• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    刺五加根的抗炎活性成分研究

    2016-11-22 07:22:49張羨媛李賀然
    中國醫(yī)藥導報 2016年13期

    張羨媛 李賀然

    蘇州大學藥學院,江蘇蘇州215123

    刺五加根的抗炎活性成分研究

    張羨媛 李賀然

    蘇州大學藥學院,江蘇蘇州215123

    目的研究刺五加根的抗炎活性成分。方法脂多糖(LPS)和干擾素(IFN-γ)誘導的單核巨噬細胞RAW264.7作為細胞炎癥模型,考察了刺五加根提取物對一氧化氮(NO)釋放抑制活性,利用HPD100大孔吸附樹脂、硅膠柱層析、反相色譜柱(ODS)、凝膠色譜、半制備高效液相等色譜技術對其進行化學成分分離,并運用薄層色譜法,紅外光譜、核磁等波譜技術確定化合物的結構。結果刺五加根提取物具有抑制NO釋放活性,從中分離得到7個化合物,分別鑒定為紫丁香苷、刺五加苷B1、刺五加苷E、芝麻素、胡蘿卜苷、β-谷甾醇和香草酸。結論刺五加根提取物具有抗炎活性,其中的苯丙素類成分為其抗炎活性成分。

    刺五加根;化學成分;抗炎活性;一氧化氮

    刺五加Acanthopanax senticosus(Rupr.et Maxim.)Harms為五加科五加屬植物,別名五加皮、刺拐棒;刺五加含有酚苷類、黃酮類、脂肪酸類、多糖類及各種微量元素、氨基酸等化學成分;具有兔疫調節(jié)、抗腫瘤、抗衰老、抗輻射、抗損傷及抗疲勞作用,可治療心腦血管疾病、糖尿病、神經衰弱、高脂血癥、低血癥等疾?。?-7]。本研究以脂多糖(LPS)和干擾素(IFN-γ)誘導的單核巨噬細胞RAW 264.7作為細胞炎癥模型,考察了刺五加根提取物對一氧化氮(NO)釋放抑制活性,并從中分離得到7個化合物,經TLC與波譜解析鑒定為紫丁香苷、刺五加苷B1、刺五加苷E、芝麻素、胡蘿卜苷、β-谷甾醇和香草酸。

    1 儀器與試藥

    VARIAN 600 MR超導核磁共振波譜儀(TMS為內標,美國VARIAN公司),熔點儀(北京科儀電光儀器廠),酶聯兔疫檢測儀(Model 3550 Microplate Reader,BIO-RAD)。凝膠Sephadex LH-20(美國GE公司),HPD100大孔吸附樹脂(滄州寶恩吸附材料科技有限公司),ODS(50~70μm),實驗所用試劑規(guī)格均為分析純。RAW264.7小鼠單核巨噬細胞白血病細胞(ATCC TIB-71)購自上海中國科學院細胞庫,脂多糖(美國Sigma公司)、干擾素-γ(美國Genzyme/Techne公司)。刺五加根購自貴州益佰制藥股份有限公司,由蘇州大學劉春宇教授鑒定為五加科植物刺五加A. senticosus Harms的干燥根。

    2 方法與結果

    2.1 NO釋放抑制活性測定

    RAW 264.7細胞濃度8×104個/mL,每孔100μL接種于96孔培養(yǎng)板,設立空白對照組、模型對照組、陽性對照組(100、30μg/mL)及給藥組(100、30、10、3μg/mL),每個濃度設3個復孔,在5%CO2和37℃下培養(yǎng)24 h,加入LPS(終濃度為100 ng/mL),IFN-γ(終濃度為0.33 ng/mL),樣品DMSO溶液(溶解樣品的DMSO相對于培養(yǎng)基的含量<0.5%),培養(yǎng)24 h[8]。取上清液100μL,分別加入50μL Griess試劑A[1%的磺胺磷酸溶液(5%)]和Griess試劑B(0.1%的萘基乙烯基二胺),遮光反應10min,用酶聯兔疫檢測儀在570 nm下測定吸光度,計算NO生成抑制率。

    2.2 提取分離

    稱取刺五加根1000 g,8000mL 60%乙醇回流提取2 h,重復3次,合并提取液,濃縮至浸膏。將浸膏水溶解,濾紙過濾,濾液經HPD100大孔吸附樹脂,依次以蒸餾水、20%乙醇、30%乙醇、75%乙醇洗脫。20%乙醇洗脫部位經硅膠柱層析;30%乙醇部分經硅膠柱層析、ODS柱層析、凝膠柱層析;75%乙醇部分經硅膠柱層析、ODS柱層析;最終分離得到7個化合物,化合物1(799 mg)、化合物2(8 mg)、化合物3(41 mg)、化合物4(13mg)、化合物5(9 mg)、化合物6(10 mg)和化合物7(61mg)。

