金心扶芳藤組培快繁技術(shù)研究

李永欣， 王曉明， 曾慧杰， 蔡 能， 喬中全

(湖南省林業(yè)科學(xué)院， 湖南 長沙 410004)

金心扶芳藤組培快繁技術(shù)研究

李永欣， 王曉明， 曾慧杰， 蔡 能， 喬中全

(湖南省林業(yè)科學(xué)院， 湖南 長沙 410004)

為加快金心扶芳藤在園林綠化中的應(yīng)用，以其帶腋芽的莖段為材料，篩選其初代、增殖及生根培養(yǎng)基，建立組培快繁技術(shù)體系。結(jié)果表明：金心扶芳藤較適宜的初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+BA 1.0 mg/L+IBA 0.05 mg/L，芽的誘導(dǎo)率達(dá)96.0%；較適宜的增殖培養(yǎng)基為MS+BA 5.0 mg/L+IBA 0.08 mg/L+NAA 0.06 mg/L，芽的增殖系數(shù)達(dá)3.9；較適宜的生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 2.0 mg/L，苗木生根率達(dá)100%，平均根數(shù)7.8條,根長4.5 cm。

金心扶芳藤； 組培快繁

金心扶芳藤(Euonymusfortuneicv. Sunspot)為衛(wèi)矛科衛(wèi)矛屬多年生常綠藤本植物，其葉深綠色,金黃色斑鑲嵌其中，在暖地秋冬季，其葉紅色，觀賞價值高，可大面積應(yīng)用于城市園林綠化中[1]。2000年以來，先后有科研人員以扶芳藤莖段、葉盤、子葉、下胚軸等為外植體，開展組培技術(shù)研究[2-14]，建立了植株再生技術(shù)體系。目前尚未有金心扶芳藤組培技術(shù)研究的報道。為了加快金心扶芳藤在園林綠化中的應(yīng)用，我們系統(tǒng)開展了其組培快繁技術(shù)研究，建立了相應(yīng)組培快繁技術(shù)體系，為大規(guī)模工廠化繁育金心扶芳藤苗木奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1試驗材料

供試金心扶芳藤植株由美國緬因大學(xué)張冬林博士提供。剪取當(dāng)年抽生的新梢上帶腋芽的嫩枝莖段為試驗材料。

1.2試驗條件

將采集的嫩枝進(jìn)行常規(guī)消毒處理，消毒后將嫩枝切段，每段帶1個腋芽，接種在初代培養(yǎng)基上；選取已萌發(fā)的培養(yǎng)體開展叢生芽及生根誘導(dǎo)試驗。

在基本培養(yǎng)基中附加不同配比的BA、IBA、NAA及0.7%的瓊脂和3%的蔗糖，培養(yǎng)基pH 5.8，在121 ℃和1.1 kg/cm2條件下用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌20 min。培養(yǎng)溫度為(25±2)℃，光照1500～2000 lx，光照時間12 h/天。

1.3試驗方法

1.3.1 初代培養(yǎng)基篩選 初代基本培養(yǎng)基為MS，添加BA 1.0 mg/L，同時分別添加IBA 0.02 mg/L、0.05 mg/L、0.1 mg/L，以不加激素的培養(yǎng)基為對照。20天后觀察腋芽誘導(dǎo)和新芽生長狀況，統(tǒng)計腋芽誘導(dǎo)率，篩選較好的初代誘芽培養(yǎng)基。

1.3.2 增殖培養(yǎng)基篩選 將萌發(fā)的新芽剪切成2.0～3.0 cm左右長的莖段進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)。按L9(34)試驗設(shè)計篩選較好的增殖培養(yǎng)基配方，參試因子為基本培養(yǎng)基(MS、White、B5)、BA(1.0、2.0、5.0 mg/L)、IBA(0.02、0.05、0.08 mg/L) 、NAA(0.01、0.03、0.06 mg/L)。每處理6瓶，每瓶3株苗，45天后觀察試管苗增殖狀況，統(tǒng)計增殖系數(shù)、叢生芽平均高度。

