大孔吸附樹(shù)脂純化常春藤皂苷C工藝研究

曾建剛， 孫化鵬， 阮琴妹， 張 珉， 鐘曉紅

(1.漢壽縣林業(yè)局， 湖南 漢壽 415900； 2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)， 湖南 長(zhǎng)沙 410128； 3.湖南省林業(yè)科學(xué)院， 湖南 長(zhǎng)沙 410004)

大孔吸附樹(shù)脂純化常春藤皂苷C工藝研究

曾建剛1， 孫化鵬2， 阮琴妹2， 張 珉3， 鐘曉紅2

(1.漢壽縣林業(yè)局， 湖南 漢壽 415900； 2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)， 湖南 長(zhǎng)沙 410128； 3.湖南省林業(yè)科學(xué)院， 湖南 長(zhǎng)沙 410004)

通過(guò)靜態(tài)吸附試驗(yàn)比較7種樹(shù)脂對(duì)常春藤皂苷C的吸附與解吸，篩選出效果最佳樹(shù)脂，通過(guò)動(dòng)態(tài)吸附試驗(yàn)對(duì)最佳樹(shù)脂的上樣pH、上樣體積、洗脫液濃度、洗脫體積、洗脫流速進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明：HPD-100樹(shù)脂對(duì)常春藤皂苷C的吸附與解吸性能最好，HPD-100樹(shù)脂對(duì)常春藤皂苷C純化的最佳條件為：上樣體積為6 BV，洗脫液乙醇濃度為80%，洗脫體積為7 BV，洗脫流速為1 BV/h。

常春藤皂苷C； 吸附； 洗脫； 大孔吸附樹(shù)脂

洋常春藤(Hederahelix)為五加科常春藤屬的多年生常綠攀援藤本植物，全株均可入藥[1]。研究表明其主要功能成分是三萜皂苷類化合物[2]，其中常春藤皂苷C在洋常春藤中含量最高，歐洲藥典和英國(guó)藥典收錄洋常春藤作為植物藥也是以洋常春藤葉片中常春藤皂苷C含量高于3%為主要含量指標(biāo)[3]。目前很多歐洲制藥企業(yè)生產(chǎn)的常春藤成藥劑型都是以常春藤皂苷C為含量指標(biāo)的提取物作為原料，而我國(guó)作為植物提取物的主要出口國(guó)，生產(chǎn)常春藤皂苷C提取物并進(jìn)入歐洲市場(chǎng)有著良好的發(fā)展前景。大孔吸附樹(shù)脂具有吸附量大、機(jī)械強(qiáng)度高、速度快、選擇性好、易解吸附、可再生處理等優(yōu)點(diǎn)，其在中草藥成分的分離純化中越來(lái)越普及[4-8]。研究表明，利用大孔吸附樹(shù)脂來(lái)純化皂苷類化合物可達(dá)到較好的效果[9-12]。我們?cè)谏鲜鲅芯康幕A(chǔ)上探討大孔吸附樹(shù)脂對(duì)常春藤皂苷C的純化工藝，旨在篩選出效果最佳的樹(shù)脂，并對(duì)最佳樹(shù)脂的上樣、洗脫條件進(jìn)行優(yōu)化，為進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究及常春藤皂苷C標(biāo)準(zhǔn)化提取物的工業(yè)化生產(chǎn)提供參考依據(jù)。

1 材料、儀器與試劑

1.1材料

洋常春藤鮮葉于2014年8月采自湖南省長(zhǎng)沙市，洗凈后置于鼓風(fēng)干燥箱中60 ℃烘干至恒質(zhì)量，粉碎后過(guò)60目篩，密封保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2儀器與試劑

Shimadzu高效液相色譜儀，包括Shimadzu SPD20A檢測(cè)器、Shimadzu SIL20A自動(dòng)進(jìn)樣器、Shimadzu LCSolutions工作站；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏試驗(yàn)設(shè)備有限公司)；AL204電子天平(梅特勒-托利多上海有限公司)；KQ-5200DB數(shù)控超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)；THZ-92B恒溫?fù)u床(上海浦東物理儀器廠)；循環(huán)水多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)；DR-1001旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)。

HPD-750型、D101型、HPD-100型、AB-8型、NKA-9型、ADS-17型、DM-130型樹(shù)脂(滄州寶恩吸附材料科技有限公司)，無(wú)水乙醇為分析純，乙腈、磷酸為色譜純，蒸餾水(自制)。常春藤皂苷C標(biāo)準(zhǔn)品(≥98%，南京春秋生物工程有限公司)。

