• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    溫州蜜柑果皮提取物總酚·總黃酮含量測定及其抗氧化活性研究

    2016-11-24 07:15:25左龍亞
    安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年28期
    關(guān)鍵詞:黃酮

    左龍亞, 于 杰

    (1.西南大學(xué)園藝園林學(xué)院,重慶 400715;2.南方山地園藝學(xué)教育部重點實驗室,重慶 400716)

    ?

    溫州蜜柑果皮提取物總酚·總黃酮含量測定及其抗氧化活性研究

    左龍亞1,2, 于 杰1,2*

    (1.西南大學(xué)園藝園林學(xué)院,重慶 400715;2.南方山地園藝學(xué)教育部重點實驗室,重慶 400716)

    [目的]研究溫州蜜柑果皮不同溶劑提取物總酚、總黃酮含量及其抗氧化活性,篩選最佳提取試劑。[方法]依次用甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯及蒸餾水對溫洲蜜柑果皮進行提取,檢測不同溶劑提取物體外抗氧化活性,并對不同溶劑提取物總酚、總黃酮含量進行測定。[結(jié)果]溫州蜜柑不同溶劑提取物均具有一定的抗氧化活性,其中甲醇、丙酮提取物的抗氧化活性較強,APC指數(shù)位居前2位。不同溶劑提取物的抗氧化活性與其總酚、總黃酮的含量呈極顯著正相關(guān)關(guān)系,相關(guān)系數(shù)r分別為0.905**、0.583**、0.948**、0.849**、0.760**、0.955**(P<0.01)。[結(jié)論]對溫州蜜柑不同溶劑提取物總酚、總黃酮含量測定及其抗氧化活性研究確定甲醇為其最優(yōu)提取試劑。

    溫州蜜柑;提取物;酚類物質(zhì);抗氧化活性

    溫州蜜柑(Citrusunshiu)隸屬于蕓香科(Rutaceae)柑橘屬(CitrusL.)植物,主產(chǎn)于浙江省溫州市,又稱無核橘,現(xiàn)為世界性主要柑橘之一[1]。溫州蜜柑抗逆性強,適應(yīng)性廣,能早產(chǎn)、高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn),品質(zhì)好,易栽培,在我國柑橘產(chǎn)業(yè)發(fā)展中占據(jù)重要地位。相關(guān)性研究表明,溫州蜜柑具有較高的營養(yǎng)價值,富含多種生物活性物質(zhì)[2-4],其中生物類黃酮有較高的研究價值,對機體抗氧化、抗癌、提高免疫能力等有顯著作用[5]。筆者以溫州蜜柑果皮干粉為材料,對比分析5種不同試劑提取物總酚、總黃酮含量及其抗氧化活性,旨在篩選溫州蜜柑活性物質(zhì)最佳提取試劑,為溫州蜜柑果皮活性物質(zhì)綜合利用提供科學(xué)參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料 溫州蜜柑干品,采自重慶市北碚區(qū)柑橘研究所,洗凈剝皮放入50 ℃烘箱中干燥至恒重,粉碎,過60目篩備用。主要試劑:1,1-1-二苯基苦基苯肼(DPPH)、2,2′-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽[ABTS]、三吡啶基三嗪[TPTZ]、6-羥基-2,5,7,8-四甲基色烷-2-羧酸(Trolox)、沒食子酸(Gallic Acid),均購自Sigma公司(St Louis,MO,USA)。甲醇、碳酸鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、冰醋酸、鹽酸、氯化鐵、過硫酸鉀、二甲亞砜(DMSO)、無水乙醇等試劑,均為國產(chǎn)分析純試劑,試驗用水為二次蒸餾水。蘆丁(純度≥95%)、福林酚,購于上海如吉生物科技發(fā)展有限公司。

    主要儀器設(shè)備:電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(DHG-9240A型),上海齊欣科學(xué)儀器有限公司;小型粉碎機(ZN-04A型),北京興時利和科技發(fā)展有限公司;超聲清洗器(KQ-500DE型),昆山市超聲儀器有限公司;數(shù)顯恒溫水浴鍋,國華電器有限公司;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(EYELA N-1100型),東京理化器械株式會社;臺式低速大容量離心機(TDL-5A型),上海菲恰爾分析儀器有限公司;紫外可見分光光度計(PerkinElmer Lambda 25),美國珀金埃爾默公司。