1.3.3 生根培養(yǎng)基篩選 組培苗生根誘導(dǎo)基本培養(yǎng)基為1/2MS，分別添加濃度為0、0.5 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L、5.0 mg/L的IBA。每處理6瓶，每瓶6株苗，35天后觀察試管苗生根狀況，統(tǒng)計生根率、平均生根數(shù)和平均根長。

2 結(jié)果與分析

2.1初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基篩選

金心扶芳藤接種到初代培養(yǎng)基上培養(yǎng)，第8天腋芽開始萌發(fā)，第15天新芽長達(dá)1.5～2.0 cm高。20天后觀測結(jié)果見表1。由表1可知： 接種到MS+BA 1.0 mg/L+IBA 0.05 mg/L培養(yǎng)基上培養(yǎng)的外植體，其腋芽誘導(dǎo)率達(dá)96.0%，新芽生長發(fā)育較好，長達(dá)3.7 cm，葉色正常。但I(xiàn)BA濃度并不是越高越好，當(dāng)IBA為0.10 mg/L時，雖然新芽長達(dá)4.2 cm，但腋芽誘導(dǎo)率僅為88%。在不添加任何外源激素的培養(yǎng)基上，外植體的腋芽萌動率僅為16.0%，新芽生長緩慢。因此，附加一定濃度的外源激素對金心扶芳藤腋芽的誘導(dǎo)非常重要。

表1 不同培養(yǎng)基對腋芽萌發(fā)的影響Tab 1 Effectsofdifferentinductivemediumongerminationofax?illarybuds處理激素濃度(mg/L)BAIBA接種數(shù)(個)腋芽誘導(dǎo)率(%)新芽長(cm)11 00 025058 02 521 00 055096 03 731 00 105088 04 240 00 005016 01 8

2.2叢生芽增殖培養(yǎng)基篩選

將金心扶芳藤新芽接種到增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)，第8天開始分化叢芽，培養(yǎng)45天后，增殖系數(shù)和叢生芽高度見表2。由表2可以看出：金心扶芳藤在附加BA 5.0 mg/L、IBA 0.08 mg/L、NAA 0.06 mg/L的MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)，其芽的增殖系數(shù)達(dá)3.9，叢生芽高達(dá)3.8 cm；試管苗粗壯，長勢好，適宜誘導(dǎo)生根與瓶外生根，且成活率高。在White和B5培養(yǎng)基中培養(yǎng)，其芽的增殖系數(shù)均低于2.0；試管苗細(xì)弱，部分叢生芽葉片發(fā)黃脫落，不適宜誘導(dǎo)生根，苗木移栽成活率較低。以增殖系數(shù)為主要評價指標(biāo)，綜合考慮叢生芽高度、苗木長勢，宜選擇MS+BA 5.0 mg/L+IBA 0.08 mg/L+NAA 0.06 mg/L作為金心扶芳藤的增殖培養(yǎng)基。

表2 不同培養(yǎng)基對叢生芽增殖的影響Tab 2 Effectsofdifferentmediumonproliferationofmultipleshoots培養(yǎng)基編號基本培養(yǎng)基激素(mg/L)BAIBANAA增殖系數(shù)叢生芽高(cm)1MS1 00 020 013 13 52MS2 00 050 033 64 53MS5 00 080 063 93 84White1 00 050 061 81 95White2 00 080 011 82 66White5 00 020 031 92 37B51 00 080 031 72 58B52 00 020 061 72 19B55 00 050 011 82 3

2.3生根培養(yǎng)基篩選

金心扶芳藤試管苗于生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)15天左右開始生根，35天后調(diào)查結(jié)果見表3。由表3可以看出： 當(dāng)IBA濃度為2.0 mg/L時，組培苗生根率高達(dá)100%，平均根數(shù)達(dá)7.8條，平均根長達(dá)4.5 cm，移栽成活率高。在不添加任何生長素的培養(yǎng)基中的組培苗也能誘導(dǎo)生根，但是培養(yǎng)28～30天才開始生根，組培苗長勢差，部分組培苗葉片萎蔫脫落，生根率、根數(shù)和根長也不及添加了IBA的處理。可見，培養(yǎng)基中添加適量生長素有利于誘導(dǎo)組培苗生根，但濃度過高(5.0 mg/L)反而導(dǎo)致其基部產(chǎn)生大量愈傷組織，降低了生根率(51.4%)，只有濃度適宜才能更好的誘導(dǎo)金心扶芳藤苗生根。

