吳茱萸不同炮制品中揮發(fā)油成分氣相色譜-質(zhì)譜分析

陳炯，高悅，譚鵬，王蕾，張先靈，張語(yǔ)凡，王鑫，李飛

北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100102

吳茱萸不同炮制品中揮發(fā)油成分氣相色譜-質(zhì)譜分析

陳炯，高悅，譚鵬，王蕾，張先靈，張語(yǔ)凡，王鑫，李飛

北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100102

目的分析吳茱萸生品、清水炙品及不同輔料炮制品（甘草炙、姜炙、醋炙、鹽炙、黃酒炙、黃連炙）揮發(fā)油的化學(xué)成分，探討炙法及輔料對(duì)吳茱萸揮發(fā)油成分的影響。方法采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，用氣相色譜-質(zhì)譜法檢測(cè)并鑒定生品及各炮制品中的揮發(fā)油成分。結(jié)果吳茱萸生品、清水炙品及各炮制品揮發(fā)油含量由高到低依次為：生品（0.71%）＞姜炙品（0.69%）＞黃連炙品（0.65%）＞黃酒炙品（0.63%）＝清水炙品（0.63%）＞醋炙品（0.59%）＝鹽炙品（0.59%）＞甘草炙品（0.51%）。生品較清水炙品減少了13個(gè)成分，增加了12個(gè)成分；鹽炙品較清水炙品減少了8個(gè)成分，增加了3個(gè)成分，醋炙品較清水炙品減少了6個(gè)成分，增加了6個(gè)成分；黃酒炙品較清水炙品減少了9個(gè)成分，增加了10個(gè)成分；姜炙品較清水炙品減少了10個(gè)成分，增加了11個(gè)成分；黃連炙品較清水炙品減少了11個(gè)成分，增加了13個(gè)成分；甘草炙品較清水炙品減少了19個(gè)成分，增加了16個(gè)成分。結(jié)論炙法及輔料均會(huì)對(duì)吳茱萸揮發(fā)油類成分組成及含量產(chǎn)生影響，不同輔料的影響不同。

吳茱萸；炮制；揮發(fā)油；氣相色譜-質(zhì)譜法

吳茱萸為蕓香科植物吳茱萸Euodia rutaecarpa（Juss.）Benth.、石虎 Euodia rutaecarpa（Juss.）Benth. var. officinalis（Dode）Huang 或疏毛吳茱萸Euodia rutaecarpa（Juss.）Benth. var. bodinieri（Dode）Huang的干燥近成熟果實(shí)，具有散寒止痛、降逆止嘔、助陽(yáng)止瀉功效[1]。吳茱萸生品有小毒，揮發(fā)油類成分既是其有效成分又是毒性成分，炮制能降低吳茱萸揮發(fā)油的毒性[2-5]。吳茱萸炮制方法繁多，2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》中采用甘草炙法，各地炮制規(guī)范中記載有鹽炙法、酒炙法、醋炙法、姜炙法以及黃連炙法等多種加輔料炙法。有研究比較吳茱萸炮制前后揮發(fā)性成分[6-8]，但結(jié)果不盡相同，且未比較酒炙、姜炙以及黃連炙后揮發(fā)油成分的變化。本研究采用氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）對(duì)吳茱萸生品、清水炙品及不同輔料炮制品中的揮發(fā)油成分進(jìn)行分析，以期闡明不同炙法及輔料對(duì)于吳茱萸的揮發(fā)性成分的影響。

1　儀器與試藥

TRACE MS氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國(guó)Finnigan公司；PL2002電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；UT300B紅外測(cè)溫儀，電熱套（KDM型），山東鄄城儀器廠。