2 試驗(yàn)方法

2.1HPLC測(cè)定常春藤皂苷C含量

2.1.1 HPLC色譜條件 色譜柱：Unitary C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)。流動(dòng)相：乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B)。二元高壓梯度洗脫：0～35 min，20%～50%A；35～40 min，50%～60%A。檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量20 μL，柱溫25 ℃。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 精密稱取常春藤皂苷C標(biāo)準(zhǔn)品5.1 mg，甲醇溶解定容至5 mL，配成濃度為1.02 mg/mL的儲(chǔ)備液。

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 分別將標(biāo)準(zhǔn)品溶液用甲醇稀釋1、2、3、4、5倍，搖勻，按2.1.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)。以標(biāo)準(zhǔn)品常春藤皂苷C的濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.1.4 常春藤皂苷C含量測(cè)定 將樣品溶液按2.1.1項(xiàng)的色譜條件測(cè)定峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程計(jì)算得出常春藤皂苷C的含量，從而計(jì)算常春藤皂苷C得率。

2.2樹(shù)脂的預(yù)處理

選取HPD-750、D101、HPD-100、AB-8、NKA-9、ADS-17、DM-130七種型號(hào)的樹(shù)脂進(jìn)行試驗(yàn)，各樹(shù)脂用無(wú)水乙醇浸泡24 h，使其充分溶脹后，用蒸餾水反復(fù)清洗至流出液無(wú)渾濁且無(wú)醇味，其次用2%HCl溶液浸泡2 h，用蒸餾水沖洗至中性，再用5%NaOH溶液浸泡2 h，用蒸餾水沖洗至中性，將樹(shù)脂儲(chǔ)藏備用。

2.3常春藤皂苷C粗提液的制備

取200 g洋常春藤粉末按照文獻(xiàn)記載[13]的最佳提取工藝條件進(jìn)行提取，即乙醇濃度69.4%，提取時(shí)間43.5 min，料液比35∶1，超聲提取2次，過(guò)濾且合并濾液，減壓濃縮至一定體積，得常春藤皂苷提取溶液，密封保存，備用。

2.4不同型號(hào)大孔樹(shù)脂的篩選

將預(yù)處理好的7種大孔樹(shù)脂去除表面水分，待干燥后，各精密稱取2 g置于100 mL錐形瓶中，分別加入30 mL已知濃度的常春藤皂苷C提取液，在20 ℃搖床中振蕩吸附24 h，將吸附飽和的樹(shù)脂過(guò)濾，按照2.1中的HPLC法測(cè)定濾液中常春藤皂苷C的含量，并按下面公式計(jì)算出樹(shù)脂對(duì)常春藤皂苷C的吸附率。然后取上述各吸附飽和的樹(shù)脂，用30 mL體積分?jǐn)?shù)為95%乙醇在搖床中解吸24 h，取出并測(cè)定解吸液中常春藤皂苷C的含量，分別按下面公式計(jì)算各樹(shù)脂的解吸率。比較各種型號(hào)樹(shù)脂對(duì)常春藤皂苷C的吸附量和解吸率，篩選解吸最佳樹(shù)脂。重復(fù)平行3次試驗(yàn)，取平均值。

吸附量=(C0-C1)V1/W

(1)

吸附率=(C0-C1)/C0×100%

(2)

解吸率=C2V2/(C0-C1)V1×100%

(3)

式中：C0為吸附液初始濃度(mg/mL)；C1為吸附后樣液中剩余的濃度(mg/mL)；C2為洗脫液的質(zhì)量濃度(mg/mL)；V1為吸附液體積(mL)；V2為洗脫液體積(mL)；W為大孔吸附樹(shù)脂質(zhì)量(g)。

2.5pH值對(duì)吸附率的影響

精密稱取由靜態(tài)吸附試驗(yàn)篩選出的最佳樹(shù)脂2 g，分別置于100 mL錐形瓶中，加入30 mL已知濃度的常春藤皂苷C提取液，用HCl和NaOH調(diào)節(jié)提取液pH值為2、4、6、8、10、12。在20 ℃搖床中振蕩吸附24 h，使樹(shù)脂吸附飽和，將提取液過(guò)濾，并分別計(jì)算出各pH的常春藤皂苷C吸附率，重復(fù)平行3次試驗(yàn)，取平均值。

