澤瀉不同提取部位對(duì)大鼠的利尿作用

黃小強(qiáng)，張雪，李小艷，趙萬里，許文，吳水生

（1．福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建福州350122；2.中國藥科大學(xué)中藥學(xué)院，江蘇南京210009）

澤瀉不同提取部位對(duì)大鼠的利尿作用

黃小強(qiáng)1，張雪1，李小艷1，趙萬里2，許文1，吳水生1

（1．福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建福州350122；2.中國藥科大學(xué)中藥學(xué)院，江蘇南京210009）

目的研究澤瀉不同提取部位對(duì)大鼠的利尿作用。方法用代謝籠法比較澤瀉不同提取部位對(duì)水負(fù)荷大鼠在0～6 h排尿量，用HPLC測定澤瀉各提取部位中的化學(xué)成分。結(jié)果澤瀉水提取部位、石油醚提取部位給藥2 h具有利尿作用，乙酸乙酯提取部位、正丁醇提取部位給藥后6 h有顯著的利尿作用，澤瀉三萜類化合物主要集中在乙酸乙酯提取部位。結(jié)論澤瀉乙酸乙酯提取部位是澤瀉利尿的主要部位，澤瀉三萜類化合物是其利尿的主要化學(xué)成分。

澤瀉；利尿；不同提取部位；三萜類化合物

澤瀉為澤瀉科植物澤瀉Alisma orientale（Sam.）Juzep.的干燥塊莖［1］，具有利水滲濕、泄熱、化濁降脂的功效。文獻(xiàn)報(bào)道澤瀉醇提物具有利尿和抗利尿的功效［2］，但澤瀉中起利尿作用的有效部位及主要化學(xué)成分尚不清楚。我們用大鼠水負(fù)荷模型，對(duì)澤瀉不同提取部位利尿的功能進(jìn)行藥理學(xué)考察，用HPLC分析澤瀉利尿的主要化學(xué)成分。

1　儀器與試藥

1.1儀器LC-20AT高相液相色譜儀、LC solution工作站（日本島津公司）；RE-2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；BS-3000A系列電子天平（上海友聲衡器有限公司）；YP202N分析天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；HC-9885電解質(zhì)分析儀（深圳市航創(chuàng)醫(yī)療設(shè)備有限公司）。

1.2材料澤瀉（福建金山醫(yī)藥集團(tuán)）；氫氯噻嗪（山西云鵬制藥有限公司，批號(hào)：A120804）；吐溫-80（天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20120320）；乙腈（德國Merck公司，色譜純）；水為超純水，其它試劑為分析級(jí)。

1.3動(dòng)物SPF雄性SD大鼠110只，體質(zhì)量180～220 g，由上海斯萊克公司提供，合格證號(hào)：SCXK（滬）2012-0002。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：UItimate XB-C18（4.6 mm ×150 mm，5μm）；流動(dòng)相：水-乙腈（35∶65）；流速：1mL／min；檢測波長：208 nm、254 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL。

2.2氫氯噻嗪藥液制備取氫氯噻嗪2 500 mg研成細(xì)粉，用2%吐溫-80配制成濃度為0.5 mg／mL藥液，備用。

2.3澤瀉水溶性部位的制備取澤瀉粉末70 g，過60目，6倍量水回流提取3次，合并提取液，減壓濃縮制成50 mg／mL。

2.4澤瀉脂溶性部位的制備取澤瀉粉末70 g，過60目，依次用6倍量石油醚、乙酸乙酯、正丁醇超聲提取3次，每次0.5 h。將石油醚提取液、乙酸乙酯提取液、正丁醇提取液進(jìn)行抽濾，減壓濃縮至溶劑被完全回收。將所得浸膏分別用2%吐溫-80制成100 mg／mL溶液，即得石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。取各提取物液1 m L，過0.45μm膜，取濾液，按2.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)行分析，結(jié)果見圖1。

2.5澤瀉乙酸乙酯提取物制備取澤瀉生品粉末400 g，過60目，放入2 L三角瓶中，加入6倍量乙酸乙酯，超聲提取3次，每次1 h。過濾，過濾液減壓、濃縮至干燥，得澤瀉浸膏20.96 g（浸膏總?cè)屏浚?0%）。取澤瀉浸膏10 g，用2%吐溫-80配制成濃度100 mg／mL的灌胃液，備用。

2.6利尿?qū)嶒?yàn)

2.6.1澤瀉不同部位利尿活性篩選SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，實(shí)驗(yàn)前禁食12 h，每只大鼠按20 mL／kg灌服生理鹽水，收集2 h尿液，選用尿量達(dá)灌服量40%以上水負(fù)荷者為合格動(dòng)物。篩選出水負(fù)荷尿量合格的48只大鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、水提物部位組（100mg／mL）、石油醚部位組（100mg／mL）、乙酸乙酯部位組（100 mg／mL）、正丁醇部位組（100 mg／mL）和氫氯噻嗪組（0.5 mg／mL），每組8只，模型篩選30 min后按20 mL／kg體質(zhì)量灌胃相應(yīng)劑量藥物溶液，立即放入代謝籠內(nèi)，每籠1只。每小時(shí)收集尿液1次，連續(xù)收集6 h。記錄每小時(shí)5組每只大鼠的尿量，計(jì)算5組6 h總排尿量，結(jié)果見表1。

