GPC3對原發(fā)性肝癌的診斷價值

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(1.大連醫(yī)科大學(xué) 附屬第二醫(yī)院 檢驗科，遼寧 大連 116027；2.溫州醫(yī)學(xué)院 研究生院，浙江 溫州 325035)

醫(yī)學(xué)檢驗

GPC3對原發(fā)性肝癌的診斷價值

許方1，李曉蘭1，王玉梅1，吳小利2

(1.大連醫(yī)科大學(xué) 附屬第二醫(yī)院 檢驗科，遼寧 大連 116027；2.溫州醫(yī)學(xué)院 研究生院，浙江 溫州 325035)

目的探討磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 (glypican-3,GPC3)對原發(fā)性肝癌的診斷意義,尤其是對AFP陰性及腫塊較小的肝癌患者的診斷價值。方法收集120例肝癌、32例肝硬化病人，通過ELISA法檢測標(biāo)本GPC3值，電化學(xué)發(fā)光法檢測標(biāo)本AFP值，肝癌組根據(jù)腫塊大小分為4組(<3 cm、3～5 cm、5～10 cm和>10 cm)進(jìn)行結(jié)果分析。結(jié)果(1)肝癌組GPC3值為(22.014±36.930)ng/mL，肝硬化組GPC3值為(8.590±8.171)ng/mL，兩組比較差異有顯著性意義(P<0.01)。(2)肝癌腫塊<3 cm組GPC3和AFP的陽性率分別為86.67%和71.43%，二者之間差異無顯著性意義(P>0.05)；肝癌腫塊3～5 cm、5～10 cm、>10 cm組的GPC3的陽性率低于AFP，二者間差異也無顯著性意義(P>0.05)。(3)AFP陰性的肝癌患者中GPC3的陽性率為75%。結(jié)論GPC3作為新興的腫瘤標(biāo)志物，可能對AFP陰性和小腫塊肝癌患者的診斷價值較大，GPC3與AFP聯(lián)合檢測更有利于肝癌的早期診斷。

GPC3；AFP；原發(fā)性肝癌

肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是中國最常見的惡性腫瘤之一，且其一旦出現(xiàn)典型癥狀和體征，多數(shù)為中晚期，缺乏有效治療，預(yù)后差，因此早期診斷非常重要。磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 (glypican-3,GPC3)作為新興的腫瘤標(biāo)志物，與傳統(tǒng)的AFP相比，具有各自的診斷局限性，Llovet等[1]在2008年HCC管理新進(jìn)展中推薦3個高準(zhǔn)確率HCC診斷基因組，GPC3是其中之一，但仍需要更多的研究以證明其優(yōu)越性。

之前本研究組曾做過GPC3與AFP兩項指標(biāo)對原發(fā)性肝癌診斷意義的比較，發(fā)現(xiàn)GPC3與AFP相比，診斷敏感性更高，但特異性相對較低，二者間沒有相關(guān)性[2]。為了進(jìn)一步明確GPC3對早期肝癌及AFP陰性肝癌診斷的價值，本組對其中46例有腫塊的肝癌病例根據(jù)腫塊大小重新進(jìn)行了分組，分別測定其GPC3及AFP值，并進(jìn)行進(jìn)一步分析。

1 資料與方法

1.1 材 料

選擇2010年2月1日 —2012年11月25日到大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院就診的肝癌患者(符合2001年中國抗癌協(xié)會肝癌專業(yè)委員會指定的診斷標(biāo)準(zhǔn))120例，其中男77例，年齡25～93歲，女43例，年齡23～81歲；肝硬化患者(符合2000年病毒性肝炎防治方案肝硬化的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn))32例，其中男19例，年齡33～79歲，女13例，年齡28～81歲。

肝癌組中46例根據(jù)腫塊大小進(jìn)一步分組，分為<3 cm、3～5 cm、5～10 cm和>10 cm共4組。

1.2 方 法

采集靜脈血標(biāo)本，分離血清，-20℃冷凍保存。采用電化學(xué)發(fā)光法檢測標(biāo)本AFP值，儀器為Elecsys2010電化學(xué)發(fā)光分析儀，試劑購自羅氏公司。

ELISA方法測定標(biāo)本GPC3值，試劑購自Uscn公司，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，酶標(biāo)檢測儀型號為美國ElX800NB。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 兩組血清GPC3水平比較

肝癌患者血清中GPC3值(22.014±36.930)ng/mL高于肝硬化患者(8.590±8.171)ng/mL，兩組比較差異有顯著性意義(P<0.01)。

2.2 不同腫塊大小的肝癌GPC3與AFP比較

腫塊直徑較小組(<3 cm)GPC3陽性率(86.67%)高于GPC3(71.43%)，其他組GPC3的陽性率均不高于AFP，所有組GPC3與GPC3的陽性率比較差異均不存在顯著性意義(P>0.05)。見表1。

