過(guò)敏性鼻炎患兒淋巴細(xì)胞亞群、血清IgE水平的變化及其相關(guān)性

徐文中 劉春艷

(寧波市眼科醫(yī)院檢驗(yàn)科，寧波315040)

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過(guò)敏性鼻炎患兒淋巴細(xì)胞亞群、血清IgE水平的變化及其相關(guān)性

徐文中 劉春艷①

(寧波市眼科醫(yī)院檢驗(yàn)科，寧波315040)

目的：探討過(guò)敏性鼻炎患兒外周血淋巴細(xì)胞亞群水平、血清中IFN-γ、IL-4 、IL-5濃度水平及血清中IgE水平的變化，并分析其相關(guān)性。方法：選取過(guò)敏性鼻炎的患兒86例，同期體檢的健康兒童76 例作為對(duì)照組，采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)其CD3+、CD4+、CD8+CD19+、CD4+CD25+、 CD16+56+淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)情況，采用雙抗體夾心(ELISA )法檢測(cè)者血清中IFN-γ、IL-4 、IL-5濃度水平，采用免疫比濁法檢測(cè)血清中IgE水平。結(jié)果：過(guò)敏性鼻炎患兒CD19+、CD4+/CD8+、 血清IL-4 、IL-5和IgE水平較正常對(duì)照組增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD25+、CD16+56+、IFN-γ較正常對(duì)照組降低(P<0.05)，過(guò)敏性鼻炎患兒CD19+B淋巴細(xì)胞和血清IgE 水平之間具有相關(guān)性。 結(jié)論：淋巴細(xì)胞的功能異常、Th1/Th2 比例失衡可能與過(guò)敏性鼻炎發(fā)病機(jī)制有關(guān)，血清IgE 、IFN-γ、IL-4 和IL-5在過(guò)敏性鼻炎患兒中起著重要作用。

淋巴細(xì)胞亞群；IL-4；IL-5；干擾素-γ；IgE；過(guò)敏性鼻炎；流式細(xì)胞技術(shù)

過(guò)敏性鼻炎是一種常見(jiàn)的變態(tài)反應(yīng)性疾病，主要臨床表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作性噴嚏、水樣鼻涕和鼻塞等，近年來(lái)在兒童發(fā)病率呈上升趨勢(shì)[1]，其病因比較復(fù)雜，T 、B 淋巴細(xì)胞功能紊亂，尤其以Th2占優(yōu)勢(shì)的免疫應(yīng)答在該病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中具有重要作用。本研究通過(guò)檢測(cè)過(guò)敏性鼻炎患兒與健康兒童外周血中淋巴細(xì)胞亞群水平及血清中IFN-γ、IL-4 、IL-5，IgE水平的變化，探討其在過(guò)敏性鼻炎發(fā)病中的作用。

1 資料與方法

1.1 材料

1.1.1 一般資料 選取2012年12月～2015年7月住院及門(mén)診過(guò)敏鼻炎性發(fā)作患兒86例和健康體檢的兒童76例，年齡在1～12歲，平均在6歲，同時(shí)進(jìn)行淋巴細(xì)胞亞群、IFN-γ、IL-4 、IL-5和血清IgE水平檢測(cè)。

1.1.2 主要試劑和設(shè)備 血清過(guò)敏原特異性IgE測(cè)定試劑和儀器分別采用BECKMAN COOLTER 的總免疫球蛋白試劑盒和IMMAGE800特定蛋白儀；淋巴細(xì)胞亞群水平測(cè)定的試劑盒為BD MultiTEST IMK kit，IFN-γ、IL-4 、IL-5測(cè)定的試劑盒和流式細(xì)胞儀(FACScalibur)均來(lái)自美國(guó)BD公司。

1.2 方法

1.2.1 T淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè) 所有檢測(cè)者均用EDTA-K2抗凝管空腹靜脈抽血1.8 ml，經(jīng)相應(yīng)的熒光標(biāo)記單克隆抗體染色，避光室溫孵育20 min，用FACSLysing solution溶血處理，流式細(xì)胞儀測(cè)定CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD4+CD25+、CD16+56+淋巴細(xì)胞亞群水平。

1.2.2 血清IFN-γ、IL-4 、IL-5及IgE水平檢測(cè) 所有檢測(cè)者于清晨用分離膠管采集2 ml靜脈血，分離血清后，常規(guī)分離血清,置-80℃冰箱待測(cè)。

2 結(jié)果

2.1T淋巴細(xì)胞亞群和IgE水平測(cè)定結(jié)果 :過(guò)敏性鼻炎患兒CD19+、CD4+/CD8+和血清IgE水平較正常對(duì)照組增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD25+、CD16+56+較正常對(duì)照組降低(P<0.05)見(jiàn)表1。

