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    庫車縣豬高致病性藍耳病血清學(xué)調(diào)查研究

    2016-11-24 08:45:51魏魯予
    獸醫(yī)導(dǎo)刊 2016年18期
    關(guān)鍵詞:庫車縣稀釋液耳病

    魏魯予

    (新疆阿克蘇地區(qū)庫車縣獸醫(yī)站,新疆阿克蘇 842000)

    庫車縣豬高致病性藍耳病血清學(xué)調(diào)查研究

    魏魯予

    (新疆阿克蘇地區(qū)庫車縣獸醫(yī)站,新疆阿克蘇 842000)

    通過對庫車縣生豬規(guī)模場進行調(diào)查采樣,進行豬高致病性藍耳病血清學(xué)檢測,分析本縣區(qū)域內(nèi)斷奶仔豬、育肥豬、母豬、公豬高致病性藍耳病抗體效價,為全縣養(yǎng)殖戶的合理使用該疫苗提供參考依據(jù)。

    豬;高致病性藍耳?。谎鍖W(xué)

    豬高致病性藍耳病是一種高度接觸性傳染病,豬是唯一的自然宿主,不同年齡、各種品種和用途的豬均可感染,但以妊娠母豬和1月齡以內(nèi)的仔豬最易感染?;疾∝i和帶毒豬是本病的主要傳染源。

    目前,豬高致病性藍耳病病毒仍是優(yōu)勢流行毒株[1],流行數(shù)年之后,其致病性和毒力仍未降低,危害大且引發(fā)疫情,一旦豬場發(fā)病,仍然呈現(xiàn)高發(fā)病率、高死亡率、母豬流產(chǎn),特別是中、小型豬場與散養(yǎng)戶多發(fā)。主要侵害豬免疫系統(tǒng)細胞,引起局部免疫抑制,常導(dǎo)致繼發(fā)感染,豬群中若存在高致病性藍耳病,則豬群中發(fā)生流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎及木乃伊胎兒等癥狀[2]。由于高致病性藍耳病能破壞豬體免疫系統(tǒng),并引起繁殖障礙和呼吸問題,常給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大損失,因此,各國科技工作者對該病的研究也在不斷深人。近年來不少豬場采取強制免疫、普遍免疫和頻繁免疫的不合理、不科學(xué)的免疫方法。

    本實驗通過對庫車縣37個豬場進行采樣,分離血清394份,進行血清學(xué)抗體檢測,進而判斷在不同的飼喂階段豬高致病性藍耳病抗體水平的高低,為進一步推進豬高致病性藍耳病防控工作提供了一定的科學(xué)依據(jù)。

    1 實驗材料

    1.1 儀器設(shè)備

    酶標儀、小型離心機、微量振蕩器、微量移液器、稀釋板、漩渦振蕩器等。

    1.2 試劑

    LSI豬繁殖和呼吸綜合征抗體檢測試劑盒(北京天之泰生物科技有限公司提供),包括包被PRRS抗原的96孔板、洗液(×10)、樣本稀釋液(×3)、酶標復(fù)合物、底物TMB、底物終止液希硫酸、陽性對照血清、陰性對照血清、蒸餾水。

    2 實驗方法

    2.1 試劑的準備

    洗液(×10):取1份清洗液加入9份的滅菌水或去離子水中,配好的液體在7天內(nèi)用完;

    樣本稀釋液(×3):配制時用1體積的樣品稀釋液中加入2倍體積的蒸餾水,配好的液體在2d內(nèi)用完;

    2.2 樣本的準備

    樣本需用樣本稀釋液進行200倍稀釋:先吸取5μl樣本加入95μl的樣本稀釋液中,混勻;再吸取5μl稀釋了20倍的液體加入ELISA反應(yīng)板孔,再加入45μl的樣本稀釋液。

    2.3 操作步驟

    (1)將試劑放在室溫,并輕搖或者倒置混勻;

    (2)將樣本和對照加入板孔中,加入50μl陽性和陰性對照,及200倍稀釋的樣品在反應(yīng)板孔。陽性對照和陰性對照雙份;

    (3)蓋上膜,在37℃作用60min;

    (4)去膜,用300μl洗液洗滌3遍,并在吸水紙上將平板弄干;

    (5)在每個孔中加入50μl酶標抗體;

    (6)蓋上膜,在37℃作用60min;

    (7)去膜,用300μl洗液洗滌3遍,并在吸水紙上將平板弄干;

    (8)加入50μl底物,輕搖板2s;

    (9)將平板放在黑暗中在20~25℃作用10min;

    (10)加入50μl終止液,輕搖板混勻;

    (11)在450nm下讀數(shù)并記錄結(jié)果。

    2.4 試驗結(jié)果判定

    (1)試驗成立條件:陽性對照的平均值OD450>0.6,

    而且陽性對照平均值/陰性對照平均值>0.4

    (2)結(jié)果解釋 結(jié)果用IPRC表示,計算公式是:

    IPRC=【(OD450樣品-OD450陰性對照平均值)/(OD450陽性對照平均值-OD450陰性對照平均值)】×100。

    IPRC≤20.0,陰性;IPRC>20.0,陽性。

    3 結(jié)果

    通過間接ELISA實驗對37個豬場的394份血清進行豬高致病性藍耳病抗體檢測,全縣豬高致病性藍耳病體合格率達到74.4%,其中斷奶仔豬、育肥豬、母豬、公豬抗體合格率分別為66.7%、71%、89.8%、77.8%,具體結(jié)果見表1。

    表1 豬高致病性藍耳病血清學(xué)抗體效價表

    圖1 豬高致病性藍耳病抗體檢測結(jié)果

    4 討論

    通過對394份血清學(xué)抗體檢測,可以看出,本縣在母豬水平上高致病性藍耳病防疫水平較好,其次是公豬,在斷奶仔豬方面,高致病性藍耳病防疫較弱,對此病的防疫不能忽視。

    具體綜合防治措施如下:(1)建立穩(wěn)定的種豬群,堅持自養(yǎng)自繁的原則,如引種,引入后必需建立隔離區(qū),一般需隔離檢疫3-4周,健康者方可混群飼養(yǎng)[3]。(2)建立健全規(guī)?;i場的生物安全,實行封閉式管理,生產(chǎn)流通實現(xiàn)全進全出。(3)在科學(xué)的管理基礎(chǔ)上做好飼喂、環(huán)境控制、防疫、檢疫、隔離、消毒等工作,以提高豬群對其他病原微生物的抵抗力,從而降低繼發(fā)感染的發(fā)生率和由此造成的損失。(4)定期對豬舍和飼養(yǎng)區(qū)域進行消毒,保持豬舍、飼養(yǎng)管理用具及環(huán)境的清潔衛(wèi)生。(5)做好藥物控制豬群的細菌性繼發(fā)感染的敏感階段。建議在妊娠母豬產(chǎn)前和產(chǎn)后階段、哺乳仔豬斷奶前和斷奶后、轉(zhuǎn)群等階段按預(yù)防量適當在飼料中添加一些抗菌藥物,以防治豬群的細菌性繼發(fā)感染。(6)對發(fā)病豬場要嚴密封鎖,對發(fā)病豬場周圍的豬場也要采取一定的防范措施,避免疫病擴散。對流產(chǎn)的胎衣、死胎及死豬做好無害化處理,產(chǎn)房徹底消毒,隔離病豬,對癥治療,改善飼喂條件等。

    [1] 李公美,錢愛東,高云航,等.豬繁殖與呼吸綜合征病毒致病機制及防制研究進展[J].中國獸藥雜志,2008,42(10):40-44.

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