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      澤瀉不同提取部位對(duì)大鼠的利尿作用

      2016-11-18 11:46:29黃小強(qiáng)張雪李小艷趙萬里許文吳水生
      福建中醫(yī)藥 2016年5期
      關(guān)鍵詞:三萜類澤瀉利尿

      黃小強(qiáng),張雪,李小艷,趙萬里,許文,吳水生

      (1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,福建福州350122;2.中國藥科大學(xué)中藥學(xué)院,江蘇南京210009)

      澤瀉不同提取部位對(duì)大鼠的利尿作用

      黃小強(qiáng)1,張雪1,李小艷1,趙萬里2,許文1,吳水生1

      (1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,福建福州350122;2.中國藥科大學(xué)中藥學(xué)院,江蘇南京210009)

      目的研究澤瀉不同提取部位對(duì)大鼠的利尿作用。方法用代謝籠法比較澤瀉不同提取部位對(duì)水負(fù)荷大鼠在0~6 h排尿量,用HPLC測定澤瀉各提取部位中的化學(xué)成分。結(jié)果澤瀉水提取部位、石油醚提取部位給藥2 h具有利尿作用,乙酸乙酯提取部位、正丁醇提取部位給藥后6 h有顯著的利尿作用,澤瀉三萜類化合物主要集中在乙酸乙酯提取部位。結(jié)論澤瀉乙酸乙酯提取部位是澤瀉利尿的主要部位,澤瀉三萜類化合物是其利尿的主要化學(xué)成分。

      澤瀉;利尿;不同提取部位;三萜類化合物

      澤瀉為澤瀉科植物澤瀉Alisma orientale(Sam.)Juzep.的干燥塊莖[1],具有利水滲濕、泄熱、化濁降脂的功效。文獻(xiàn)報(bào)道澤瀉醇提物具有利尿和抗利尿的功效[2],但澤瀉中起利尿作用的有效部位及主要化學(xué)成分尚不清楚。我們用大鼠水負(fù)荷模型,對(duì)澤瀉不同提取部位利尿的功能進(jìn)行藥理學(xué)考察,用HPLC分析澤瀉利尿的主要化學(xué)成分。

      1 儀器與試藥

      1.1儀器LC-20AT高相液相色譜儀、LC solution工作站(日本島津公司);RE-2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);BS-3000A系列電子天平(上海友聲衡器有限公司);YP202N分析天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司);HC-9885電解質(zhì)分析儀(深圳市航創(chuàng)醫(yī)療設(shè)備有限公司)。

      1.2材料澤瀉(福建金山醫(yī)藥集團(tuán));氫氯噻嗪(山西云鵬制藥有限公司,批號(hào):A120804);吐溫-80(天津市福晨化學(xué)試劑廠,批號(hào):20120320);乙腈(德國Merck公司,色譜純);水為超純水,其它試劑為分析級(jí)。

      1.3動(dòng)物SPF雄性SD大鼠110只,體質(zhì)量180~220 g,由上海斯萊克公司提供,合格證號(hào):SCXK(滬)2012-0002。

      2 方法與結(jié)果

      2.1色譜條件色譜柱:UItimate XB-C18(4.6 mm ×150 mm,5μm);流動(dòng)相:水-乙腈(35∶65);流速:1mL/min;檢測波長:208 nm、254 nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:10μL。

      2.2氫氯噻嗪藥液制備取氫氯噻嗪2 500 mg研成細(xì)粉,用2%吐溫-80配制成濃度為0.5 mg/mL藥液,備用。

      2.3澤瀉水溶性部位的制備取澤瀉粉末70 g,過60目,6倍量水回流提取3次,合并提取液,減壓濃縮制成50 mg/mL。

      2.4澤瀉脂溶性部位的制備取澤瀉粉末70 g,過60目,依次用6倍量石油醚、乙酸乙酯、正丁醇超聲提取3次,每次0.5 h。將石油醚提取液、乙酸乙酯提取液、正丁醇提取液進(jìn)行抽濾,減壓濃縮至溶劑被完全回收。將所得浸膏分別用2%吐溫-80制成100 mg/mL溶液,即得石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。取各提取物液1 m L,過0.45μm膜,取濾液,按2.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)行分析,結(jié)果見圖1。

      2.5澤瀉乙酸乙酯提取物制備取澤瀉生品粉末400 g,過60目,放入2 L三角瓶中,加入6倍量乙酸乙酯,超聲提取3次,每次1 h。過濾,過濾液減壓、濃縮至干燥,得澤瀉浸膏20.96 g(浸膏總?cè)屏浚?0%)。取澤瀉浸膏10 g,用2%吐溫-80配制成濃度100 mg/mL的灌胃液,備用。

      2.6利尿?qū)嶒?yàn)

      2.6.1澤瀉不同部位利尿活性篩選SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周,實(shí)驗(yàn)前禁食12 h,每只大鼠按20 mL/kg灌服生理鹽水,收集2 h尿液,選用尿量達(dá)灌服量40%以上水負(fù)荷者為合格動(dòng)物。篩選出水負(fù)荷尿量合格的48只大鼠,隨機(jī)分為正常對(duì)照組、水提物部位組(100mg/mL)、石油醚部位組(100mg/mL)、乙酸乙酯部位組(100 mg/mL)、正丁醇部位組(100 mg/mL)和氫氯噻嗪組(0.5 mg/mL),每組8只,模型篩選30 min后按20 mL/kg體質(zhì)量灌胃相應(yīng)劑量藥物溶液,立即放入代謝籠內(nèi),每籠1只。每小時(shí)收集尿液1次,連續(xù)收集6 h。記錄每小時(shí)5組每只大鼠的尿量,計(jì)算5組6 h總排尿量,結(jié)果見表1。

