氣相色譜法檢測黃芪飲片中有機氯農(nóng)藥殘留量

杜妍，宗凱，夏泉，余曉峰

(1.安徽出入境檢疫檢驗局，安徽 合肥 230022;2.安徽醫(yī)科大學藥學院，安徽 合肥 230032；3.安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院，安徽 合肥 230022)

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◇藥物分析◇

氣相色譜法檢測黃芪飲片中有機氯農(nóng)藥殘留量

杜妍1，2，宗凱1，夏泉3，余曉峰1

(1.安徽出入境檢疫檢驗局，安徽 合肥 230022;2.安徽醫(yī)科大學藥學院，安徽 合肥 230032；3.安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院，安徽 合肥 230022)

目的 了解目前安徽省部分醫(yī)療機構中所使用的的黃芪中藥飲片有機氯農(nóng)藥殘留量的現(xiàn)狀。方法 從安徽省部分三級甲等醫(yī)療機構采集樣品并收集相關產(chǎn)地信息，按照2010版《中國藥典》中有機氯農(nóng)藥殘留氣相色譜檢測方法，黃芪飲片粉粹后以有機溶劑超聲提取、用濃硫酸磺化后，采用不分流進樣方式，經(jīng)兩次程序升溫技術分離，后采用電子捕獲檢測器(ECD)檢測，外標法計算含量。結果 所采集的黃芪飲片中有機氯農(nóng)藥殘留遠低于《中國藥典》2010年版一部規(guī)定要求。但不同產(chǎn)地來源的樣品仍存在差異。結論 該方法可以快速準確的檢測黃芪飲片中有機氯農(nóng)藥殘留的含量，為安全用藥提供保障。

黃芪飲片；有機氯農(nóng)藥殘留；現(xiàn)狀調(diào)查

中藥農(nóng)藥殘留關系到安全用藥的問題，嚴重阻礙了中藥走向國際市場的步伐。如何確保中藥材的質(zhì)量安全成為目前迫在眉睫的首要問題。在過去的幾十年中，有機氯農(nóng)藥是一種高效廣譜殺蟲劑，被世界各地廣泛使用，并有嚴重的神經(jīng)毒性和實質(zhì)臟器毒性，可以引發(fā)癌癥。而且在禁用十幾年后，由于其穩(wěn)定性高，部分難以分解的農(nóng)藥有效化學成分在藥材中的聚集，仍能形成危害使用者健康的農(nóng)藥殘留問題。中藥材中有機氯農(nóng)藥主要為六六六、滴滴涕及五氯硝基苯三個品種。1983年，我國就明確禁止使用有機氯農(nóng)藥，但是由于藥材的種植期較長，特別是像黃芪這種多年生的根類藥材，十分容易受到有機氯農(nóng)藥的污染。國內(nèi)關于有機氯殘留檢測多集中在土壤[1]、中藥材[2-4]、煙草[5]、河流、茶、地表水、地下水、水產(chǎn)品等領域。但近年來并未有關于藥食同源的中藥材中有機氯殘留量檢測的報告。黃芪飲片作為傳統(tǒng)中藥材，具有扶正補氣之功效，更有增強機體免疫功能、利尿、保肝、抗應激、抗衰老、降壓和較廣泛的抗菌作用，是最為常用的補中益氣、藥食兩用中藥材[6]，市場需求較大，其安全性必須得到保障。2010版《中國藥典》中明確規(guī)定了其有機氯農(nóng)藥殘留的含量限定[總六氯甲苯(BHC)不得過千萬分之二；總滴滴涕(DDT)不得過千萬分之二；五氯硝基苯(PCNB)不得過千萬分之一][7]。為了解目前安徽省部分醫(yī)療機構黃芪飲片中有機氯農(nóng)藥殘留現(xiàn)狀，判斷其是否符合《中國藥典》2010版標準十分有必要，我們參照了2010年版《中國藥典》一部有機氯農(nóng)藥殘留測定法，對采集于安徽省不同醫(yī)療機構中黃芪飲片的有機氯農(nóng)藥殘留進行檢測，調(diào)查和評價目前黃芪飲片中有機氯農(nóng)藥是否符合國家標準。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 黃芪藥材10份，分別購自安徽省部分三級甲等醫(yī)療機構，分別以H1～H10表示(見表1)。有機氯農(nóng)藥對照品溶液：六氯甲苯(α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC)，滴滴涕(PP′-DDE，PP′-DDD，OP′-DDT，PP′-DDT)，五氯硝基苯(PCNB)均由安徽出入境檢驗檢疫局技術中心提供。其他試劑均為分析純。

