脂餐負(fù)荷前后MPO和GSH-Px變化及其與動(dòng)脈硬化關(guān)系的研究

周 雪，靳春榮，白 淘，陳 武，李思進(jìn)，梁建芳

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脂餐負(fù)荷前后MPO和GSH-Px變化及其與動(dòng)脈硬化關(guān)系的研究

周 雪1，靳春榮2，白 淘2，陳 武2，李思進(jìn)2，梁建芳2

目的 研究在動(dòng)脈硬化過程中脂餐負(fù)荷前后髓過氧化物酶(MPO)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的變化情況及其與動(dòng)脈硬化的關(guān)系。方法 高脂喂養(yǎng)10只新西蘭雄性大白兔12周，初始及第4周、8周、12周給予脂餐負(fù)荷，于空腹、脂餐負(fù)荷后2 h、4 h、6 h、8 h采血，測(cè)定MPO和GSH-Px含量，同步超聲觀察腹主動(dòng)脈硬化情況。結(jié)果 MPO空腹水平呈升高趨勢(shì)，12周明顯增多(P<0.05)，初始和第12周脂餐負(fù)荷后MPO水平先升高后降低，餐后2 h最高(P<0.05)。GSH-Px 空腹水平呈降低趨勢(shì)，4周、8周、12周均較初始降低(P<0.05)，脂餐負(fù)荷后GSH-Px均呈下降趨勢(shì)，6 h～8 h最低(P<0.05)。結(jié)論 氧化應(yīng)激反應(yīng)始終存在于動(dòng)脈粥樣硬化過程中，不同階段脂餐負(fù)荷對(duì)氧化應(yīng)激可能有較大影響。

動(dòng)脈粥樣硬化；氧化應(yīng)激；脂餐負(fù)荷；髓過氧化物酶；谷胱甘肽過氧化物酶

氧化應(yīng)激是各種心血管疾病危險(xiǎn)因素導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的共同機(jī)制之一。高脂肪飲食所致的代謝綜合征會(huì)引起血管損傷，增加心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)，其發(fā)病機(jī)制與持續(xù)高脂飲食誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生的氧化應(yīng)激反應(yīng)密切相關(guān)[1-2]。氧化應(yīng)激反應(yīng)致機(jī)體內(nèi)活性氧族(ROS)過量產(chǎn)生，引起血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、凋亡，脂質(zhì)過氧化，誘導(dǎo)并促進(jìn)了動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展[3]。其中，髓過氧化物酶(MPO)參與的酶促反應(yīng)可產(chǎn)生大量氧自由基，而谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)是谷胱甘肽抗氧化系統(tǒng)中關(guān)鍵的抗氧化酶，起著清除脂類氫過氧化物的作用。本研究通過觀察在動(dòng)脈硬化進(jìn)展過程中脂餐負(fù)荷前后兔血清MPO、GSH-Px水平的變化情況，以探討動(dòng)脈硬化發(fā)展不同階段脂餐負(fù)荷對(duì)氧化應(yīng)激的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象 山西省畜牧研究所提供的健康雄性新西蘭大白兔10只，2個(gè)月～3個(gè)月齡，體重2.5 kg～3.0 kg，室溫(18℃～23 ℃)單籠飼養(yǎng)。

1.2 動(dòng)脈硬化模型建立 所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予高脂飼料喂養(yǎng)(含1%膽固醇、10%蛋黃、89%基礎(chǔ)飼料)12周，分別于初始、第4周、第8周、第12周禁食12 h，給予高脂餐負(fù)荷(含2%膽固醇、20%蛋黃、78%基礎(chǔ)飼料)，膽固醇由北京索萊寶科技有限公司提供。

1.3 MPO、GSH-Px檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)初始及第4周、8周、12周，禁食12 h予脂餐負(fù)荷，脂餐負(fù)荷前及負(fù)荷后第2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、8小時(shí)，經(jīng)耳緣靜脈取血2 mL(分離膠促凝管)，離心(3 000 r/min，15 min)，取上清保存待測(cè)(EP管，-80 ℃)。全部實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定血清MPO、GSH-Px水平，試劑盒均由上海西唐生物科技有限公司提供。

2 結(jié) 果

研究結(jié)束時(shí)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均出現(xiàn)了腹主動(dòng)脈粥樣硬化病變。動(dòng)脈粥樣硬化過程中，脂餐負(fù)荷前后血清MPO、GSH-Px變化情況詳見表1、表2。

