• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    常用基因序列在搖蚊科昆蟲系統(tǒng)發(fā)育研究中的應(yīng)用進(jìn)展

    2016-12-14 08:23:08閆春財(cái)趙廣君戈昕宇王新華
    關(guān)鍵詞:搖蚊亞科線粒體

    閆春財(cái),郭 琴,趙廣君,戈昕宇,王新華,劉 婷

    (1.天津師范大學(xué)a.生命科學(xué)學(xué)院,b.天津市動(dòng)植物抗性重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,天津300387;2.南開大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,天津300071)

    常用基因序列在搖蚊科昆蟲系統(tǒng)發(fā)育研究中的應(yīng)用進(jìn)展

    閆春財(cái)1,郭 琴1,趙廣君1,戈昕宇1,王新華2,劉 婷1

    (1.天津師范大學(xué)a.生命科學(xué)學(xué)院,b.天津市動(dòng)植物抗性重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,天津300387;2.南開大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,天津300071)

    搖蚊科隸屬于雙翅目長角亞目,現(xiàn)行分為11亞科.本文整理了常用核基因和線粒體基因在搖蚊科系統(tǒng)發(fā)育研究中的應(yīng)用情況:搖蚊科中的9亞科(不含智利搖蚊亞科和烏桑巴搖蚊亞科),除前寡角搖蚊亞科外,其余均為單系;直突搖蚊亞科與搖蚊亞科的親緣關(guān)系較近,寡脈搖蚊亞科與長足搖蚊亞科為姊妹群.在搖蚊亞科中,搖蚊族(Chironomini)、長跗搖蚊族(Tanytarsini)都是單系群.常用核基因和線粒體基因在搖蚊科昆蟲系統(tǒng)發(fā)育研究中,18SrDNA和28SrDNA適合研究從界到科所有高級(jí)階元的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系,對(duì)于部分類群可以進(jìn)行屬間分析;CAD基因能較好地解決從亞科到屬之間各分類階元的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系;ITS和EF-1ɑ可以解決種或?qū)匍g的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系;COⅠ和COⅡ適合研究屬、種及種以下階元的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系,但不能很好地解決較高的階元如族間、亞科以及科的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系;16SrDNA適用于種、屬階元水平的系統(tǒng)學(xué)研究,但不適用于種內(nèi);Cytb適合研究種內(nèi)到種間甚至科間的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系.

    搖蚊科;基因;分子標(biāo)記;分子系統(tǒng)學(xué);系統(tǒng)發(fā)育

    搖蚊科(Chironomidae)隸屬于昆蟲綱雙翅目長角亞目(Diptera:Nematocera),現(xiàn)行分類系統(tǒng)中該科分為11亞科,世界范圍內(nèi)約有2萬種,已記述種類超過5 000種.搖蚊科廣布于全球各大生物地理區(qū)域,即使在高山寒冷地帶,如喜馬拉雅山海拔5 600 m的地區(qū)仍有分布,某些種類在-16℃下仍能夠保持活躍狀

    態(tài)[1].搖蚊體型微小至中型,成蟲口器退化,幼蟲生活在各類型水體中,是分布最廣、種類最多、生物量最大的淡水底棲動(dòng)物類群之一,同時(shí)也是重要的水體環(huán)境指示生物.在搖蚊的系統(tǒng)發(fā)育研究中,以往多采用形態(tài)學(xué)方法對(duì)種、屬進(jìn)行鑒定,但對(duì)于形態(tài)相近的物種,如搖蚊屬(Chironomus)的某些種,則需借助細(xì)胞遺傳學(xué)方法,如通過染色體數(shù)目與形態(tài)、帶型、組型、性染色體位置及染色體減數(shù)分裂行為模式等特征來鑒別昆蟲種類[2].雖然該方法在種屬鑒定上很有幫助,但在研究搖蚊科的系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系上仍有不足,如無法通過染色體帶型及組型來確定外群,從而無法通過外群建立系統(tǒng)發(fā)育樹.而分子生物學(xué)方法能夠很好地解決這一問題,由于DNA序列中富含生物學(xué)信息,因此成為研究生物系統(tǒng)發(fā)育和進(jìn)化規(guī)律的重要工具[3-4].

    搖蚊科的系統(tǒng)發(fā)育研究始于1914年Goetghebuer[5]對(duì)搖蚊亞科(Chironominae)主要類群間系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系的探討.1966年Brundin[6]首次報(bào)道了搖蚊種間水平的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系.此后,許多學(xué)者基于形態(tài)學(xué)研究了搖蚊科的多個(gè)類群[7-8].同傳統(tǒng)方法相比,基于分子的系統(tǒng)學(xué)研究能夠解決一些單純依靠形態(tài)特征無法解決的某些類群的分類地位,并能為分類學(xué)中的種類鑒定、親緣種及單系類群的識(shí)別提供簡便快捷的方法.目前常用的主要有核基因序列和線粒體基因序列,兩者在昆蟲系統(tǒng)發(fā)育的不同分類階元中各具優(yōu)勢(shì).

    本文總結(jié)了常用核基因和線粒體基因在搖蚊科昆蟲系統(tǒng)發(fā)育研究中的應(yīng)用情況,整理了搖蚊科主要類群的演化和系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系,歸納出幾種常用核基因(18S rDNA、28S rDNA、ITS、EF-1ɑ、CAD、組蛋白H3基因)和線粒體基因(COⅠ、COⅡ、Cytb、16S rDNA)在搖蚊科昆蟲各分類階元中的適用范圍和應(yīng)用情況.

    1 常用核糖體基因在搖蚊科昆蟲分子系統(tǒng)學(xué)上的應(yīng)用

    1.1 18S rDNA

    18S rDNA是真核生物染色體上編碼核糖體小亞基RNA的基因,在核糖體合成蛋白質(zhì)的過程中具有重要作用.由于其核酸序列和二級(jí)結(jié)構(gòu)具有高度保守性,因此被認(rèn)為比較適用于高級(jí)階元系統(tǒng)發(fā)育的研究,但其不同區(qū)域上的進(jìn)化速率不同,因此也適用于不同的分類層[8].如Cranston等[9]用18SrDNA、28SrDNA、CAD聯(lián)合COⅠ基因序列片段對(duì)岡瓦納大陸寡脈搖蚊亞科(Podonominae)(共15屬)中的13個(gè)屬進(jìn)行了系統(tǒng)發(fā)育分析,采用貝葉斯法和最大似然法(ML)構(gòu)建的發(fā)育樹表明該亞科為單系,是長足搖蚊亞科(Tanypodinae)的姊妹群;如果把長足搖蚊屬(Trichotanypus)考慮在內(nèi),寡脈搖蚊族(Podonomini)為單系;擬綠搖蚊屬(Parochlus)為單系,是 Podonomus屬的姐妹群;Podochlus屬為單系,是擬綠搖蚊屬和Podonomus屬的姐妹群;Afrochlus屬與Archaeochlus屬互為姊妹群. Cranston等[10]又利用文獻(xiàn)[9]中的基因片段對(duì)搖蚊科的9個(gè)亞科(不包括智利搖蚊亞科(Chilenomyiinae)和烏桑巴搖蚊亞科(Usambaromyiinae))的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系進(jìn)行了分析,發(fā)現(xiàn)除前寡角搖蚊亞科(Prodiamesinae)外,其余亞科均為單系;似蠓搖蚊亞科(Buchonomyiinae)是所有亞科的姊妹群;南部的阿福羅搖蚊亞科(Aphroteniinae)是除了似蠓搖蚊亞科以外所有亞科的姊妹群;在寡角搖蚊亞科(Diamesinae)中,Heptagiini、Harrisonini與寡角搖蚊族(Diamesini)互為姐妹群;在長足搖蚊亞科(Tanypodinae)中,五脈搖蚊族(Pentaneurini)單獨(dú)形成一支;在直突搖蚊亞科(Orthocladiinae)中,直突搖蚊族(Orthocladiini)和中足搖蚊族(Metriocnemini)(不包括棒脈搖蚊屬(Corynoneura)和布搖蚊屬(Brillia))的分類地位也得到了支持.Martin等[11]利用2個(gè)線粒體基因和一個(gè)核基因18S rDNA對(duì)搖蚊亞科的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系進(jìn)行了研究,結(jié)果證實(shí)基于不同的分子標(biāo)記研究能夠解決不同階元的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系;拓?fù)鋵W(xué)結(jié)果顯示,該亞科主要分成兩大支,二叉搖蚊屬(Dicrotendipes)為這兩大支的姐妹群:一支由球附器搖蚊屬(Kiefferulus)、阿克西搖蚊屬(Axarus)、光搖蚊屬(Xestochironomus)、裸突搖蚊屬(Goeldichironomus)、李搖蚊屬(Lipiniella)及哈搖蚊屬復(fù)合體(Harnischia complex)構(gòu)成,屬間有較近的親緣關(guān)系;另一支由搖蚊屬(Chironomus)(包括Camptochironomus和Lobochironomus 2個(gè)亞屬在內(nèi))、弱搖蚊屬(Baeotendipes)、恩菲搖蚊屬(Einfeldia)等聚在一起,親緣關(guān)系較近.

