血清白細(xì)胞介素-37水平與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病及病情進(jìn)展的相關(guān)性

孫淑銀 王穎翠

(即墨市人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，山東 即墨 266200)

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血清白細(xì)胞介素-37水平與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病及病情進(jìn)展的相關(guān)性

孫淑銀 王穎翠1

(即墨市人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，山東 即墨 266200)

目的 探討血清白細(xì)胞介素(IL)-37水平與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)發(fā)病及病情進(jìn)展的相關(guān)性。方法 選擇50例RA患者(觀察組)和30例健康者(對(duì)照組)，觀察或檢測(cè)治療前后關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、關(guān)節(jié)壓痛數(shù)、關(guān)節(jié)炎活動(dòng)度評(píng)分(DAS28)及血清C反應(yīng)蛋白(CRP)、紅細(xì)胞沉降率(ESR)、類風(fēng)濕因子(RF)和IL-37水平及IL-37 mRNA表達(dá)，并與對(duì)照組進(jìn)行分析，分析血清IL-37水平與以上各指標(biāo)的相關(guān)性。結(jié)果 觀察組治療前的關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、關(guān)節(jié)壓痛數(shù)和DAS28評(píng)分均高于對(duì)照組(P<0.05)，治療后以上臨床指標(biāo)均顯著改善(P<0.05)；觀察組治療前血清中CRP、ESR、RF水平均高于對(duì)照組(P<0.05)，治療后這3項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)明顯降低(P<0.05)；觀察組治療前血清IL-37水平、IL-37 mRNA表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，治療后明顯較治療前降低(P<0.05)，且血清IL-37水平與以上臨床指標(biāo)和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論 血清中IL-37與RA的發(fā)病及病情進(jìn)展密切相關(guān)，其在RA病程進(jìn)展過(guò)程中具有抑制炎癥的作用。

白細(xì)胞介素-37；類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)是以對(duì)稱性多關(guān)節(jié)炎為主要表現(xiàn)的全身性自身免疫性疾病，主要累及周圍關(guān)節(jié)，可伴有關(guān)節(jié)外系統(tǒng)性損害，多數(shù)患者在發(fā)病2年內(nèi)出現(xiàn)不可逆性骨關(guān)節(jié)破壞，導(dǎo)致殘疾，在一定程度上影響患者的生存和生活質(zhì)量。RA的發(fā)病機(jī)制至今仍未完全明確，可能與各亞型的CD4+T細(xì)胞及其分泌細(xì)胞因子紊亂有關(guān)〔2〕。研究發(fā)現(xiàn)，關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞增生及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)是該病的主要病理變化，滑膜內(nèi)異常增生的關(guān)節(jié)滑膜成纖維樣細(xì)胞(FLS)可分泌破壞軟骨和骨的白細(xì)胞介素(IL)-1、腫瘤壞死因子(TNF)-α、IL-6等多種炎性因子；又因關(guān)節(jié)內(nèi)滑膜生成侵襲性血管翳，使滑膜增厚、滲出增加，分泌多種細(xì)胞因子，進(jìn)而破壞軟骨、骨和周圍組織〔3〕。大量研究表明，IL-37在RA患者滑膜襯內(nèi)層細(xì)胞高表達(dá)，具有抑制促炎癥因子、減輕炎癥反應(yīng)的功能〔4，5〕。本實(shí)驗(yàn)初步探討IL-37在RA患者中的表達(dá)情況及其與病情進(jìn)展的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2013年10月至2014年5月我院收治的50例RA患者為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均滿足2010年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(ACR)/歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟(EULAR)RA評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)〔6〕，排除肝腎疾病、嚴(yán)重心腦血管疾病、敗血癥、嚴(yán)重感染、惡性腫瘤、活動(dòng)性結(jié)核病或結(jié)核菌素試驗(yàn)陽(yáng)性。男42例，女8例，年齡48～86歲，平均(56.25±11.72)歲，病程2～316個(gè)月，平均(54.85±61.12)個(gè)月。選取同期來(lái)我院健康體檢的30例健康者為對(duì)照組，男24例，女6例，年齡21～58歲，平均(45.73±11.38)歲，經(jīng)檢查無(wú)急、慢性病史、無(wú)遺傳家庭史、無(wú)腫瘤、無(wú)自身免疫性疾病。兩組在性別及年齡比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性。實(shí)驗(yàn)征得本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)且研究對(duì)象全部簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 臨床指標(biāo)和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)觀察 患者均給予對(duì)癥治療，于治療前、后檢查并記錄關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、關(guān)節(jié)壓痛數(shù)，計(jì)算關(guān)節(jié)炎活動(dòng)度評(píng)分(DAS28)，計(jì)算方法〔7〕：DAS28=0.56×關(guān)節(jié)壓痛數(shù)+0.28×關(guān)節(jié)腫脹數(shù)+0.7ln〔紅細(xì)胞沉降率(ESR)〕×1.08+0.16；用C反應(yīng)蛋白(CRP)檢測(cè)試劑盒經(jīng)FIA8000免疫定量分析儀(南京普朗醫(yī)療設(shè)備有限公司提供)單向免疫擴(kuò)散法檢測(cè)CRP；用自動(dòng)生化分析儀(日本OLYMPUS AU5400)按乳膠凝集試劑盒(上海捷門生物技術(shù)合作公司)說(shuō)明書檢測(cè)RF；用配套枸櫞酸抗凝管收集全血經(jīng)ESR-30全自動(dòng)血沉儀(均由上海迅達(dá)醫(yī)療食品有限公司提供)檢測(cè)ESR。對(duì)照組按相同方法記錄或檢測(cè)以上指標(biāo)。