    1.2 方法

    1.2.1 溫州蜜柑果皮提取物的制備。準(zhǔn)確稱取溫州蜜柑果皮粉末1.0 g置于50 mL離心管中,按料液比1∶20 g/mL分別加入甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、蒸餾水,振蕩器搖勻,50 ℃超聲波輔助提取1 h,5 000 r/min離心10 min后轉(zhuǎn)移上清液,殘渣加20 mL相應(yīng)提取液,振蕩器搖勻,重復(fù)提取2次,合并3次上清液真空減壓濃縮至油膏狀,用甲醇溶解并定容至10 mL,即得相應(yīng)溫州蜜柑果皮提取物,于-20 ℃冰箱中存儲、備用。

    1.2.2 提取物抗氧化活性檢測。ABTS、DPPH自由基抗氧化活性測定參照張華等[6]的方法。亞鐵還原能力試驗(fluorescence recovery after photobleaching,FRAP)值檢測參考Benzie等[7]的方法略加修改。取25 μL提取物,加入6 mL已經(jīng)預(yù)先混合的FRAP反應(yīng)試劑[0.1 mol/L pH 3.6醋酸緩沖液、10 mmol/L TPTZ(溶于40 mmol/L 鹽酸)、20 mmol/L氯化鐵以體積比10∶1∶1混合],振蕩30 s,反應(yīng)10 min,混合均勻后在593 nm波長處測定吸光度。以VC為標(biāo)樣制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,樣品的FRAP值(還原Fe3+的抗氧化活性)用VC含量表示(mg/g)。每個樣品重復(fù)測定3次。

    1.2.3 總酚、總黃酮含量的測定。 總酚測定參考Singleton等[8]的方法略加修改。準(zhǔn)確吸取25 μL檸檬皮提取液于10 mL試管中,加蒸餾水至2 mL搖勻;加0.5 mL福林酚試劑,混勻后暗處放置5 min;加入1.0 mL 5%碳酸鈉溶液,蒸餾水定容至5 mL,充分混合后室溫放置60 min,于波長750 nm處測吸光值。以沒食子酸做標(biāo)樣制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,總酚含量用GAE(Gallic Acid Equivalent)含量表示。

    總黃酮測定參考Kim等[9]的方法略加修改。準(zhǔn)確吸取50 μL提取液于20 mL試管中,加30%乙醇至2.5 mL,加0.2 mL 5%亞硝酸鈉溶液搖勻放置5 min;加0.2 mL 10%硝酸鋁溶液,搖勻放置6 min;加1 mol/L氫氧化鈉溶液0.2 mL,用30%乙醇定容至5 mL放置15 min,于波長510 nm處測其吸光度。以蘆丁做標(biāo)樣制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,總黃酮含量用蘆丁含量表示。

    1.2.4 數(shù)據(jù)處理。采用SPSS 17.0和Excel 2007對試驗數(shù)據(jù)進行分析,并參照Zhang等[10]的方法引用APC綜合指數(shù)來評價其綜合抗氧化能力。

    APC綜合指數(shù)=Σ[(樣品抗氧化值/最大抗氧化值)×100%]

    2 結(jié)果與分析

    2.1 沒食子酸、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 沒食子酸標(biāo)樣標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1,蘆丁標(biāo)樣標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2。

    圖1 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of gallic acid

    圖2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2 Standard curve of rutin

    2.2 不同溶劑提取物總酚、總黃酮含量 總酚、總黃酮含量測定結(jié)果顯示,不同溶劑提取物種總酚、總黃酮含量差異性顯著(表1)。5種溶劑提取物總酚含量在(0.60±0.02)~(16.47±1.65)mg/g,甲醇提取物總酚含量最高,乙酸乙酯提取物總酚含量僅為其3%。不同溶劑提取物總酚含量由大到小的順序依次為甲醇、丙酮、乙醇、蒸餾水、乙酸乙酯。不同溶劑提取物總黃酮含量在(4.63±0.10)~(10.36±0.21)mg/g,其中丙酮提取物總黃酮含量最高,甲醇次之,乙酸乙酯提取物總黃酮含量最低。不同溶劑提取物總黃酮含量提取由大到小的順序依次為丙酮、甲醇、乙醇、蒸餾水、乙酸乙酯,幾種溶劑提取物之間最大差異達1.24倍。

    表1 不同溶劑提取物總酚、總黃酮含量

    Table 1 Total phenols,total flavonoids content of different solvent extracts mg/g

    注:同列不同字母為差異顯著(P<0.05)。

    Note:Different letters in the same column stand for significant difference(P<0.05).