      2.6.2澤瀉三萜類利尿活性研究篩選出水負(fù)荷尿量合格的40只大鼠,隨機(jī)分為正常對(duì)照組、氫氯噻嗪組、澤瀉乙酸乙酯提取部位低、中、高劑量組,每組8只。5組動(dòng)物禁食12 h,不禁水,按20 mL/kg給予生理鹽水,造成鹽水負(fù)荷模型。擠壓膀胱排盡余尿,按20 m L/kg灌胃相應(yīng)的藥液,澤瀉乙酸乙酯提取部位中劑量組等效于臨床成年人每次用量,低劑量為中劑量0.5倍,高劑量為中劑量2倍,正常對(duì)照組給予等量的2%吐溫-80。給藥后,將大鼠置于代謝籠內(nèi),收集0~3、3~6、0~6 h的尿量,檢測0~6 h大鼠尿液的Na+、K+、Cl-含量,結(jié)果見表2。

      2.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)量資料用x±s表示,用SPSS 18.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,組間比較用單因素方差分析,P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      2.8結(jié)果見圖1、圖2,表1、表2。

      表1 澤瀉4種不同提取部位對(duì)水負(fù)荷大鼠的排尿影響(x±s)

      表2 澤瀉乙酸乙酯提取物對(duì)水負(fù)荷大鼠的排尿影響(x±s)

      3 討論

      3.1中藥澤瀉具有利尿作用,廣泛用于治療各種水腫。利尿有2個(gè)方面因素,即增加尿量和電解質(zhì)缺失[3]。陽性藥氫氯噻嗪可以明顯增加尿量,通過抑制Na+/K+/Cl-轉(zhuǎn)運(yùn)子增加尿Na+排出。給予水負(fù)荷大鼠模型澤瀉不同提取部位發(fā)現(xiàn),乙酸乙酯部位和正丁醇部位利尿作用最明顯。趙宇輝等[4]研究報(bào)道24-乙酰澤瀉醇A和澤瀉醇B是澤瀉利尿作用的主要成分。我們通過HPLC對(duì)澤瀉不同提取部位進(jìn)行化學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)三萜類化合物主要集中于乙酸乙酯部位。因此,初步判斷澤瀉中起利尿作用的是三萜類化合物。實(shí)驗(yàn)提示澤瀉水提物可增加水負(fù)荷大鼠尿量,HPLC比較發(fā)現(xiàn)水提物中幾乎不含有任何脂溶性成分,說明水提物的利尿作用幾乎與澤瀉萜類化合物無關(guān)。澤瀉電解質(zhì)分析,澤瀉的K+含量較高[5],這是澤瀉利尿的主要成分之一。

      3.2通過給予不同劑量的澤瀉乙酸乙酯提取部位發(fā)現(xiàn),澤瀉乙酸乙酯提取部位低、中劑量組大鼠在0~3 h、0~6 h的尿量與正常對(duì)照組比較顯著增加(P<0.01),澤瀉乙酸乙酯提取部位高劑量組大鼠在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的尿量均未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。這與文獻(xiàn)報(bào)道的澤瀉利尿具有雙向調(diào)節(jié)功能相符。澤瀉乙酸乙酯提取部位在利尿的同時(shí),還增加電解質(zhì)Na+的排出,減少K+的排出,使尿液中的Na+/K+比值升高,表明澤瀉乙酸乙酯提取部位是Na+排利尿,其機(jī)制是抑制了腎遠(yuǎn)曲小管和集合管Na+-K+交換,產(chǎn)生了類似于低效利尿藥螺內(nèi)酯的保鉀排鈉作用。

      實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明澤瀉乙酸乙酯部位是澤瀉發(fā)揮利尿藥效的部位,通過HPLC分析發(fā)現(xiàn)其主要化學(xué)成分為三萜類化合物。

      [1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典:一部[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015:229.

      [2]FENG Y L,CHEN H,TIAN T,et al.Diuretic and anti-diuretic activities of the ethanol and aqueous extracts of Alismatis rhizome[J].Journal of Ethnopharmacology,2014,154:386-390.

      [3]楊靜,趙慧英,陸永新,等.17β-雌二醇對(duì)去卵巢大鼠子宮Bax和Bcl-2表達(dá)的影響[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2008,17(4):42-46.

      [4]趙宇輝,唐丹丹,陳丹倩,等.利尿藥茯苓、茯苓皮、豬苓和澤瀉的化學(xué)成分及其利尿作用機(jī)制研究進(jìn)展[J].中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志,2014,28(4):594-599.

      [5]吳啟南.中藥澤瀉微量元素的研究[J].世界元素醫(yī)學(xué),2003,10(2):48-49.

      R284.2

      B

      1000-338X(2016)05-0021-03

      2016-07-14

      國家自然科學(xué)基金資助課題(U1205022)

      黃小強(qiáng)(1988—),男,2014級(jí)中藥學(xué)碩士研究生,主要從事中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制研究。

      吳水生(1965—),男,教授。E-mail:wushuishengwss@163. com

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