    1.2 28S rDNA

    28S rDNA是真核生物染色體上編碼核糖體大亞基RNA的基因,在進(jìn)化過程中比較保守,但變異性高于18SrDNA,其序列上含有D1~D12個(gè)高變區(qū).28SrDNA同18S rDNA一樣適合從界到科所有高級(jí)階元的系統(tǒng)發(fā)育研究,對(duì)于部分類群可以進(jìn)行屬間分析[12].如Allegrucci等[13]利用28S rDNA的D1和D3~D5基因片段對(duì)南極的搖蚊科(Chironomidae)15個(gè)類群之間的系統(tǒng)學(xué)關(guān)系進(jìn)行分析,最大簡約樹(MP)顯示,直突搖蚊亞科(Orthocladiinae)、搖蚊亞科(Chironominae)、濱海搖蚊亞科(Telmatogetoninae) 和寡脈搖蚊亞科(Podonominae)各分別聚為一支,這4個(gè)亞科很容易區(qū)

    分,其中直突搖蚊亞科與搖蚊亞科的親緣關(guān)系較近.王茜等[14]利用28S rDNA的D1部分基因序列研究直突搖蚊亞科屬級(jí)階元的系統(tǒng)發(fā)育情況,基于距離臨近法(NJ)和MP法建立的系統(tǒng)發(fā)育樹如圖1所示.2種發(fā)育樹均表明,濱海搖蚊屬位于系統(tǒng)發(fā)育樹的基部,心突搖蚊屬和真開氏搖蚊屬互為姐妹群,流環(huán)足搖蚊屬和刀突搖蚊屬互為姐妹群.Huang等[15]基于28S rDNA的D1~D3、組蛋白H3的2個(gè)核基因序列以及COⅠ、Cytb 2個(gè)線粒體基因序列對(duì)海搖蚊屬(Pontomyia)4個(gè)已知種和1個(gè)未知種的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系進(jìn)行分析,結(jié)果表明,海搖蚊屬為單系;海生搖蚊(Pontomyia oceana)和Pontomyia pacifica形成一大支,有較近的親緣關(guān)系;形態(tài)上難以區(qū)分的2個(gè)種Pontomyia natans和Pontomyia cottoni聚在一起,支持率較高,無論是傳統(tǒng)方法還是基于分子生物學(xué)的方法都難以區(qū)分,因此將二者視為1種,Pontomyia cottoni被認(rèn)為是Pontomyia natans的次異名.

    圖1 基于28S rDNA D1序列構(gòu)建的17種搖蚊系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系NJ和MP樹(引自文獻(xiàn)[14])Fig.1 NJ and MP trees of 17 species of Chironomidae based on D1 region of 28S rDNA D1 sequence(cited from document[14])

    1.3 ITS

    由18S、5.8S和28S rDNA構(gòu)成的轉(zhuǎn)錄單元中有2個(gè)可變區(qū),即核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)ITS1和ITS2,ITS1位于18S和5.8S rDNA之間,ITS2位于5.8S rDNA和28S rDNA之間.由于ITS為非編碼區(qū),承受的選擇壓力較小,相對(duì)變化較大,并且能夠提供詳盡的系統(tǒng)學(xué)分析所需要的可遺傳性狀,因此可以解決種和屬間的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系[16].如宗祖勝等[17]對(duì)我國南方某城市4座自來水廠沉淀池池壁上的搖蚊進(jìn)行采集,將樣品進(jìn)行ITS1序列的PCR擴(kuò)增和PCR-RFLP分析,采用最大簡約法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹,結(jié)果表明,搖蚊的ITS1序列在種內(nèi)相當(dāng)保守,在種間表現(xiàn)出一定的差異性,因此搖蚊ITS1序列可以作為鑒別搖蚊物種的理想分子標(biāo)記之一.Sharma[18]基于核基因ITS1和ITS2序列對(duì)搖蚊的7個(gè)種(Thienemanniella xena、Xylotopus par、Tribelos fuscicorne、Robackia demeijerei、Xylotopus jucundum、Polypendilum aviceps和 Chironomus tentans)作了詳細(xì)分析,結(jié)合從基因庫中獲得的15個(gè)物種序列,研究顯示這些物種具有很高的種間變異,在歐洲分布的物種比在北美分布的物種更容易聚群;在進(jìn)化樹中較高的置信度和較短的聚類分枝能夠表明可能存在的各種聚群及快速分化的物種.Asari等[19]利用核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)ITS2對(duì)日本水搖蚊屬(Hydrobaenus)中的3個(gè)種,即Hydrobaenus kondoi、Hydrobaenus biwaquartus和Hydrobaenus kisosecundus進(jìn)行區(qū)分,基于ITS2的分子生物學(xué)方法很容易把Hydrobaenus biwaquartus與其他2個(gè)物種加以區(qū)分,這與形態(tài)學(xué)研究的結(jié)果一致;但不支持通過傳統(tǒng)方法(例如陽莖刺突、抱器端節(jié)的長度、觸角比、第九背板的形狀等)判定的Hydrobaenus kondoi、Hydrobaenus biwaquartus為同物異名的說法,可見ITS2對(duì)于水搖蚊屬(Hydrobaenus)中相近物種的區(qū)分能夠提供更加有用的信息.

    ITS基因雖然可以用于搖蚊科物種的鑒別及系統(tǒng)發(fā)育分析,但由于該序列中A或T有較多的重復(fù),從而會(huì)干擾測(cè)序,而且長度變化較大也可能會(huì)使序列的對(duì)齊產(chǎn)生誤差.

    2 常用編碼蛋白的核基因在搖蚊科昆蟲分子系統(tǒng)學(xué)上的應(yīng)用

    2.1 CAD

    CAD是由3種參與從頭合成嘧啶核苷酸途徑的酶共同構(gòu)成的融合蛋白,3種酶分別為氨甲酰磷酸合成酶(CPS)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶(ATC)以及二氫乳清酸酶(DHO),其中CPS的基因片段長度約4 kb,含

    遺傳信息最多[20-21].Silva等[22]利用CAD的部分序列結(jié)合形態(tài)學(xué)特征對(duì)拉布長足搖蚊屬(Labrundinia)(長足搖蚊亞科)中22個(gè)種的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)行了驗(yàn)證,與單獨(dú)利用CAD基因序列或者基于形態(tài)特征數(shù)據(jù)所做貝葉斯分析的結(jié)果基本相同,即拉布長足搖蚊屬為單系,有較高支持率;分子結(jié)合形態(tài)數(shù)據(jù)產(chǎn)生的貝葉斯樹結(jié)果顯示,Labrundinia mayaca+L.paravirescens+L.jasoni+ L.paulae與L.semicurvata的親緣關(guān)系最近,僅L. mayaca+L.paravirescens 2個(gè)分枝的支持率較高,這些結(jié)果不同于僅用CAD基因序列分析得到的結(jié)論;此外,L.amandae+L.unicolor互為 L.reniformis+L. parareniformis的姐妹群.Andersen等[23]對(duì)一種來自克羅地亞980 m深處的雌性Troglocladius hajdi進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)其部分形態(tài)特征類似于直突搖蚊族(Orthocladiini)和中足搖蚊族(Metriocnemini)中的一些類群,但僅憑傳統(tǒng)方法很難將其歸為任何一屬.基于分子標(biāo)記COⅠ、18S rDNA、28S rDNA、CADⅠ及CADⅣ分析該物種在直突搖蚊亞科(Orthocladiinae)中的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系,采用貝葉斯法構(gòu)建系統(tǒng)樹,結(jié)果表明,Troglocladius hajdi沒有與直突搖蚊族中的環(huán)足搖蚊屬(Cricotopus)聚在一起,而與中足搖蚊族(Metriocnemini)中的特維搖蚊屬(Tvetenia)、心突搖蚊屬(Cardiocladius)、真開氏搖蚊屬(Eukiefferiella)聚在一起形成一大支,表明Troglocladius hajdi與這3個(gè)屬間有較近的親緣關(guān)系.