2.6泄露曲線確定上樣體積

取預(yù)處理好的大孔樹(shù)脂進(jìn)行濕法裝柱，層析柱口徑為1 cm，柱體積為20 mL，用已知濃度的常春藤皂苷提取液以1 BV/h的流速進(jìn)行上樣，每3 mL收集一管流出液，并檢測(cè)流出液中常春藤皂苷C的濃度，以吸附液體積為橫坐標(biāo)，吸附液中常春藤皂苷C的濃度為縱坐標(biāo)，繪制泄露曲線，從而確定適合的上樣體積。重復(fù)平行3次試驗(yàn)，取平均值。

2.7乙醇濃度對(duì)解吸率的影響

取預(yù)處理好的大孔樹(shù)脂濕法裝柱，層析柱口徑為1 cm，柱體積為20 mL，取120 mL已知濃度的常春藤皂苷C提取液以1 BV/h的流速進(jìn)行上樣，上樣完成后用2 BV的蒸餾水初步洗脫，去除水溶性色素、無(wú)機(jī)鹽及多糖等水溶性雜質(zhì)，再用5 BV蒸餾水或濃度為30%、45%、60%、75%、90%的乙醇以1 BV/h的流速進(jìn)行洗脫，計(jì)算洗脫液中常春藤皂苷C的解吸率。用移液管吸取10 mL洗脫液置于已稱質(zhì)量的蒸發(fā)皿中用水浴鍋蒸干，放入105 ℃烘箱中，烘2 h取出，移入干燥器中冷卻至室溫后稱質(zhì)量，再次放入烘箱1 h，直到兩次質(zhì)量之差小于2 mg，通過(guò)蒸發(fā)皿質(zhì)量之差可得洗脫液的干物量，由常春藤皂苷C的含量與干物量可計(jì)算出洗脫液中常春藤皂苷C的純度。常春藤皂苷C回收率和純度較高的即為最佳洗脫濃度。重復(fù)平行3次試驗(yàn)，取平均值。

2.8洗脫體積對(duì)解吸率的影響

取預(yù)處理好的HPD-100樹(shù)脂進(jìn)行濕法裝柱，層析柱口徑為1 cm，柱體積為20 mL，用6 BV已知濃度的常春藤皂苷C提取液以1 BV/h的流速上樣，上樣完成后用2 BV的蒸餾水初步洗脫，去除水溶性色素、無(wú)機(jī)鹽及多糖等水溶性雜質(zhì)，再用1 BV、2 BV、3 BV、4 BV、5 BV、6 BV最佳濃度的洗脫液進(jìn)行洗脫，洗脫流速為1 BV/h，計(jì)算洗脫液中常春藤皂苷C的解吸率。重復(fù)平行3次試驗(yàn)，取平均值。

2.9洗脫流速對(duì)解吸率的影響

取預(yù)處理好的樹(shù)脂進(jìn)行濕法裝柱，層析柱口徑為1 cm，柱體積為20 mL，用6 BV已知濃度的常春藤皂苷C提取液以1 BV/h的流速上樣，上樣完成后用2 BV的蒸餾水初步洗脫，取5 BV濃度為75%的乙醇以1 BV/h、2 BV/h、3 BV/h、4 BV/h的流速進(jìn)行洗脫，計(jì)算洗脫液中常春藤皂苷C的回收率與純度。重復(fù)平行3次試驗(yàn)，取平均值。

2.10洗脫條件的正交試驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，選取洗脫濃度、洗脫體積、洗脫流速三個(gè)影響解吸率及常春藤皂苷C純度的因素，設(shè)計(jì)L9(34)正交表，通過(guò)回收率和純度綜合考察確定最佳洗脫條件，并對(duì)最佳洗脫工藝進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表Tab 1 Thefactorsandlevelsoforthogonalexperiment水平因素A濃度(%)B體積(BV)C流速(BV/h)160512706238073

3 結(jié)果與分析

3.1常春藤皂苷C的HPLC檢測(cè)方法的確定

通過(guò)不斷調(diào)整流動(dòng)相比例，在2.1.1項(xiàng)二元高壓梯度洗脫時(shí)，樣品溶液色譜圖基線平穩(wěn)，目標(biāo)組分常春藤皂苷C峰型對(duì)稱且與其他物質(zhì)峰分離度好，詳見(jiàn)圖1。