表1 不同腫塊大小的GPC3與AFP的陽性率

2.3 GPC3在AFP陽性與陰性中的檢測結(jié)果

GPC3在AFP陰性的肝癌患者中陽性率為75%，提高了檢測的敏感度。見表2。

表2 HCC組中GPC3在AFP陽性與陰性中的檢測結(jié)果

3 討 論

GPC3是一類分布在細(xì)胞膜表面的蛋白聚糖，屬于糖基磷脂酰肌醇錨定細(xì)胞表面磷酸乙酰肝素蛋白多糖家族，GPC3蛋白作為一種膜性間質(zhì)蛋白，其表達(dá)方式與生長因子(如成纖維細(xì)胞生長因子等)及其受體表達(dá)方式一致，能通過一系列細(xì)胞表面受體傳導(dǎo)的信號來調(diào)節(jié)細(xì)胞形態(tài)和各種細(xì)胞行為如粘附、增殖、遷移、存活和分化[3]。GPC3在肝癌組織中高表達(dá)，而在正常肝組織不表達(dá)，是一種新的肝細(xì)胞癌的癌胚抗原，許多學(xué)者對GPC3在肝細(xì)胞癌的發(fā)生和發(fā)展中的作用提出了許多假說，并通過實驗證明假說，但關(guān)于GPC3在肝細(xì)胞癌中的作用具體機(jī)制并未達(dá)成一致意見[4]。

關(guān)于GPC3在肝癌診斷中的作用，尤其是國外學(xué)者做過不少相關(guān)探討。Hippo和Capurro等[5]在肝癌病人血清中特異性地檢測到可溶 GPC3 (sGPC3) ，其表達(dá)量明顯高于肝硬化病人及健康對照組，且方法的敏感性優(yōu)于AFP。Nakatsura和Capurro等[6-7]應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附方法發(fā)現(xiàn)40 %(16/40) ～53 %(18/34) 肝癌患者血清GPC3陽性，而在20 例肝炎肝硬化患者血清中僅1 例陽性，正常人血清中未檢測到。本實驗用ELISA方法分析了32例肝硬化病人和120例原發(fā)性肝癌病人血清中的GPC3含量。結(jié)果表明：HCC組的GPC3明顯高于肝硬化組及正常對照組，二者間存在明顯差異，說明GPC3對肝癌的診斷有一定意義。這一結(jié)果與許多國外學(xué)者的報道相吻合。

同時，本實驗對于肝癌患者根據(jù)腫塊的大小進(jìn)行了分組，發(fā)現(xiàn)腫塊<3 cm組，GPC3的陽性率(86.67%)高于AFP的陽性率(71.43%)；其他腫塊(>3 cm)組，GPC3的陽性率均不高于AFP，組間差異均沒有顯著性意義。其他類似的研究分組情況略有不同，結(jié)論也有所區(qū)別。汪得勝等[8]發(fā)現(xiàn)腫瘤最大直徑<5 cm及5～10 cm的HCC患者GPC3陽性率高于AFP，而最大直徑>10 cm的HCC患者中GPC3陽性率低于AFP，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。Zhou等[9]研究發(fā)現(xiàn)，在腫瘤直徑<5 cm 的HCC患者中，GPC3 mRNA表達(dá)的陽性率(83.3%，6 例中的5 例) 要明顯高于血清AFP的診斷率(33.3%，6 例中的2 例，診斷標(biāo)準(zhǔn)AFP>400 μg/mL) ，說明早期肝癌的診斷中GPC3mRNA較血清AFP敏感度高。Libbrecht 等[10]應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法研究發(fā)現(xiàn)，GPC3 在小肝癌(<3 cm)的表達(dá)水平顯著高于肝硬化及其他小局灶性病變，對于小HCC的診斷GPC3的敏感度和特異度分別為77%和96%，提示GPC3 在小局灶性病變的組織病理學(xué)診斷方面具有較大的臨床輔助價值。本研究可能由于選材及例數(shù)的原因，在腫塊<3 cm組，GPC3的陽性率雖然高于AFP的陽性率，但并沒有明顯差異，但提示對于未發(fā)現(xiàn)腫塊及腫塊較小者進(jìn)行GPC3的測定可能對肝癌的早期診斷更有意義。

本次實驗結(jié)果中，肝癌組AFP陰性患者中GPC3的陽性率為75.00%，相關(guān)報道如Ding等[11]利用Northern blot技術(shù)在AFP陰性的41例肝癌組織中，檢測到了30例GPC3表達(dá)，比例高達(dá)73.17%。還有研究用Northern blot檢測AFP陰性肝癌組織，有73.00%的標(biāo)本 GPC3 mRNA陽性，以血清 AFP≤20 μg/L為診斷標(biāo)準(zhǔn)，其表達(dá)率為 40.0%，提示血清AFP陰性的樣本中也可檢測出GPC3。此外Zhou等[9]發(fā)現(xiàn)，GPC3在AFP陰性的HCC中表達(dá)可以達(dá)到90%以上。因此認(rèn)為，GPC3對AFP陰性的肝癌患者意義更大，有效地提高了檢測的靈敏度，在肝癌患者的篩查中具有很大的價值。

近年來的大量研究表明，GPC3是一種很有前景的肝癌早期診斷標(biāo)志物，尤其對于AFP陰性及腫塊較小的HCC患者，建議將其與AFP進(jìn)行聯(lián)合檢測，可以有效提高檢測率，有助于早期發(fā)現(xiàn)，早期治療。

[1] Llovet JM,Chen Y,Wurmbach E,et al.A molecular signature to discriminate dysplastic nodules from early hepatocellular carcinoma in HCV cirrhosis[J].Gastroeterology,2006,131:1758-1767.