吳茱萸（產(chǎn)地江西，批號(hào)20100131），購(gòu)自安徽亳州藥材批發(fā)公司，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院生藥系張貴君教授鑒定為蕓香科植物吳茱萸Euodia rutaecarpa（Juss.）Benth.的干燥近成熟果實(shí)；甘草（產(chǎn)地內(nèi)蒙古，批號(hào)20100317），購(gòu)自安國(guó)市神禾中藥飲片有限責(zé)任公司，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院生藥系陳玉婷教授鑒定為豆科植物烏拉爾甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根和根莖；黃連（產(chǎn)地重慶，批號(hào)20100618），購(gòu)自北京同仁堂藥業(yè)有限公司，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)生藥系張貴君教授鑒定為毛茛科植物黃連Coptis chinensis Franch.的干燥根莖；食鹽（中鹽北京鹽業(yè)公司），米醋（北京龍門和田寬食品有限公司），黃酒（浙江紹興縣醇雕酒業(yè)有限公司），生姜（市售）。無水硫酸鈉（分析純，北京化學(xué)試劑三廠）。

2　方法與結(jié)果

2.1樣品的制備

2.1.1生品取吳茱萸，除去枝梗等雜質(zhì)，得凈吳茱萸。

2.1.2清水炙品凈吳茱萸100 g中加入適量去離子水，拌勻，悶潤(rùn)至吸盡，置炒鍋內(nèi)，文火炒干，取出，攤開晾涼，得清水炙吳茱萸。（同時(shí)記錄炒制溫度和炒制時(shí)間，其他炮制品皆按此溫度和時(shí)間進(jìn)行炒制。）2.1.3各炮制品參照2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》炙法制備甘草炙吳茱萸；制備鹽水、姜汁（生姜壓榨汁）、黃連汁、稀釋米醋、稀釋黃酒，分別按照清水炙品的炮制操作方法制備各炮制品，得鹽炙吳茱萸、姜炙吳茱萸、黃連炙吳茱萸、醋炙吳茱萸、黃酒炙吳茱萸。

2.2供試品溶液制備

參照2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》（一部）附錄ⅩD揮發(fā)油測(cè)定法甲法提取揮發(fā)油。稱取吳茱萸及炮制品各50.00 g，置揮發(fā)油提取器中，加水500 mL，浸泡過夜，加熱并保持微沸狀態(tài)8 h，收集揮發(fā)油，用無水硫酸鈉脫水，得黃色揮發(fā)油。各樣品揮發(fā)油用乙醚稀釋后，過0.22 μm濾膜，備用。生品、清水炙、甘草炙、鹽炙、醋炙、姜炙、黃酒炙、黃連炙吳茱萸揮發(fā)油得率分別為0.71%、0.63%、0.51%、0.59%、0.59%、0.69%、0.63%、0.65%。

2.3氣相色譜-質(zhì)譜條件

2.3.1色譜條件色譜柱為DB-5石英毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；進(jìn)樣量：1 μL；進(jìn)樣口溫度240 ℃，傳輸線溫度250 ℃；程序升溫：40～220 ℃（3 ℃/min）；分流比：40∶1；載氣為高純氦氣，流量1.0 μL/min。

2.3.2質(zhì)譜條件EI離子源；電離能量70 eV；離子源溫度：200 ℃；加速電壓：200 eV；掃描范圍：40～500 amu。

2.4揮發(fā)油成分鑒定

吳茱萸生品含揮發(fā)油0.71%，經(jīng)炮制后，揮發(fā)油含量均有所降低，不同炮制品中揮發(fā)油含量由高到低依次為：姜炙品＞黃連炙品＞黃酒炙品＝清水炙品＞醋炙品＝鹽炙品＞甘草炙品。說明輔料會(huì)影響吳茱萸中揮發(fā)油的含量。

用GC-MS分析吳茱萸生品及各炮制品的揮發(fā)油，得其總離子流色譜圖。通過檢索質(zhì)譜計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)系統(tǒng)（質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)NIST.NBS），確認(rèn)化合物；按峰面積歸一化法計(jì)算各化合物在揮發(fā)油中的相對(duì)百分含量，結(jié)果見表1。生品中共檢測(cè)出58個(gè)峰，鑒定出57個(gè)化合物；清水炙品中共檢測(cè)出56個(gè)峰，鑒定出54個(gè)化合物；甘草炙品中共檢測(cè)出53個(gè)峰，鑒定出52個(gè)化合物；鹽炙品中共檢測(cè)出51個(gè)峰，鑒定出49個(gè)化合物；醋炙品中共檢測(cè)出56個(gè)峰，鑒定出52個(gè)化合物；黃酒炙品中共檢測(cè)出57個(gè)峰，鑒定出53個(gè)化合物；姜炙品中共檢測(cè)出57個(gè)峰，鑒定出53個(gè)化合物；黃連炙品中共檢測(cè)出58個(gè)峰，鑒定出54個(gè)化合物。