    2.3 刺五加提取物對巨噬細胞產生NO的影響

    刺五加根60%乙醇提取物對LPS和IFN-γ誘導的單核巨噬細胞RAW 264.7產生NO的抑制作用呈劑量依賴關系,濃度為100μg/mL,抑制率達到(59.96± 4.57)%,濃度為30μg/mL,抑制率為(20.02±4.22)%,濃度為10μg/mL,抑制率為(8.81±5.29)%,濃度為3μg/mL,(6.36±3.52)%,n=3。陽性對照組濃度為100μg/mL,抑制率達到(94.73±2.05)%,濃度為30μg/mL,抑制率為(62.70±5.08)%,n=3。刺五加根60%乙醇提取物在濃度為100μg/mL時,與30μg/mL濃度的陽性對照組對NO產生的抑制能力相當。

    2.4 化合物結構鑒定

    將化合物1~7的波譜數據進行綜合分析,并與參考文獻、對照品比對,最終確定結構見圖1。化合物1~7的性狀與主要波譜數據歸屬如下:

    化合物1:白色針晶(甲醇),mp 190.0~192.0℃。三氯化鐵-鐵氰化鉀顯色反應呈陽性,Molish反應呈陽性。1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6),δ:6.69(1H,d,J=2.0 Hz,H-3),6.69(1H,d,J=2.0 Hz,H-5),6.44(1H,d,J=15.8 Hz,H-7),6.41(1H,d,J=15.8 Hz,H-8),4.07(2H,m,H-9),4.81(1H,d,J=7.9 Hz,glc-H-1'),3.17~3.55(6H,m),δ3.73(6H,s,2×OCH3)。13C-NMR(125MHz,DMSO-d6),δ:134.4(C-1),153.25(C-2,6),105.0(C-3,5),133.1(C-4),129.0(C-7),130.7(C-8),61.4(C-9),103.1(C-1'),74.7(C-2'),77.8(C-3'),70.5(C-4'),77.1(C-5'),62.0(C-6'),56.9(2×OCH3)。上述波譜數據與文獻[9]報道的紫丁香苷數據一致,與紫丁香苷對照品薄層比較,二者的薄層層析行為一致,且與對照品混合熔點不下降,鑒定化合物1為紫丁香苷。

    化合物2:無色針晶(甲醇),mp 204.0~205.0℃。1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6),δ:7.96(1H,d,J=9.5 Hz,H-4),7.13(1H,s,H-5),6.40(1H,d,J=9.5 Hz,H-3),5.16(1H,d,J=7.0 Hz,glc-H-1'),3.82(3H,s,OCH3),3.91(3H,s,OCH3)。13C-NMR(125MHz,DMSO-d6),δ:159.8(C-2),114.7(C-3),144.4(C-4),105.5(C-5),149.4(C-6),141.6(C-7),140.2(C-8),142.4(C-9),114.5(C-10),102.1(C-1'),74.1(C-2'),77.5(C-3'),69.8(C-4'),76.5(C-5'),61.2(C-6'),56.5(OCH3),60.8(OCH3)。上述波譜數據與文獻[10]報道的刺五加苷B1數據一致,鑒定化合物2為刺五加苷B1。

    化合物3:白色粉末(甲醇),10%H2SO4試劑呈現藍色,Molish反應呈陽性。1H-NMR(600MHz,DMSO-d6),δ:6.62(4H,s,H-2',6',2'',6''),4.86(2H,d,J= 5.4 Hz,glu-1,glu-1'),4.60(2H,d,J=4.0 Hz,H-7,7'),3.11(2H,m,H-8,8'),3.80,4.13(H-9,9'),3.81~4.16(12H,m),3.73(12H,s,4×OCH3)。13C-NMR(125MHz,DMSO-d6),δ:53.6(C-1,5),85.1(C-2,6),71.3(C-4,8),133.7(C-1',1''),104.2(C-2',6',2'',6''),152.6(C-3',5',3'',5''),137.1(C-4',4''),102.7(glc-1',1''),74.2(glc-2',2''),76.5(glc-3',3''),69.9(glc-4',4''),77.2(glc-5',5''),60.9(glc-6',6''),56.4(4×OCH3)。上述波譜數據與文獻[11]報道的刺五加苷E數據一致,與刺五加苷E對照品薄層比較,二者的薄層層析行為一致,且與對照品混合熔點不下降,鑒定化合物3為刺五加苷E。