表1 動(dòng)脈硬化過程中脂餐負(fù)荷前后MPO變化(±s) ng/mL

表2 動(dòng)脈硬化過程中脂餐負(fù)荷前后GSH-Px變化(±s) nmol/mL

3 討 論

氧化應(yīng)激是指機(jī)體內(nèi)ROS生成增加和(或)清除能力降低，ROS過量蓄積引起氧化損傷的病理過程。MPO通過氧化修飾作用引起脂質(zhì)過氧化，加劇血管損傷，參與了動(dòng)脈粥樣斑塊的演變過程，與斑塊的不穩(wěn)定性相關(guān)[4]。GSH-Px是谷胱甘肽抗氧化系統(tǒng)中最重要的抗氧化酶，若其減少或活性降低將導(dǎo)致機(jī)體抗氧化能力嚴(yán)重受損，脂質(zhì)過氧化物增多，同樣可損傷血管、增加血栓形成的概率[5]。因此檢測(cè)MPO、GSH-Px可探討脂餐后體內(nèi)氧化和抗氧化的能力。

脂質(zhì)代謝紊亂致動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展中，氧化應(yīng)激起關(guān)鍵作用。研究表明：高脂喂養(yǎng)的小鼠血脂增高，體內(nèi)抗氧化酶表達(dá)顯著降低，ROS生成增加[6]。小鼠高脂飲食后8周MPO活性相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)飲食組明顯升高[7]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：隨高脂飼料喂養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，兔血清MPO于12周時(shí)明顯增高，GSH-Px呈遞減趨勢(shì)，12周時(shí)最低，說(shuō)明長(zhǎng)時(shí)間高脂飲食可引起機(jī)體內(nèi)氧化反應(yīng)增強(qiáng)，抗氧化能力減弱，與既往研究結(jié)果一致。實(shí)驗(yàn)12周時(shí)氧化反應(yīng)最明顯、抗氧化能力受損最嚴(yán)重，提示氧化應(yīng)激反應(yīng)貫穿于動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中，其病變的嚴(yán)重性與高膽固醇攝入的持續(xù)時(shí)間有關(guān)，這可能與脂質(zhì)代謝異常和氧化應(yīng)激之間相互促進(jìn)并形成惡性循環(huán)有關(guān)[8]。

氧化應(yīng)激可能是引發(fā)餐后內(nèi)皮功能損傷的重要機(jī)制之一[9-10]。研究表明：高脂餐負(fù)荷后2 h發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈內(nèi)皮功能障礙、氧化應(yīng)激增強(qiáng)[11]。大量奶油攝入后 1 h～3 h發(fā)現(xiàn)ROS顯著增加[12]。健康人血液中脂質(zhì)過氧化物在高脂肪餐后2 h～4 h明顯增高，3 h達(dá)高峰，超氧化物歧化酶降低，3 h最低[13]。既往研究多關(guān)注于脂餐負(fù)荷前后氧化應(yīng)激的變化規(guī)律，而在動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展的不同階段其變化規(guī)律尚不明確。本研究于不同階段予脂餐負(fù)荷后發(fā)現(xiàn)：循環(huán)MPO在初始及12周餐后2 h明顯升高，后逐漸降低；GSH-Px于高脂負(fù)荷后均呈下降趨勢(shì)，初始餐后2 h～8 h均明顯降低，4周時(shí)餐后6 h～8 h降低，8周時(shí)餐后4 h～8 h降低，12周時(shí)餐后8 h降低。提示無(wú)論是無(wú)動(dòng)脈粥樣硬化的初始階段還是病變進(jìn)展期受高脂肪餐攝入影響，氧化反應(yīng)增強(qiáng)且抗氧化能力減弱，且與既往研究結(jié)果相似，餐后2 h氧化應(yīng)激明顯增強(qiáng)，餐后6 h～8 h抗氧化能力減弱最明顯，隨著動(dòng)脈粥樣硬化加重，明顯減弱時(shí)間點(diǎn)稍有延后。因此，在動(dòng)脈粥樣硬化的慢性發(fā)展中，急性高脂肪攝入可能起促發(fā)作用，健康人群和心血管病高危人群均應(yīng)注意飲食結(jié)構(gòu)，減少急性心血管事件的發(fā)生。

此外，由于實(shí)驗(yàn)樣本量、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物個(gè)體化差異及實(shí)驗(yàn)總時(shí)間的限制，關(guān)于動(dòng)脈粥樣硬化過程中脂餐負(fù)荷對(duì)氧化應(yīng)激的影響，尚需進(jìn)一步研究。

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(本文編輯郭懷印)

山西省高等學(xué)?？萍紕?chuàng)新項(xiàng)目(No.20131102)

1.山西醫(yī)科大學(xué)研究生(太原030001)；2.山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院

靳春榮，E-mail：zhouxue01211@163.com

R543.5 R256.2

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2016.19.011

1672-1349(2016)19-2244-02

2016-03-06)

引用信息：周雪，靳春榮，白淘，等.脂餐負(fù)荷前后MPO和GSH-Px變化及其與動(dòng)脈硬化關(guān)系的研究[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2016，14(19)：2244-2245.