表1　吳茱萸生品及各炮制品揮發(fā)油成分及相對(duì)含量（%）

續(xù)表1

3　討論

與生品相比，吳茱萸各炮制品中含量下降明顯或消失的成分大多集中在30～60 min。此區(qū)域內(nèi)的成分有：乙酸金合歡酯、β-石竹烯、α-石竹烯、β-花柏烯、喇叭茶醇、α-桉葉烯、正十五烷、9,11(12)-蓽澄茄二烯、橙花叔醇、4-甲基-正十五烷、對(duì)-斯巴醇、正十六烷、馬兜鈴烯、表藍(lán)桉醇、鄰苯二甲酸二異丁酯、棕櫚酸等。由于揮發(fā)油是吳茱萸的主要毒性成分，炮制后吳茱萸的毒性降低，因此推測(cè)吳茱萸揮發(fā)油中的主要毒性成分以該部分為主。在此區(qū)域的揮發(fā)油中，有研究顯示石竹烯給小鼠灌胃后有亞急性毒性[9-10]。

本試驗(yàn)中特引入了清水炙品，即炮制工藝流程與其他炙品相同，但炮制輔料為水。清水炙品的設(shè)置可對(duì)照性地闡釋輔料在吳茱萸炮制中起到的作用。清水炙品與生品共有成分45個(gè)，吳茱萸清水炙后減少了13個(gè)成分，增加了12個(gè)成分，這些成分的變化主要與炮制過程有關(guān)，翻炒受熱可能是引起變化的主要影響因素。鹽炙品較清水炙品減少了8個(gè)成分，增加了3個(gè)成分，兩者共有成分48個(gè)。醋炙品較清水炙品減少了6個(gè)成分，增加了6個(gè)成分，兩者共有成分50個(gè)。黃酒炙品較清水炙品減少了9個(gè)成分，增加了10個(gè)成分，兩者共有成分47個(gè)。姜炙品較清水炙品減少了10個(gè)成分，增加了11個(gè)成分，兩者共有成分46個(gè)。黃連炙品較清水炙品減少了11個(gè)成分，增加了13個(gè)成分，兩者共有成分45個(gè)。甘草炙品較清水炙品減少了19個(gè)成分，增加了16個(gè)成分，兩者共有成分36個(gè)。參照韋氏等[11]建立的相似度計(jì)算方法，各炮制品中揮發(fā)油與生品的相似度從大到小依次為：清水炙品＞鹽炙品＞醋炙品＞黃酒炙品≈姜炙品＞黃連炙品＞甘草炙品。清水炙品與生品的相似度最高，各炮制品與生品的相似度均比清水炙品低，可見輔料會(huì)影響吳茱萸中揮發(fā)油成分的組成。生品及各炮制品中共有的成分共22個(gè)，生品有3個(gè)獨(dú)有成分，甘草炙品中有5個(gè)獨(dú)有成分，鹽炙品中有1個(gè)獨(dú)有成分，黃酒炙品中有2個(gè)獨(dú)有成分，姜炙品中有3個(gè)獨(dú)有成分，黃連炙品中有3個(gè)獨(dú)有成分，清水炙品、醋炙品中無獨(dú)有成分。不同的輔料對(duì)于吳茱萸中揮發(fā)油成分的影響不同，其中甘草產(chǎn)生的影響最為顯著。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015：171.

[2] 李紅霞.吳茱萸湯在婦科臨床的應(yīng)用[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2009, 16(7)：83.

[3] 毛淑杰,王智民,李先端,等.淺談中藥炮制輔料的研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2011,18(1)：7-9.