    化合物4:白色粉末(甲醇),Molish反應呈陽性。IR(KBr):3420,2937,2870,1465,1380,1105,1060 cm-1。與胡蘿卜苷對照品薄層比較,二者的薄層層析行為一致,且與對照品混合熔點不下降,鑒定化合物4為胡蘿卜苷。

    化合物5:白色粉末。將其與β-谷甾醇對照品對照品薄層比較,二者的薄層層析行為一致,且與對照品混合熔點不下降,鑒定化合物5為β-谷甾醇。

    化合物6:白色粉末。1H-NMR(600MHz,DMSO-d6),δ:3.00(2H,m,H-8,8'),3.75(2H,dd,J=9.2,3.3 Hz,H-9a,9'a),4.11(2H,dd,J=8.8,6.6 Hz,H-9e,9e'),4.63(2H,d,J=4.0 Hz,H-7,7'),5.99(4H,s,2×OCH2O),6.92(2H,s,H-2,2'),6.83(2H,d,J=8.1 Hz,H-6,6'),6.87(2H,d,J=7.7 Hz,H-5,5')。13C-NMR(125 MHz,DMSO-d6),δ:147.4(C-4,4'),146.5(C-3,3'),135.5(C-1,1'),119.4(C-6,6'),108.0(C-5,5'),106.6(C-2,2'),84.9(C-7,7'),71.0(C-9,9'),53.7(C-8,8'),100.9(2×OCH2O)。上述波譜數據與文獻[12]報道的芝麻素數據一致,鑒定化合物6為芝麻素。

    化合物7:白色晶體(甲醇),mp 63.0~64℃。1HNMR(600MHz,DMSO-d6),δ:6.82(1H,d,J=8.1 Hz,H-5),7.42(1H,m,H-2,6),3.78(3H,s,OCH3),δ9.86(1H,s,OH)。13C-NMR(125MHz,DMSO-d6),δ:167.2(-COOH),151.0(C-4),147.1(C-3),123.4(C-6),121.5(C-1),114.9(C-2),112.6(C-5),55.5(OCH3)。上述波譜數據與文獻[13]報道的香草酸數據一致,鑒定化合物7為香草酸。

    圖1 化合物1~7結構

    3 討論

    NO是從血管內皮發(fā)現的小分子,一氧化氮合酶(NOS)催化L-精氨酸產生的5個電子的氧化物;NO既兼有第二信使和神經遞質的功能,又是效應分子,介導和調節(jié)多種生理和病理過程;急慢性炎癥的發(fā)生均與NO有關系,抑制NO的生成被認定為治療炎癥疾病比較有前景的方法[14]。文獻報道,刺五加水提物具有抗炎作用,可能通過抑制活化的巨噬細胞產生炎癥介質發(fā)揮其抗炎功效[15]。巨噬細胞中含有誘導型NOS,在LPS、IFN-γ等刺激下誘導表達可以催化精氨酸產生NO。因此,采用LPS和IFN-γ誘導的單核巨噬細胞RAW264.7作為細胞炎癥模型,考察刺五加醇提物對單核巨噬細胞RAW264.7產生NO的影響。實驗結果表明,刺五加根的醇提物對LPS和IFN-γ誘導的單核巨噬細胞RAW 264.7產生NO具有抑制作用,從中分離得到紫丁香苷、刺五加苷B1、刺五加苷E、芝麻素等苯丙素類成分。文獻報道,芝麻素等苯丙素類成分具有抑制NO生成和抗炎的作用,此類化合物在抗感染、抗心血管疾病等方面具有顯著的活性[16],與刺五加的功效、臨床應用[1-7]比較一致。因此,此類化合物可能是刺五加的抗炎藥效成分之一,對此類化合物的深入研究將有助于人類更深入地理解刺五加的藥效物質基礎。

    中藥抗炎藥理研究已從“整體-器官-細胞”水平發(fā)展到在分子、細胞水平探討中藥的作用機制;中藥有多種抗炎作用機制,如對下丘腦-垂體-腎上腺皮質軸(HPAA)的影響,導致內源性皮質醇分泌增多而發(fā)揮抗炎效應[17];干擾花生四烯酸代謝,苦參堿對磷脂酶A2(PLA2)活性的抑制是其抗炎機制之一[18];對細胞因子的影響,銀杏葉提取物通過下調IL-13的表達,從而使氣道炎細胞浸潤減少,減輕氣道炎癥[19];對核因子的影響,氧化苦參堿可抑制NF-κB活化,降低TNF-α和IL-6的生成,從而減輕葡聚糖硫酸鈉誘導的結腸炎炎性損傷[20];抗組胺、5-羥色胺、NO等炎癥介質的作用,銀杏葉總黃酮能明顯降低大鼠足爪局部炎癥組織中NO的含量,提示其抗炎機制與抑制NO生成有關[21]。本次實驗中,刺五加提取物能抑制LPS和IFN-γ誘導的單核巨噬細胞RAW 264.7的NO產生,這可能是刺五加抗炎作用機制之一;刺五加含有多種化學成分,不同成分的藥理作用及作用靶點不同,下一步,可以從炎癥動物模型驗證刺五加的抗炎作用,從細胞因子、核因子等方面多角度探索刺五加的抗炎作用機制。

    [1]國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草(第15卷)[M].上海:上??茖W技術出版社,1997:1256-1269.

