廣西地區(qū)中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血的發(fā)病情況及表型特征

韋媛，林麗，陳碧艷，王梁，陳秋莉，陳少科，何升

(廣西壯族自治區(qū)婦幼保健院，南寧530003)

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廣西地區(qū)中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血的發(fā)病情況及表型特征

韋媛，林麗，陳碧艷，王梁，陳秋莉，陳少科，何升

(廣西壯族自治區(qū)婦幼保健院，南寧530003)

目的 探討廣西地區(qū)人群中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血的檢出率及表型特征。方法 選擇14 204例血液標本，用跨越斷裂點PCR(Gap-PCR)檢測α、β地中海貧血常規(guī)24種基因型，用Gap-PCR檢測中國型Gγ(Aγδβ)0地中海貧血缺失型基因，用血常規(guī)檢測和血紅蛋白(Hb)電泳分析表型特征。結果 在14 204例標本中共檢出中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血雜合子10例、中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血復合β-地中海貧血1例，總檢出率為0.07%。中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血雜合子中無貧血癥狀7例，輕度貧血3例；血液學結果顯示紅細胞平均體積(MCV)及紅細胞平均Hb含量(MCH)降低，Hb電泳結果顯示HbA2正常，HbF升高。結論 廣西地區(qū)人群中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血的檢出率為0.07%；其表型特征為Hb正?；蜉p微降低，MCV、MCH降低，HbA2正常并HbF升高。

地中海貧血；中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血；篩查；基因型；表型特征；廣西壯族自治區(qū)

地中海貧血又稱為珠蛋白生成障礙性貧血，是由于珠蛋白基因缺陷導致珠蛋白鏈合成障礙而引起的遺傳性溶血性疾病。根據(jù)肽鏈合成障礙不同通常分為α、β、γ和δβ-地中海貧血。δβ-地中海貧血是一組因基因發(fā)育階段特異性表達失控導致胎兒出生后血紅蛋白F(HbF)持續(xù)增高的地中海貧血，其遺傳異質性很大[1]。根據(jù)基因缺陷背景的不同，δβ-地中海貧血可分為缺失型和非缺失型兩大類。缺失型涉及β-類珠蛋白基因簇多個成員不同程度的大片段DNA缺失。我國報道的δβ-地中海貧血大片段缺失型有中國型、廣州型、云南型、比利時型及東南亞型遺傳性持續(xù)性胎兒Hb增高癥[2～5]，其中我國最常見的δβ-地中海貧血為中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血。本研究通過對廣西地區(qū)14 204例標本進行血液學和基因型分析，探討該地區(qū)中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血的發(fā)病情況及表型特征。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2015年1月～2016年4月在廣西壯族自治區(qū)婦幼保健院、廣西壯族自治區(qū)婦產醫(yī)院、廣西壯族自治區(qū)兒童醫(yī)院要求進行地中海貧血基因檢測的受檢者14 204例，其中男7 269例、女6 935例，年齡10～55歲，近3個月無輸血史，均來自南寧、賀州、百色等14個轄市，包括壯、漢、苗、瑤等7個民族。

1.2 基因檢測 采集受檢者肘部外周血2 mL，置于EDTA抗凝管，按全血基因組DNA提取試劑盒說明書用Lab-Aid 820核酸提取儀(廈門百維信生物公司)提取基因組DNA。先采用跨越斷裂點PCR(Gap-PCR)檢測α-地中海貧血4種缺失型基因(含-Thai)、α-地中海貧血3種點突變基因和β-地中海貧血常見17種突變基因，試劑盒均購于深圳益生堂生物公司。采用Gap-PCR檢測中國型Gγ(Aγδβ)0地中海貧血缺失型基因，Gγ(Aγδβ)0缺失上游引物：5′-GGCATATATTGGCTCAGTCA-3′，Gγ(Aγδβ)0缺失下游引物：5′-TCAACAATTATCAACATTACACC-3′；正常內對照下游引物：5′-CTTGCAGAATAAAGCCTATC-3′[6]。PCR反應體系25 μL：2×mix 12.5 μL，ddH2O 6.5 μL，上游引物2 μL，下游引物1 μL，內對照下游引物1 μL，DNA模板2 μL。擴增反應條件：94 ℃預變性5 min，94 ℃變性1 min，59.7 ℃退火30 s，72 ℃延伸90 s，共35個循環(huán)，最后72 ℃延伸10 min。正常對照擴增目的片段為682 bp，缺失擴增目的片段為508 bp。