    2.3 溫州蜜柑果皮不同溶劑提取物抗氧化活性 由圖3可知,溫州蜜柑果皮不同溶劑提取物對DPPH、ABTS自由基及FRAP值 3種抗氧化檢測均表現(xiàn)出一定的差異性(P<0.05)。其中丙酮提取物對DPPH自由基清除表現(xiàn)出較高的抗氧化活性,清除率達(93.85±0.28)%,蒸餾水、甲醇提取物次之,清除率分別為(92.93±0.23)%、(92.15±0.49)%,乙酸乙酯提取物對DPPH自由基清除率僅為(15.68±51.55)%。不同溶劑提取物對ABTS自由基均表現(xiàn)出一定的抑制率且差異性顯著,對ABTS自由基清除率在(58.83±0.85)%~(87.46±0.83)%。5種不同溶劑溫州蜜柑果皮提取物均對ABTS自由基表現(xiàn)出較高的抑制率,大小順序依次為丙酮、甲醇、乙酸乙酯、蒸餾水、乙醇。FRAP鐵離子還原反應(yīng)表明,5種提取物均有一定的還原性,且不同溶劑提取物對FRAP抗氧化還原能力存在差異性。試驗數(shù)據(jù)顯示,丙酮、甲醇2種試劑溫州蜜柑果皮提取物在FRAP氧化反應(yīng)中表現(xiàn)出較高的抗氧化活性[(28.06±0.61)、(26.55±3.10)mg/g],同比乙酸乙酯抗氧化能力高出7倍。FRAP值在(3.27±0.22)~(28.06±0.61)mg/g。

    2.4 不同溶劑提取物抗氧化活性綜合評價 5種溫州蜜柑果皮提取物APC指數(shù)顯示(圖4),不同溶劑提取物的抗氧化活性差異明顯(32.58%~100%)。溫州蜜柑果皮5種不同溶劑提取物中丙酮提取物的綜合抗氧化指數(shù)最高,其次是甲醇提取物、蒸餾水提取物(91.70%~82.77%)。乙酸乙酯提取物綜合抗氧化指數(shù)最低,僅為32.58%,溫州蜜柑果皮不同溶劑提取物綜合抗氧化能力大小順序依次為丙酮、甲醇、蒸餾水、乙醇、乙酸乙酯。

    2.5 酚類物質(zhì)含量與抗氧化活性之間的相關(guān)性 從相關(guān)性分析看出(表2),總酚含量與DPPH、ABTS自由基和FRAP值,總黃酮含量與DPPH、ABTS自由基和FRAP值都呈極顯著性的正相關(guān)關(guān)系,相關(guān)系數(shù)r分別為0.905、0.583、0.948、0.849、0.760和0.955。試驗相關(guān)性系數(shù)分析顯示,總酚含量較總黃酮含量在溫州蜜柑果皮提取物綜合抗氧化活性檢測中發(fā)揮作用較大,與前人研究結(jié)果基本一致[11]。

    注:不同字母為差異顯著(P<0.05)。Note:Different letters stand for significant difference(P<0.05).圖3 溫州蜜柑果皮不同溶劑提取物抗氧化能力比較Fig.3 The antioxidant capacity of different solvent extracts of Citrus unshiu peel

    圖4 溫州蜜柑果皮不同溶劑提取物抗氧化活性APC指數(shù)Fig.4 APC indexes for antioxidant activities of different solvent extracts of Citrus unshiu peel

    表2 酚類物質(zhì)含量與抗氧化活性之間的相關(guān)性

    注:**為差異極顯著(P<0.01);*為差異顯著(P<0.05)。

    Note:** stands for extremely significant difference(P<0.01); * stands for significant difference(P<0.05).

    3 結(jié)論與討論

    該試驗對溫州蜜柑果皮不同溶劑提取物酚類物質(zhì)及其抗氧化活性檢測發(fā)現(xiàn),不同溶劑對溫州蜜柑果皮總酚、總黃酮含量提取存在顯著差異,同時在DPPH、ABTS自由基和FRAP值3種抗氧化體外檢測中也表現(xiàn)出不同抗氧化性能。綜合抗氧化APC指數(shù)顯示,蒸餾水提取物具有較強的體外抗氧化能力,這一現(xiàn)象可能與水提物中含有較多的多糖物質(zhì)以及一些具有抗氧化活性的多肽類物質(zhì)有關(guān)[12];5種試劑對同一物質(zhì)中總酚、總黃酮、抗氧化活性差異可能與其試劑自身極性相關(guān)[13]。