    [2]涂正偉,周渭渭,單淇,等.刺五加的研究進展[J].藥物評價研究,2011,34(3):213-216.

    [3]刁波,唐瑛,王曉昆,等.刺五加多糖對海馬神經元抗氧化酶系統(tǒng)的影響[J].醫(yī)藥導報,2009,28(1):21-24.

    [4]于大海,毛士龍.刺五加總皂苷對家兔血小板、凝血功能及血液流變性的影響[J].藥學實踐雜志,2008,26(4):272-273.

    [5]李辰,王曉燕,胡緒瑋,等.刺五加抗疲勞活性部位中刺五加苷B的含量測定[J].中國中藥雜志,2008,33(23):2800.

    [6]陳月,王寶貴,張桂英,等.刺五加皂苷的抗輻射損傷作用[J].吉林大學學報,2005,31(3):423-425.

    [7]Yi JM,Kim MS,Seo SW,et al.Yook and H.M.Kim.A-canthopanax senticosus root inhibits mast cell-dependent anaphylaxis[J].Clinica Chimica Acta,2001,312:163.

    [8]Liu S,Chen Y,Gu L J,et al.Purification of eleutherosides by macroporous resin and the active fractions of anti-inflammatory and antioxidant activity from Acanthopanax senticosus extract[J].Analyticalmethods,2013,5:3732-3740.

    [9]吳立軍,阮麗軍,鄭健,等.刺五加莖葉化學成分研究[J].藥學學報,1999,34(11):839-841.

    [10]張玥秀,吳兆華,高慧援,等.刺五加莖葉化學成分的分離與鑒定[J].沈陽藥科大學學報,2010,27(2):111-112.

    [11]Lee S,Kim B K,Cho S H,et al.Phytochemical constituents from the fruits of Acanthopanax sessiliflorus[J]. Archibes of pharmacal research,2002,25(3):280-284.

    [12]葉敏,閻玉凝,喬梁,等.中藥菟絲子化學成分研究[J].中國中藥雜志,2002,27(2):115-117.

    [13]宋冬梅,孫啟時.阿爾泰金蓮花化學成分的研究(Ⅰ)[J].中國藥物化學雜志,2004,14(4):233-235.

    [14]潘會君,唐寧,華曉東,等.中藥調控一氧化氮合酶-一氧化氮系統(tǒng)的研究[J].中國實驗方劑學雜志,2010,16(12):202-204.

    [15]Lin Q,Jin L,Ma Y,et al.Acanthopanax senticosus inhibits Nitric Oxide production in Murine Macrophages in vitro and in vivo[J].Phytotherapy,2007,21(9):879-883.

    [16]魯磊,王緒新.芝麻素對2,4,6-三硝基苯磺酸誘導的大鼠潰瘍性結腸炎的影響[J].中南藥學,2013,11(11):815-817.

    [17]陳萬生,韓軍,李力,等.知母總多糖的抗炎作用[J].第二軍醫(yī)大學學報,1999,20(10):758-760.

    [18]邱耕,涂植光,李曉文,等.苦參堿對內毒素致炎大鼠PLA-2活性影響及其抗炎機制研究[J].中草藥,2002,33(7):630-632.

    [19]胡娜,王紅,呂兵,等.銀杏葉提取物拮抗哮喘大鼠氣道炎癥的機制探討[J].實用醫(yī)學雜志,2009,25(16):2646-2648.

    [20]鄭萍,牛鳳麗,劉文忠,等.氧化苦參堿對葡聚糖硫酸鈉誘導大鼠結腸炎的抗炎作用機制研究[J].中華消化雜志,2003,23(4):207-210.

    [21]張黎,陳志武,王瑜,等.銀杏葉總黃酮抗炎作用及機制的探討[J].安徽醫(yī)科大學學報,2001,36(5):350-352.

    [22]李鳳霞,王鳳儒,李宏偉.高效液相色譜儀對甲硝唑注射液滅菌工藝篩選研究[J].中國醫(yī)學裝備,2015,12(2):37-39.

    [23]宋學英,楊華,趙≥松,等.高效液相色譜儀的應用分析[J].中國醫(yī)學裝備,2015,12(1):29-31.