[4] 楊偉鵬,王怡薇,王彥禮,等.吳茱萸汁炮制對(duì)黃連抗炎藥效和苦寒藥性的影響[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2013,20(8)：42-44,47.

[5] 張曉鳳,高南南,劉紅玉,等.吳茱萸炮制前后揮發(fā)油成分及毒性的比較研究[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào),2011,27(3)：229-232.

[6] 雷培海,周欣,湯洪波,等.GC-MS法測(cè)定吳茱萸炮制前后揮發(fā)性化學(xué)成分[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào),2005,24(6)：108-110.

[7] 王易賓,黃慕斌.吳茱萸炮制前后揮發(fā)油成分的研究[J].中藥材, 1992,15(6)：18-20.

[8] 張韜,張世臣,魏璐雪.中藥吳茱萸炮制前后揮發(fā)油成分分析[J].中國(guó)中藥雜志,1994,19(6)：341-343.

[9] NAARALA J, KORPI A. Cell death and production of reactive oxygen species by murine macrophages after short term exposure to phthalates[J]. Toxicol Lett,2009,188(2)：157-160.

[10] 趙文紅,厲曙光.DEHP染毒后小鼠各臟器含量的測(cè)定及其意義[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2005,15(3)：262-263,292.

[11] 韋建榮,馬銀海.Excel與中藥指紋圖譜相似度計(jì)算[J].昆明師范高等?？茖W(xué)校學(xué)報(bào),2007,9(4)：110-112.

Analysis on Volatile Oil Constituents in Euodiae Fructus and Processed Products by GC-MS

CHEN Jiong, GAO Yue, TAN Peng, WANG Lei, ZHANG Xian-ling, ZHANG Yu-fan, WANG Xin, LI Fei
(Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100102, China)

Objective To analyze volatile constituents isolated from the crude, the water-prepared and processed Euodiae Fructus (prepared by Glycyrrhizae Radix et Rhizoma, prepared by ginger juice, stir-frying with vinegar, prepared by salt, prepared by yellow wine, prepared by Coptidis Rhizoma); To discuss the effects resulting from stir-firing with liquid processing and processing adjuvants on volatile oil in Euodiae Fructus. Methods The volatile constituents were extracted from Euodiae Fructus by steam distillation and the amount of each components in the volatile oil was determined by GC-MS. Results The contents of volatile oil in the the crude, the water-prepared and processed Euodiae Fructus was ordered from high to low. The crude (0.71%) ＞ ginger-prepared samples (0.69%) ＞Coptidis Rhizoma-prepared samples (0.65%) ＞ yellow wine-prepared samples (0.63%) = water-prepared samples (0.63%) ＞ vinegar-prepared samples (0.59%) = salt-prepared samples (0.59%) ＞ Glycyrrhizae Radix et Rhizoma-prepared samples (0.51%). Compared with the water-processed samples, 13 compositions disappeared and 12 compositions were added in the crude samples; 8 compositions disappeared and 3 compositions were added in the salt-prepared samples; 6 compositions disappeared and 6 compositions were added in the vinegar-prepared samples; 9 compositions disappeared and 10 compositions were added in the yellow wine-prepared samples; 10 compositions disappeared and 11 compositions were added in the ginger-prepared samples; 11 compositions disappeared and 13 compositions were added in the Coptidis Rhizoma-prepared samples; 19 compositions disappeared and 16 compositions were added in the Glycyrrhizae Radix et Rhizoma-prepared samples. Conclusion Stir-firing with liquid processing and processing adjuvants would have influence on volatile constituents in Euodiae Fructus, different adjuvants with different effects.

Euodiae Fructus; processing; volatile oil; GC-MS

10.3969/j.issn.1005-5304.2016.12.022

R283.1

A

1005-5304(2016)12-0091-05

國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃基礎(chǔ)理論專項(xiàng)（2009CB522800）；北京中醫(yī)藥大學(xué)在讀研究生項(xiàng)目（2015-JYB-XS094）

李飛，E-mail：lf668@sina.com

（2015-11-12）

（2016-01-07；編輯：陳靜）