ANS活性在乳鼠心房肌細胞KAch通道表達中的作用

田 銀 楊 龍 夏桂玲 鄧 娜

ANS活性在乳鼠心房肌細胞KAch通道表達中的作用

田 銀 楊 龍 夏桂玲 鄧 娜

目的 探討ANS活性在乳鼠心房肌細胞KAch通道表達中的作用。方法 在2015年9月～2016年9月，選60只實驗用大鼠，分為去甲腎上腺素組和對照組，去甲腎上腺素組利用去腎上腺素干預(yù)，對照組僅應(yīng)用生理鹽水；使用實時熒光定量RT-PCR檢測二組大鼠乳鼠心房肌細胞的Kir 3．1、Kir 3．4 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果 ANS活性和乳鼠心房肌細胞KAch通道上Kir 3．1、Kir 3．4 mRNA表達水平之間存在著相關(guān)性。結(jié)論 ANS活性影響乳鼠心房肌細胞KAch通道上很多因子的表達水平。

ANS活性；乳鼠心房肌細胞；KAch通道 ；表達

自主神經(jīng)系統(tǒng)（Autonomic Nervous System，ANS）在心臟分布密度極高，而心臟功能受ANS的調(diào)節(jié)［1］。目前ANS在心臟功能調(diào)節(jié)中的作用倍受關(guān)注。ANS活性變化與心臟疾病，如心力衰竭等疾病都已經(jīng)證實與ANS活性有著非常重要的關(guān)系［2］。本研究主要是對ANS活性在乳鼠心房肌細胞KAch通道表達中的作用進行分析，選擇2015年9月～2016年3月45只實驗用大鼠乳鼠，對其進行實驗研究，具體情況如下所示：

1 一般材料和方法

1.1 一般方法

將清潔級SD（Sprague-Dawley）乳鼠稱重，ip10%水合氯醛（30 mg/kg）麻醉，麻醉成功后處死乳鼠分離心房肌細胞，進行細胞培養(yǎng)及干預(yù)。進行分組后，分別給藥。對照組進行生理鹽水0.1 ml/100 g的注射（22只）。去甲腎上腺素組給予去甲腎上腺素NE-氯化鈣混合液0.1 ml/100 g（23只）。

1.2 方法

使用實時熒光定量RT-PCR檢測二組大鼠乳鼠心房肌細胞的Kir 3.1、Kir 3.4 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。具體方法如下：

按不同組份配制PCR反應(yīng)液，分別為5×PrimeSTAR? Buffer（Mg2+plus）10 μl，PCR Primer 1（10 μM）1 μl ，PCR Primer 2（10 μM）1 μl，dNTP Mixture（各2.5 mM）4 μl，RT反應(yīng)液（cDNA溶液）2.0 μl PrimeSTAR? HS，DNA Polymerase（2.5 U/μl）0.5 μl，d H2O滅菌蒸餾水8.5 μl等。

然后進行Real Time PCR反應(yīng)，PCR擴增程序，第一步是預(yù)變性，在95℃ 2 min，55℃ 1 min，72℃ 2 min中進行第一個循環(huán)，第二步是PCR反應(yīng)，在95℃ 45 s，60℃ 30 s，70℃ 1 min中進行第二個循環(huán)，共40個。第三步取出4℃ 5 min后-20℃保存或電泳。

反應(yīng)結(jié)束后確認Real Time PCR的擴增曲線和熔解曲線，制作標準曲線等。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。計數(shù)資料應(yīng)用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗，檢驗水準α=0.05，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組乳鼠心房肌細胞鉀離子通道上的因子表達

通過檢測發(fā)現(xiàn)，去甲腎上腺素組的Kir 3.1、Kir 3.4 mRNA表達水平均低于空白組，其中Kir 3.1、Kir 3.4、Cab 2、CaB 3 mRNA與空白組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組Kir 3.1、Kir 3.4 mRNA表達水平

2.2 兩者相關(guān)性分析

數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)ANS活性和乳鼠心房肌細胞KAch通道上Kir3.1、Kir3.4mRNA表達水平之間存在著相關(guān)性。見圖1。

圖1 ANS活性和乳鼠心房肌細胞Kach通道相關(guān)性

3 討論

KAch是參與心房肌細胞動作電位復(fù)極末期主要鉀離子通道之一，促進K+外流，對動作電位末期的復(fù)極、靜息電位水平有重要影響［3-4］；針對發(fā)生心房重構(gòu)的過程，刺激交感神經(jīng)增加房顫誘發(fā)率，刺激迷走神經(jīng)無增加；而在心房正常情況下，刺激迷走神經(jīng)增加房顫誘發(fā)率，刺激交感神經(jīng)無增加。經(jīng)消融心外脂肪墊去神經(jīng)能夠抑制犬心房快速起搏誘導的心房電重構(gòu)、使房顫誘發(fā)更為困難［5-8］。本研究選擇選60只實驗用大鼠，分為去甲腎上腺素組和對照組，去甲腎上腺素組利用去腎上腺素干預(yù)，對照組僅應(yīng)用生理鹽水；使用實時熒光定量RT-PCR檢測二組大鼠乳鼠心房肌細胞的Kir 3.1、Kir 3.4 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。本次研究結(jié)果顯示，ANS活性和乳鼠心房肌細胞KAch通道上Kir 3.1、Kir 3.4 mRNA表達水平之間存在著相關(guān)性。提示ANS活性影響乳鼠心房肌細胞KAch通道上很多因子的表達水平。以上臨床和基礎(chǔ)研究結(jié)果顯示交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)在房顫的發(fā)生和維持機制中的作用復(fù)雜，而自主神經(jīng)效應(yīng)相關(guān)基質(zhì)的改變作為心房重構(gòu)的主要機制之一參與房顫的發(fā)生和維持。

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Role of ANS Activity in the Expression of KAch Channel in Rat Atrial Myocytes

TIAN Yin YANG Long XIA Guiling DENG Na Department of Cardiology，Guizhou Provincial People's Hospital，Guiyang Guizhou 550000，China

Objective To investigate the effect of ANS activity on the expression of KAch channel in rat atrial myocytes． Methods From September 2015 to September 2016，60 experimental rats were divided into norepinephrine group and control group，norepinephrine group using norepinephrine intervention，the control group used normal saline，the transcription level detection of atrial myocytes of neonatal rats in the two groups of Kir 3．1 and Kir 3．4 mRNA using real-time fluorescence quantitative RT-PCR． Results There was a correlation between ANS activity and the expression level of Kir 3．1 and Kir 3．4 mRNA in the rat atrial myocytes of KAch． Conclusion ANS activity affects the expression levels of many factors in the KAch channel of rat atrial myocytes．

ANS activity，Neonatal rat atrial myocytes，KAch pathway，Expression

R-33

A

1674-9316（2016）19-0168-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2016．19．113

貴州省人民醫(yī)院心血管內(nèi)科，貴州 貴陽 550000 通訊作者：楊龍，E-mail：yanglong1001@163．com