    5種不同溶劑溫州蜜柑果皮提取物酚類物質(zhì)含量測定及其抗氧化活性對比研究發(fā)現(xiàn),丙酮、甲醇為溶劑所得溫州蜜柑果皮提取物比乙醇、蒸餾水、乙酸乙酯所得提取物具有更高的抗氧化活性和酚類物質(zhì)得率,這2種溶劑提取物在抗氧化活性和總酚、總黃酮含量上無顯著差異。由于丙酮具有較強毒性,長期使用會對機體產(chǎn)生較大的傷害,因此該試驗中選用毒性相對較小的甲醇作為溫州蜜柑果皮總酚、總黃酮及抗氧化活性物質(zhì)提取的最佳試劑。

    [1] 章恢志.溫州蜜柑的來龍去脈[J].柑桔科技通訊,1978,7(4):1-8.

    [2] 鄒英寧,吳強盛,饒貴珍.貯藏方式對溫州蜜柑果實抗氧化性能的影響[J].中國南方果樹,2014,43(5):36-38.

    [3] 蘇東林,李高陽,何建新,等.溫州蜜柑皮中氨基酸及脂肪酸的組成分析研究[J].食品工業(yè)科技,2012,48(2):100-102.

    [4] 王菁,蒲彪,伍紅梅.柑橘果皮中主要功能性成分含量測定[J].食品工業(yè)科技,2010(3):367-369.

    [5] 張氽,闞建全,陳宗道.生物類黃酮抗癌作用研究進展[J].中國食品添加劑,2003(3):17-20.

    [6] 張華,周志欽,席萬鵬.15種柑橘果實主要酚類物質(zhì)的體外抗氧化活性比較[J].食品科學(xué),2015,36(11):64-69.

    [7] BENZIE I F F,STRAIN J J.The ferric reducing ability of plasma (FRAP) as a measure of “antioxidant power”:The FRAP assay[J].Analytical biochemistry,1996,239(1):70-76.

    [8] SINGLETON V L,ORTHOFER R,LAMUELA-RAVENTOS R M.Analysis of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants by means of Folin-Ciocalteu reagent[J].Methods in enzymology,1999,299:152-178.

    [9] KIM D O,CHUN O K,KIM Y J,et al.Antioxidant capacity of phenolic phytochemicals from various cultivars of plums[J].Food chemistry,2011,124:1561-1566.

    [10] ZHANG Y M,SUN Y J,XI W P,et al.Phenolic compositions and antioxidant capacities of Chinese wild mandarin(CitrusreticulataBlanco)fruits[J].Food chemistry,2014,145:674-680.

    [11] 李欣,薛治浦,朱文學(xué).丹參不同部位總酚酸和總黃酮含量分析及其抗氧化活性研究[J].食品科學(xué),2011,32(3):108-110.

    [12] 尹秀蓮,游慶紅,蔣中海,等.松茸不同溶劑提取物及其抗氧化活性[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2011,37(5):194-198.

    [13] 涂宗財,傅志豐,王輝,等.紅薯葉不同溶劑提取物抗氧化性及活性成分鑒定[J].食品科學(xué),2015,36(17):1-6.

    Detection of Total Phenols and Total Flavonoids Content in Extracts of Citrus unshiu Peel and Its Antioxidant Activities

    ZUO Long-ya1,2,YU Jie1,2*

    (1.College of Horticulture and Landscape Architecture,Southwest University,Chongqing 400715; 2.Key Laboratory of Southern Mountain Horticulture,Ministry of Education,Chongqing 400716)

    [Objective] The aim was to compare and study content of total phenols and total flavonoids inCitrusunshiupeel and antioxidant activity by different solvents,to screen out optimal extraction reagent.[Method] Methanol,ethanol,acetone,ethyl acetate and distilled water was used to get extracts fromCitrusunshiupeel.The antioxidant activity was detected.The content of total phenol,total flavonoids in different solvents was determined.[Result] The different solvents fromCitrusunshiuall had some antioxidant activity.The extracts from methanol and acetone had more stronger antioxidant activity than others,APC index was in top 2.The antioxidant activity had extremely significant positive correlation with the content of total flavonois,total phenols(r=0.905**,0.583**,0.948**,0.849**,0.760**,0.955**(P<0.01)).[Conclusion] The extracts of methanol ofCitrusunshiushow the best in antioxidant activities and contents of total flavonoids and phenols from different solvent extracts ofCitrusunshiu.