按2.1.3項(xiàng)試驗(yàn)方法得出常春藤皂苷C標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程為：Y=1.7×106X-7 972.3，R2=0.999 3。該結(jié)果表明，常春藤皂苷C的濃度與峰面積線性關(guān)系良好，常春藤皂苷C檢出范圍為0.06～1.02 mg/mL，HPLC測(cè)定常春藤皂苷C含量的試驗(yàn)方法有效可行。

3.2大孔樹(shù)脂的篩選

圖1 對(duì)照品與樣品的HPLC圖Fig.1 HPLC chromatograms of the standard and the sample

由于各樹(shù)脂的極性、孔徑、比表面積、孔容等理化性質(zhì)的不同，導(dǎo)致樹(shù)脂對(duì)不同化合物的純化效果也大不相同。評(píng)價(jià)大孔樹(shù)脂的性能要從靜態(tài)吸附率和解吸率兩方面綜合考察，不但要吸附率高，而且解吸率也要高，才能保證有效成分的充分利用及回收[14]。按照2.4項(xiàng)的方法測(cè)定七種大孔吸附樹(shù)脂的靜態(tài)吸附率與解吸率，結(jié)果如表2所示。

表2 7種型號(hào)樹(shù)脂對(duì)常春藤皂苷C的吸附率和解吸率Tab 2 ComparisonofadsorptionanddesorptioncapabilityofseventypesofmacroporousresinonhederacosideC樹(shù)脂型號(hào)極性吸附率(%)解吸率(%)HPD-750中極性70 197 3D-101非極性17 779 4HPD-100非極性81 996 7AB-8弱極性78 590 8NKA-9極性48 589 5ADS-17中極性9 592 1DM-130弱極性61 587 4

由表2可以看出，七種大孔吸附樹(shù)脂對(duì)常春藤皂苷C的吸附和解吸有著較大的差異，其中HPD-100及AB-8兩種型號(hào)的樹(shù)脂對(duì)常春藤皂苷C的吸附效果較好，吸附率較高。從理化性質(zhì)上看，除D-101外其它非極性或弱極性樹(shù)脂的吸附效果要好于極性或中極性樹(shù)脂，說(shuō)明非極性或弱極性樹(shù)脂能更好地吸附常春藤皂苷C。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，HPD-100型樹(shù)脂吸附率最高，與理論相符。同樣，解吸效果也與樹(shù)脂理化性質(zhì)相關(guān)，一般比表面積較大的樹(shù)脂容易被洗脫，由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，七種樹(shù)脂的解吸率均較高，其中HPD-750和HPD-100都達(dá)到了96%以上，但HPD-750吸附率較低，綜合確定HPD-100樹(shù)脂為純化常春藤皂苷C的最佳樹(shù)脂。

3.3pH值對(duì)吸附率的影響

不同pH上樣液對(duì)常春藤皂苷C吸附率的影響結(jié)果如圖2所示，可以看出，上樣液的pH值對(duì)HPD-100樹(shù)脂純化常春藤皂苷C的影響不大，吸附率均在84%左右，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析無(wú)顯著差異，試驗(yàn)結(jié)果的微小差距也可能是操作誤差引起的。因此下面試驗(yàn)均采用上樣液本身的pH條件進(jìn)行。

圖2 上樣液pH值對(duì)吸附率的影響Fig.2 Effects of pH values of sample solution on adsorption

3.4泄露曲線確定上樣體積

通過(guò)繪制泄露曲線，可以充分利用和保留目標(biāo)成分，確定上樣終點(diǎn)，提高生產(chǎn)效率。一般認(rèn)為，當(dāng)泄露流出的吸附液濃度達(dá)到上樣液濃度的1/10時(shí)為泄露點(diǎn)，即上樣終點(diǎn)[15]。通過(guò)2.1項(xiàng)的HPLC法檢測(cè)出上樣液中常春藤皂苷C的濃度為1.72 mg/mL。HPD-100對(duì)常春藤皂苷C的泄露曲線見(jiàn)圖3，當(dāng)吸附液流出90 mL時(shí)，高效液相色譜檢測(cè)出常春藤皂苷C開(kāi)始有泄露，到流出120 mL時(shí)，檢測(cè)出泄露液中常春藤皂苷C濃度為0.18 mg/mL，濃度為上樣液的十分之一，將其確定為最佳上樣體積。后續(xù)流出的吸附液到150 mL時(shí)泄漏量趨于平緩。為了盡可能保留有效成分，最佳上樣體積為120 mL(6 BV)。

