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    miR-21表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者預(yù)后的相關(guān)性

    2017-08-12 16:14:12黃新造占桂香
    實(shí)用癌癥雜志 2017年8期
    關(guān)鍵詞:生存期肝細(xì)胞血管

    黃新造 占桂香 賽 君 紀(jì) 丹

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    miR-21表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者預(yù)后的相關(guān)性

    黃新造 占桂香 賽 君 紀(jì) 丹

    miR-21;生物標(biāo)志物;肝細(xì)胞癌;預(yù)后

    肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是常見(jiàn)的惡性實(shí)體腫瘤之一,在腫瘤相關(guān)疾病死亡率中排第二[1]。臨床上急需一種能夠準(zhǔn)確預(yù)測(cè)HCC患者疾病復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和預(yù)后的標(biāo)志物以改善患者臨床療效。報(bào)道表明在多種人類(lèi)腫瘤中miR-21表達(dá)增加能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移和侵入[2],且部分研究證實(shí)miR-21可以作為某些腫瘤診斷和預(yù)后標(biāo)志物[3-5],然而HCC患者的miR-21表達(dá)情況及其對(duì)疾病預(yù)后的影響尚不清楚。本研究旨在探討miR-21對(duì)評(píng)估HCC患者疾病預(yù)后的價(jià)值。

    1 材料與方法

    1.1 一般資料

    本研究中120例均為2007年至2013年在我院接受手術(shù)切除治療的原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者。HCC組織和鄰近非腫瘤組織均為術(shù)中采集,且立即放入液氮中保存?zhèn)溆?。所有患者入組前均未接受任何干預(yù)和治療?;颊咭话闩R床特征見(jiàn)表1,本研究通過(guò)我院倫理委員會(huì)審批。

    1.2 RNA提取和實(shí)施定量PCR檢測(cè)

    采用mirVana miRNA提取試劑盒提取組織miRNA,通過(guò)SPECTRAmax微孔板紫外分光光度計(jì)測(cè)定miRNA濃度,按參考文獻(xiàn)[6]合成miR-21和內(nèi)參U6 snRNA擴(kuò)增引物。實(shí)施定量PCR反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性10 min,95 ℃變性15 s,60 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,共45個(gè)循環(huán)。根據(jù)內(nèi)參U6 snRNA的含量通過(guò)2-ΔΔCt方法計(jì)算miR-21的相對(duì)表達(dá)量。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    數(shù)據(jù)均采用SPSS 19.0軟件處理,相關(guān)性分析采用卡方檢驗(yàn)和Fisher’s精準(zhǔn)檢驗(yàn)或獨(dú)立t檢驗(yàn),組間生存期比較則采用秩和檢驗(yàn),對(duì)于單一變量檢測(cè)有顯著性意義的因素進(jìn)行多重變量分析,P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 HCC樣本中miR-21表達(dá)檢測(cè)

    與鄰近非腫瘤組織相比,HCC組織樣本中miR-21表達(dá)顯著上調(diào)(P<0.05,圖1)。根據(jù)實(shí)施定量PCR檢測(cè)結(jié)果將120例HCC患者分成2組,其中高表達(dá)患者63例,低表達(dá)患者57例。

    2.2 miR-21表達(dá)與HCC患者臨床病理學(xué)特征分析

    miR-21高表達(dá)與腫瘤分化、TNM分期和血管侵入密切相關(guān),然而miR-21表達(dá)水平與患者年齡、性別、實(shí)體瘤數(shù)量、腫瘤直徑、血清AFP含量和肝硬化等因素?zé)o關(guān)。見(jiàn)表1。

    圖1 實(shí)施定量PCR方法檢測(cè)HCC組織和臨近非腫瘤組織中miR-21表達(dá)量比較

    病理學(xué)特征例數(shù)miR-21表達(dá)/例高表達(dá)低表達(dá)P值性別0.929 男性663531 女性542826年齡/歲0.224 <50573324 ≥50633033腫瘤直徑/cm0.302 ≤5512427 >5693930實(shí)體瘤數(shù)量0.204 單個(gè)623626 多個(gè)582431血清AFP/(μg·L-1)0.316 <400754233 ≥400452124肝硬化0.092 否21813 是995544腫瘤分化0.002 良好+中等571542 不良634815TNM分期0.003 Ⅰ~Ⅱ481731 Ⅲ~Ⅳ724626血管侵入0.004 是27207 否934350