    Citrusunshiu; Extracts; Phenolics; Antioxidant activity

    國家自然科學(xué)基金面上項目(31171930);重慶市自然科學(xué)基金資助項目(CSTC2013JCYJA8002);中央高?;究蒲袠I(yè)務(wù)費專項(XDJK2014C091);重慶市北碚區(qū)科技計劃項目(2015-35)。

    左龍亞(1991- ),女,重慶人,碩士研究生,研究方向:果品營養(yǎng)與質(zhì)量安全。*通訊作者,副教授,從事果品營養(yǎng)研究。

    2016-08-15

    S 666

    A

    0517-6611(2016)28-0089-03

    猜你喜歡
    黃酮
    不同桑品種黃酮含量測定
    桑黃黃酮的研究進展
    一測多評法同時測定腦心清片中6種黃酮
    中成藥(2018年11期)2018-11-24 02:57:00
    HPLC法同時測定固本補腎口服液中3種黃酮
    中成藥(2017年8期)2017-11-22 03:19:40
    MIPs-HPLC法同時測定覆盆子中4種黃酮
    中成藥(2017年10期)2017-11-16 00:50:13
    DAD-HPLC法同時測定龍須藤總黃酮中5種多甲氧基黃酮
    中成藥(2017年4期)2017-05-17 06:09:50
    正交法優(yōu)化王不留行中王不留行黃酮苷的超聲提取工藝
    黃酮抗癌作用研究進展
    瓜馥木中一種黃酮的NMR表征
    UV法和HPLC法測定甘草總黃酮混懸液中總黃酮和查爾酮含量
    男人舔女人的私密视频| 国产成人精品在线电影| 久久久国产成人免费| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 看黄色毛片网站| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 一区福利在线观看| 久久99一区二区三区| 99热网站在线观看| 老司机深夜福利视频在线观看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 午夜福利一区二区在线看| а√天堂www在线а√下载 | 久热这里只有精品99| 精品免费久久久久久久清纯 | 国产成人系列免费观看| 天堂中文最新版在线下载| 精品久久久久久电影网| 国产亚洲精品一区二区www | 天堂俺去俺来也www色官网| avwww免费| 欧美激情高清一区二区三区| 免费在线观看亚洲国产| 91在线观看av| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 啦啦啦 在线观看视频| 成年人黄色毛片网站| 久久ye,这里只有精品| 9热在线视频观看99| 亚洲欧美色中文字幕在线| 国产亚洲欧美在线一区二区| 免费在线观看亚洲国产| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 老司机靠b影院| 免费在线观看完整版高清| a在线观看视频网站| √禁漫天堂资源中文www| 99国产精品一区二区三区| 欧美日韩亚洲高清精品| 欧美av亚洲av综合av国产av| 精品卡一卡二卡四卡免费| 多毛熟女@视频| 在线观看免费高清a一片| 色老头精品视频在线观看| 亚洲专区国产一区二区| 欧美精品亚洲一区二区| 精品国产亚洲在线| 飞空精品影院首页| 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲av美国av| 午夜亚洲福利在线播放| 欧美日韩成人在线一区二区| 国产欧美日韩综合在线一区二区| bbb黄色大片| 成人国语在线视频| 精品少妇久久久久久888优播| 黄色a级毛片大全视频| 欧美最黄视频在线播放免费 | 成在线人永久免费视频| 国产av又大| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 十八禁人妻一区二区| 女警被强在线播放| 老司机福利观看| 久久久久久久久免费视频了| 日韩免费高清中文字幕av| 少妇 在线观看| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 热99re8久久精品国产| 日本欧美视频一区| 午夜福利乱码中文字幕| 捣出白浆h1v1| 国产精品一区二区在线观看99| 欧美 日韩 精品 国产| 老熟女久久久| 欧美黑人精品巨大| 黄色视频不卡| 啪啪无遮挡十八禁网站| 亚洲九九香蕉| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲av日韩在线播放| 久久亚洲真实| 国产成人欧美在线观看 | www.自偷自拍.com| 国产真人三级小视频在线观看| 国产精品国产av在线观看| 日本a在线网址| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 女警被强在线播放| 日日夜夜操网爽| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 欧美一级毛片孕妇| 久久午夜综合久久蜜桃| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 成人永久免费在线观看视频| 女同久久另类99精品国产91| 老司机靠b影院| 亚洲精品中文字幕在线视频| 久久中文看片网| 国产精品一区二区在线观看99| 中文欧美无线码| 久久亚洲真实| 国产成人av教育| 婷婷丁香在线五月| xxx96com| 亚洲av成人一区二区三| 欧美日韩av久久| 日本黄色视频三级网站网址 | 国产极品粉嫩免费观看在线| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲色图综合在线观看| 757午夜福利合集在线观看| 日韩免费av在线播放| 国产精品国产av在线观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 男人操女人黄网站| 美女扒开内裤让男人捅视频| 真人做人爱边吃奶动态| 日韩大码丰满熟妇| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 