c-myc基因和p53蛋白在喉癌切緣組織的表達(dá)與局部復(fù)發(fā)的相關(guān)性研究

余曉虹，羅鴻，朱曉玲,李鶴,劉開瑞

(襄陽市中心醫(yī)院北區(qū)耳鼻喉科,湖北 襄陽 441003)

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c-myc基因和p53蛋白在喉癌切緣組織的表達(dá)與局部復(fù)發(fā)的相關(guān)性研究

余曉虹，羅鴻，朱曉玲,李鶴,劉開瑞

(襄陽市中心醫(yī)院北區(qū)耳鼻喉科,湖北 襄陽 441003)

目的 通過檢測(cè)c-myc基因(c-myc)和p53蛋白在喉癌切緣組織的表達(dá)，探討其與術(shù)后局部復(fù)發(fā)的相關(guān)性。方法 選擇接受治療的喉癌患者201例，將患者按復(fù)發(fā)與否分成復(fù)發(fā)組和非復(fù)發(fā)組，校正一般資料后，采用免疫組化法對(duì)兩組患者喉癌組織和切緣組織中c-myc和p53蛋白的表達(dá)進(jìn)行比較。結(jié)果 (1)在喉癌組織中，c-myc蛋白在復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組表達(dá)的陽性率分別為54.5%和50．0%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；p53蛋白在復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組表達(dá)的陽性率分別為84.8%和91.1%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；(2)在切緣組織中，c-myc蛋白在復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組表達(dá)的陽性率分別為66.7%和20.8%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；p53蛋白在復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組表達(dá)的陽性率分別為84.8%和81.0%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；(3)邊緣黏膜異型增生型發(fā)生率在復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組分別是63.6%和45.8%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 切緣組織中c-myc蛋白的表達(dá)與喉癌術(shù)后局部復(fù)發(fā)具有明顯相關(guān)性，或可作為局部復(fù)發(fā)狀況的預(yù)測(cè)指標(biāo)。

喉癌；局部復(fù)發(fā)；c-myc；p53

作為頭頸外科常見腫瘤之一,喉癌的治療方法隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步不斷優(yōu)化、改善。然而，術(shù)后局部復(fù)發(fā)時(shí)有發(fā)生,且是喉癌治療失敗的主要原因[1]，給患者和親屬帶來極大痛苦，不僅面臨再次手術(shù)或治療，對(duì)其心理也有消極影響。目前研究[2-4]認(rèn)為，手術(shù)切緣組織是否安全與術(shù)后局部復(fù)發(fā)有明顯相關(guān)性，而c-myc基因(c-myc)和p53等癌基因與喉癌的發(fā)生相關(guān)。因此，本研究旨在通過檢測(cè)c-myc和p53蛋白在喉癌切緣組織的表達(dá)，探討其與術(shù)后局部復(fù)發(fā)的相關(guān)性，以期確定能預(yù)測(cè)喉癌術(shù)后局部復(fù)發(fā)危險(xiǎn)性的基因蛋白，作為標(biāo)志物對(duì)術(shù)后恢復(fù)以及輔助治療提供可靠參考數(shù)據(jù)，降低術(shù)后局部復(fù)發(fā)的出現(xiàn)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年1月至2016年1月在襄陽市中心醫(yī)院接受治療的喉癌患者201例，其中男性175例，女性26例，年齡43～82(58.9±7.6)歲，病程0.4～8.7(3.5±2.1)年。排除標(biāo)準(zhǔn)：腦血管疾病或功能障礙者；腫瘤有轉(zhuǎn)移或轉(zhuǎn)移跡象者；有嚴(yán)重內(nèi)科疾病者；意識(shí)不清且精神狀態(tài)差者。根據(jù)國(guó)際通用腫瘤分期系統(tǒng)TNM，所有調(diào)查對(duì)象均為T1期，其中T1a 89例，T1b 112例。將患者按復(fù)發(fā)與否分成復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組，復(fù)發(fā)組： 33例，即手術(shù)切緣組織HE染色陰性，但術(shù)后經(jīng)病理學(xué)鑒定為局部復(fù)發(fā)；未復(fù)發(fā)組：168例，即2年隨診期內(nèi)無局部復(fù)發(fā)現(xiàn)象。使用自動(dòng)天平測(cè)量患者身高和體質(zhì)量，計(jì)算其體質(zhì)量指數(shù)(BMI)。結(jié)果顯示，兩組性別、年齡、病程、BMI等方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。本研究經(jīng)襄陽市中心醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均簽署知情同意書。