2.2 血清中IFN-γ、IL-4 、IL-5和IgE水平 過(guò)敏性鼻炎患兒血清IL-4 、IL-5和血清IgE水平較正常對(duì)照組增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，IFN-γ較正常對(duì)照組降低(P<0.05)，見(jiàn)表2。

2.3 過(guò)敏性鼻炎患兒外周血中CD19+淋巴細(xì)胞和血清IgE水平的相關(guān)性 我們對(duì)86例過(guò)敏性鼻炎患兒外周血中CD19+淋巴細(xì)胞及 血清IgE水平之間的相關(guān)性進(jìn)行了相關(guān)性分析，結(jié)果兩者存在著顯著的相關(guān)性(r=0.746,P<0.05)。

3 討論

過(guò)敏性鼻炎是機(jī)體接觸變應(yīng)原后主要由IgE介導(dǎo)的鼻黏膜非感染性炎性疾病[2]，屬于速發(fā)型(Ⅰ型)變態(tài)反應(yīng)，其病理可能是機(jī)體受到變應(yīng)原刺激后多種免疫活性細(xì)胞參與的疾病過(guò)程。淋巴細(xì)胞是其中重要的一種細(xì)胞，有研究表明T淋巴細(xì)胞不僅參與細(xì)胞免疫，而且也作為調(diào)節(jié)細(xì)胞參與調(diào)節(jié)多種免疫反應(yīng)[3]。研究中 ，過(guò)敏性鼻炎患兒CD3+、CD4+、CD8+水平較正常對(duì)照組明顯降低(P<0.05)，CD3+代表T淋巴細(xì)胞水平，我們推測(cè)其降低表明過(guò)敏性鼻炎患兒T細(xì)胞免疫功能降低；CD4+是具有輔助性T細(xì)胞亞群，它可以刺激B細(xì)胞產(chǎn)生抗體，可以分為T(mén)h1和Th2 兩種類(lèi)型,它們通過(guò)所分泌的細(xì)胞因子相互調(diào)節(jié),正常情況下,二者處于相對(duì)平衡狀態(tài)以維持機(jī)體免疫功能的平衡，當(dāng)機(jī)體受到異?？乖碳r(shí),上述平衡被打破,可引起異常的免疫應(yīng)答。Th1主要參與細(xì)胞免疫,是遲發(fā)型(Ⅵ)型變態(tài)反應(yīng)中的重要效應(yīng)細(xì)胞，其分泌的IFN-γ是其特征因子。Th2 細(xì)胞主要刺激B細(xì)胞產(chǎn)生抗體,參與體液免疫,引起速發(fā)型(Ⅰ型)變態(tài)反應(yīng),維持著機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫正常的功能，其主要分泌IL-4 、IL-5等細(xì)胞因子。本研究結(jié)果顯示,過(guò)敏性鼻炎患兒CD4+T細(xì)胞降低，其中Th1 類(lèi)細(xì)胞因子也IFN-γ降低,而Th2 類(lèi)細(xì)胞因子IL-4、IL-5升高,我們分析過(guò)敏性鼻炎患兒盡管Th細(xì)胞減少，但免疫狀態(tài)異常，Th2 類(lèi)細(xì)胞優(yōu)勢(shì)表達(dá)，Th1/Th2 比例失衡在其炎性反應(yīng)中起著重要作用，與Baars報(bào)道一致[4]。CD8+代表細(xì)胞毒性T細(xì)胞和抑制性T細(xì)胞，可以抑制T淋巴細(xì)胞活性和抑制B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體[5]，在過(guò)敏性鼻炎患兒中降低，說(shuō)明其對(duì)B細(xì)胞抑制作用減弱，使B細(xì)胞產(chǎn)生IgE抗體增高，成為過(guò)敏性鼻炎發(fā)病的重要環(huán)節(jié)；但過(guò)敏性鼻炎患兒CD4+/CD8+比值較正常對(duì)照組升高，我們推測(cè)二者的免疫平衡功能紊亂在該疾病中過(guò)程起重要作用。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮作用，可通過(guò)調(diào)節(jié)Th1/Th2 平衡，抑制Th2 細(xì)胞的分化而強(qiáng)化Th1 細(xì)胞的活性，從而抑制變應(yīng)性疾病的發(fā)生[6]。

