人參皂苷Rg1對(duì)2型糖尿病大鼠模型血糖調(diào)控作用

鄭永仁 劉傳鳳 王 礴 楊曉密*

1.云南中醫(yī)學(xué)院科研實(shí)驗(yàn)中心，云南 昆明 650500；2.云南白藥集團(tuán)股份有限公司，云南 昆明 650500

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人參皂苷Rg1對(duì)2型糖尿病大鼠模型血糖調(diào)控作用

鄭永仁1劉傳鳳2王 礴1楊曉密1*

1.云南中醫(yī)學(xué)院科研實(shí)驗(yàn)中心，云南 昆明 650500；2.云南白藥集團(tuán)股份有限公司，云南 昆明 650500

目的：探討人參皂苷(Rg1)對(duì)2型糖尿病大鼠血糖的調(diào)控作用。方法：選取SD雄性大鼠120只，體重(200±20)g，采用高糖高脂高鹽飲食和鏈脲佐菌素結(jié)合的方法建立大鼠2型糖尿病模型；實(shí)驗(yàn)設(shè)對(duì)照組、模型組、鹽酸吡格列酮組，人參皂苷(Rg1)高低劑量組；血糖儀測(cè)定血糖濃度，ELISA測(cè)定胰島素含量；結(jié)果：給予高糖高脂喂養(yǎng)和腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)造模后，造模動(dòng)物血糖濃度、胰島素含量顯著高于空白對(duì)照組(P<0.01 )；給藥6周治療后，吡格列酮組血糖濃度、胰島素含量顯著低于模型組(P<0.05)；與模型對(duì)照組比較，給藥6周治療后人參皂苷(Rg1)低、中、高劑量組血糖濃度、胰島素含量呈現(xiàn)不同程度降低，其中人參皂苷(Rg1)高劑量組、人參皂苷(Rg1)中劑量組血糖濃度、胰島素含量明顯低于模型組(P<0.05)，并且人參皂苷(Rg1)高劑量組、人參皂苷(Rg1)中劑量組動(dòng)物體征基本正常，體重增長(zhǎng)明顯快于模型組。結(jié)論：人參皂苷(Rg1)對(duì)2型糖尿病大鼠血糖濃度和胰島素含量均有調(diào)節(jié)作用。

2型糖尿??；人參皂苷；鏈脲佐菌素

糖尿病是一種常見的內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病，主要是由于體內(nèi)的胰島素的缺乏，或是胰島素本身質(zhì)量及其他原因造成其不能發(fā)揮正常生理作用，引起以糖代謝為主的糖、脂肪、蛋白質(zhì)三大物質(zhì)代謝混亂的一種綜合病癥。糖尿病又會(huì)引發(fā)一系列的與之相關(guān)的眾多健康問題，其各種并發(fā)癥及心腦血管合并癥不斷危害公眾健康，給個(gè)人、家庭及社會(huì)帶來(lái)了沉重負(fù)擔(dān)[1]。

據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全球患有糖尿病的人群高達(dá)2.8億，近年來(lái)，糖尿病患者數(shù)以驚人的速度在迅速增長(zhǎng)。最近流行病學(xué)調(diào)查顯示，國(guó)內(nèi)20歲以上人群糖尿病患病率達(dá)到9.7%[2],按照這個(gè)推算，現(xiàn)在我國(guó)糖尿病患者總?cè)藬?shù)是9240多萬(wàn)，而糖尿病潛在已達(dá)到1.5億，糖尿病患者中，95%以上為2型糖尿病[2]。2型糖尿病為慢性病，至今沒有有效的治愈方法。在2型糖尿病的發(fā)生中，胰島素抵抗(Insulin Resistance,IR)是最主要的誘因。IR又稱胰島素敏感性下降，通常指胰島素介導(dǎo)的葡萄糖利用率降低。IR 是2型糖尿病主要發(fā)病機(jī)制之一，并伴隨著糖尿病發(fā)生、發(fā)展的全過(guò)程，其在肥胖、高血壓和血脂異常等多種代謝疾病中亦可存在。流行病學(xué)研究表明，人群中約有25% 的個(gè)體患有IR， 而2 型糖尿病(T2DM)患者中IR 患病率超過(guò)80%。多年來(lái)，諸多學(xué)者圍繞IR 的發(fā)生原因、發(fā)病機(jī)制、臨床特點(diǎn)、診斷方法和治療策略開展了多層面、多方位的研究，以揭示其與糖尿病的關(guān)系，并已從中發(fā)現(xiàn)了更多、更為有效的治療靶點(diǎn)，為日趨增多的糖尿病患者帶來(lái)福音[3]。