表1 兩組患者一般資料比較±s

1.2 研究方法 切緣組織取材：鏡下使用CO2激光將喉癌組織整塊切除，經(jīng)鉗夾清除炭化組織后在腫瘤組織周圍0.5 mm處另取4塊組織作為切緣組織標(biāo)本。標(biāo)本處理：4%中性甲醛固定后用石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片。免疫組化方法：采用SP法，兩種抗體工作濃度均為1∶100，以磷酸鹽緩沖液替換一抗制作切片作為陰性對(duì)照，以陽性切片為陽性對(duì)照。

1.3 判斷方法 免疫組化陽性結(jié)果：信號(hào)呈棕黃色或棕褐色，p53蛋白位于細(xì)胞核內(nèi)，c-myc蛋白同時(shí)位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。染色結(jié)果：為確保結(jié)果的準(zhǔn)確性及可靠性，采用雙盲法，由2名經(jīng)驗(yàn)豐富病理科醫(yī)師在光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)選擇5個(gè)視野，然后選取每個(gè)視野中100個(gè)細(xì)胞，對(duì)陽性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)算陽性細(xì)胞的百分比，取5個(gè)視野的平均值作為該標(biāo)本陽性細(xì)胞數(shù)的比例，若陽性細(xì)胞≥10%則判定為陽性結(jié)果(+)，若陽性細(xì)胞<10%則判定為陰性結(jié)果(-)。典型圖片見圖1～10。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 17．0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)資料進(jìn)行分析。計(jì)量數(shù)據(jù)(正態(tài))的比較為成組t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料(非等級(jí))則采用χ2檢驗(yàn)。顯著性水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 喉癌組織中c-myc和p53蛋白的表達(dá) c-myc蛋白：復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組的陽性細(xì)胞百分比分別為54.5%(18/33)和50．0%(84/168)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；p53蛋白：復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組的陽性細(xì)胞百分比分別為84.8%(28/33)和91.1%(153/168)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具體見表2。

圖1 喉癌組織中p53(+)，SP法(×40)

圖2 喉癌組織中p53(-)，SP法(×40)

圖3 喉癌組織中c-myc(+)，SP法(×40)

圖4 喉癌組織中c-myc(-)，SP法(×40)

圖5 切緣組織中p53(+)，SP法(×40)

圖6 切緣組織中p53(-)，SP法(×40)

圖7 切緣組織中c-myc(+)，SP法(×40)

圖8 切緣組織中c-myc(-)，SP法(×40)

圖9 異型增生手術(shù)切緣p53(+)，SP法(×40)

圖10 異型增生手術(shù)切緣c-myc(+)，SP法(×40)

2.2 切緣組織中c-myc和p53蛋白的表達(dá) c-myc蛋白：復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組的陽性細(xì)胞的百分比分別為66.7%(22/33)和20.8%(35/168)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；p53蛋白：復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組的陽性細(xì)胞的百分比分別為84.8%(28/33)和81.0%(136/168)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。具體見表2。

表2 兩組患者喉癌和切緣組織中c-myc和p53蛋白陽性細(xì)胞表達(dá)的比較/例(%)

2.3 切緣黏膜異型增生狀況 201例患者中，切緣黏膜無異型增生116例，輕度異型增生56例，中度異型增生29例。其中，復(fù)發(fā)組發(fā)生切緣黏膜異型增生型增生患者21例，無異型增生的患者12例；未復(fù)發(fā)組發(fā)生切緣黏膜異型增生型增生的患者77例，無異型增生的患者91例，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P>0.05)。具體見表3。

表3 兩組患者切緣黏膜異型增生狀況比較/例(%)

注：兩組比較χ2=3.499，P=0.061。

3 討論

喉癌可分繼發(fā)性喉癌和原發(fā)性喉癌兩種。繼發(fā)性喉癌指其他部位的惡性腫瘤轉(zhuǎn)移至喉部致使喉部發(fā)生腫瘤，較為少見；而原發(fā)性喉癌指原發(fā)部位在喉部的腫瘤，以鱗狀細(xì)胞癌為主，相對(duì)常見?，F(xiàn)目前，喉癌的發(fā)生尚無明確病因，但研究[5-7]表明，吸煙、飲酒、空氣污染、職業(yè)因素、病毒感染、性激素、放射線等都是其可能的危險(xiǎn)因素。早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療對(duì)于緩解喉癌所致危害非常重要，不僅可提高患者的術(shù)后生存率，還可保留喉的發(fā)音功能，同時(shí)減少術(shù)后并發(fā)癥[8-10]。其治療方式主要為手術(shù)治療、放射治療、化療及生物治療等，有時(shí)會(huì)采取多種方式聯(lián)合治療的手段[11]。若對(duì)早期喉癌患者采取適當(dāng)治療手段，5年生存率高于90%[12]。復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是影響其預(yù)后效果的主要因素。喉癌的癥狀主要為咳嗽、聲嘶、呼吸困難、吞咽困難、頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等。