[2] 許方，李曉蘭，吳小利.血清GPC3與AFP的檢測對原發(fā)性肝癌診斷意義比較[J].中國實驗診斷學(xué)，2013，17(6)：71-73.

[3] Baumhoer D,Tornillo L,Stadlmann S,et al.Glypican 3 expression in human nonneoplastic,preneoplastic,and neoplastic tissue:a tissue microarray analysis of 4387 tissue samples[J].Am J Clin Pathol,2008, 129:899-906.

[4] 楊龍，劉劍勇.GPC3與肝癌的研究進(jìn)展[J].中國癌癥防治雜志，2010，6(2)：146-148.

[5] Hippo Y,Watanabe K,Watanabe A, et al. Identification of soluble NH2-terminal fragment of glypican-3 as a serological marker for early-stage hepat ocellular carcinoma[J].Cancer Res, 2004, 64 (7): 2418- 2423.

[6] Nakatsura T, Yoshitake Y, Senju S, et al. Glypican-3, over expressed specifically in human hepatocellular carcinoma, is a novel tumor marker[J].Biochem Biophys Res Commun,2003,306 (1):16-25.

[7] Capurro M,Wanless IR, Sherman M, et al. Glypican-3:A novel serumand histochemical marker for hepatocellular carcinoma[J]. Gastroenterology, 2003, 125 (1):89-97.

[8] 汪得勝，丁惠國，李卓，等.血清GPC3聯(lián)合AFP對原發(fā)性肝癌的診斷價值探討[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2007，30(10)：1169-1171.

[9] Zhou XP,Wang HY,Yang GS,et al.Cloning and expression of MXR7 gene in human HCC tissue[J]．World J Gastroenteml, 2000,6:57-60.

[10] Libbrecht L,Severi T,Cassiman D, et al. Glypican-3 expression distinguishes small hepatocellular carcinomas from cirrhosis, dysplastic nodules, and focal nodular hyperplasia- like nodules[J]. Am J Surg Pathol, 2006, 30 (11):1405-1411.

[11] Ding GH, Wang HY, Chen H, et al. Expression of the glypican-3gene in α-fetoprotein-negative human hepatocellularcarcinoma[J].Chn-Ger J Clin Oncol, 2005, 4(5):262-266.

StudyondiagnosticsignificanceofGPC3inthepatientswithprimaryhepatocellularcarcinoma

XUFang1,LIXiao-lan1,WANGYu-mei1,WUXiao-li2

(1.ClinicalLaboratory,theSecondAffiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity,Dalian116027,China; 2.AcademyofWenzhouMedicallCollege,Wenzhou325035,China)

ObjectiveTo evaluate the diagnostic value of GPC3 for patients with primary hepatocellular carcinoma, especially when AFP was negative or swelling was smaller.MethodsSerum GPC3 and AFP were measured by ELISA and the electrochemical luminescence method in 120 patients with primary hepatocellular carcinoma, 32 patients with hepatic cirrhosis. The results were divided into groups according to the size of swelling(<3 cm，3～5 cm，5～10 cm和>10 cm ).Results(1)The value of GPC3 in hepatocellular carcinoma group was (22.014±36.930)ng/mL,and the value of GPC3 in hepatic cirrhosis was (8.590±8.171)ng/mL.The difference was significant between two groups(P<0.01).(2)The positive rates of GPC3 and AFP were 86.67% and 71.43% in swelling size <3 cm group, and the difference was not significant(P>0.05). The positive rates of GPC3 in the other groups(swelling size 3～5 cm,5～10 cm,>10 cm) were lower than AFP,and the difference was not significant(P>0.05).(3) The positive rate of GPC3 in case of negative AFP was 75%.ConclusionAs a new tumor marker in primary hepatocellular carcinoma,GPC3 perhaps has higher diagnosis value in case of negative AFP and smaller swelling size. GPC3 in combination with AFP can improve the early stage detection of HCC.

GPC3；AFP； primary hepatocellular carcinoma

10.11724/jdmu.2013.04.18

R392.9；R735.7

A

1671-7295(2013)04-0381-03

許方，李曉蘭，王玉梅，等. GPC3對原發(fā)性肝癌的診斷價值[J].大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2013,35(4)：381-383.

大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院青年科研基金(2009)

許 方(1972-)，女，遼寧大連人，主任技師。E-mail:xu27002@126.com

2013-05-08；

2013-06-25)