糞大腸菌群酶底物法在環(huán)境監(jiān)測中的應(yīng)用研究

殷惠　陳志芳　馬德高

【摘 要】在水體污染監(jiān)測中糞大腸菌群為其指示菌，對現(xiàn)階段水質(zhì)檢測有著重要的作用。因此，在進(jìn)行水質(zhì)檢測是選擇出快速、準(zhǔn)確的糞大腸菌群檢測方法對于有效的方式疾病的發(fā)生于傳播有著關(guān)鍵性的意義。本文簡要介紹了酶底物法，并與與其他方法進(jìn)行了比較，然后分析了酶底物法的應(yīng)用及其前景，相信隨著酶底物法不斷推廣而具有更廣闊的應(yīng)用范圍。

【關(guān)鍵詞】糞大腸菌群 酶底物法 環(huán)境監(jiān)測 應(yīng)用研究

糞大腸菌群能夠在45℃左右的環(huán)境中生存，產(chǎn)氣產(chǎn)酸，其主要來源于人和動物的糞便，能夠?qū)е履c道性疾病的傳播，是進(jìn)行水質(zhì)檢測的重要指標(biāo)，所以，更好的優(yōu)化糞大腸菌群檢測有著較為重要的醫(yī)學(xué)意義。其中酶底物法為現(xiàn)階段糞大腸菌群檢測的新型方法之一，具有快速、精確及可靠的檢測優(yōu)勢，能夠及時(shí)的將水體的污染情況反應(yīng)出來。

1 酶底物法解析

1.1 酶底物法介紹

酶底物法為利用糞大腸菌群在45℃左右生長過程中產(chǎn)生的半乳糖苷酶與葡萄糖醛酸酶，分解培養(yǎng)基中所含的葡萄糖醛酸與半乳糖苷，從而使整個(gè)培養(yǎng)基呈現(xiàn)出黃色與發(fā)生熒光反應(yīng)，根據(jù)最終的陽性組合，查閱MPN表而得出糞大腸菌群的數(shù)量。

在實(shí)際操作的過程中，檢測人員首先應(yīng)當(dāng)根據(jù)污染的程度對需檢測的水樣進(jìn)行適當(dāng)性的稀釋，然后取100ml的水樣加入到無菌瓶中，再向其中加入科立得，搖勻，然后將其倒入97孔定量盤中，放置于45℃的培養(yǎng)箱中，連續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)，最后根據(jù)實(shí)際的陽性孔數(shù)，通過查MPN表進(jìn)行計(jì)算。

1.2酶底物法與其他方法比較

現(xiàn)階段我國使用的糞大腸菌群檢測方法主要為國外早期使用的實(shí)驗(yàn)方法—濾膜法和MPN法為主，同時(shí)隨著現(xiàn)代化生物監(jiān)測技術(shù)的發(fā)展，紙片法、分子生物鑒定法及固定酶底物法在很多方面得到一定的應(yīng)用，各種方法比較如表1所示。

從糞大腸菌群檢測的實(shí)驗(yàn)操作方面來講，酶底物法采用了取藥封口的培養(yǎng)方式，相對于其他檢測方面過程較為簡單，降低了人為污染帶來的影響，特別是紙片法，其操作過程雖然也較為簡單，但是其操作過程中交易受到人為的污染，此外還需要進(jìn)行確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。其次，從實(shí)驗(yàn)的結(jié)果方面來分析，酶底物法使用的97孔定量盤所包含的數(shù)表能夠達(dá)到近2400組，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于其他檢測方法，因此其檢測的結(jié)果更為準(zhǔn)確。第三，酶底物法使用了酶技術(shù)對糞大腸菌群進(jìn)行了檢測，出現(xiàn)假陽性與假陰性的現(xiàn)象非常少，這在很大程度上能夠提升糞大腸菌群檢測的準(zhǔn)確性。

2酶底物法的應(yīng)用

糞大腸菌群為一種衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)，在很多行業(yè)內(nèi)均有著較為嚴(yán)格的要求，其中酶底物法在糞大腸菌群檢測標(biāo)準(zhǔn)中的應(yīng)用如表2所示。

從上表2中可以看出，現(xiàn)階段我國對糞大腸菌群的檢測標(biāo)準(zhǔn)多數(shù)情況下為發(fā)酵法，并沒有對酶底物法進(jìn)行規(guī)定性使用，由此可知，在今后進(jìn)行糞大腸菌群的檢測時(shí)，將酶底物法應(yīng)用到糞大腸菌群的檢測試驗(yàn)中，在很大程度上能夠彌補(bǔ)我國在糞大腸菌群檢測方面使用酶底物法的空白，同時(shí)在很多程度上也為更好的提升我國糞大腸菌群的檢測的準(zhǔn)確性打下了良好的基礎(chǔ)。