    2.3 miR-21表達(dá)與HCC患者疾病預(yù)后

    由于miR-21表達(dá)水平與HCC患者腫瘤分化、TNM分期和血管侵入密切相關(guān),本研究推測(cè)miR-21表達(dá)可能是影響HCC患者疾病預(yù)后的因素,為驗(yàn)證這一猜想,本研究根據(jù)HCC患者miR-21表達(dá)情況采用Kaplan-Meier方法繪制患者總生存期曲線(xiàn),結(jié)果提示miR-21表達(dá)上調(diào)HCC患者總生存期顯著短于低表達(dá)患者(P<0.05,圖2),表明miR-21表達(dá)上調(diào)與HCC患者疾病預(yù)后不良密切相關(guān),Cox比例危險(xiǎn)模型顯示miR-21表達(dá)、腫瘤分化不良、高TNM分期和血管侵入均為影響HCC總生存期的獨(dú)立預(yù)后因素(P<0.05,表2,圖2)。

    表2 HCC患者總生存期相關(guān)因素的單一和多重變量分析

    圖2 HCC患者miR-21表達(dá)的Kaplan-Meier分析

    3 討論

    miRNAs表達(dá)異常是多種腫瘤的常見(jiàn)現(xiàn)象,且其通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)進(jìn)而在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用。研究證實(shí)miRNA表達(dá)改變與人類(lèi)腫瘤的發(fā)展和預(yù)后密切相關(guān),因此探究HCC患者組織中miRNA表達(dá)譜不僅為HCC發(fā)生或發(fā)展的分子機(jī)制研究奠定基礎(chǔ),同時(shí)也為HCC患者腫瘤治療提供新的靶標(biāo)。早期研究報(bào)道顯示miR-21在多種腫瘤中表達(dá)升高,例如乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌和胰腺癌[3-4]。與上述研究結(jié)果一致,本研究證實(shí)HCC組織中miR-21表達(dá)顯著上調(diào)。統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果顯示與相應(yīng)鄰近非腫瘤組織相比HCC組織中表達(dá)顯著升高。此外,miR-21表達(dá)升高與HCC患者腫瘤分化、TNM分期和血管侵入密切相關(guān),提示miR-21可能參與HCC的發(fā)展。許多學(xué)者研究顯示miR-21表達(dá)升高與腫瘤患者疾病預(yù)后不良密切相關(guān),例如,Yan等[5]研究表明miR-21在人乳腺癌中表達(dá)升高,且與患者較高的臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。此外,miR-21高表達(dá)患者的總生存期顯著低于低表達(dá)患者。王斌等[6]研究發(fā)現(xiàn)miR-21在結(jié)直腸癌患者中表達(dá)顯著升高,且其表達(dá)與高臨床分期密切相關(guān)。Hu等報(bào)道表明在喉頭鱗狀細(xì)胞癌樣本中檢測(cè)到miR-21表達(dá)上調(diào),且結(jié)果提示miR-21表達(dá)上調(diào)為喉頭鱗狀細(xì)胞癌患者疾病預(yù)后不良獨(dú)立因素[7]。

    總之,本研究結(jié)果提示與鄰近非腫瘤組織相比,HCC組織中miR-21表達(dá)顯著上調(diào),且miR-21表達(dá)升高與患者腫瘤分化、TNM分期和血管侵入密切相關(guān),統(tǒng)計(jì)分析證實(shí)miR-21表達(dá)可以作為HCC患者疾病預(yù)后不良獨(dú)立標(biāo)志物。

    [1] 張議心,王利新,李元杰,等.原發(fā)性肝癌患者血清中miR-21和miR-1247-5p的表達(dá)檢測(cè)〔J〕.世界華人消化雜志,2015,23(32):5148-5156.

    [2] 馬曉路,談綺文,彭穎斐,等.血清 DKK1 水平對(duì)肝細(xì)胞癌(HCC)患者預(yù)后判斷的臨床價(jià)值〔J〕.復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2014,41(5):589-595.

    [3] 伍怡穎,張仲林.miR-21 與結(jié)直腸癌的相關(guān)性研究進(jìn)展〔J〕.成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2014,9(2):222-225.

    [4] 郭仲莉,曾照芳.miR-21 的高表達(dá)與肺癌預(yù)后關(guān)系的 meta 分析〔J〕.激光雜志,2014,35(1):58-59.

    [5] Yan LX,Huang XF,Shao Q,et al.MicroRNA miR-21 overexpression in human breast cancer is associated with advanced clinical stage,lymph node metastasis and patient poor prognosis〔J〕.Rna,2008,14(11):2348-2360.

    [6] 王 斌,姜 雷,王冰冰,等.miRNA-21 表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者預(yù)后關(guān)系的 Meta 分析〔J〕.腫瘤,2016,35(1):84.

    [7] Hu A,Huang JJ,Xu WH,et al.miR-21 and miR-375 microRNAs as candidate diagnostic biomarkers in squamous cell carcinoma of the larynx:association with patient survival〔J〕.Am J Transl Res,2014,6(5):604-613.

    (編輯:甘 艷)

    435000 鄂東醫(yī)療集團(tuán)市中醫(yī)醫(yī)院

    占桂香

    10.3969/j.issn.1001-5930.2017.08.052

    R735.7

    B

    1001-5930(2017)08-1391-02

    2016-10-24

    2017-03-28)

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