圖3 泄露曲線Fig.3 Leakage curve

3.5洗脫液濃度對(duì)解吸率的影響

洗脫液濃度對(duì)洗脫效果有較大的影響。作為對(duì)照，先用水作為洗脫液進(jìn)行洗脫，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，解吸率幾乎為零，由此可認(rèn)為常春藤皂苷C不能用水洗脫。由圖4可知，隨著乙醇濃度的增加，解吸率逐漸升高，乙醇濃度大于60%后，解吸率增長(zhǎng)平緩?？蛇x擇60%～90%乙醇濃度進(jìn)行洗脫，洗脫效果較優(yōu)。

為了達(dá)到更好的純化效果，除了考察乙醇濃度對(duì)解吸率的影響，還應(yīng)考慮常春藤皂苷C占干物質(zhì)量的純度。洗脫液中常春藤皂苷C含量占上樣液常春藤皂苷C含量的百分比為回收率，能更直觀地體現(xiàn)純化效果。乙醇濃度對(duì)常春藤皂苷C回收率及純度的影響見(jiàn)表3，由表3可知，濃度為75%和90%的乙醇對(duì)常春藤皂苷C的回收率較高，但90%濃度的乙醇洗脫純度較低，綜合考慮確定洗脫常春藤皂苷C的最佳乙醇濃度為75%。

3.6洗脫體積對(duì)解吸率的影響

洗脫劑用量越大，解吸率越高，但為了盡可能地減少試劑用量，節(jié)約成本，必須考察洗脫液體積對(duì)解吸率的影響。由圖5可知，隨著洗脫液體積倍數(shù)的增加，解吸率逐漸升高，當(dāng)洗脫液達(dá)到5 BV時(shí)，基本洗脫完全，解吸率高達(dá)96.8%，趨于平衡。因此，選擇5 BV作為最佳洗脫體積。

圖4 乙醇濃度對(duì)解吸率的影響Fig.4 Effect of ethanol concentration on desorption rate

表3 不同乙醇濃度對(duì)回收率及純度的影響Tab 3 Therecoveryrateandpuritywithdifferentethanolconcentration乙醇濃度(%)回收率(%)干物量(mg)純度(%)3023 511151 94548 823052 26075 740246 37580 542246 99081 654936 5

3.7洗脫流速對(duì)解吸率的影響

一般認(rèn)為，洗脫流速越慢，洗脫越完全，但工業(yè)生產(chǎn)中需要節(jié)約生產(chǎn)時(shí)間，提高設(shè)備效率，因此需考察洗脫流速對(duì)解吸率的影響。由圖6可知，解吸率隨著洗脫流速的增加逐漸降低，1 BV/h和2 BV/h的流速解吸率均較高，在96%以上，洗脫效果較佳。而3 BV/h和4 BV/h洗脫效果稍差，其解吸率在92%以上。

圖5 乙醇用量對(duì)解吸率的影響Fig.5 Effects of ethanol volumes on desorption rate

圖6 乙醇流速對(duì)解吸率的影響Fig.6 Effects of ethanol flow velocities on desorption rate

同樣為了達(dá)到更好的純化效果，除了考察洗脫流速對(duì)解吸率的影響，還應(yīng)考慮常春藤皂苷C占干物質(zhì)量的純度。由表4可知，洗脫流速在1～3 BV/h時(shí)，常春藤皂苷C的回收率及純度都較高，純化效果較佳，工業(yè)生產(chǎn)中為了提高效率，可采用3 BV/h的流速進(jìn)行洗脫。試驗(yàn)室為了達(dá)到最優(yōu)的純化效果，可選用1 BV/h的流速進(jìn)行洗脫。

表4 不同洗脫流速對(duì)回收率及純度的影響Tab 4 Therecoveryrateandpuritywithdifferentelutionvelocity洗脫流速(BV/h)回收率(%)干物量(mg)純度(%)181 830042 7280 729842 4380 029442 6478 831339 4

3.8正交試驗(yàn)結(jié)果分析

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5，由表中極差(R)可知，各因素對(duì)洗脫效果的影響順序?yàn)锳>C>B，即乙醇濃度>洗脫流速>洗脫體積。方差分析見(jiàn)表6，結(jié)果表明，乙醇濃度及洗脫流速對(duì)常春藤皂苷C的洗脫效果影響顯著，而洗脫液體積對(duì)洗脫效果影響不大。另外，正交設(shè)計(jì)9組試驗(yàn)的純度值均為45%左右，方差分析無(wú)顯著性，因此忽略對(duì)純度的影響。根據(jù)直觀分析表及上述結(jié)果分析得出HPD-100樹(shù)脂對(duì)常春藤皂苷C最佳純化工藝條件為A3B3C1，即乙醇濃度為80%、洗脫體積為7 BV，洗脫流速為1 BV/h。