    [24]陸福廣,鄧祝智.大鼠骨骼肌挫傷后不同時間節(jié)點CNTF mRNA表達、收縮蛋白和能荷的變化[J].中國醫(yī)學裝備,2014,11(B12):112-113.

    [25]孫璠璠,李萍,朱志杰,等.風濕祛痛膠囊的抗炎作用研究[J].中國藥房,2016,27(1):26-28.

    [26]張瑩,朱志杰,李萍,等.壯骨伸筋膠囊的抗炎鎮(zhèn)痛作用研究[J].中國藥房,2016,27(1):35-37.

    [27]王瑤,鐘希文,張文霞.鱷嘴花的化學成分及藥理作用研究進展[J].中國藥房,2016,27(1):108-111.

    [28]柴守范,郭騰飛,馮學武.蘇黃止咳膠囊治療急性咽喉炎療效觀察[J].西部中醫(yī)藥,2015,28(11):84-86.

    [29]王拴旺,李永平,王樹林.藏藥五味獐牙菜湯對膽囊炎模型家兔藥效學的影響[J].西部中醫(yī)藥,2015,28(5):75-77.

    [30]張明,鄧毅.甘草及其有效成分的藥效學研究進展[J].西部中醫(yī)藥,2015,28(4):156-159.

    Anti-inflammatory constituents of Acanthopanax senticosus

    ZHANG Xianyuan LIHeran
    Department of Pharmacy,Soochow University,Jiangsu Province,Suzhou 215123,China

    Objective To study the anti-inflammatory constituents of Acanthopanax senticosus.Methods NO production in the activated RAW 264.7macrophages induced by LPS and IFN-γwere used to evaluate anti-inflammatory activity.The compounds were isolated by HPD 100 resin,silica gel,ODSand HPLCmethods,their structureswere identified by Infrared TLCmethod and spectral imaging spectrum technology.Resu lts The extraction of A.senticosus.had inhibitory activity on NO production.Seven compoundswere isolated and identified as Syringin,Isofraxidin-7-O-glucoside,Syringaresinoldi-O-β-D-glycoside,Sesamin,Daucosterol,β-sitosterol and Vanillic acid respectively.Conclusion The extraction of A.senticosus.has the anti-inflammatory effect,and phenylpropanoids are the anti-inflammatory constituents.

    Acanthopanax senticosus;Constituents;Anti-inflammatory activity;Nitric oxide

    R961.1

    A

    1673-7210(2016)05(a)-0020-04

    2016-01-21本文編輯:趙魯楓)