1.3 血常規(guī)及Hb分型檢測 采集受檢者肘部外周血4 mL，取2 mL置于EDTA抗凝管，用邁瑞B(yǎng)C-2000血液分析儀檢測紅細胞參數(shù)，包括Hb、紅細胞平均體積(MCV)及紅細胞平均Hb含量(MCH)等。另取外周血2 mL置于枸櫞酸鈉抗凝真空管，用Capillarys 2 flex piercing全自動電泳儀分析Hb，包括HbA2、HbF。

2 結果

14 204例受檢者中共檢出11例中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血，檢出率為0.07%。其中中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血雜合子10例、復合β-地中海貧血1例。10例中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血雜合子均表現(xiàn)為小細胞低色素(MCV<80 fL，MCH<28 pg)；Hb正常7例，Hb輕度降低3例；HbA2未見異常，HbF明顯升高(10.8%～22.3%)。中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血復合β-地中海貧血1例，表現(xiàn)為中重型地中海貧血表型，Hb 83.8 g/L，MCV 61.8 fL，MCH 19.4 pg，HbA2降低，大部分為HbF(98.8%)。見表1。

表1 11例Gγ(Aγδβ)0地中海貧血標本的血液學參數(shù)及基因型

注：β-*為βChinese(Aγδβ)0/βN。

3 討論

δβ-地中海貧血依據(jù)其分子缺陷類型和表型特征分為五種類型：(δβ)0-地中海貧血、GγAγ(δβ)0-地中海貧血、Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血、(εγδβ)0-地中海貧血和Hb Lepore[7]。缺失型δβ-地中海貧血因涉及的有關功能基因(如Gγ、Aγ、δ和β-基因等)直接缺失而影響基因表達，也可由β-類珠蛋白基因簇中參與基因調控的座位控制區(qū)以及其他一些具有增強子作用的超敏位點的缺失而導致[8]。中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血最初由Mann等[9]于20世紀70年代首次報道，其缺失范圍累及β-珠蛋白基因簇Aγ、ψβ、δ和β-基因下游具有增強效應的DNA序列以及3′-HS-1區(qū)域，缺失長度為78.9 kb[10]。β-類珠蛋白基因簇中含有2個表達γ-珠蛋白肽鏈的γ-基因(Gγ和Aγ)，其表達水平直接影響Gγ和Aγ的比例及HbF含量。出生后本應關閉的γ-基因因δβ-地中海貧血攜帶者的β-基因缺失而替代β-基因的功能，其產物(γ-珠蛋白肽鏈)與α-基因產物(α-珠蛋白肽鏈)生成HbF(α2γ2)[1]。相較于云南型純合子僅有輕度貧血[11]，中國型純合子臨床上則有中重度貧血表現(xiàn)，依賴輸血維持生命[12]。中國型缺失斷裂點的3′端位于云南型3′端斷裂點的下游約10 kb，這段缺失區(qū)域中包含了以上提到的增強子。增強子的距離效應學說可很好地解釋這種差異：位于β基因下游遠端的增強子序列因基因的大段丟失而被帶到了鄰近γ基因的位點，此增強子可對Gγ基因產生正向調節(jié)，從而使γ鏈的表達水平升高[1]。

本研究中廣西地區(qū)的10例中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血缺失雜合子表現(xiàn)為無貧血或輕度貧血，HbA2在正常范圍(2.3%～2.9%)，HbF則明顯升高(10.8%～22.3%)，與覃麗波等[13]報道的廣西地區(qū)情況相比，血液學參數(shù)范圍更大。這可能是因為本研究病例較多。雖然中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血缺失雜合子臨床癥狀輕微，但當復合β-地中海貧血時，出現(xiàn)中度至重度貧血，臨床表型類似于中間型或重型β-地中海貧血。本研究有1例中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血復合β-地中海貧血(病例11)，中度貧血(83.6 g/L)，MCV 61.8 fL，MCH 19.4 pg，HbF 98.8%，6個月時出現(xiàn)貧血癥狀，肝脾大，依賴輸血,與相關文獻[14～16]報道相似。檢測出的中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血且配偶為β-地中海貧血攜帶者4例，均給予及時回訪及充分臨床指導，在其孕期對胎兒進行產前診斷，分別檢測出正常胎兒2例、中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血雜合子胎兒1例及中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血復合β-地中海貧血雙重雜合子胎兒1例。

當Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血復合其他β-地中海貧血時，表現(xiàn)為中重型地中海貧血表型，臨床比較容易發(fā)現(xiàn)。而當單純攜帶中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血時，多數(shù)人未有貧血表現(xiàn)，血象僅表現(xiàn)為小細胞低色素和HbF升高，且常規(guī)17種β-地中海貧血檢測結果正常，臨床極容易漏診。當發(fā)現(xiàn)MCV、MCH降低，HbA2未見明顯異常而HbF明顯增高時，或夫妻雙方基因型與重型地中海貧血患兒基因結果不符合時，應考慮存在中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血或其他缺失型δβ-地中海貧血的可能。本研究從14 204例臨床標本中檢出11例中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血，人群發(fā)病率為0.07%，與Xiong等[17]報道的調查結果相似，為廣西地區(qū)地中海貧血的流行病學調查提供新的佐證。廣西是地中海貧血高發(fā)地區(qū)，人群中β-地中海貧血攜帶率高達6.43%[18]。如夫妻雙方一方為中國型Gγ(Aγδβ)0-地中海貧血，另一方為β-地中海貧血，應給予充分的遺傳咨詢，建議產前診斷，以避免重型地中海貧血患兒的出生，達到優(yōu)生優(yōu)育的目的。

[1] 徐湘民.見于中國人的HPFH和δβ-地中海貧血的分子基礎[J].中華醫(yī)學遺傳學雜志,1998,15(5):315-317.

[2] Lin M, Wen YF, Wu JR, et al. Hemoglobinopathy: molecular epidemiological characteristics and health effects on Hakka peoplein the meizhou region , southern China[J]. PLoS One, 2013,8(2):e55024.

[3] Xu XM, Li ZQ, Liu ZY, et al. Molecular characterization and PCR detection of a deletional HPFH: application to rapid prenatal diagnosis for compound heterozygotes of this defect with beta-thalassemia in a chinese family[J]. Am J Hematol, 2000,65(3):183-188.

[4] So CC, So AC, Chan AY, et al. Detection and characterisation of beta-globin gene cluster deletions in Chinese using multiplex ligation-dependent probe amplification[J]. J Clin Pathol, 2009,62(12):1107-1111.

[5] Chen W, Zhang X, Shang X, et al. The molecular basis of beta-thalassemia intermedia in southern China:genotypic heterogeneity and phenotypic diversity[J]. BMC Med Genet, 2010(25):11-31.

[6] Craig JE, Barnetson RA, Prior J, et al. Rapid detection of deletions causing δβ-thalassemia and hereditary persistence of fetal hemoglobin by enzymatic amplification[J]. Blood, 1994,83(6):1673-1682.

[7] Carrocini GC, Ondei LS, Zamaro PJ, et al. Evaluation of HPFH and δβ-thalassemia mutations in a Brazilian group with high Hb F levels[J]. Genet Mol Res, 2011,10(4):3213-3221.

[8] Bollekens JA, Forget BG. δβ-thalassemia and hereditary persistence of fetal hemoglobin[J]. Hematol Oncol Clin North Am, 1991,5(3):399-422.

[9] Mann JR, MacNeish AS, Bannister D, et al.Delta-beta-thalassemia in a Chinese family[J]. Br J Haematol,1972,23(4):393-402.

[10] 王春芳,韋傳東,雷茗，等.Gγ+(Aγδβ)0-地中海貧血復合β-地中海貧血家系的表型與基因型分析的警示[J].中國兒童保健雜志,2015,23(11):1191-1193.

[11] Zhang JW, Song WF, Zhao YJ, et al. Molecular characterization of a novel form of (Aγδβ)0-thalassemia deletion in a Chinese family[J]. Blood, 1993,81(6):1624-1629.

[12] 張俊武,吳冠蕓,趙艷君，等.與胎兒珠蛋白基因持續(xù)表達有關的(Aγδβ)0-地貧純合子及雜合子的分子鑒別[J].生物化學雜志,1991,7(3):333-338.

[13] 覃麗波,陳萍,陳文強，等.廣西地區(qū)Gγ(Aγδβ)0-珠蛋白生成障礙性貧血的研究[J].實用兒科臨床雜志,2012,27(15):1151-1153.

[14] 杜麗,秦丹卿,王繼成，等.5個家系δβ地中海貧血的家系分析及產前診斷[J].分子診斷與治療雜志,2015,7(1):27-32.

[15] 李堅,李東至.β-地中海貧血合并δβ-地中海貧血一個家系的產前診斷[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2008,16(5):66-49.

[16] 李志琴,莫秋華,鐘雄林，等.一個β-地中海貧血復合δβ-地中海貧血家系的表型與基因型分析[J].中華醫(yī)學遺傳學志,2001,18(4):310-313.

[17] Xiong F, Sun M. Molecular epidemiological survey of haemoglobinopathies in the Guangxi Zhuang Autonomous Region of southern China[J]. Clinical Genetics, 2010,78(2):139-148.

[18] 徐湘民,張新華,陳荔麗,等.地中海貧血預防控制操作指南[M].北京:人民軍醫(yī)出版社,2011:28.

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.37.019

R556.6

B

1002-266X(2016)37-0058-03

2016-05-10)