表5 正交試驗(yàn)結(jié)果及極差分析Tab 5 Theresultsoforthogonalexperiment試驗(yàn)號(hào)ABC回收率(%)111180 2212276 0313375 6421276 7522375 9623181 9731380 7832183 4933281 8K177 26779 20081 833K278 16778 16778 167K381 96779 76777 400極差(R)4 7001 3344 433 注：Kn=∑提取率n，n為因素的因子。 極差R=maxRn-minRn

表6 正交試驗(yàn)方差分析表Tab 6 Varianceanalysisoforthogonalexperiment方差來(lái)源偏差平方和自由度F值顯著性A乙醇濃度37 340224 453顯著B(niǎo)洗脫體積2 68721 760C洗脫流速33 687222 061顯著誤差1 532

4 結(jié)論與討論

通過(guò)對(duì)七種不同型號(hào)樹(shù)脂對(duì)常春藤皂苷C的靜態(tài)吸附與解吸性能的比較研究，確定了HPD-100樹(shù)脂為純化常春藤皂苷C的最佳樹(shù)脂，其吸附率為81.9%，解吸率為96.7%。通過(guò)動(dòng)態(tài)吸附對(duì)影響純化效果的pH、上樣體積、洗脫液濃度、洗脫體積、洗脫流速進(jìn)行深入研究，最終確定HPD-100樹(shù)脂對(duì)常春藤皂苷C純化的最佳條件：上樣體積為6 BV，洗脫液乙醇濃度為80%，洗脫體積為7 BV，洗脫流速為1 BV/h。

童星[11]系統(tǒng)地比較了硅藻土純化法、溶劑萃取-硅膠柱層析純化法、聚酰胺純化法、大孔吸附樹(shù)脂純化法純化常春藤皂苷類化合物的效果，最終確定AB-8型大孔吸附樹(shù)脂純化常春藤中皂苷類化合物效果最好。本研究在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步深入研究大孔吸附樹(shù)脂對(duì)常春藤皂苷的純化效果，并篩選出效果更優(yōu)的HPD-100型樹(shù)脂。通過(guò)對(duì)HPD-100樹(shù)脂純化常春藤皂苷C的各影響因素的深入研究，優(yōu)化了常春藤皂苷C的純化工藝，為下一步的實(shí)驗(yàn)研究奠定了良好的基礎(chǔ)，同時(shí)也為工業(yè)化生產(chǎn)常春藤皂苷C提供了參考依據(jù)。

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PurifyingprocessofhederacosideCbymacroreticularresin

ZENG Jiangang1， SUN Huapeng2， RUAN Qinmei2， ZHANG Min3， ZHONG Xiaohong2

(1.Forestry Bureau of Hanshou County， Hanshou 415900， China； 2.Hunan Agriculture University， Changsha 410128， China； 3.Hunan Academy of Forestry， Changsha 410004， China)

The best macroreticular resin was selected by comparing adsorption and elution performance of seven kinds of macroreticular resin through static adsorption experiment.And purifying process parameters such as the pH and volume of sample loading，concentration of washing solution，elution volume，and elution flow rate were optimized through dynamic state absorbance experiment.The results showed that HPD-100 macroreticular resin had the best adsorption and elution performance.The optimum conditions of purification of hederacoside C were sample loading volume on 6 BV，elution volume on 7 BV with 80% ethanol，elution velocity was 1 BV/h.

hederacoside C； adsorption； elution； macroporous resin

2015-11-30

湖南省教育廳科研項(xiàng)目(15A089)；湖南省研究生科研創(chuàng)新項(xiàng)目(CX2014B290)。

曾建剛(1988-)，男，湖南武岡人，碩士，研究方向?yàn)樗幱弥参镩_(kāi)發(fā)與利用。

鐘曉紅，教授，博士生導(dǎo)師；E-mail：xh-zhong@163.com

TQ 464.3

A

1003-5710(2016)01-0053-08

10.3969/j.issn.1003-5710.2016.01.000

(文字編校：張 珉)