    蘇州大學大學生創(chuàng)新性實驗計劃項目(573151 1710)。

    張羨媛(1990.3-),女,碩士,主要從事天然產物活性成分研究。

    李賀然(1976.11-),男,副教授,主要從事天然產物化學成分及活性研究。

    精品久久久精品久久久| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 亚洲人成电影观看| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 成人精品一区二区免费| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 成人免费观看视频高清| 成年人黄色毛片网站| 伦理电影免费视频| 亚洲av五月六月丁香网| 少妇被粗大的猛进出69影院| 视频在线观看一区二区三区| 久久热在线av| 丝袜在线中文字幕| 欧美日本中文国产一区发布| 国产精华一区二区三区| 久久热在线av| 老熟妇仑乱视频hdxx| 男女床上黄色一级片免费看| 麻豆国产av国片精品| 午夜久久久久精精品| 国产精品国产高清国产av| 亚洲美女黄片视频| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲欧美精品综合久久99| 黑人操中国人逼视频| 999久久久国产精品视频| 男女床上黄色一级片免费看| 男人操女人黄网站| 中文字幕av电影在线播放| 999久久久精品免费观看国产| 91麻豆精品激情在线观看国产| av网站免费在线观看视频| 中文字幕色久视频| 手机成人av网站| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 91av网站免费观看| 色av中文字幕| 一级a爱视频在线免费观看| 在线观看一区二区三区| 亚洲精华国产精华精| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 在线十欧美十亚洲十日本专区| av天堂在线播放| 国产成人精品在线电影| e午夜精品久久久久久久| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 亚洲欧美日韩高清在线视频| 成人国产综合亚洲| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产成人精品无人区| 精品久久蜜臀av无| 色老头精品视频在线观看| 啦啦啦免费观看视频1| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 亚洲av电影不卡..在线观看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 精品久久久久久,| 成在线人永久免费视频| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 国产区一区二久久| 午夜福利影视在线免费观看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 99国产综合亚洲精品| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 黄片播放在线免费| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲精品粉嫩美女一区| 免费在线观看黄色视频的| www.熟女人妻精品国产| 身体一侧抽搐| 久久久精品欧美日韩精品| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 精品久久久久久久人妻蜜臀av | 18美女黄网站色大片免费观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产精品98久久久久久宅男小说| 99精品欧美一区二区三区四区| 久久九九热精品免费| 黄片播放在线免费| 免费看a级黄色片| av在线天堂中文字幕| 最新在线观看一区二区三区| 一二三四在线观看免费中文在| 两个人免费观看高清视频| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲第一电影网av| 午夜两性在线视频| av有码第一页| 精品久久蜜臀av无| 久久国产精品影院| 亚洲熟妇熟女久久| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| netflix在线观看网站| 午夜影院日韩av| 精品国产乱码久久久久久男人| 中文字幕色久视频| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 99精品欧美一区二区三区四区| 久久香蕉激情| 欧美性长视频在线观看| avwww免费| 母亲3免费完整高清在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲欧美激情在线| 久久久水蜜桃国产精品网| 日韩有码中文字幕| 午夜福利影视在线免费观看| 国产91精品成人一区二区三区| 久久午夜亚洲精品久久| 久久国产亚洲av麻豆专区| 波多野结衣高清无吗| 精品国产乱码久久久久久男人| 色av中文字幕| 国产午夜福利久久久久久| 啦啦啦 在线观看视频| 黄色片一级片一级黄色片| 国产亚洲精品av在线| 亚洲国产精品sss在线观看| 黄频高清免费视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 老司机靠b影院| 国产成人精品在线电影| 成人18禁在线播放| 嫩草影视91久久| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 亚洲国产精品久久男人天堂| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 亚洲自偷自拍图片 自拍| 午夜免费成人在线视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 老汉色∧v一级毛片| 欧美激情极品国产一区二区三区| 成熟少妇高潮喷水视频| 99久久久亚洲精品蜜臀av| av有码第一页| 成人亚洲精品av一区二区| 国产视频一区二区在线看| 天堂√8在线中文| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产一区在线观看成人免费| 91国产中文字幕| 免费观看精品视频网站| 国产一区在线观看成人免费| 高清毛片免费观看视频网站| 脱女人内裤的视频| 男女下面进入的视频免费午夜 | 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 亚洲精华国产精华精| 怎么达到女性高潮| 国产不卡一卡二| 十八禁人妻一区二区| 窝窝影院91人妻| 国产野战对白在线观看| 免费搜索国产男女视频| 精品高清国产在线一区| 婷婷六月久久综合丁香| 波多野结衣一区麻豆| 可以在线观看毛片的网站| 国产三级在线视频| 电影成人av| 啦啦啦韩国在线观看视频| 午夜福利18| 日本 欧美在线| 高潮久久久久久久久久久不卡| 日本五十路高清| 母亲3免费完整高清在线观看| 中文字幕久久专区| av欧美777| 两性夫妻黄色片| 亚洲av成人一区二区三| 日本 av在线| 成人手机av| 丝袜美足系列| 亚洲激情在线av| 午夜精品久久久久久毛片777| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲视频免费观看视频| www国产在线视频色| 午夜两性在线视频| 欧美成人性av电影在线观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产又色又爽无遮挡免费看| 一级片免费观看大全| 九色国产91popny在线| 99国产极品粉嫩在线观看| 老鸭窝网址在线观看| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 日韩成人在线观看一区二区三区| 久久香蕉激情| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产黄a三级三级三级人| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲第一电影网av| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 9热在线视频观看99| 国产欧美日韩精品亚洲av| 少妇的丰满在线观看| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 中文字幕色久视频| 自线自在国产av| 91av网站免费观看| 久久人妻av系列| 国产精品免费视频内射| 国产精品日韩av在线免费观看 | 精品电影一区二区在线| 国产精品久久视频播放| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 欧美日本亚洲视频在线播放| 99香蕉大伊视频| 国产精品国产高清国产av| 国产一区二区激情短视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 最好的美女福利视频网| 久久久国产成人免费| 欧美不卡视频在线免费观看 | 欧美黄色片欧美黄色片| 精品久久久久久成人av| 色在线成人网| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产精品1区2区在线观看.