3酶底物法應(yīng)用前景

酶底物法相對于其他的糞大腸菌群檢測方法操作較為簡單，所得結(jié)果也較為準(zhǔn)確快速，在今后的環(huán)境監(jiān)測中有著較為廣泛的應(yīng)用前景，主要表現(xiàn)在如下方面：

首先糞大腸菌群檢測為我國環(huán)境監(jiān)測的主要衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)之一，具有非常重要的實(shí)際檢測意義，因此，在進(jìn)行糞大腸菌群檢測時(shí)采用酶底物法能夠有效的滿足檢測應(yīng)用的需求。

其次，現(xiàn)階段國內(nèi)使用的糞大腸菌群檢測方法較為傳統(tǒng)，實(shí)際的操作流程較為繁瑣，所需的檢測時(shí)間較長，一般在48小時(shí)到72小時(shí)才能獲得糞大腸菌群的檢測結(jié)果，并對檢測條件、檢測技術(shù)人員水平等方面有著較高的要求，在進(jìn)行水樣的保存時(shí)也往往較為苛刻，這在很大程度上限制了傳統(tǒng)的糞大腸菌群檢測方法在我國中西部地區(qū)的使用，直接的影響到我國中西部地區(qū)衛(wèi)生檢測的效果。

第三，糞大腸菌群在檢測時(shí)使用酶底物法能夠較為迅速、準(zhǔn)確及可靠的將結(jié)果檢測出來，同時(shí)所需的玻璃器皿也不需要進(jìn)行清洗，檢測環(huán)境要求也不高，一般均不需要在無菌的環(huán)境中進(jìn)行，也不需要進(jìn)行培養(yǎng)基的專門配置，在24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行定量的檢測，這在很大程度上降低了糞大腸菌群的檢測所需的工作量，同時(shí)可以避免使用多管法時(shí)逐級稀釋帶來的操作誤差，也避免了使用濾膜法時(shí)肉眼讀數(shù)的人為誤差，能夠較為準(zhǔn)確地判斷水樣的污染狀況。

第四，國內(nèi)現(xiàn)階段使用的糞大腸菌群檢測標(biāo)準(zhǔn)并沒有對酶底物法的使用進(jìn)行針對性的規(guī)定，但是在國外特別是西方的發(fā)達(dá)國家內(nèi)，酶底物法在糞大腸菌群的檢測中已經(jīng)得到了較為廣泛的應(yīng)用，并取得了較好的效果，國際上各個(gè)組織機(jī)構(gòu)已經(jīng)認(rèn)可了酶底物法在檢測糞大腸菌群的作用，因此，國內(nèi)在進(jìn)行糞大腸菌群的檢測時(shí)也應(yīng)當(dāng)順應(yīng)時(shí)代的需求，認(rèn)清時(shí)代所處的位置，針對性的將酶底物法嵌入到我國糞大腸菌群的檢測工作中，從而更好的完善我國糞大腸菌群的檢測方法，提升我國糞大腸菌群檢測的準(zhǔn)確性。

4結(jié)語

酶底物法在進(jìn)行糞大腸菌群的檢測時(shí)，根據(jù)糞大腸菌群特異性酶針對性的與特異性物質(zhì)產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)，從而得到熒光與顏色的變化作為糞大腸菌群的檢測依據(jù)，整個(gè)操作的過程非常簡單，結(jié)果也較為清晰，直觀，客觀性也較強(qiáng)?，F(xiàn)階段影響酶底物法應(yīng)用的主要因素為其檢測過程中使用的培養(yǎng)基現(xiàn)階段只有國外的生產(chǎn)商生產(chǎn)，因此，使用該方法時(shí)所需的檢測費(fèi)用較高，這在很大程度上也是由于酶底物法在國內(nèi)現(xiàn)階段并沒有得到廣泛的推廣而導(dǎo)致的，因此，隨著酶底物法在我國糞大腸菌群檢測中的不斷應(yīng)用，其所需的檢測成本必然會大幅度的降低，使其具有更廣闊的應(yīng)用范圍和前景，作為評價(jià)水質(zhì)微生物污染的快速標(biāo)準(zhǔn)檢測方法在日常監(jiān)測和應(yīng)急監(jiān)測中發(fā)揮重要作用。

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