    2.2 H3和EF-1ɑ

    H3是一個(gè)編碼與染色體結(jié)構(gòu)形成有關(guān)的堿性蛋白質(zhì)的基因,其序列高度保守,可用于研究高級(jí)分類階元的系統(tǒng)發(fā)育;同時(shí),其序列還存在進(jìn)化速率較快的間隔區(qū),適于分析親緣關(guān)系較近的物種間的系統(tǒng)發(fā)育.因此H3可用于不同分類階元層次上的分子系統(tǒng)學(xué)研究.EF-1a是單拷貝基因,在蛋白質(zhì)翻譯過中具有重要作用,其第一、二密碼子高度保守,被看作有潛力研究高級(jí)分類階元系統(tǒng)發(fā)育的基因,而第三密碼子替換常常達(dá)到飽和,因此也可用其分析低階元的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系[24-26].

    為了研究海搖蚊屬(Pontomyia)的系統(tǒng)進(jìn)化,Huang等[27]測(cè)定其28S rDNA D1~D3、H3兩個(gè)核基因序列以及COⅠ、Cytb兩個(gè)線粒體基因序列,以Chironomus tepperi、C.thummi和Tanytarsus allicis為外群,采用最大簡約法、最大似然法和貝葉斯法建立系統(tǒng)發(fā)育樹,結(jié)果均支持海搖蚊屬(Pontomyia)為單系.Ekrem等[28]分析了2個(gè)核基因(CAD、EF-1ɑ)和3個(gè)線粒體基因(COⅠ、COⅡ、16S rDNA)在搖蚊亞科(Chironominae)小突搖蚊屬(Micropsectra)、泉搖蚊屬(Krenopsectra)、擬長跗搖蚊屬(Paratanytarsus)和Parapsectra屬系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系中的效用,結(jié)果發(fā)現(xiàn),在一些屬中COⅠ的系統(tǒng)學(xué)信號(hào)最弱,而CAD包含的信號(hào)最強(qiáng);擬長跗搖蚊屬是單系群,支持率較低;另外,在一些物種中用高度可變的EF-1ɑ序列首次發(fā)現(xiàn)了雙翅目長角亞目的旁系同源基因拷貝.

    3 常用線粒體基因在搖蚊科昆蟲分子系統(tǒng)學(xué)上的應(yīng)用

    線粒體DNA在昆蟲系統(tǒng)發(fā)育研究中應(yīng)用廣泛,其中,細(xì)胞色素C氧化酶亞基Ⅰ(COⅠ)和亞基Ⅱ(COⅡ)的序列既保守又有足夠變異,是較好的分子標(biāo)記. 3.1 COⅠ

    在搖蚊科的昆蟲系統(tǒng)學(xué)研究中,Krosch等[29]通過線粒體基因COⅠ和2個(gè)核基因28S rDNA、CAD對(duì)直突搖蚊亞科(Orthocladiinae)的系統(tǒng)學(xué)關(guān)系進(jìn)行了分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn),擬開氏搖蚊屬(Parakiefferiella)單獨(dú)形成一支且較早地分離出來;真開氏搖蚊屬(Eukiefferiella)與心突搖蚊屬(Cardiocladius)、特維搖蚊屬(Tvetenia)聚在一起,說明3者有較近的親緣關(guān)系;Botryocladius(包括南美和澳大利亞種群)形成一個(gè)單系群;Anzacladius limnophyes與Ferringtonia patagonica形成姐妹群;南美的Echinocladius sp.與Naonella forsythia、Tonnoirocladius commensalis形成姐妹群.姜麗等[30]測(cè)定了搖蚊亞科(Chironominae)23個(gè)物種的線粒體COⅠ基因的部分序列,以環(huán)足搖蚊屬(Cricotopus)作為外群,采用鄰接法和最大簡約法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,結(jié)果表明,多足搖蚊屬復(fù)合體(Polypendilum complex)中的斑搖蚊屬(Stictochironomus)、明搖蚊屬(Phaenopsectra)、倒毛搖蚊屬(Microtendipes)和內(nèi)搖蚊屬(Endochironomus)聚在一支,親緣關(guān)系較近;狹搖蚊屬(Stenochironomus)單獨(dú)為一支;哈搖蚊屬群(Harnischia complex)僅有部分屬聚在一起;長跗搖蚊屬群(Tanytarsus complex)中大部分屬的親緣關(guān)系也較近.

    COⅠ在物種界定和識(shí)別方面具有良好的應(yīng)用性,被視為DNA條形碼[31-32],已證實(shí)在許多動(dòng)物類群中運(yùn)用該基因能夠成功鑒定到種級(jí)水平.如Silva等[33]利用條形碼技術(shù)結(jié)合形態(tài)學(xué)特征對(duì)巴西棒脈搖蚊屬(Corynoneura)中的14種86個(gè)樣本進(jìn)行了物種鑒定;Amora等[34]利用條形碼技術(shù)對(duì)形態(tài)相似的采自日本、韓國和巴西的搖蚊屬(Chironomus)類群進(jìn)行了物種鑒定.此外,DNA條形碼技術(shù)提高了搖蚊在水體生態(tài)系統(tǒng)評(píng)估及環(huán)境監(jiān)測(cè)方面的應(yīng)用[35-36].如Ekrem等[37]利用DNA條碼技術(shù)調(diào)查了挪威中部自然保護(hù)區(qū)內(nèi)雌性搖

    蚊在搖蚊生物多樣性方面所起的作用;Brodin等[38]評(píng)估了COⅠ基因在提高物種鑒定準(zhǔn)確率以及在環(huán)境監(jiān)測(cè)中的有效性,如運(yùn)用DNA條形碼技術(shù)使波羅的海的搖蚊物種鑒定成功率提高了80%.很多研究集中在相對(duì)較小的類群以及形態(tài)分類較清晰的類群中.如Meier等[39]用二代測(cè)序技術(shù)分析了1 015個(gè)熱帶地區(qū)分布的搖蚊(490個(gè)幼蟲和525個(gè)成蟲)樣本;Lin等[40]使用不同的分析工具探究了長跗搖蚊屬(Tanytarsus)的2 790個(gè)DNA條形碼在物種鑒定上的意義.

    3.2 COⅡ

    Ekrem等[41]基于線粒體基因COⅡ分析了搖蚊科16屬屬級(jí)階元的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系,采用最大簡約法和貝葉斯法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,貝葉斯分析與形態(tài)學(xué)的研究結(jié)果一致,除Corynocera ambigua和Tanytarsus gracilentus互為姊妹群外,其余各屬均為單系群,且得到很高的支持率;系統(tǒng)發(fā)育樹支持長跗搖蚊亞族(Tanytarsina)和刷毛搖蚊亞族(Zavreliina)這2個(gè)亞族分類地位的劃分.Stur等[42]用COⅡ結(jié)合形態(tài)學(xué)特征對(duì)小突搖蚊屬(Micropsectra)的部分物種進(jìn)行了系統(tǒng)發(fā)育分析,最大簡約法和貝葉斯法分析均表明,Micropsectra pallidula、M.calcifontis、M.atrofasciata、M.sofiae和 M. schrankelae組成一個(gè)單系群,M.contracta和M.insignilobus、M.sofiae和M.schrankelae分別互為姐妹群.M.appendica和M.logani的雄性成蟲在形態(tài)上與M.atrofasciata很相似,但基于線粒體基因COⅡ的結(jié)果顯示并非同一物種.王茜等[43]利用部分COⅡ基因序列對(duì)直突搖蚊亞科(Orthocladiinae)的24屬30種搖蚊進(jìn)行了分子系統(tǒng)學(xué)研究,以Chironomus samoensis為外群,采用鄰接法和最小進(jìn)化法構(gòu)建的分子系統(tǒng)樹顯示,擬開氏搖蚊屬(Parakiefferiella)和克萊施密搖蚊屬(Krenosmittia)、偽直突搖蚊屬(Pseudorthocladius)和陸直突搖蚊屬(Georthocladius)各自互為姐妹群,這與形態(tài)學(xué)分析結(jié)果一致;毛突搖蚊屬(Chaetocladius)和直突搖蚊屬(Orthocladius)、擬環(huán)足搖蚊屬(Paracricotopus)和施密搖蚊屬(Smittia)、真開氏搖蚊屬(Eukiefferiella)和肛脊搖蚊屬(Mesosmittia)各自互為姐妹群,并得到較高支持率.