1.2 儀器與設備 Agilent Technologies7890A型氣相色譜儀(美國Agilent公司)，配備63Ni ECD型電子捕獲檢測器，vortex-genie2旋渦混合器(美國SI公司)，Gen-Probe超聲儀(美國基因探針(Gen-Probe)公司)，avanti 301高速冷凍離心機(美國貝克曼公司)，N-EVAP-112氮吹儀(美國Organomation公司)。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件 檢測器溫度：300 ℃，進樣口：230 ℃，不分流進樣。初始程序升溫100 ℃，每分鐘10 ℃升至220 ℃，每分鐘8 ℃升至250 ℃，保持10 min。高純氮氣(>99．999%);載氣流速:1.5 mL·min-1，恒流模式，尾吹流量:58.5 m L·min-1，不分流，進樣量為1 μL。

1.3.2 對照品溶液的制備[7]適量稱取六氯甲苯(α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC)，滴滴涕(PP′-DDE，PP′-DDD，OP′-DDT，PP′-DDT)，五氯硝基苯(PCNB)三種農(nóng)藥對照品，分別用石油醚稀釋成約5 mg·L-1的溶液，作為儲備液。精密量取上述儲備液各0.5 mL，用石油醚稀釋至10 mL，混合制成0.25 mg·L-1的混合液，作為混合對照品儲備液。精密量取混合對照品儲備液，用適量石油醚分別稀釋成5、10、20、50、100 μg·L-1的溶液。

1.3.3 供試品溶液的制備[7]參考《中國藥典》2010年版一部制備方法。取適量黃芪飲片在烘箱內(nèi)干燥4 h，用中藥粉碎機粉碎，稱取2 g，置于100 mL燒杯中加水浸泡過夜。加40 mL丙酮，稱重后超聲30 min，用丙酮補足損失的重量后，加6 g氯化鈉，再加30 mL二氯甲烷，稱重后超聲15 min，用二氯甲烷補足損失的重量。迅速將有機相轉(zhuǎn)入100 mL燒杯中，并加入適量無水硫酸鈉，靜置4 h。精密稱取35 mL，旋蒸濃縮至近干，加入適量石油醚后旋蒸濃縮，重復3次，用5 mL石油醚溶解，再緩慢加入1 mL硫酸后移至10 mL離心管內(nèi)，渦旋離心(3 000 r·min-1)10 min。精密量取2 mL上清液，旋轉(zhuǎn)蒸干后，精密稀釋至1 mL。

1.3.4 線性與范圍 精密吸取1 μL混合對照品溶液，每個濃度平行測定3次，采用氣相色譜儀，以濃度為橫坐標，平均峰面積為縱坐標，計算相關系數(shù)和回歸方程。

2 結果

2.1 黃芪中藥飲片樣品信息 共收集10家醫(yī)療機構的黃芪飲片樣品，具體見表1。

2.2 標準曲線與回歸方程 有機氯農(nóng)藥標準品的回歸方程及相關系數(shù)見表2，由表2可見，有機氯農(nóng)藥混合對照品溶液線性關系良好。

2.3 實際樣品分析結果 檢測10種不同醫(yī)療機構的黃芪飲片農(nóng)藥殘留量，均發(fā)現(xiàn)有機氯類農(nóng)藥殘留(見表3)。色譜圖見圖1，滴滴涕(PP′-DDE，PP′-DDD，PP′-DDT)及五氯硝基苯(PCNB)均未檢出。