热re99久久国产66热| 91成人精品电影| 男女下面插进去视频免费观看| 多毛熟女@视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 欧美日本中文国产一区发布| 在线av久久热| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产精品免费一区二区三区在线 | 久热爱精品视频在线9| 日韩欧美三级三区| 国产区一区二久久| 麻豆乱淫一区二区| 俄罗斯特黄特色一大片| 亚洲精品国产色婷婷电影| 精品国产亚洲在线| 黄频高清免费视频| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产男靠女视频免费网站| 男女免费视频国产| 淫妇啪啪啪对白视频| 久久精品国产a三级三级三级| 欧美日韩乱码在线| 亚洲在线自拍视频| 亚洲国产精品sss在线观看 | 亚洲精品乱久久久久久| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国产三级黄色录像| 亚洲精品国产一区二区精华液| 成人特级黄色片久久久久久久| 国产精品.久久久| 久久久国产成人精品二区 | 另类亚洲欧美激情| 精品一区二区三区四区五区乱码| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 视频区欧美日本亚洲| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲三区欧美一区| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲在线自拍视频| 精品一区二区三卡| 日韩有码中文字幕| 亚洲五月色婷婷综合| 国产欧美亚洲国产| √禁漫天堂资源中文www| 飞空精品影院首页| av超薄肉色丝袜交足视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 精品视频人人做人人爽| 午夜老司机福利片| 麻豆成人av在线观看| 五月开心婷婷网| 老司机午夜福利在线观看视频| 一级黄色大片毛片| 日韩欧美免费精品| 国产人伦9x9x在线观看| 欧美日韩av久久| 美女国产高潮福利片在线看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产成人精品久久二区二区免费| 免费日韩欧美在线观看| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产精品九九99| 久久性视频一级片| av一本久久久久| 亚洲国产精品合色在线| 在线视频色国产色| 99精国产麻豆久久婷婷| 99久久国产精品久久久| 精品少妇久久久久久888优播| 欧美成人午夜精品| 黄色女人牲交| av超薄肉色丝袜交足视频| √禁漫天堂资源中文www| 成人av一区二区三区在线看| a级毛片在线看网站| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 久久久国产精品麻豆| 国产精品欧美亚洲77777| 久久久久久人人人人人| 这个男人来自地球电影免费观看| 黑人操中国人逼视频| 黄色女人牲交| 中出人妻视频一区二区| av线在线观看网站| 国产精品偷伦视频观看了| 韩国av一区二区三区四区| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 一本综合久久免费| 亚洲,欧美精品.| 色婷婷av一区二区三区视频| 悠悠久久av| 亚洲av第一区精品v没综合| 久久ye,这里只有精品| 新久久久久国产一级毛片| 最新的欧美精品一区二区| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 亚洲第一青青草原| 777米奇影视久久| 欧美亚洲日本最大视频资源| 久久香蕉国产精品| 免费看十八禁软件| 99热只有精品国产| 一个人免费在线观看的高清视频| 黄片大片在线免费观看| 国产男女内射视频| 在线国产一区二区在线| 999久久久精品免费观看国产| 精品国产美女av久久久久小说| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲国产中文字幕在线视频| 成年人午夜在线观看视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产成人精品久久二区二区91| 久久久国产成人精品二区 | 一级毛片高清免费大全| 久久精品国产a三级三级三级| 91av网站免费观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 久热这里只有精品99| 亚洲人成伊人成综合网2020| ponron亚洲| 亚洲国产欧美一区二区综合| 99国产精品一区二区三区| 黄色视频不卡| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲精品乱久久久久久| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 久久香蕉激情| 婷婷成人精品国产| 一级,二级,三级黄色视频| 咕卡用的链子| av有码第一页| 黄色a级毛片大全视频| avwww免费| √禁漫天堂资源中文www| av线在线观看网站| 久久香蕉激情| 亚洲精品成人av观看孕妇| 黄频高清免费视频| av电影中文网址| 亚洲精品美女久久av网站| 日韩欧美在线二视频 | 国产高清videossex| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 手机成人av网站| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产精品一区二区免费欧美| 国产一卡二卡三卡精品| 一级片'在线观看视频| 午夜免费成人在线视频| 美女 人体艺术 gogo| 妹子高潮喷水视频| 超色免费av| www日本在线高清视频| 亚洲av电影在线进入| 黄片播放在线免费| 欧美激情 高清一区二区三区| 成人三级做爰电影| 啦啦啦免费观看视频1| 黄色片一级片一级黄色片| 欧美成人午夜精品| 99riav亚洲国产免费| 亚洲一区中文字幕在线| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 