    3.3 16S rDNA和Cytb

    16S rDNA基因序列一級(jí)結(jié)構(gòu)比較保守,而二級(jí)結(jié)構(gòu)又表現(xiàn)出螺旋差異性,較適用于種、屬水平的系統(tǒng)學(xué)研究[44].細(xì)胞色素b基因(Cytb)已被證明在不同門類的不同分類階元中均含有親緣信號(hào),其基因片段含有緩慢和快速進(jìn)化的密碼子位點(diǎn)、更保守區(qū)以及多個(gè)可變區(qū)或結(jié)構(gòu)域,由于其進(jìn)化速度適中,已被廣泛用于多樣性和系統(tǒng)發(fā)育的研究[45-47].

    如Cranston等[48]基于線粒體16S rDNA基因的IV和V域,以蠓科(Ceratopogonidae)和蚋科(Simuliidae)種類作為外群,對(duì)澳大利亞地區(qū)的搖蚊科昆蟲作了系統(tǒng)發(fā)育分析.結(jié)果顯示:相對(duì)于分布在非洲的Archaeochlus和Afrochlus單系群而言,澳大利亞分布的Archaeochlus為單系,這與形態(tài)學(xué)分析一致;非洲分布的Archaeochlus是Afrochlus的姐妹群.Papoucheva等[49]測(cè)定了絲搖蚊屬(Sergentia)7個(gè)種的COⅠ和Cytb基因片段,其中5個(gè)是貝加爾湖特有種,用鄰接法和最大簡約法建樹. 2種方法的結(jié)果均支持絲搖蚊屬(Sergentia)的單系性及貝加爾湖種的特有性;NJ樹顯示,同S.baueri相比,Sergentia electa的親緣關(guān)系更接近貝加爾類群;S.nebulosa和S.assimilis為姊妹群,節(jié)點(diǎn)支持率為99%,S.baicalensis和S.flavodentata為姊妹群,但支持率僅為58%,S.affinis的地位沒有得到解決;MP樹中,S.baueri的親緣關(guān)系更接近貝加爾類群,S.affinis的分類地位也得到了解決.Carew等[50]利用2個(gè)線粒體基因COⅠ、Cytb和1個(gè)核基因CAD對(duì)來自澳大利亞南部的前突搖蚊屬(Procladius)類群中用傳統(tǒng)方法不易區(qū)分的物種進(jìn)行區(qū)分,前突搖蚊屬(Procladius)是檢測(cè)水體環(huán)境和污染狀況的優(yōu)良指示生物之一.基于線粒體基因的NJ樹表明,研究中采集到的前突搖蚊屬樣品至少包含5個(gè)類群,且支持率大于99%;而基于CAD的NJ樹顯示有6個(gè)類群,Procladius sp.沒有與Procladius paludicola聚在一起.

    4 總結(jié)與展望

    系統(tǒng)發(fā)育學(xué)主要研究物種形成及物種間的進(jìn)化關(guān)系.近年來,隨著分子生物技術(shù)的快速發(fā)展,尤其是PCR技術(shù)的廣泛應(yīng)用,越來越多的學(xué)者把核基因及線粒體基因應(yīng)用在昆蟲系統(tǒng)發(fā)育研究中.由于單一基因片段所提供的系統(tǒng)學(xué)信息非常有限,據(jù)其構(gòu)建的進(jìn)化樹可信度低,因此許多研究都把核基因組序列和線粒體基因組序列結(jié)合起來開展聯(lián)合基因分析,便于更客觀、真實(shí)、科學(xué)地反映物種間的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系[51].

    搖蚊科昆蟲種類豐富,個(gè)體眾多,通過系統(tǒng)發(fā)育學(xué)研究,可以了解該科各分類群的進(jìn)化關(guān)系,解決一些有爭議物種的界定以及相關(guān)物種的生物地理分布.本文總結(jié)了常用核基因和線粒體基因在搖蚊科昆蟲系統(tǒng)發(fā)育研究中的國內(nèi)外研究概況,大致觀點(diǎn)為:搖蚊科中的9亞科(不含智利搖蚊亞科(Chilenomyiinae)和烏桑巴搖蚊亞科(Usambaromyiinae)),除前寡角搖蚊亞科(Prodiamesinae)外,其余亞科均為單系;寡脈搖

    蚊亞科(Podonominae)與長足搖蚊亞科(Tanypodinae)為姊妹群,直突搖蚊亞科(Orthocladiinae)與搖蚊亞科(Chironominae)的親緣關(guān)系較近.在搖蚊亞科(Chironomidae)中,搖蚊族(Chironomini)和長跗搖蚊族(Tanytarsini)都是單系群,而在搖蚊族(Chironomini)中,搖蚊屬(Chironomus)、隱搖蚊屬(Cryptochironomus)、內(nèi)搖蚊屬(Endochironomus)和長跗搖蚊屬(Tanytarsus)均為單系;球附器搖蚊屬(Kiefferulus)、阿克西搖蚊屬(Axarus)、光搖蚊屬(Xestochironomus)、裸突搖蚊屬(Goeldichironomus)、李搖蚊屬(Lipiniella)及哈搖蚊屬復(fù)合體(Harnischia complex)有較近的親緣關(guān)系,此外搖蚊屬(Chironomus)(包括Camptochironomus和Lobochironomus這2個(gè)亞屬在內(nèi))、弱搖蚊屬(Baeotendipes)、恩菲搖蚊屬(Einfeldia)等聚在一起,親緣關(guān)系較近,弱搖蚊屬(Baeotendipes)與搖蚊屬(Chironomus)有較近的親緣關(guān)系;在長跗搖蚊族(Tanytarsin)中,擬長跗搖蚊屬(Paratanytarsus)、枝長跗搖蚊屬(Cladotanytarsus)是單系群.在直突搖蚊亞科(Orthocladiinae)中,直突搖蚊族(Orthocladiini)和中足搖蚊族(Metriocnemini)(不包括棒脈搖蚊屬(Corynoneura)和布搖蚊屬(Brillia))的分類地位也得到了支持;擬開氏搖蚊屬(Parakiefferiella)和克萊施密搖蚊屬(Krenosmittia)、偽直突搖蚊屬(Pseudorthocladius)和陸直突搖蚊屬(Georthocladius)、心突搖蚊屬(Cardiocladius)和真開氏搖蚊屬(Eukiefferiella)各自互為姊妹群,Belgica antarctica和Eretmoptera murphyi的分類地位與傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)的結(jié)果一致.在長足搖蚊亞科(Tanypodinae)中,大粗腹搖蚊族(Macropelopiini)、五脈搖蚊族(Pentaneurini)分別單獨(dú)形成一支,拉布長足搖蚊屬(Labrundinia)、大粗腹搖蚊屬(Macropelopia)和扎長足搖蚊屬(Zavrelimyia)均為單系.在寡角搖蚊亞科(Diamesinae)中,Heptagiini與寡角搖蚊族(Diamesini)互為姐妹群.對(duì)現(xiàn)有研究進(jìn)行總結(jié)可以看出,搖蚊亞科(Chironomidae)、直突搖蚊亞科(Orthocladiinae)、長足搖蚊亞科(Tanypodinae)等的研究較多,而智利搖蚊亞科(Chilenomyiinae)、烏桑巴搖蚊亞科(Usambaromyiinae)、阿福羅搖蚊亞科(Aphroteniinae)等的研究則相對(duì)薄弱,將會(huì)是后續(xù)研究的重點(diǎn).