三七含有人參皂苷Rb1、Rb2、 Rg1、Rg2等多種成分，其中人參皂苷Rg1(簡(jiǎn)稱Rg1)是三七的主要成分，含量較高，具有抗炎癥、抗氧化損傷、神經(jīng)保護(hù)和抗纖維化等作用[4-5]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠IR動(dòng)物模型，給予Rg1通過(guò)，檢測(cè)大鼠血糖和胰島素的改變，探討三七皂苷(Rg1)是否具有降低血糖和增加胰島素的敏感性作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與實(shí)驗(yàn)環(huán)境 SD雄性大鼠120只，體重(200±20)g,由昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(滇)2011-0004；大鼠高糖高脂飼料由昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部提供，飼料生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(滇)2011-0005。實(shí)驗(yàn)環(huán)境，云南中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室SPF實(shí)驗(yàn)室，使用許可證：SYXK(滇)K2011-011。

1.2 主要試劑與儀器 人參皂苷Rg1(含量95%，昆明醫(yī)科大學(xué)生化教研室提供)。鹽酸吡格列酮片，石藥集團(tuán)遠(yuǎn)大(大連)制藥有限公司產(chǎn)品，批號(hào)：H20052682；鏈脲佐菌素(Sterptozotocin,STZ)，美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品，批號(hào)：CAS1883-66-4；檸檬酸、檸檬酸三鈉，由云南澤浩公司提供，批號(hào)：T20110105；胰島素ELISA檢測(cè)試劑盒：由上海前塵生物科技有限公司公司生產(chǎn)，批號(hào)：S20050104；JY2001電子分析天平,上海浦春計(jì)量?jī)x器有限公司； 血糖儀(羅氏血糖儀型號(hào)：GN21258252)。

1.3 處理與分組

1.3.1 T2DM模型制作和分組 120只SD雄性大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3d，隨機(jī)抽取12只作為空白對(duì)照組，給予標(biāo)準(zhǔn)飼料及飲水正常飼喂；其余108只大鼠喂高脂高糖飼料(30%脂肪、50%碳水化合物和20%蛋白)，并每隔1天加喂30%蔗糖水和1.5%鹽水用于制作大鼠T2DM模型；連續(xù)喂飼高糖髙脂8周后，108只大鼠按55mg/kg腹腔注射1%的檸檬酸鈉緩沖液配制的鏈脲佐菌素溶液(STZ)；3d后108只大鼠禁食12 h，尾靜脈取血測(cè)量血糖，選取高糖高脂和腹腔注射1%STZ造模并且血糖≥11.1 mmol/L的68只大鼠作為2型糖尿病模型，并右眼眶取血加抗凝血?jiǎng)╇x心獲得血漿測(cè)定胰島素濃度，胰島素濃度和對(duì)應(yīng)的血糖值和作為給藥前的檢測(cè)值，淘汰造模不成功的大鼠；對(duì)造模成功大鼠隨機(jī)選60只，隨機(jī)分為5組，每組12只，即模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照吡格列酮組、人參皂苷Rg1低、中、高劑量組。分組后所有實(shí)驗(yàn)大鼠飼喂普通飼料和普通水。

1.3.2 給藥 鹽酸吡格列酮片劑量為2.5mg/kg，用純化水配制成混懸液，按1.0mL/100g體重容積每日灌胃給予1次，連續(xù)給藥6周。

人參皂苷(Rg1)低劑量20mg/kg、中劑量40mg/kg、高劑量80mg/kg均用純化水配制成溶液，按1.0mL/100g體重容積每日分別灌胃給予對(duì)應(yīng)劑量樣品1次，連續(xù)給藥6周；空白對(duì)照組和模型對(duì)照組按1.0mL/100g體重容積每日灌胃給予純化水1次，連續(xù)灌胃6周。

1.4 測(cè)定指標(biāo)與統(tǒng)計(jì)分析

1.4.1 血糖和胰島素測(cè)定 藥物治療給藥6周，末次給藥后禁食12h，各組動(dòng)物尾靜脈取血測(cè)量血糖值，左眼眶取血加抗凝血?jiǎng)╇x心獲得血漿ELISA測(cè)定胰島素含量。

