HPLC法測(cè)定炎熱清片中黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素的含量

康珊芬

(舟山市市場(chǎng)監(jiān)督管理局定海分局，浙江 定海 316000)

HPLC法測(cè)定炎熱清片中黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素的含量

康珊芬

(舟山市市場(chǎng)監(jiān)督管理局定海分局，浙江 定海 316000)

目的：建立高效液相色譜法測(cè)定炎熱清片中黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素的含量。方法以WATERS X-Bridge C18(250mm×4.6mm，5μm)為色譜柱，甲醇-0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速1.0ml/min，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)277nm。結(jié)果色譜峰分離度良好，黃芩苷在0.1118～1.118μg、黃芩素在8.225×10-3～8.225×10-2μg、漢黃芩素在3.975×10-3～3.975×10-2μg內(nèi)呈良好線性關(guān)系。平均加樣回收率分別為98.8%、97.9%和97.4%。結(jié)論該方法簡(jiǎn)單、快速、重復(fù)性好，可用于炎熱清片中黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素的質(zhì)量控制。

HPLC；炎熱清片；黃芩苷；黃芩素；漢黃芩素

炎熱清片由玄參、黃芩、柴胡、梔子等8味藥材組成，常用于呼吸道炎、支氣管炎、肺炎、急性扁桃體炎的治療。本品現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)YBZ13632005-2011Z-5，原標(biāo)準(zhǔn)只有黃芩苷的含量測(cè)定項(xiàng)。鑒于黃芩中黃芩素、漢黃芩素在抗菌、抗病毒、抑制炎癥反應(yīng)方面具有重要的藥理活性[1-2]，為確保產(chǎn)品的質(zhì)量，本文采用HPLC建立了炎熱清片中黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素的含量測(cè)定方法，經(jīng)驗(yàn)證，重現(xiàn)性好，空白無(wú)干擾，可作為控制本制劑質(zhì)量的分析方法。

1 材料

1.1 儀器

Agilent1200型高效液相色譜儀；賽多利斯BS124S型電子分析天平。

1.2 試劑

黃芩苷(批號(hào)：110715-201318，純度：93.3%)、黃芩素(批號(hào)：111595-201306，純度：97.8%)、漢黃芩素(批號(hào)：111514-200403，純度[3]：98%)。對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。甲醇為色譜純，水為高純水，其他試劑均為分析純。炎熱清片 (吉林天藥本草堂制藥有限公司，批號(hào)：131001、140113、140416；湖北華龍生物制藥有限公司，批號(hào)：20141124、20150319；四川凱京制藥有限公司，批號(hào)：140810)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：WATERS X-Bridge C18分析柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇(A)- 0.1%磷酸溶液(B)，線性梯度洗脫0～30min為40%～70%A，30～35min為70%～40%A；檢測(cè)波長(zhǎng)277nm；柱溫：30℃；流速：1.0 ml/min；進(jìn)樣量：10 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液[4-5]取本品，研細(xì)，取約1.0g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入70%乙醇50 ml，稱重，水浴回流1h，放冷，用70%乙醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2 對(duì)照品溶液 精密稱取黃芩苷對(duì)照品23.96mg，置20ml量瓶中；黃芩素對(duì)照品16.82mg，置200ml量瓶中；漢黃芩素對(duì)照品10.14mg，置250ml量瓶中；分別用70%乙醇溶解，并定容至刻度，制成相應(yīng)濃度的對(duì)照品貯備液。分別精密吸取上述對(duì)照品貯備液各1ml分別置同一20，25，50，100ml量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻，作為混合對(duì)照品溶液1#～4#，精密吸取上述對(duì)照品貯備液各5ml置同一50ml量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻，作為混合對(duì)照品溶液5#。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液 根據(jù)處方工藝制備缺黃芩的陰性供試品，并按2.2.1項(xiàng)下制備方法制備。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照品溶液各10 μl，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，見圖1。結(jié)果供試品色譜圖中顯示與對(duì)照品色譜相同保留時(shí)間的色譜峰，各色譜峰分離度大于1.5，陰性對(duì)照溶液在此保留時(shí)間無(wú)色譜峰出現(xiàn)，表明方法系統(tǒng)適應(yīng)性良好。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取混合對(duì)照品溶液1#～5#各10μl，注入高效液相色譜儀，以進(jìn)樣量(x，μg)為橫坐標(biāo)，峰面積(y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素的回歸方程分別為y=3.114×103x-4.628(r=0.9992)，y=5.027×103x-2.603(r=0.9991)，y=3.925×103x+1.3541(r=0.9995)。表明黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素進(jìn)樣量分別在0.1118～1.118μg，8.225×10-3～8.225×10-2μg，3.975×10-3～3.975×10-2μg范圍內(nèi)與其峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