    在搖蚊科的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系研究中,18S rDNA和28S rDNA適合從界到科的所有高級(jí)階元,對(duì)于部分類群可以進(jìn)行屬間分析;CAD基因能較好地解決從亞科到屬之間各分類階元的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系,ITS和EF-1ɑ可以解決種或?qū)匍g的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系;COⅠ、COⅡ適合研究屬、種及種下階元的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系,但不能很好地解決較高的階元,如族間、亞科以及科的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系;16S rDNA適用于種、屬階元水平的系統(tǒng)學(xué)研究,但不適用于種內(nèi);Cytb適合研究種內(nèi)到種間甚至科間的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系.使用單個(gè)基因研究搖蚊科系統(tǒng)發(fā)育的研究較少,更多的是多個(gè)基因的聯(lián)合使用(核基因的聯(lián)合、線粒體基因的聯(lián)合或者核基因結(jié)合線粒體基因).對(duì)于同一類群,采用不同基因序列可能會(huì)得到不同的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系結(jié)果,出現(xiàn)基因樹沖突等問題,而系統(tǒng)發(fā)育基因組學(xué)的建立對(duì)于解決基因樹的沖突能夠提供有力幫助.

    [1]ARMITAGE P,CRANSTON P S,PINDER L C V,et al.The Chironomidae:the Biology and Ecology of Non-biting Midges[M].London:Chapman&Hall,1995.

    [2]李志勤,閆洪波,李成德.昆蟲分類的主要技術(shù)手段[J].河北林果研究,2006,21(4):398-403. LI Z Q,YAN H B,LI C D.The main techniques of insect taxonomy[J]. Hebei Journal of Forestry and Orchard Research,2006,21(4):398-403(in Chinese).

    [3]GURYEV V,MAKAREVITCH I,BLINOV A,et al.Phylogeny of the genus Chironomus(Diptera)inferred from DNA sequences of mitochondrial cytochrome b and cytochrome oxidaseⅠ[J].Mol Phylogenet Evol,2001,19(1):9-21.

    [4]時(shí)號(hào),張婧,蔣國芳.線粒體基因和核基因在蝶類分子系統(tǒng)學(xué)中的研究進(jìn)展[J].廣西科學(xué),2006,13(2):156-160. SHI H,ZHANG J,JIANG G F.A progress in the molecular systematics of butterflies based on mitochondrial gene and nuclear gene[J]. Guangxi Sciences,2006,13(2):156-160(in Chinese).

    [5] GDETGHEBUER M.Recherches sur les chironomides de Belgique[J]. Mém Acad Rog Belg,1914,3(7):1-48.

    [6] BRUNDIN L Z.Transantarctic relationships and their significance,evidenced by chirononind midges with a monograph of the rubfamilies of Podonominae and Aphrotenilnae and the austral Heptagyiae[J].Kunylica Svenska Vetenskadenicens Handlinggar,1966,11:1-472.

    [7] DONATO M,SIRI A.A new species of Metriocnemus van der Wulp(Diptera:Chironomidae)with a tentative phylogeny of the genus[J]. Neotropical Entomology,2010,39(1):50-60.

    [8] FU Y,SAETHER O,WANG X H.Thienemanniella kieffer from east Asia,with a systematic review of the genus(Diptera:Chironomidae:Orthocladiinae)[J].Zootaxa,2010,2431:1-42.

    [9]CRANSTON P S,HARDY N B,MORSE G E,et al.When molecules and morphology concur:the‘Gondwanan’midges(Diptera:Chironomidae)[J].Systematic Entomology,2010,35(4):636-648.

    [10]CRANSTON P S,HARDY N B,MORSE G E.A dated molecular phylogenyfortheChironomidae(Diptera)[J].Systematic Entomology,2012,37(1):172-188.

    [11]MARTIN J,BLINOV A,ALIEVA E,et al.A Molecular Phylogenetic Investigation of the Genera Closely Related to Chironomus meigen(Diptera:Chironomidae)[M].Columbus:The Caddis Press,2007.

    [12]DIETRICH C H,RAKITOV R A,HOLMES J L,et al.Phylogeny of the major lineages of Membracoidea(Insecta:Hemiptera:Cicadomor-

    pha)based on 28S rDNA sequences[J].Molecular Phylogenetics and Evolution,2001,18(2):293-305.

    [13]ALLEGRUCCI G,CARCHINI G,TODISCO V,et al.A molecular phylogeny of antarctic chironomidae and its implications for biogeographical history[J].Polar Biology,2006,29(4):320-326.

    [14]王茜,王新華.直突搖蚊亞科部分屬28S rDNA D1序列的分子系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系(雙翅目,搖蚊科)[J].動(dòng)物分類學(xué)報(bào),2011,36(1):93-98. WANG Q,WANG X H.Molecular phylogenetic analysis on some genera of the subfamily Orthocladinae(Diptera,Chironomidae)based on D1 variable region of 28S ribosomal DNA[J].Acta Zootaxonomica Sinica,2011,36(1):93-98(in Chinese).

    [15]HUANG D W,CRANSTON P S,CHENG L.A complete species phylogeny of the marine midge Pontomyia(Diptera:Chironomidae)reveals a cosmopolitan species and a new synonym[J].Invertebrate Systematics,2014,28(3):277-286.

    [16]MEI H,LUO W,LIU G X,et al.Phylogeny of Oedogoniales(Chlorophyceae,Chlorophyta)inferred from 18S rDNA sequences with emphasis on the relationships in the genus Oedogonium based on ITS-2 sequences[J].Plant Systematics and Evolution,2007,265(3):179-191.

    [17]宗祖勝,張金松,劉麗君,等.自來水廠中搖蚊rDNA系統(tǒng)學(xué)分析[J].中國給水排水,2005,21(3):1-4. ZONG Z S,ZHANG J S,LIU L J,et al.Analysis on molecular systematics of chironomus rDNA in water treatment plants[J].China Water& Waste Water,2005,21(3):1-4(in Chinese).

    [18]SHARMA M.Molecular Identification of Chironomid Species Based on ITS1 and ITS2 Regions of rDNA[D].Dayton:Wright State University,2007.

    [19]ASARI H,KASUYAS T K.Identilication of closely related Hydrobaenus species(Diptera:Chironomidae)using the second internal transcribed spacer(ITS2)region of ribosomal DNA[J].Aquatic Insects,2004,26(3):207-213.

    [20]王詩迪,趙喆,張春田.常用核基因序列在雙翅目昆蟲系統(tǒng)學(xué)中的研究進(jìn)展[J].環(huán)境昆蟲學(xué)報(bào),2012,34(1):220-228. WANG S D,ZHAO Z,ZHANG C T.Advances in systematics of Diptera based on nuclear genes[J].Journal of Environmental Entomology,2012,34(1):220-228(in Chinese).

    [21]MOULTON J K,WIEGMANN B M.Evolution and phylogenetic utility of CAD(rudimentary)among Mesozoic-aged Eremoneuran Diptera(Insecta)[J].Molecular Phylogenetics and Evolution,2004,31(1):363-378.

    [22]SILVA F L,EKREM T R,F(xiàn)ONSECA-GESSNER A A.Out of south America:phylogeny of non-biting midges in the genus Labrundinia suggests multiple dispersal events to central and north America[J].Zoologica Scripta,2015,44(1):59-71.

    [23]ANDERSEN T,BARANOV V,HAGENLUND L K,et al.Blind flight?A new Troglobiotic orthoclad(Diptera,Chironomidae)from the Lukina Jama-Trojama cave in Croatia[J].PLoSOne,2016,11(4):1-15.

    [24]劉殿鋒,蔣國芳.核基因序列在昆蟲分子系統(tǒng)學(xué)上的應(yīng)用[J].動(dòng)物分類學(xué)報(bào),2005,30(3):484-492. LIU D F,JIANG G F.Application in molecular systematics of insect based on nuclear genes[J].Acta Zootaxonomica Sinica,2005,30(3):484-492(in Chinese).

    [25]成新躍,周紅章,張廣學(xué).分子生物學(xué)技術(shù)在昆蟲系統(tǒng)學(xué)研究中的應(yīng)用[J].動(dòng)物分類學(xué)報(bào),2000,25(2):121-130. CHENG X Y,ZHOU H Z,ZHANG G X.Application in systematics of insect based on molecular biology techniques[J].Acta Zootaxonomica Sinica,2000,25(2):121-130(in Chinese).

    [26]MORSE G E,NORMARK B B.A molecular phylogenetic study of armoured scale insects(Hemiptera:Diaspididae)[J].Systematic Entomology,2006,31(2):338-349.

    [27]HUANG D,CHENG L.The flightless marine midge Pontomyia(Diptera:Chironomidae):ecology,distribution,and molecular phylogeny[J].Zoological Journal of the Linnean Society,2011,162(2):443-456

    [28]EKREM T,WILLASSEN E,STUR E.Phylogenetic utility of five genes for dipteran phylogeny:a test case in the Chironomidae leads to generic synonymies[J].Molecular Phylogenetics and Evolution,2011,57(2):561-571

    [29]KROSCH M,BAKER A M,MATHER P B,et al.Systematics and biogeography of the Gondwanan Orthocladiinae(Diptera:Chironomidae)[J].Molecular Phylogenetics and Evolution,2011,59(2):458-468.