| 国产精品日韩av在线免费观看 | 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲精品国产一区二区精华液| 欧美一区二区精品小视频在线| 久久久久久久久久久久大奶| 国产成+人综合+亚洲专区| 黄片小视频在线播放| 国产成人欧美在线观看| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| tocl精华| 国语自产精品视频在线第100页| 久久久久久国产a免费观看| 在线播放国产精品三级| 中文字幕人成人乱码亚洲影| e午夜精品久久久久久久| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产精品av久久久久免费| 中文字幕最新亚洲高清| 美女午夜性视频免费| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 亚洲精品中文字幕在线视频| 这个男人来自地球电影免费观看| 美女国产高潮福利片在线看| 欧美激情高清一区二区三区| 久久久久久久久中文| 亚洲视频免费观看视频| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 97碰自拍视频| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 最新美女视频免费是黄的| 在线视频色国产色| 精品一区二区三区四区五区乱码| 亚洲精品中文字幕在线视频| 一区二区三区精品91| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产欧美日韩精品亚洲av| √禁漫天堂资源中文www| 亚洲精品一区av在线观看| 给我免费播放毛片高清在线观看| 精品不卡国产一区二区三区| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产99久久九九免费精品| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 精品日产1卡2卡| 日韩欧美国产一区二区入口| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 国产1区2区3区精品| 午夜福利一区二区在线看| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 在线观看免费日韩欧美大片| 午夜两性在线视频| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 日韩视频一区二区在线观看| 在线国产一区二区在线| 国产黄a三级三级三级人| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲国产看品久久| 大码成人一级视频| 村上凉子中文字幕在线| 亚洲人成伊人成综合网2020| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲人成电影观看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 老鸭窝网址在线观看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产成人免费无遮挡视频| 国产91精品成人一区二区三区| 首页视频小说图片口味搜索| 男女午夜视频在线观看| av片东京热男人的天堂| 人人妻人人澡欧美一区二区 | 亚洲国产精品999在线| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 亚洲人成电影免费在线| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 一级作爱视频免费观看| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 老司机在亚洲福利影院| 电影成人av| 天天一区二区日本电影三级 | 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 色播在线永久视频| 美女高潮到喷水免费观看| 欧美一级a爱片免费观看看 | 婷婷六月久久综合丁香| √禁漫天堂资源中文www| 美女免费视频网站| 中出人妻视频一区二区| 美女午夜性视频免费| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 国产午夜精品久久久久久| xxx96com| 十八禁网站免费在线| 国产片内射在线| 男女下面进入的视频免费午夜 | 久久人人爽av亚洲精品天堂| 黄片小视频在线播放| 黄色丝袜av网址大全| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| www国产在线视频色| 国产三级在线视频| 国产单亲对白刺激| 久久久国产欧美日韩av| 欧美丝袜亚洲另类 | 精品卡一卡二卡四卡免费| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 我的亚洲天堂| 亚洲精品粉嫩美女一区| 一区二区三区国产精品乱码| 亚洲av成人av| 国产在线精品亚洲第一网站| 亚洲,欧美精品.| √禁漫天堂资源中文www| avwww免费| 成熟少妇高潮喷水视频| 一区二区日韩欧美中文字幕| 黄色丝袜av网址大全| 国产av一区二区精品久久| 午夜成年电影在线免费观看| 一区福利在线观看| 多毛熟女@视频| avwww免费| 校园春色视频在线观看| 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | 长腿黑丝高跟| 黄色毛片三级朝国网站| 国产亚洲欧美在线一区二区| 色综合婷婷激情| 久久久久久久午夜电影| 99久久99久久久精品蜜桃| or卡值多少钱| 香蕉久久夜色| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 久久精品91蜜桃| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 久热爱精品视频在线9| av超薄肉色丝袜交足视频| 精品福利观看| www.www免费av| 精品不卡国产一区二区三区| 香蕉国产在线看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 热99re8久久精品国产| 久久欧美精品欧美久久欧美| 午夜老司机福利片| 亚洲自拍偷在线| 国产成人欧美在线观看| 亚洲片人在线观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产91精品成人一区二区三区| 最新美女视频免费是黄的| 午夜福利,免费看| 亚洲在线自拍视频| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 久久久久久久久中文| 嫩草影院精品99| 成人永久免费在线观看视频| а√天堂www在线а√下载| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 亚洲国产精品成人综合色| 国产精品一区二区精品视频观看| 十八禁人妻一区二区| 国产午夜福利久久久久久| 欧美色视频一区免费| 久久久久久人人人人人| x7x7x7水蜜桃| 搡老岳熟女国产| 亚洲男人的天堂狠狠| 他把我摸到了高潮在线观看| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲中文av在线| 午夜日韩欧美国产| а√天堂www在线а√下载| 免费无遮挡裸体视频| 