表1 黃芪中藥飲片樣品信息

表2 有機氯農(nóng)藥線性及回歸方程

表3 樣品的α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、OP′-DDT檢測結果

3 討論

測定結果表明，在采集的10組樣品中有機氯農(nóng)藥殘留量都很低，均符合2010版《中國藥典》對甘草、黃芪兩種藥材規(guī)定(≤0.2 μg·g-1)[7]、《藥用植物及制劑進出口綠色行業(yè)標準》對藥用植物原料、飲片、提取物及其制劑規(guī)定(≤0.1 μg·g-1)[8]、《香港中藥材標準》對中藥材規(guī)定(≤0.3 μg·g-1)[9]。在黃芪飲片中六六六有4種異構體有殘留，滴滴涕只有部分殘留，而其它含量均低于最低檢出限而未被檢出。但不同批號的黃芪藥材有機氯農(nóng)藥殘留量差異較大，如H5號樣品的總BHC殘留量較其他樣品的殘留量大，這種現(xiàn)象的出現(xiàn)，可能與黃芪種植過程有關[10]，也可能與氣候等環(huán)境因素有關，農(nóng)藥殘留的轉(zhuǎn)化和積聚的機制還有待于進一步研究,為控制農(nóng)藥殘留提供安全用藥提供理論依據(jù)。有機氯農(nóng)藥的穩(wěn)定性好，半衰期長，雖然在我國已經(jīng)禁用20多年，但在中藥中仍有一定殘留，因此監(jiān)測黃芪飲片中有機氯農(nóng)藥殘留對于保證其質(zhì)量十分必要。而本次實驗的檢測結果均符合要求，各醫(yī)院黃芪飲片中有機氯農(nóng)藥的殘留均穩(wěn)定在國家標準范圍內(nèi)。

本研究僅對安徽省部分三級甲等醫(yī)院黃芪飲片中有機氯殘留現(xiàn)狀進行了調(diào)查，而二級及以下醫(yī)院的黃芪中藥飲片有機氯農(nóng)藥殘留現(xiàn)狀還待進一步的調(diào)查。

[1] 王娜.超聲提取-氣相色譜法測定土壤中的多種有機氯農(nóng)藥殘留[J].環(huán)境化學，2011,30(2):569-570.

[2] 陳驍鵬,葉慧,仇雅靜,等.泰州地區(qū)7種中藥材中的有機氯農(nóng)藥殘留量的測定[J].藥物分析雜志,2012,32(7):1196-1204.

[3] 何睿,劉雪峰,劉海靜.中藥材中20種農(nóng)藥殘留的檢測方法研究[J].藥物分析雜志,2011,31(11):2164-2167.

[4] 黃曉會,薛健,吳曉波,等.甘草中50種有機氯及擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留量的分析方法研究[J].中國藥學雜志,2011,46(15):1204-1208.

[5] 張建平.超聲波溶劑提取-氣相色譜法測定煙草及煙草制品中19種有機氯農(nóng)藥殘留[J].分析科學學報，2012,28(3):377-380.

[6] 張薔,高文遠,滿淑麗.黃芪中有效成分藥理活性的研究進展[J].中國中藥雜志，2012,37(21):3203-3207.

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[8] 中華人民共和國商務部.藥用植物及制劑外經(jīng)貿(mào)綠色行業(yè)標準[S].WM/T2-2004.北京：中國標準出版社,2005.

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[10] 李輝,吳虹,沈晨,等.不同產(chǎn)地黃芪中有機氯農(nóng)藥殘留的分析[J].中國實驗方劑學雜志,2013,19(10):131-134.

Determination of organochorine pesticide residues in Radix Astragali by GC-ECD

DU Yan1，2， ZONG Kai1， XIA Quan3,et al

(1.AnhuiEntry-ExitInspectionandQuarantineTechnology,Hefei,Anhui230022,China;2.SchoolofPharmaceuticalSciences,AnhuiMedicalUniversity,Hefei,Anhui230032,China;3.TheFirstAffiliatedHospitalofAnhuiMedicalUniversity,Hefei,Anhui230022,China)

Objective To investigate organochlorine pesticides residue in Radix Astragali collected from different medical institutions.Methods We collected samples and information of sources from different medical institutions.According to the "Chinese pharmacopoeia" we used gas chromatography method.Samples were extracted with mixed solvents by ultrasonic,then purified with sulfuric acid.Splitless injection was adopted before the detection of ECD detector and determination of contents by external standard method.Results Organochlorine pesticides residue in Radix Astragali produced in Gansu and Inner Mongolia were much lower than the standard of Chinese pharmacopeia,but there were some differences among samples from different sources.Conclusions This method is quick and accurate,which can provide a guarantee for the safe use of drug.

Radix Astragali;Residue of organochlorine pesticides;Status survey

國家質(zhì)檢總局科技計劃項目(2015IK001)

余曉峰，男，研究員，研究方向:研究方向為食品安全,E-mail：amyxf@126.com

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.10.011

2016-02-26，

2016-05-22)