    [30]姜麗,閆嬌,王婷婷,等.基于COⅠ基因的搖蚊亞科部分屬的系統(tǒng)發(fā)育分析(雙翅目,搖蚊科)[J].天津師范大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2015,35(3):7-11. JIANG L,YAN J,WANG T T,et al.A molecular phylogeny for some genera of the subfamily Chironominae(Diptera:Chironomidae)based on cytochrome oxidase I gene[J].Journal of Tianjin Normal University:NaturalScienceEdition,2015,35(3):7-11(In Chinese).

    [31]EKREM T,WILLASSEN E,STUR E.A comprehensive DNA sequence library is essential for identification with DNA barcodes[J]. Molecular Phylogenetics and Evolution,2007,43(2):530-542.

    [32]SINCLAIR C S,GRESENS S E.Discrimination of Cricotopus species(Diptera:Chironomidae)by DNA barcoding[J].Bulletin of Entomological Research,2008,98(6):555-563.

    [33]SILVA F L,WIEDENBRUG S.Integrating DNA barcodes and morphology for species delimitation in the Corynoneura group(Diptera:Chironomidae:Orthocladiinae)[J].Bulletin of Entomological Research,2014,104(1):65-78.

    [34]AMORA G,HAMADA N,F(xiàn)USARI L M,et al.An asiatic chironomid in Brazil:morphology,DNA barcode and bionomics[J].Zookeys,2015,514:129-144.

    [35]CAREW M E,PETTIGROVE V J,METZELING L,et al.Environmental monitoring using next generation sequencing:rapid identification of macroinvertebrate bioindicator species[J].Frontiers in Zoology,2013,10(45):1-15.

    [36]CRANSTON P S,ANGY C,HEYZER A,et al.The nuisance midges(Diptera:Chironomidae)of Singapore′s Pandan and Bedok Reservoirs [J].Raffles Bulletin of Zoology,2013,61(2):779-793.

    [37]EKREM T,STUR E,HEBERT P.Females do count:documenting Chironomidae(Diptera)species diversity using DNA barcoding[J].Organisms Diversity&Evolution,2010,10(5):397-408.

    [38]BRODIN Y,EJDUNG G,STRANDBERG J,et al.Improving environmental and biodiversity monitoring in the Baltic Sea using DNA barcoding of Chironomidae(Diptera)[J].Molecular Ecology Resources,

    2013,13(6):996-1004.

    [39]MEIER R,WONG W,SRIVATHSAN A,et al.$1 DNA barcodes for reconstructing complex phenomes and finding rare species in specimen-rich samples[J].Cladistics,2016,32(1):100-110.

    [40]LIN X L,STUR E,EKREM T.Exploring genetic divergence in a species-rich insect genus using 2 790 DNA barcodes[J].Plos one,2015,10(9):1-24.

    [41]EKREM T,WILLASSEN E.Exploring Tanytarsini relationships(Diptera:Chironomidae)using mitochondrial COⅡgene sequences[J]. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology,2004,35(3):263-276.

    [42]STUR E,EKREM T.A revision of West Palaearctic species of the Micropsectra atrofasciata species group(Diptera:Chironomidae)[J].Zoological Journal of the Linnean Society,2006,146(42):165-225.

    [43]王茜,王新華.直突搖蚊亞科部分屬基于線粒體COⅡ基因部分序列的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系(雙翅目,搖蚊科)[J].四川動(dòng)物,2011,30(5):711-716. WANG Q,WANG X H.Phylogenetic relationship of some genera of the subfamily Orthocladiinae(Diptera:Chironomidae)based on partial sequences of mitochondrial COⅡgene[J].Sichuan Journal of Zoology,2011,30(5):711-716(in Chinese).

    [44]HARRISON J S.Evolution,biogeography,and the utility of mitochondrial 16s and COⅠ genes in phylogenetic analysis of the crab genus Aus-tinixa(Decapoda:Pinnotheridae)[J].Molecular Phylogenetics and Evolution,2004,30(3):743-754.

    [45]CANTATORE M,ROBERTI G,PESOLE A,et al.Evolutionary analysis of cytochrome b sequences in some Perciformes:evidence for a slower rate of evolution than in mammals[J].Molecular and Evolution,1994,39:589-597.

    [46]IRWIN D M,KOCHER T D,WILSON A C.Evolution of the cytochrome b gene of mammals[J].Molecular and Evolution 1991,32(2):128-144.

    [47]KUMAZAWA Y,NISHIDA M.Molecular phylogeny of Osteoglossoids:a new model for Gondwanian origin and plate tectonic transportation of the Asian Arowana[J].Molecular Biology and Evolution,2000,17(12):1869-1878.

    [48]CRANSTON P S,EDWARD D,COOK L G.New status,species,distribution records and phylogeny for Australian mandibulate Chironomidae(Diptera)[J].Australian Journal of Entomology,2002,41(4):357-366.

    [49]PAPOUCHEVA E,PROVIZ V,LAMBKIN C,et al.Phylogeny of the endemic Baikalian Sergentia(Chironomidae,Diptera)[J].Molecular Phylogenetics and Evolution,2003,29(1):120-125.

    [50]CAREW M E,MARSHALL S E,HOFFMANN A A.A combination of molecular and morphological approaches resolves species in the taxonomically difficult genus Procladius Skuse(Diptera:Chironomidae)despite high intra-specific morphological variation[J].Bull Entomol Res,2011,101(5):505-519.

    [51]鄒新慧,頌葛.基因樹沖突與系統(tǒng)發(fā)育基因組學(xué)研究[J].植物分類學(xué)報(bào),2008,46(6):795-807. ZHOU X H,SONG G.Conflicting gene trees and phylogenomics[J]. Journal of Systematics and Evolution,2008,46(6):795-807(in Chinese).

    (責(zé)任編校 紀(jì)翠榮)

    Application progress of common genes in the phylogenetic studies of Chironomidae

    YAN Chuncai1,GUO Qin1,ZHAO Guangjun1,GE Xinyu1,WANG Xinhua2,LIU Ting1
    (1a.College of Life Sciences,1b.Tianjin Key Laboratory of Animal and Plant Resistance,Tianjin Normal University,Tianjin 300387,China;2.College of Life Sciences,Nankai University,Tianjin 300071,China)

    Chironomidae belongs to Nematocera in Diptera and includes 11 subfamilies.The paper summarized the applications of common nuclear genes and mitochondria genes which were adopted in the phylogenetic studies of Chironomidae:In Chironomidae(excluding Chilenomyiinae and Usambaromyiinae),all sampled subfamilies were confirmed to be the monophyly,with the exception of Prodiamesinae;the monogeneric Podonominae was supported as sister to Tanypodinae;the subfamily Orthocladiinae and Chironominae were sister groups.In the subfamily of Chironominae,Chironomini and Tanytarsini were monophyletic groups.The results also showed that:18S rDNA and 28S rDNA genes can accurately infer the phylogenetic relationships of the levels from kindom to family,and also can be used for some groups among genus.CAD gene can infer the phylogenetic relationships of the levels from subfamily to genus.ITS and EF-1ɑ genes are more suitable for the levels of species or genus.COⅠand COⅡare applicable for the levels of genus,species and subspecies,but can not infer the phylogenetic relationships of the higher levels of tribe,subfamily and family.16S rDNA can infer the phylogenetic relationships of the levels of genus and species,but can not be used in intraspecific.Cytb is applicable for the levels of intraor inter-species,even for the level of family.

    Chironomidae;genes;molecular marker;molecular systematics;phylogeny

    Q951

    A

    1671-1114(2016)06-0054-08

    2016-03-25

    國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31101653,31272284,31672324);天津市自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(14JCQNJC14600);天津市高等學(xué)??萍及l(fā)展基金資助項(xiàng)目(20090608);天津師范大學(xué)引進(jìn)人才基金資助項(xiàng)目(5RL104);天津市優(yōu)秀青年教師資助計(jì)劃資助項(xiàng)目(2013).

    閆春財(cái)(1979—),男,副教授,主要從事昆蟲分子系統(tǒng)學(xué)方面的研究.