久久久久国内视频| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产极品粉嫩免费观看在线| 色在线成人网| 日韩欧美在线二视频| 宅男免费午夜| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲人成77777在线视频| 欧美乱色亚洲激情| 亚洲精华国产精华精| 成人特级黄色片久久久久久久| 久久午夜亚洲精品久久| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 99久久综合精品五月天人人| 嫩草影院精品99| 精品卡一卡二卡四卡免费| 日韩欧美免费精品| 精品福利观看| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲全国av大片| 十分钟在线观看高清视频www| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 日本三级黄在线观看| 亚洲av美国av| 色播在线永久视频| 久久久久久久精品吃奶| 国产精品亚洲一级av第二区| 操出白浆在线播放| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 国产99久久九九免费精品| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 一级黄色大片毛片| 在线观看午夜福利视频| ponron亚洲| 国产区一区二久久| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产在线精品亚洲第一网站| 露出奶头的视频| 又黄又粗又硬又大视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产高清视频在线播放一区| e午夜精品久久久久久久| 国产不卡一卡二| 久久影院123| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 亚洲午夜理论影院| 免费人成视频x8x8入口观看| 日本黄色视频三级网站网址| 美女 人体艺术 gogo| 亚洲成人精品中文字幕电影| 高清在线国产一区| 国产三级黄色录像| 色婷婷久久久亚洲欧美| 十八禁人妻一区二区| 精品电影一区二区在线| 99久久综合精品五月天人人| 日韩欧美三级三区| 亚洲午夜理论影院| 日本 欧美在线| 老汉色∧v一级毛片| 操美女的视频在线观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 一级黄色大片毛片| 免费在线观看黄色视频的| 日韩成人在线观看一区二区三区| 天堂影院成人在线观看| 亚洲无线在线观看| 免费无遮挡裸体视频| tocl精华| 欧美av亚洲av综合av国产av| 伦理电影免费视频| 成人亚洲精品一区在线观看| 免费无遮挡裸体视频| 好男人在线观看高清免费视频 | 久久人妻熟女aⅴ| 精品不卡国产一区二区三区| 三级毛片av免费| 午夜福利欧美成人| 免费观看精品视频网站| 51午夜福利影视在线观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 黄色片一级片一级黄色片| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲九九香蕉| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 精品熟女少妇八av免费久了| 99re在线观看精品视频| 午夜免费鲁丝| 51午夜福利影视在线观看| 久久精品91蜜桃| 99久久精品国产亚洲精品| 婷婷六月久久综合丁香| 91精品国产国语对白视频| 大型av网站在线播放| 久久精品91蜜桃| e午夜精品久久久久久久| 他把我摸到了高潮在线观看| 看黄色毛片网站| 国产精品 国内视频| 999久久久国产精品视频| 成熟少妇高潮喷水视频| 日韩三级视频一区二区三区| 国产精品国产高清国产av| 麻豆国产av国片精品| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国产成人欧美在线观看| 深夜精品福利| 色综合婷婷激情| 中亚洲国语对白在线视频| 精品电影一区二区在线| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 成人免费观看视频高清| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 在线观看免费视频网站a站| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 精品国产亚洲在线| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲av美国av| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 成人手机av| 亚洲欧美日韩无卡精品| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 午夜亚洲福利在线播放| 身体一侧抽搐| 色av中文字幕| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 9热在线视频观看99| 一进一出抽搐动态| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 国产精品一区二区三区四区久久 | 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 国产麻豆69| 午夜福利一区二区在线看| 亚洲国产欧美网| 日韩大码丰满熟妇| 午夜影院日韩av| 91老司机精品| а√天堂www在线а√下载| 丝袜在线中文字幕| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 女性生殖器流出的白浆| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 99久久精品国产亚洲精品| 在线免费观看的www视频| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 制服诱惑二区| 亚洲国产看品久久| 麻豆一二三区av精品| 视频在线观看一区二区三区| 国产野战对白在线观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 欧美在线一区亚洲| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 国产高清videossex| 成在线人永久免费视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 婷婷丁香在线五月| 啦啦啦 在线观看视频| 国产精品99久久99久久久不卡| 高清毛片免费观看视频网站| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 在线视频色国产色| 成人国语在线视频| 真人做人爱边吃奶动态| 极品教师在线免费播放| 精品福利观看| 久99久视频精品免费| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 正在播放国产对白刺激| 他把我摸到了高潮在线观看| 看免费av毛片| 99国产综合亚洲精品| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 禁无遮挡网站| 精品电影一区二区在线| 精品欧美一区二区三区在线| av在线播放免费不卡| xxx96com| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 手机成人av网站| 久久九九热精品免费| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 国产激情久久老熟女| АⅤ资源中文在线天堂| 欧美乱色亚洲激情| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国产野战对白在线观看| 欧美大码av| 国产一区二区在线av高清观看| 咕卡用的链子| 天天添夜夜摸| 国产乱人伦免费视频| 免费在线观看黄色视频的| 男女午夜视频在线观看| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲久久久国产精品| 色综合婷婷激情| 国产精品久久久久久人妻精品电影|