1.2.2 血清IL-37水平的檢測(cè) 分別于治療前、治療后空腹12 h后采集外周靜脈血2 ml，注入預(yù)先加了血清分離膠的無(wú)菌促凝試管，室溫靜置2 h后3 000 r/min離心20 min，取血清待測(cè)。具體操作嚴(yán)格按照人血清IL-37 ELISA分析試劑盒(美國(guó)R&D公司)說(shuō)明書進(jìn)行。同時(shí)檢測(cè)對(duì)照組血清IL37水平，方法同觀察組。

1.2.3 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)IL-37 mRNA表達(dá) 分別于治療前、后空腹12 h后采集外周靜脈血2 ml，注入含EDTA的抗凝管中混勻，-80℃保存待測(cè)。RT-PCR檢測(cè)操作按說(shuō)明書進(jìn)行：①提取細(xì)胞：取上述外周血樣本，按試劑盒說(shuō)明書提取全血中單核細(xì)胞；②提取總RNA：采用Trizol試劑盒提取總RNA，經(jīng)紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA純度及濃度，以A260/A280值1.8～2.0為宜；③逆轉(zhuǎn)錄：按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書操作合成cDNA：RT10×Buffer 2 μl+dNTP 2 μl+MgCl24 μl+引物1 μl+逆轉(zhuǎn)錄酶0.5 μl，補(bǔ)充RNase Free dH2O至體積20 μl，IL-37引物由Primer Premier5.0設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)而成，上游引物：5′-CGGGATCCATGGTTCACACAAGTCCA-3′，下游引物：5′-CCCAAGCTTCTAATCGCTGACCTCACT-3′，196 bp；內(nèi)參甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)依文獻(xiàn)設(shè)計(jì)而得〔8〕，上游引物：5′-TGACGTGGACATCCGCAAAC-3′，下游引物：5′-CTGGAAGGTGGACAGCGAGG-3′，204 bp；④PCR擴(kuò)增：設(shè)置PCR循環(huán)條件：95℃變性10 min、95℃退火15 s、60℃延伸1 min，循環(huán)40個(gè)，共重復(fù)3次；⑤取10 μl上述PCR產(chǎn)物于2.0%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳50 min，用凝膠成像系統(tǒng)SC805拍照條帶的光密度，以GAPDH光密度值作為參考定量標(biāo)準(zhǔn)，以IL-37/GAPDH的比值作為IL-37 mRNA的相對(duì)表達(dá)量，取平均數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法 使用SPSS17.0軟件，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析用Pearson直線相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 兩組臨床指標(biāo)和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較 治療前患者的關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、關(guān)節(jié)壓痛數(shù)、DAS28評(píng)分均高于對(duì)照組(P<0.05)，治療后患者以上指標(biāo)較治療前明顯下降(P<0.05)，觀察組治療前血清CRP、ESR、RF明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，治療后以上指標(biāo)均明顯降低(P<0.05)，見表1。

表1 兩組臨床指標(biāo)和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較±s)

與對(duì)照組比較：1)P<0.05；與治療前比較：2)P<0.05；下表同

2.2 血清IL-37水平及IL-37 mRNA表達(dá) 觀察組治療前血清中的IL-37水平及IL-37 mRNA表達(dá)顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，治療后明顯下降(P<0.05)，見表2。

2.3 血清IL-37水平與類RA發(fā)病及病情進(jìn)展的相關(guān)性 見表3。觀察組血清IL-37水平與關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、關(guān)節(jié)壓痛數(shù)、DAS28評(píng)分及CRP、ESR、RF呈正相關(guān)(P<0.05)。