    猜你喜歡
    搖蚊亞科線粒體
    棘皮動(dòng)物線粒體基因組研究進(jìn)展
    線粒體自噬與帕金森病的研究進(jìn)展
    云南省雙江縣4種多足搖蚊翅膀形態(tài)特征及COI基因序列分析
    伊朗臂繭蜂亞科、繭蜂亞科、甲腹繭蜂亞科和小腹繭蜂亞科的新記錄(膜翅目:繭蜂科)
    沉睡搖蚊的生存智慧
    A faunistic study on the bee flies(Diptera:Brachycera:Asiloidea:Bombyliidae)from northern Iran
    廣西多足搖蚊屬一新記錄種記述
    NF-κB介導(dǎo)線粒體依賴的神經(jīng)細(xì)胞凋亡途徑
    線粒體研究方法探討
    免费人成视频x8x8入口观看| 黑人操中国人逼视频| 亚洲黑人精品在线| 亚洲激情在线av| 精品人妻1区二区| 黄色毛片三级朝国网站| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| av在线天堂中文字幕| 久久天堂一区二区三区四区| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 激情在线观看视频在线高清| 黑人操中国人逼视频| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 两个人看的免费小视频| 亚洲国产精品久久男人天堂| 狂野欧美激情性xxxx| 亚洲精品久久国产高清桃花| 国产三级黄色录像| 精品国产美女av久久久久小说| av中文乱码字幕在线| 大型黄色视频在线免费观看| 全区人妻精品视频| 麻豆久久精品国产亚洲av| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲电影在线观看av| 女同久久另类99精品国产91| 老汉色∧v一级毛片| 男女午夜视频在线观看| 午夜福利在线在线| 好男人电影高清在线观看| 久久婷婷成人综合色麻豆| 亚洲精品在线观看二区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 日韩欧美 国产精品| 少妇粗大呻吟视频| 黄色 视频免费看| 动漫黄色视频在线观看| 不卡一级毛片| 国产精品爽爽va在线观看网站| 超碰成人久久| 一本精品99久久精品77| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲黑人精品在线| 国产一区二区在线av高清观看| 黄片小视频在线播放| 国产成人系列免费观看| 久久精品人妻少妇| 久久婷婷成人综合色麻豆| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲全国av大片| 18禁观看日本| 999久久久国产精品视频| 精品福利观看| 欧美精品啪啪一区二区三区| 麻豆成人av在线观看| 久久久久久久久中文| 亚洲中文日韩欧美视频| 日本在线视频免费播放| xxxwww97欧美| 午夜激情福利司机影院| 欧美一级毛片孕妇| av片东京热男人的天堂| 亚洲精品久久国产高清桃花| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲精华国产精华精| 欧美在线一区亚洲| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 五月玫瑰六月丁香| 黄片小视频在线播放| 国产主播在线观看一区二区| 午夜影院日韩av| 亚洲 国产 在线| 身体一侧抽搐| 熟女电影av网| 国产精品免费视频内射| 99国产精品一区二区三区| 99国产精品99久久久久| 久久午夜综合久久蜜桃| 久久久久久久久免费视频了| 国产精品久久电影中文字幕| 精品久久久久久成人av| 免费在线观看日本一区| 搡老熟女国产l中国老女人| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 在线观看舔阴道视频| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产视频一区二区在线看| 不卡一级毛片| 亚洲国产精品sss在线观看| 日韩精品免费视频一区二区三区| 日本五十路高清| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲午夜理论影院| 精品一区二区三区av网在线观看| 可以免费在线观看a视频的电影网站| av福利片在线| 国产精品亚洲av一区麻豆| 成人一区二区视频在线观看| 白带黄色成豆腐渣| 国产精品影院久久| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产精品免费一区二区三区在线| 叶爱在线成人免费视频播放| cao死你这个sao货| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产成人啪精品午夜网站| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 欧美一级a爱片免费观看看 | 9191精品国产免费久久| 精品国产亚洲在线| 久久亚洲精品不卡| 免费看美女性在线毛片视频| 午夜福利在线观看吧| 无人区码免费观看不卡| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | www.www免费av| 国产97色在线日韩免费| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲国产欧美网| 高清在线国产一区| 国产精品亚洲美女久久久| 精品电影一区二区在线| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 黄频高清免费视频| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 午夜福利在线在线| 欧美一区二区国产精品久久精品 | 国产久久久一区二区三区| 超碰成人久久| 午夜福利在线在线| 岛国视频午夜一区免费看| 国产成人精品久久二区二区91| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 欧美一级a爱片免费观看看 | 男女之事视频高清在线观看| 一进一出抽搐gif免费好疼| 一进一出抽搐gif免费好疼| 99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 美女午夜性视频免费| 一进一出抽搐gif免费好疼| 长腿黑丝高跟| 国产成人影院久久av| 中出人妻视频一区二区| 91在线观看av| 12—13女人毛片做爰片一| 国产精品久久久av美女十八| 变态另类丝袜制服| 国产精品久久视频播放| 欧美色欧美亚洲另类二区| 日韩欧美国产在线观看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 午夜两性在线视频| 国产精品av视频在线免费观看| АⅤ资源中文在线天堂| 日本一二三区视频观看| 性欧美人与动物交配| 看黄色毛片网站| 成人av一区二区三区在线看| 国产av在哪里看| 国产成年人精品一区二区| 日韩大码丰满熟妇| 精品久久蜜臀av无| 精品高清国产在线一区| 精品不卡国产一区二区三区| 草草在线视频免费看| 宅男免费午夜| 麻豆av在线久日| 亚洲一码二码三码区别大吗| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 亚洲人成电影免费在线| 国产激情久久老熟女| 又黄又爽又免费观看的视频| 精品福利观看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 亚洲av熟女| 女警被强在线播放| 可以在线观看毛片的网站| 国产99白浆流出| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 禁无遮挡网站| 国产人伦9x9x在线观看| 欧美激情久久久久久爽电影| 一级a爱片免费观看的视频| 91av网站免费观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 特级一级黄色大片| 一级a爱片免费观看的视频| 久久中文字幕一级| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲国产精品成人综合色| 首页视频小说图片口味搜索| 香蕉久久夜色| 欧美一区二区精品小视频在线| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 十八禁人妻一区二区| 亚洲天堂国产精品一区在线| 久久香蕉精品热| 男女床上黄色一级片免费看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 窝窝影院91人妻| 999久久久精品免费观看国产| 免费av毛片视频| 欧美黑人巨大hd| 99久久综合精品五月天人人| 国产精品98久久久久久宅男小说| 亚洲激情在线av| 一本一本综合久久| 亚洲人成网站高清观看| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产一区二区在线av高清观看| bbb黄色大片| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 免费电影在线观看免费观看| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲成av人片在线播放无| 又粗又爽又猛毛片免费看| 俄罗斯特黄特色一大片| 精品久久久久久成人av| 一本大道久久a久久精品| 久久这里只有精品中国| av视频在线观看入口| 国产精品久久电影中文字幕| 岛国在线观看网站| 99精品欧美一区二区三区四区| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 欧美精品啪啪一区二区三区| 免费电影在线观看免费观看| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲av成人一区二区三| 国产主播在线观看一区二区| 制服诱惑二区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 老汉色∧v一级毛片| or卡值多少钱| 久久伊人香网站| 999久久久精品免费观看国产| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 午夜激情福利司机影院| 在线国产一区二区在线| 黄色 视频免费看| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲人成伊人成综合网2020| xxx96com| 两个人的视频大全免费| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产成人av教育| 久久人妻av系列| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产野战对白在线观看| 变态另类丝袜制服| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 久久国产精品人妻蜜桃| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲国产精品999在线| 国产精品一及| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产av又大| 中出人妻视频一区二区| 中文字幕高清在线视频| 看黄色毛片网站| 色老头精品视频在线观看| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产av麻豆久久久久久久| av天堂在线播放| 69av精品久久久久久| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产激情久久老熟女| 天天一区二区日本电影三级| 国产一区二区在线观看日韩 | 久久草成人影院| 亚洲色图av天堂| 精华霜和精华液先用哪个| 日本 欧美在线| 怎么达到女性高潮| 在线观看www视频免费| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 18禁美女被吸乳视频| 久久国产精品人妻蜜桃| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲精品av麻豆狂野| 小说图片视频综合网站| 国产精品久久久av美女十八| 