1.4.2 動(dòng)物體征觀察 每日觀察觀測(cè)動(dòng)物體征變化，每周對(duì)所有動(dòng)物稱重一次，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 給藥前后血糖和胰島素含量檢測(cè)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，給予高糖高脂喂養(yǎng)和腹腔注射STZ造模后，血糖濃度、胰島素含量顯著高于空白對(duì)照組(P<0.01 )；給藥6周治療后，吡格列酮組血糖濃度、胰島素含量顯著低于模型組(P<0.05)；與模型對(duì)照組比較，給藥6周治療后人參皂苷(Rg1)低、中、高劑量組血糖濃度、胰島素含量呈現(xiàn)不同程度降低，其中人參皂苷(Rg1)高劑量組、人參皂苷(Rg1)中劑量組血糖濃度、胰島素含量顯著低于模型組(P<0.05)。見表1。

表1 給藥前后血糖濃度、胰島素含量測(cè)量結(jié)果 ±s，n=12)

注：與空白組比較，*P<0.01 ；與模型組比較，ΔP<0.05；給藥后與模型組比較，★P<0.05。

2.2 動(dòng)物體征變化 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，與空白組比較，模型動(dòng)物組血糖維持在較高水平，明顯表現(xiàn)多飲、多食、多尿，普遍出現(xiàn)毛發(fā)灰暗、體重增長(zhǎng)緩慢，其中部分大鼠出現(xiàn)瞎眼、爛尾、反應(yīng)遲鈍，目光呆滯無(wú)神等現(xiàn)象。陽(yáng)性對(duì)照吡格列酮組和人參皂苷(Rg1)大鼠中多飲、多食、多尿現(xiàn)象明顯比模型組減少，動(dòng)物活動(dòng)基本正常，未出現(xiàn)瞎眼、爛尾、反應(yīng)遲鈍，目光呆滯無(wú)神等現(xiàn)象。

2.3 造模給藥后動(dòng)物體重變化 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高糖高脂喂養(yǎng)和腹腔注射STZ造模后，各造模組動(dòng)物體重增長(zhǎng)明顯緩慢，其中模型組最為明顯；陽(yáng)性對(duì)照吡格列酮組和人參皂苷低、中、高劑量組動(dòng)物雖然增長(zhǎng)緩慢，但隨著給予治療，體重增長(zhǎng)較模型組快。見圖1。

結(jié)論：人參皂苷(Rg1)對(duì)2型糖尿病大鼠血糖濃度和胰島素含量均有調(diào)節(jié)作用。

3 討論

人參皂苷(Rg1)藥理作用廣泛，目前研究其相關(guān)方面的文獻(xiàn)報(bào)道很多。 本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明人參皂苷(Rg1)有明顯降低2型糖尿病大鼠血糖濃度、胰島素含量的作用，其作用機(jī)制尚不清楚，但此實(shí)驗(yàn)證實(shí)人參皂苷(Rg1)有降低血糖濃度和抑制造模后大鼠體內(nèi)胰島素含量的作用，提示人參皂苷(Rg1)對(duì)2型糖尿病大鼠作用于胰島素分泌和血糖代謝有關(guān)，值得進(jìn)一步研究。而人參皂苷(Rg1)作為三七皂苷的主要成分，且目前三七已經(jīng)能夠規(guī)模化大批量種植，如能進(jìn)一步證實(shí)Rg1對(duì)2型糖尿病的藥理作用和臨床療效，對(duì)于三七的開發(fā)，推動(dòng)三七產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，進(jìn)一步幫助藥農(nóng)脫貧致富藥，推進(jìn)中藥現(xiàn)代化進(jìn)程、產(chǎn)業(yè)化發(fā)展等方面有重要社會(huì)意義和經(jīng)濟(jì)意義。

[1]陳灝珠.實(shí)用內(nèi)科學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社, 2009：949-957.

[2]YangwY，Lu JM，Weng JP，et a1．Prevalence ofDiabetes amongMen and Women in China[J]．New England Journal of Medicine，2010，362：1090-1101．

[3]賈偉平.胰島素抵抗在2型糖尿病發(fā)病機(jī)制中的作用[J].診斷學(xué)理論與實(shí)踐,2009,8(3)：233-236.

[4]Hatada EN, Krappmann D，Scheidereit C.NF-kappa B and the innate immune response[J]. Curr Opin Immunol,2000,12:52-58.

[5]Liu WJ, Ma LQ, Liu WH, et al. Inhibition of hepatic glycogen synthesis by hyperhomocysteinemia mediated by TRb3 [J]. Am J Pathol,2011, 178(4):1489-1499.

(編輯：陶希睿)

2016-08-05

云南省教育廳科學(xué)研究基金一般項(xiàng)目(編號(hào):2014Y245)。

鄭永仁(1965-)，男，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，主要從事實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)工作。

楊曉密(1979-)，女，實(shí)驗(yàn)師，主要從事動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理工作。E-mail：12986263@qq.com

R285.6

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1007-8517(2016)20-0018-02