表3 不同培養(yǎng)基對組培苗生根的影響Tab 3 Effectsofdifferentmediumonrootingoftissueculturedseedlings培養(yǎng)基編號IBA濃度(mg/L)生根率(%)平均根數(shù)(條)平均根長(cm)10 020 32 80 820 575 05 24 231 060 05 63 142 0100 07 84 555 051 44 56 3

3 結(jié)論與討論

本試驗以金心扶芳藤當(dāng)年生枝條帶腋芽莖段為外植體，建立了組培快繁技術(shù)體系。

(1) 較好的初代培養(yǎng)基為MS+BA 1.0 mg/L+IBA 0.05 mg/L，外植體萌芽率達(dá)96.0%，新芽長達(dá)3.7 cm。

(2) 增殖培養(yǎng)基宜選擇MS+BA 5.0 mg/L+IBA 0.08 mg/L+NAA 0.06 mg/L，芽的增殖系數(shù)達(dá)3.9，叢生芽高達(dá)3.8 cm。吳海紅[15]研究了‘Canadale黃金’扶芳藤的組織培養(yǎng)，認(rèn)為‘Canadale黃金’扶芳藤適宜的不定芽分化培養(yǎng)基為WPM + BA 3 mg /L + IBA 0.2 mg/L + 蔗糖30 g/L，芽的增殖系數(shù)為3.3，較本試驗的低。

(3) 本試驗組培苗生根為瓶內(nèi)培養(yǎng)，生根率達(dá)100%。陸秀君[3]曾采用試管外生根的方法培養(yǎng)扶芳藤完整組培苗，其方法是將組培苗莖基部蘸取0.05 mg/ L 的IBA， 處理10 s后扦插在盛有基質(zhì)的花盆中，基質(zhì)中加入生根培養(yǎng)液(成分∶ 以MS培養(yǎng)基礦物成分、有機質(zhì), 加IBA 2.5 mg/L),15天 后,小苗均長出強壯的根。我們也開展了金心扶芳藤的瓶外生根方法研究，將組培苗莖基部速蘸500 mg/L的KIBA，處理10 s后扦插在泥炭土∶ 珍珠巖=1∶ 3(體積比)的基質(zhì)中，10天左右小苗開始生根，20天后生根率達(dá)100%。

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[2] 周雪玲，付超，陳奇凌.扶芳藤組培快繁育苗技術(shù)的研究[J].林業(yè)實用技術(shù)，2005(10)：18-19.

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Researchontissuecultureandrapidpropagationof‘Euonymusfortuneicv.Sunspot’

LI Yongxin, WANG Xiaoming, ZENG Huijie, CAI Neng,QIAO Zhongquan

(Hunan Academy of Forestry，Changsha 410004，China)

To speed up the application of ‘Euonymusfortuneicv. Sunspot’ in the landscape, with its stem segments with axillary buds of material, the initial screening, to establish tissue culture and rapid propagation technology system. Results showed that, the appropriate medium on original culture was MS+BA 1.0 mg/L+IBA 0.05 mg/L, germination frequency of axillary buds reached 96.0%; The suitable proliferation medium were MS+BA5.0 mg/L+IBA0.08 mg/L+NAA 0.06 mg/L, and the multiplication coefficient were 3.9; The proper rooting medium was 1/2MS+IBA2.0 mg/L，rooting rate was up to 100%，root number 7.8，root length was 4.5 cm.

Euonymusfortuneicv. Sunspot; tissue culture and rapid propagation

2016-09-18

國家林業(yè)局948項目(2003-4-26)。

李永欣(1976-)，女，副研究員。主要從事木本花卉和木本藥用植物遺傳育種、栽培與生理生化研究。

Q 943, Q 949.754.7

A

1003 — 5710(2016)06 — 0078 — 03

10. 3969/j. issn. 1003 — 5710. 2016. 06. 017

(文字編校：唐效蓉)