久久中文字幕一级| 欧美成人免费av一区二区三区| 欧美精品亚洲一区二区| 国产高清视频在线观看网站| 真人一进一出gif抽搐免费| 亚洲精品av麻豆狂野| 我的老师免费观看完整版| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 欧美日韩一级在线毛片| 人人妻人人看人人澡| 久久这里只有精品中国| 欧美乱妇无乱码| 真人做人爱边吃奶动态| 一级a爱片免费观看的视频| 嫁个100分男人电影在线观看| 久久伊人香网站| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国内揄拍国产精品人妻在线| 欧美黑人巨大hd| 热99re8久久精品国产| 国产精品乱码一区二三区的特点| 男女午夜视频在线观看| 国产成人精品无人区| 男女那种视频在线观看| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产一区二区在线av高清观看| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 国语自产精品视频在线第100页| 国产私拍福利视频在线观看| 精品无人区乱码1区二区| 日韩精品中文字幕看吧| 五月玫瑰六月丁香| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产免费男女视频| 黄色女人牲交| 老鸭窝网址在线观看| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产三级在线视频| 久久精品91无色码中文字幕| 日日夜夜操网爽| 亚洲自拍偷在线| 一个人免费在线观看电影 | 99国产精品99久久久久| 欧美在线黄色| 母亲3免费完整高清在线观看| 欧美大码av| 悠悠久久av| 亚洲九九香蕉| 亚洲国产精品久久男人天堂| 亚洲一区中文字幕在线| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 99在线视频只有这里精品首页| 看黄色毛片网站| 一a级毛片在线观看| 久久久久国内视频| 亚洲av成人精品一区久久| 日韩国内少妇激情av| 12—13女人毛片做爰片一| 大型av网站在线播放| 成人亚洲精品av一区二区| 免费在线观看影片大全网站| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 欧美日本视频| 国产不卡一卡二| 成年人黄色毛片网站| 日韩欧美国产在线观看| 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲人成77777在线视频| 99热6这里只有精品| 一本大道久久a久久精品| 午夜免费观看网址| 亚洲av熟女| 99热这里只有是精品50| av国产免费在线观看| 高清毛片免费观看视频网站| 特大巨黑吊av在线直播| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 午夜免费成人在线视频| 男女之事视频高清在线观看| 正在播放国产对白刺激| 亚洲精品一区av在线观看| 国产成人影院久久av| 国产精品亚洲美女久久久| 国产91精品成人一区二区三区| 国产精品亚洲av一区麻豆| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产精品免费一区二区三区在线| 久久久久性生活片| 黄色a级毛片大全视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 听说在线观看完整版免费高清| 成人三级做爰电影| 999精品在线视频| 大型av网站在线播放| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 午夜福利在线在线| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲av五月六月丁香网| 午夜影院日韩av| 欧美成人性av电影在线观看| 国产久久久一区二区三区| 免费看a级黄色片| 18禁美女被吸乳视频| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 久久精品91无色码中文字幕| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产爱豆传媒在线观看 | 国产黄片美女视频| 久久久久久大精品| 99热这里只有是精品50| 国产一区二区在线观看日韩 | 亚洲精品在线美女| 久久中文字幕人妻熟女| 亚洲第一电影网av| 大型黄色视频在线免费观看| 免费看美女性在线毛片视频| 91老司机精品| 亚洲真实伦在线观看| 俺也久久电影网| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲美女黄片视频| 中亚洲国语对白在线视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 婷婷精品国产亚洲av在线| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 欧美精品亚洲一区二区| 久久久久久久午夜电影| 怎么达到女性高潮| 免费看a级黄色片| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲国产精品合色在线| av有码第一页| 99热这里只有是精品50| 久久这里只有精品中国| e午夜精品久久久久久久| 人妻夜夜爽99麻豆av| 日本a在线网址| 91在线观看av| 91成年电影在线观看| 最近最新中文字幕大全电影3| 久久精品91蜜桃| 久久中文字幕一级| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 日日干狠狠操夜夜爽| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 日韩免费av在线播放| 久久精品成人免费网站| 国产精品电影一区二区三区| 丰满人妻一区二区三区视频av | 一a级毛片在线观看| 色精品久久人妻99蜜桃| 成人精品一区二区免费| 午夜福利在线在线| a级毛片在线看网站| 色老头精品视频在线观看| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 国产视频内射| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 18禁观看日本| 一本久久中文字幕| 国产精品亚洲美女久久久| 欧美黄色片欧美黄色片| 成熟少妇高潮喷水视频| 黄色 视频免费看| 中国美女看黄片| 搞女人的毛片| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 国产高清videossex| 一进一出抽搐gif免费好疼| 中国美女看黄片| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 一区二区三区激情视频| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 精华霜和精华液先用哪个| av片东京热男人的天堂| 日韩精品青青久久久久久| 国产成人av教育| 亚洲专区字幕在线| 99在线人妻在线中文字幕| 欧美一级毛片孕妇| 精品久久久久久,| 免费人成视频x8x8入口观看| 中文在线观看免费www的网站 | 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲av电影不卡..在线观看| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 国产视频一区二区在线看| a级毛片在线看网站| 曰老女人黄片| 岛国在线免费视频观看| 一本综合久久免费| 国产亚洲精品久久久久5区| 亚洲av成人一区二区三| 在线观看一区二区三区| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产精品综合久久久久久久免费| 久久久久九九精品影院| 亚洲成av人片在线播放无| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国产99久久九九免费精品| 国产精品免费一区二区三区在线| 少妇被粗大的猛进出69影院| 一边摸一边抽搐一进一小说| 亚洲一区二区三区不卡视频| 丰满人妻一区二区三区视频av | 中文亚洲av片在线观看爽| 午夜免费激情av| 两个人的视频大全免费| 91av网站免费观看| 一区二区三区国产精品乱码| 欧美性猛交黑人性爽| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 欧美午夜高清在线| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲精品在线观看二区| 成人av在线播放网站| 在线观看www视频免费| 日本一二三区视频观看| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 啪啪无遮挡十八禁网站| 久久久久久大精品| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 在线观看一区二区三区| 国产69精品久久久久777片 | 亚洲成人久久性| 亚洲七黄色美女视频| 校园春色视频在线观看| 亚洲av五月六月丁香网| 久久精品91无色码中文字幕| 亚洲色图av天堂| 搡老妇女老女人老熟妇| 久久精品国产综合久久久| 90打野战视频偷拍视频| 精品一区二区三区av网在线观看| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 一区福利在线观看| 日韩欧美在线二视频| 午夜福利欧美成人| 老司机福利观看| 午夜福利在线在线| 99热6这里只有精品| 久久久久久人人人人人| 99国产综合亚洲精品| 亚洲avbb在线观看| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 日韩欧美国产一区二区入口| 精品久久久久久成人av| 久久久久久大精品| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 久久久久性生活片| 91麻豆精品激情在线观看国产| 在线观看舔阴道视频| 视频区欧美日本亚洲| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 美女午夜性视频免费| 国产av麻豆久久久久久久| 成人午夜高清在线视频| 大型黄色视频在线免费观看| 狂野欧美激情性xxxx| 五月玫瑰六月丁香| 欧美日韩国产亚洲二区| 男女视频在线观看网站免费 | 色综合欧美亚洲国产小说| 一a级毛片在线观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 久久久久久久午夜电影| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 很黄的视频免费| 午夜免费观看网址| 国产亚洲精品一区二区www| 青草久久国产| 午夜免费成人在线视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 精品国产亚洲在线| 91麻豆av在线| 变态另类丝袜制服| 搞女人的毛片| 两性夫妻黄色片| 国产一区在线观看成人免费| 国产激情欧美一区二区| 日本 欧美在线| 婷婷精品国产亚洲av在线| 久久久久久久久免费视频了| 日本a在线网址| 大型黄色视频在线免费观看| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 黄频高清免费视频| 免费在线观看影片大全网站| 久久伊人香网站| 黄色视频,在线免费观看| 日本黄大片高清| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 亚洲精品粉嫩美女一区| 无限看片的www在线观看| 在线观看免费午夜福利视频| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 黑人操中国人逼视频| 久久久久国内视频| 美女免费视频网站| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 亚洲精华国产精华精| 亚洲成人精品中文字幕电影| 怎么达到女性高潮| 午夜福利在线观看吧| 亚洲精品在线观看二区| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 99久久无色码亚洲精品果冻|