p53是一種腫瘤抑制基因，在所有惡性腫瘤中，50%以上會(huì)出現(xiàn)該基因的突變。p53基因突變后，由于其空間構(gòu)象的改變，將失去對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡和DNA 修復(fù)的調(diào)控作用，p53基因由抑癌基因轉(zhuǎn)變?yōu)榘┗?。喉癌患者中，p53基因發(fā)生突變的概率約為60%，是目前發(fā)現(xiàn)的與喉癌發(fā)生關(guān)系最為密切的癌基因[13]。

c-myc既是一種可易位基因，又是一種多種物質(zhì)調(diào)節(jié)的可調(diào)節(jié)基因，也是一種可使細(xì)胞無限增殖、獲永生化功能、促進(jìn)細(xì)胞分裂的基因。c-myc基因參與細(xì)胞凋零，與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)，研究表明[14]，其與喉癌的發(fā)生可能存在一定聯(lián)系。

早期喉癌患者二氧化碳激光治療失敗的原因主要是由于術(shù)后局部復(fù)發(fā)，本研究中復(fù)發(fā)組A中所有患者均接受了喉部分切除術(shù)。目前，判斷二氧化碳激光治療手術(shù)切除部分是否足夠或者手術(shù)切緣是否安全的主要手段仍然是病理學(xué)檢查。然而，本研究中33例局部復(fù)發(fā)患者常規(guī)病理學(xué)檢查組織切緣均為陰性，說明病理學(xué)檢查的不確定性太大，往往不能很好的預(yù)測(cè)術(shù)后局部復(fù)發(fā)的可能性。因此，探索更為準(zhǔn)確、可靠的檢查標(biāo)準(zhǔn)及方法很有必要。

本研究結(jié)果顯示，喉癌組織中，c-myc蛋白在復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組表達(dá)的陽性率分別為54.5%和50．0%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說明c-myc在喉癌組織的表達(dá)與喉癌復(fù)發(fā)的發(fā)生及演進(jìn)無明顯關(guān)系；p53蛋白在復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組表達(dá)的陽性率分別為84.8%和91.1%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說明p53在喉癌組織的表達(dá)與喉癌復(fù)發(fā)的發(fā)生及演進(jìn)也無明顯關(guān)系。

在切緣組織中，c-myc蛋白在復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組表達(dá)的陽性率分別為66.7%和20.8%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說明c-myc在切緣組織的表達(dá)與喉癌復(fù)發(fā)的發(fā)生及演進(jìn)有一定相關(guān)性；p53蛋白在復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組表達(dá)的陽性率分別為84.8%和81.0%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說明p53在邊緣組織的表達(dá)與喉癌復(fù)發(fā)的發(fā)生及演進(jìn)也無明顯關(guān)系。

邊緣黏膜異型增生型發(fā)生率在復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組分別是63.6%和45.8%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說明邊緣黏膜異型增生型的發(fā)生率與喉癌復(fù)發(fā)的發(fā)生及演進(jìn)無明顯關(guān)系。

綜上所述，切緣組織中c-myc蛋白的表達(dá)與喉癌術(shù)后局部復(fù)發(fā)具有明顯相關(guān)性，或可作為局部復(fù)發(fā)狀況預(yù)測(cè)的指標(biāo)。

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Correlation between the expressions of c-myc gene and p53 protein in laryngeal cancer edge tissues and local recurrence

YU Xiaohong,LUO Hong，ZHU Xiaoling,et al

(DepartmentofOtolaryngology,XiangyangCentralHospital,Xiangyang,Hubei441003,China)

Objective To explore the correlation of c-myc gene and p53 protein with local recurrence in laryngeal cancer edge tissues.Methods Totally 201 patients with laryngeal cancer treated in Xiangyang Central Hospital were assigned into 2 groups,recurrence group and non-recurrence group.The expressions of c-myc gene and p53 protein in laryngeal cancer edge tissues were analyzed after correcting clinical data between two groups.Results In laryngeal cancer tissues,the positive rates of the expression of c-myc gene in group A and group B were 54.5% and 50.0% respectively,and they were not statistically different(P>0.05);the expressions of p53 protein in group A and group B were 84.8% and 91.1% respectively,and they were not statistically different either(P>0.05).In edge tissues,the positive rates of the expression of c-myc gene in group A and group B were 66.7% and 20.8% respectively,and they were statistically different (P<0.05);the expression of p53 protein in group A and group B were 84.8% and 81.0% respectively,and they were not statistically different(P>0.05).The incidences of mucosa dysplasia on edge tissues in group A and group B were 63.6% and 45.8% respectively,and they were not statistically different(P>0.05).Conclusions The expression of c-myc gene in edge tissues has obvious correlation with postoperative local recurrence of laryngeal cancer,which can become a forecast indicator of local recurrence.

Laryngeal cancer;Local recurrence;c-myc;p53

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.10.029

2016-03-25，

2016-07-12)