表2 兩組IL-37水平及IL-37mRNA表達(dá)比較

表3 觀察組血清中IL-37水平與其他指標(biāo)的相關(guān)性

3 討 論

RA是因炎癥導(dǎo)致肉芽組織與纖維組織增生，多數(shù)為緩慢起病，也可在短時(shí)間內(nèi)發(fā)生關(guān)節(jié)腫痛等臨床表現(xiàn)；該病主要侵犯手、腕、肩、膝等周圍關(guān)節(jié)，引起關(guān)節(jié)腫脹、疼痛，導(dǎo)致患者失去勞動(dòng)能力甚至殘疾，也可能損害心臟、腎臟、肺臟及血液系統(tǒng)而縮短患者生存時(shí)間〔9〕。臨床上RA治療手段包括物理治療、休息、手術(shù)及藥物治療，藥物治療有糖皮質(zhì)激素、非甾體類抗炎藥(NSAIDs)、生物制劑、慢作用抗風(fēng)濕藥(SAARDs)及中藥等〔10〕。因?yàn)镽A發(fā)病機(jī)制復(fù)雜、病程反復(fù)、對(duì)機(jī)體危害大，故在治療上仍然缺乏有效的根治方案〔11〕。越來(lái)越多的研究者認(rèn)為早期診斷和干預(yù)RA很有必要〔12〕。目前診斷RA的免疫學(xué)指標(biāo)主要包括CRP、抗環(huán)瓜氨酸肽(anti-CCP)抗體、RF、ESR、抗核周因子等〔13〕，也通過(guò)它們來(lái)評(píng)估病情和療效：①在炎癥發(fā)生過(guò)程中急性相反應(yīng)蛋白(CRP)由于細(xì)胞因子等因素的刺激導(dǎo)致其合成增加高達(dá)100～1000倍，提示著炎癥和損傷，且其增加幅度與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)，患者在RA活動(dòng)期CRP持續(xù)升高，緩解期則下降〔14，15〕；②ESR是反映炎癥的敏感指標(biāo)，在RA患者中若ESR快，則患者關(guān)節(jié)腫脹、晨僵等癥狀就會(huì)嚴(yán)重，疾病的進(jìn)展快、預(yù)后差，若ESR下降則提示治療有效〔16〕；③RA患者關(guān)節(jié)滑膜充血、水腫甚至軟骨破壞是因?yàn)镽F與變性的IgG結(jié)合形成免疫復(fù)合物在關(guān)節(jié)滑膜等處沉積并誘發(fā)炎癥，多數(shù)觀察組血清中RF增加，且其滴度與病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，故可用于判斷病情和治療效果，因其特異性較低，一般與抗-CCP抗體、ESR、CRP等其他指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)〔17〕。IL-37是2000年在腫瘤研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)的IL-1家庭的成員，其基因位于人的2號(hào)染色體，因具有先天性炎癥免疫抑制劑的作用〔18〕而備受關(guān)注。經(jīng)證實(shí)，IL-37分子量最大的異構(gòu)體IL-37b在肝缺血再灌注損傷〔19〕、系統(tǒng)性紅斑狼瘡〔20〕、外源性刺激誘導(dǎo)的結(jié)腸炎、關(guān)節(jié)炎、胰腺炎〔21〕等多種炎癥性疾病中起保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)說(shuō)明關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、關(guān)節(jié)壓痛數(shù)、DAS28評(píng)分、CRP、ESR、RF可以反映RA的病情變化〔22〕；治療前觀察組血清IL-37水平明顯高于對(duì)照組，可能是病理狀態(tài)下觀察組體內(nèi)的TNF等促炎癥細(xì)胞因子誘導(dǎo)IL-37的生成〔23，24〕，治療后觀察組IL-37較治療前明顯下降，可能生成的IL-37發(fā)揮抑炎作用控制了炎癥的惡化，而隨著炎癥的好轉(zhuǎn)，誘導(dǎo)生成的IL-37也減少。本研究中，經(jīng)Pearman分析，發(fā)現(xiàn)IL-37與RA的病情進(jìn)展有密切關(guān)系。

綜上所述，IL-37在RA患者血清中高表達(dá)，與RA的病情變化密切相關(guān)，隨著炎癥反應(yīng)嚴(yán)重而升高。同時(shí)，IL-37可抑制炎癥反應(yīng)，可作為診斷和治療RA等炎癥疾病的新依據(jù)和新靶點(diǎn)。

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〔2015-12-30修回〕

(編輯 李相軍)

王穎翠(1972-)，女，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事冠心病心衰方面的研究。

孫淑銀(1965-)，女，主治醫(yī)師，主要從事風(fēng)濕免疫方面的研究。

R593.22

A

1005-9202(2016)20-5115-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.20.085

1 山東大學(xué)齊魯醫(yī)院青島院區(qū)心血管中心