2.6.2澤瀉三萜類利尿活性研究篩選出水負(fù)荷尿量合格的40只大鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、氫氯噻嗪組、澤瀉乙酸乙酯提取部位低、中、高劑量組，每組8只。5組動(dòng)物禁食12 h，不禁水，按20 mL／kg給予生理鹽水，造成鹽水負(fù)荷模型。擠壓膀胱排盡余尿，按20 m L／kg灌胃相應(yīng)的藥液，澤瀉乙酸乙酯提取部位中劑量組等效于臨床成年人每次用量，低劑量為中劑量0.5倍，高劑量為中劑量2倍，正常對(duì)照組給予等量的2%吐溫-80。給藥后，將大鼠置于代謝籠內(nèi)，收集0～3、3～6、0～6 h的尿量，檢測0～6 h大鼠尿液的Na+、K+、Cl－含量，結(jié)果見表2。

2.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)量資料用x±s表示，用SPSS 18.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，組間比較用單因素方差分析，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.8結(jié)果見圖1、圖2，表1、表2。

表1　澤瀉4種不同提取部位對(duì)水負(fù)荷大鼠的排尿影響（x±s）

表2　澤瀉乙酸乙酯提取物對(duì)水負(fù)荷大鼠的排尿影響（x±s）

3　討論

3.1中藥澤瀉具有利尿作用，廣泛用于治療各種水腫。利尿有2個(gè)方面因素，即增加尿量和電解質(zhì)缺失［3］。陽性藥氫氯噻嗪可以明顯增加尿量，通過抑制Na+／K+／Cl－轉(zhuǎn)運(yùn)子增加尿Na+排出。給予水負(fù)荷大鼠模型澤瀉不同提取部位發(fā)現(xiàn)，乙酸乙酯部位和正丁醇部位利尿作用最明顯。趙宇輝等［4］研究報(bào)道24-乙酰澤瀉醇A和澤瀉醇B是澤瀉利尿作用的主要成分。我們通過HPLC對(duì)澤瀉不同提取部位進(jìn)行化學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)三萜類化合物主要集中于乙酸乙酯部位。因此，初步判斷澤瀉中起利尿作用的是三萜類化合物。實(shí)驗(yàn)提示澤瀉水提物可增加水負(fù)荷大鼠尿量，HPLC比較發(fā)現(xiàn)水提物中幾乎不含有任何脂溶性成分，說明水提物的利尿作用幾乎與澤瀉萜類化合物無關(guān)。澤瀉電解質(zhì)分析，澤瀉的K+含量較高［5］，這是澤瀉利尿的主要成分之一。

3.2通過給予不同劑量的澤瀉乙酸乙酯提取部位發(fā)現(xiàn)，澤瀉乙酸乙酯提取部位低、中劑量組大鼠在0～3 h、0～6 h的尿量與正常對(duì)照組比較顯著增加（P＜0.01），澤瀉乙酸乙酯提取部位高劑量組大鼠在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的尿量均未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。這與文獻(xiàn)報(bào)道的澤瀉利尿具有雙向調(diào)節(jié)功能相符。澤瀉乙酸乙酯提取部位在利尿的同時(shí)，還增加電解質(zhì)Na+的排出，減少K+的排出，使尿液中的Na+／K+比值升高，表明澤瀉乙酸乙酯提取部位是Na+排利尿，其機(jī)制是抑制了腎遠(yuǎn)曲小管和集合管Na+-K+交換，產(chǎn)生了類似于低效利尿藥螺內(nèi)酯的保鉀排鈉作用。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明澤瀉乙酸乙酯部位是澤瀉發(fā)揮利尿藥效的部位，通過HPLC分析發(fā)現(xiàn)其主要化學(xué)成分為三萜類化合物。

［1］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：229.

［2］FENG Y L，CHEN H，TIAN T，et al.Diuretic and anti-diuretic activities of the ethanol and aqueous extracts of Alismatis rhizome［J］.Journal of Ethnopharmacology，2014，154：386-390.

［3］楊靜，趙慧英，陸永新，等.17β-雌二醇對(duì)去卵巢大鼠子宮Bax和Bcl-2表達(dá)的影響［J］.西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2008，17（4）：42-46.

［4］趙宇輝，唐丹丹，陳丹倩，等.利尿藥茯苓、茯苓皮、豬苓和澤瀉的化學(xué)成分及其利尿作用機(jī)制研究進(jìn)展［J］.中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2014，28（4）：594-599.

［5］吳啟南.中藥澤瀉微量元素的研究［J］.世界元素醫(yī)學(xué)，2003，10（2）：48-49.

R284.2

B

1000-338X（2016）05-0021-03

2016-07-14

國家自然科學(xué)基金資助課題（U1205022）

黃小強(qiáng)（1988—），男，2014級(jí)中藥學(xué)碩士研究生，主要從事中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制研究。

吳水生（1965—），男，教授。E－mail：wushuishengwss@163. com