在线观看免费高清a一片| 欧美黑人欧美精品刺激| 色尼玛亚洲综合影院| 一级a爱片免费观看的视频| 国产麻豆69| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 久久九九热精品免费| 成年版毛片免费区| 大型av网站在线播放| 美国免费a级毛片| 女性生殖器流出的白浆| 真人做人爱边吃奶动态| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 精品久久久久久久久久免费视频 | 亚洲中文av在线| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲欧美色中文字幕在线| 精品一区二区三区四区五区乱码| 精品电影一区二区在线| 久99久视频精品免费| 欧美日韩黄片免| 日韩大码丰满熟妇| 国产乱人伦免费视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲精品粉嫩美女一区| 淫妇啪啪啪对白视频| 午夜免费观看网址| 久久影院123| 两个人免费观看高清视频| 老司机福利观看| 无遮挡黄片免费观看| 老司机午夜十八禁免费视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲一区高清亚洲精品| 91成人精品电影| 久久这里只有精品19| 国产精品综合久久久久久久免费 | 欧美老熟妇乱子伦牲交| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| av天堂久久9| 午夜老司机福利片| 亚洲色图综合在线观看| 久久精品国产a三级三级三级| 亚洲,欧美精品.| a在线观看视频网站| 国产精品永久免费网站| av不卡在线播放| 国产91精品成人一区二区三区| 午夜精品久久久久久毛片777| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| av在线播放免费不卡| 两性夫妻黄色片| 午夜91福利影院| 1024香蕉在线观看| 99久久精品国产亚洲精品| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲,欧美精品.| 日本一区二区免费在线视频| 一边摸一边抽搐一进一出视频| av有码第一页| 中文字幕av电影在线播放| 天堂√8在线中文| 9色porny在线观看| 国产一区二区三区综合在线观看| 国产1区2区3区精品| 黄色视频不卡| 国产成人精品久久二区二区免费| 黄色视频,在线免费观看| 国产成人精品久久二区二区免费| 俄罗斯特黄特色一大片| 免费日韩欧美在线观看| 一级片免费观看大全| 欧美精品亚洲一区二区| 超色免费av| 久久久精品区二区三区| 99精品久久久久人妻精品| 国产高清视频在线播放一区| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 国产成人欧美在线观看 | 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产91精品成人一区二区三区| av天堂久久9| 国产精品免费一区二区三区在线 | 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 成熟少妇高潮喷水视频| 国产主播在线观看一区二区| 91大片在线观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| xxxhd国产人妻xxx| 91成年电影在线观看| 一区二区三区国产精品乱码| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 日韩视频一区二区在线观看| 一本综合久久免费| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 亚洲久久久国产精品| 人妻丰满熟妇av一区二区三区 | 欧美精品av麻豆av| 国产精品免费一区二区三区在线 | 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲情色 制服丝袜| 天堂动漫精品| 亚洲成人手机| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 超碰成人久久| 一级,二级,三级黄色视频| 国产亚洲av高清不卡| 99riav亚洲国产免费| 999久久久精品免费观看国产| 一级作爱视频免费观看| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 亚洲成国产人片在线观看| 国产一区在线观看成人免费| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 欧美激情 高清一区二区三区| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 国产欧美亚洲国产| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 岛国毛片在线播放| 亚洲一区二区三区不卡视频| 久久亚洲真实| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 中文字幕人妻熟女乱码| 91成人精品电影| 大片电影免费在线观看免费| 亚洲第一青青草原| 日日夜夜操网爽| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 搡老岳熟女国产| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 老司机靠b影院| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 丁香欧美五月| 欧美精品av麻豆av| 大香蕉久久网| av不卡在线播放| a级毛片在线看网站| 久久久精品区二区三区| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲成人国产一区在线观看| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产精品1区2区在线观看. | 少妇 