取同一份供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定目標(biāo)化合物的峰面積。結(jié)果各成分峰面積的RSD分別為0.86%，1.27%和1.53%，表明儀器的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，22h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果3類黃酮化合物的色譜峰峰面積RSD分別為1.4%，1.9%，2.3%。表明供試品溶液在22h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批炎熱清片內(nèi)容物約1.0 g，共取6份，按要求制備，分別進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素的平均含量分別為0.591，0.042，0.019mg/g，RSD值分別為0.8 %，1.3%，1.7%，表明方法重復(fù)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn)

取同一批已知含量的供試品(吉林天藥本草堂制藥有限公司，批號(hào)：131001，) 0.5g，精密稱定，平行6份，分別加入混合對(duì)照品溶液5#適量，按2.2.1項(xiàng)下方法制備，依法測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。黃芩苷平均加樣回收率為98.8%(RSD為0.61%)，黃芩素為97.9%(RSD為1.16%)，漢黃芩素為97.4%(RSD為1.07%)。結(jié)果見表1。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)(N=9)

2.9 供試品測(cè)定

分別精密吸取供試品、混合對(duì)照品溶液4# 10μl注入高效液相色譜儀，依法測(cè)定。結(jié)果見表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果(N=3)

注：A. 吉林天藥本草堂制藥有限公司；B. 湖北華龍生物制藥有限公司；C. 四川凱京制藥有限公司。

3 小結(jié)

黃芩中黃酮類化合物含量豐富，并具有廣泛的藥理活性，是黃芩藥材中的主要功效成分。目前黃芩中已發(fā)現(xiàn)41種黃酮類化合物，以黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素含量最高，且藥理作用最為明顯[6]。但現(xiàn)有藥品標(biāo)準(zhǔn)中多以黃芩苷一種成分作為指標(biāo)考察制劑質(zhì)量，缺少對(duì)黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素為代表的總黃酮進(jìn)行研究。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)炎熱清片中黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素含量較豐富，且不同廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品中黃芩總黃酮含量差異較大，建議在制劑標(biāo)準(zhǔn)中增加黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素的含量考察項(xiàng)目，并以黃芩總黃酮含量作為制劑質(zhì)量的評(píng)價(jià)指標(biāo)。

[1]付王景，石繼和.黃芩素體外抑菌與體內(nèi)抗炎作用研究[J].中國(guó)藥房，2014，25(23):2136-2138.

[2]任曉東，符偉，張曉蕓，等.天然產(chǎn)物漢黃芩素的研究進(jìn)展[J].中國(guó)新藥雜質(zhì)，2011，20(9):777-784.

[3]候?qū)W智，張振秋，尤春雪，等.HPLC測(cè)定黃芩中6個(gè)成分的含量[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2012，29(11):1010-1014.

[4]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:一部[S].2010年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:282-283.

[5]闞紅玉，宋殿榮，王躍飛，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定黃芩中5中黃酮類成分的含量[J].中國(guó)藥房，2010，21(11):1016-1018.

[6]梁英，韓魯佳.黃芩中黃酮類化合物藥理學(xué)作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，8(6): 9-14.

Simultaneousdeterminationofbaicalin,baicaleinandwogonininYanReqingTabletsbyHPLC

KANGShanfen

( Zhoushan Dinghai Market Supervisory Authority，Zhejiang 316000 ， China)

ObjectiveTo establish a method for determining the content of baicalin， baicalein and wogonin in Huatan Pingchuan tablets by HPLC.MethodWATERS X-Bridge C18(250mm×4.6mm, 5μm) was used. The mobile phase was consisited of methanol-0.1% phosphoric acid by gradient elution. The flow rate was 1.0 ml/min. The column temperature was set at 30℃. The detector wavelength was 277nm.ResultBaicalin, baicalein and wogonin showed a good linear relationship with range in 0.1118～1.118μg, 8.225×10-3～8.225×10-2μg, and 3.975×10-3～3.975×10-2μg, respectively. The recovery were 98.8%, 97.9%, and 97.4%.ConclusionThe method is simple, rapid, accurate and reliablewhich can be applied to control the quality of Yan Reqing tablets.

HPLC;Yan Reqing tablets; baicalin; baicalein; wogonin

康珊芬(1972-)，女，浙江舟山人，本科，主管藥師。研究方向：藥品質(zhì)量管理

R917

B

1672-0024(2016)03-0045-03