表1 T淋巴細(xì)胞亞群和IgE水平測(cè)定結(jié)果

Tab.1 Results of T lymphocyte subsets

GroupsCasesCD3+CD4+CD8+CD19+CD16+56+CD4+/CD8+CD4+CD25+Allergicrhinitisgroup8665.07±2.9236.29±3.1223.78±2.5515.20±1.719.29±0.921.55±0.234.54±0.82Controlgroup7668.60±7.7040.37±5.1228.94±2.0810.41±1.0711.71±1.191.42±0.258.10±1.10t-3.94-6.21-14.1821.74-14.363.0723.14P<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05

表2 血清中IFN-γ、IL-4 、IL-5水平測(cè)定結(jié)果

Tab.2 Results of IFN-γ，IL-4 ，IL-5 and IgE levels

GroupsCasesIFN-γIL-4IL-5IgEAllergicrhinitisgroup8632.38±4.3670.14±4.3857.93±4.76362.47±153.97Controlgroup7644.84±3.4152.64±4.7538.90±4.0235.84±15.33t-20.3720.3927.3119.45P<0.05<0.05<0.05<0.05

本試驗(yàn)中過(guò)敏性鼻炎組明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，我們推測(cè)CD4+CD25+減少對(duì)Th2抑制作用減弱，導(dǎo)致Th1/Th2 失衡，可能是過(guò)敏性鼻炎發(fā)生原因之一，有報(bào)道過(guò)敏性鼻炎中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞存在缺陷[7]。

CD19是B淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志分子,其在過(guò)敏性鼻炎患兒中表達(dá)升高，表明B淋巴細(xì)胞活化，分化成熟為漿細(xì)胞，并分泌IgE抗體是變應(yīng)性鼻炎發(fā)病的重要因素，本研究中變應(yīng)性鼻炎患兒IgE升高間接表明B 淋巴細(xì)胞功能紊亂，同時(shí)過(guò)敏性鼻炎患兒CD19+和IgE水平具有正相關(guān)性。CD16+56+代表的自然殺傷細(xì)胞(NK 細(xì)胞)是機(jī)體的第一道防御屏障，在清除病毒感染中起重要作用，過(guò)敏性鼻炎中其降低，表明患兒免疫力低下，變應(yīng)原刺激后應(yīng)激能力減弱和其發(fā)病有關(guān)。

綜上所述，過(guò)敏性鼻炎的發(fā)病與T、B淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞功能紊亂、血清IgE、水平相關(guān)，其和病情進(jìn)展相關(guān)性有待于擴(kuò)大樣本進(jìn)一步研究，治療過(guò)程中要注意調(diào)節(jié)患兒免疫功能。

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[2] 中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志編委會(huì)鼻科組，中華醫(yī)學(xué)會(huì)耳鼻咽喉頭頸外科學(xué)分會(huì)鼻科學(xué)組.變應(yīng)性鼻炎診斷和治療指南[J].中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2009，44(12):977-978.

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[收稿2015-06-11 修回2015-08-20]

(編輯 許四平)

Changes and correlation of lymphocyte subsets and serum levels of IgE in children with allergic rhinitis

XU Wen-Zhong,LIU Chun-Yan.Clinical Laboratory,Ningbo Eye′s Hospital,Ningbo 315040,China

Objective:To investigate the changes of lymphocyte subsets and the serum levels of IgE in the children with allergic rhinitis,and to analyze the relationship between lymphocyte subsets and IgE.Methods: CD3+，CD4+，CD8+CD19+，CD4+CD25+，CD16+56+lymphocyte subsets were measured by flow cytometry ,IFN-γ，IL-4，IL-5 of serum were detected by enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)and the serum level of total IgE was detected by immuno turbidimetric assays in 86 cases of children with allergic rhinitis and 76 cases of healthy children.Results: CD19+B lymphocyte subsets，the ratio of CD4+and CD8+，IL-4 ，IL-5 and the serum levels of IgE were increased in the children with allergic rhinitis groups as compared with healthy children ,the difference has statistical significance(P<0.05);CD3+，CD4+，CD8+，CD4+CD25+，CD16+56+lymphocyte subsets and IFN-γ were lower than the control group(P<0.05);there was a correlation between B lymphocyte subsets and IgE in the children with allergic rhinitis.Conclusion: Lymphocyte dysfunction and Th1/Th2 ratio imbalance may be related to the pathogenesis of allergic rhinitis,and IgE，IFN-γ，IL-4 and IL-5 play important roles in children with allergic rhinitis.

Lymphocyte subsets;IL-4;IL-5;Interferon γ;IgE;Allergic rhinitis；Flow cytometry

10.3969/j.issn.1000-484X.2016.04.022

徐文中(1982年-)，男，主管技師，主要從事臨床檢驗(yàn)方面工作。

R765.21

A

1000-484X(2016)04-0550-03

①寧波市婦女兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，寧波315012。