在线观看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产av精品麻豆| 欧美人与性动交α欧美软件| 中亚洲国语对白在线视频| 国产亚洲一区二区精品| 精品无人区乱码1区二区| 在线观看一区二区三区激情| 搡老乐熟女国产| 岛国毛片在线播放| 欧美人与性动交α欧美软件| 最新的欧美精品一区二区| 美女视频免费永久观看网站| 国产亚洲欧美98| 亚洲片人在线观看| 黄色a级毛片大全视频| 露出奶头的视频| 欧美人与性动交α欧美软件| 最新的欧美精品一区二区| 国产精品综合久久久久久久免费 | 久久久久久久精品吃奶| 一区二区三区激情视频| 精品无人区乱码1区二区| 国产一区在线观看成人免费| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产男女超爽视频在线观看| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 一区二区三区精品91| 亚洲全国av大片| 久久草成人影院| 久久精品国产清高在天天线| 一区二区三区国产精品乱码| 人成视频在线观看免费观看| 飞空精品影院首页| 国产成人欧美在线观看 | 看黄色毛片网站| 久久99一区二区三区| 国产亚洲一区二区精品| av片东京热男人的天堂| 精品国产美女av久久久久小说| 啦啦啦在线免费观看视频4| 久久中文字幕人妻熟女| 女同久久另类99精品国产91| 99久久国产精品久久久| 国产不卡一卡二| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 精品国产乱码久久久久久男人| 久热爱精品视频在线9| 亚洲人成电影免费在线| 国产又色又爽无遮挡免费看| 亚洲精品久久午夜乱码| 精品免费久久久久久久清纯 | 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 在线观看一区二区三区激情| 人人澡人人妻人| 国产精品av久久久久免费| 欧美乱色亚洲激情| 51午夜福利影视在线观看| 岛国在线观看网站| 男人操女人黄网站| 久久国产精品影院| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲色图综合在线观看| 一二三四社区在线视频社区8| xxx96com| 午夜免费观看网址| 男女高潮啪啪啪动态图| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 久久久国产一区二区| 精品视频人人做人人爽| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 天天影视国产精品| 91麻豆av在线| av在线播放免费不卡| 高清av免费在线| 欧美黑人精品巨大| av一本久久久久| 一进一出好大好爽视频| av天堂久久9| 免费在线观看完整版高清| 国产成人av激情在线播放| 欧美日本中文国产一区发布| 日日爽夜夜爽网站| 国产精品九九99| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产成人精品在线电影| 成人永久免费在线观看视频| cao死你这个sao货| 18禁观看日本| √禁漫天堂资源中文www| av有码第一页| 国产精品免费视频内射| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产91精品成人一区二区三区| 在线观看舔阴道视频| 高清毛片免费观看视频网站 | 他把我摸到了高潮在线观看| 9191精品国产免费久久| 又大又爽又粗| 色在线成人网| 精品国产乱子伦一区二区三区| 中文字幕人妻丝袜制服| 美女视频免费永久观看网站| 国产亚洲欧美精品永久| 国产三级黄色录像| 在线观看66精品国产| 色婷婷av一区二区三区视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 99香蕉大伊视频| 在线观看免费视频网站a站| 国精品久久久久久国模美| 大型av网站在线播放| 18禁观看日本| 国产高清videossex| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产99白浆流出| 中文字幕色久视频| 黄色视频不卡| 久热爱精品视频在线9| av片东京热男人的天堂| 男女床上黄色一级片免费看| 国产在视频线精品| 免费观看a级毛片全部| 成年动漫av网址| 午夜日韩欧美国产| 嫁个100分男人电影在线观看| 在线视频色国产色| 国产激情欧美一区二区| 午夜福利在线观看吧| 国产野战对白在线观看| 精品久久久久久久久久免费视频 | 国产av又大| 国产淫语在线视频| 亚洲国产欧美网| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产精品久久久av美女十八| 窝窝影院91人妻| 国产精品久久视频播放| 新久久久久国产一级毛片| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 欧美在线一区亚洲| 精品人妻1区二区| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 天天操日日干夜夜撸| 韩国精品一区二区三区| 9色porny在线观看| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲伊人色综图| 淫妇啪啪啪对白视频| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲伊人色综图| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 亚洲黑人精品在线| 精品人妻1区二区| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 欧美精品人与动牲交sv欧美| videos熟女内射| 国产精品电影一区二区三区 | 久久精品国产a三级三级三级| 欧美久久黑人一区二区| 交换朋友夫妻互换小说| 十八禁高潮呻吟视频| 亚洲在线自拍视频| 电影成人av| 波多野结衣av一区二区av| 国产1区2区3区精品| 在线观看免费日韩欧美大片| 久久狼人影院| 91九色精品人成在线观看| 一级作爱视频免费观看| 午夜免费观看网址| 色老头精品视频在线观看| av片东京热男人的天堂| 黄色视频不卡|