非小細胞肺癌EGFR基因突變126例分析及評價

李怡霖　倪　兵　高　艷　張　銀

661099　云南省 紅河州第三人民醫(yī)院 腫瘤分子與細胞生物學實驗中心

?

非小細胞肺癌EGFR基因突變126例分析及評價

李怡霖倪兵高艷張銀

661099云南省 紅河州第三人民醫(yī)院 腫瘤分子與細胞生物學實驗中心

目的設計對照實驗，應用統(tǒng)計學方法分析及評價非小細胞肺癌EGFR基因突變的發(fā)生率及基因突變類型。方法以我院2013年3月至2015年8月接受治療的126例確診非小細胞肺癌患者為研究對象，根據(jù)PCR擴增及基因測序原理分析及評價非小細胞肺癌EGFR基因突變的發(fā)生率及基因突變類型。結(jié)果：42例(33.33%)肺癌患者EGFR基因發(fā)生突變，其中26例(64.90%)患者外顯子19發(fā)生突變，13例(30.95%)患者外顯子21發(fā)生突變，僅3例(7.14%)患者外顯子20發(fā)生突變，其中外顯子19均為堿基缺失型突變，外顯子20及21均為堿基替換型突變。結(jié)論EGFR基因在非小細胞肺癌的預防、診斷、治療過程中具有十分重要的臨床價值。

非小細胞肺癌；EGFR基因；基因突變

云南省個舊市地區(qū)是全國重要的錫礦基地，其肺癌的發(fā)生率在全球處于較高水平。臨床數(shù)據(jù)表明，非小細胞肺癌的發(fā)病率占肺癌總數(shù)的80%以上，且晚期非小細胞肺癌目前臨床治療效率并不顯著，患者5年死亡率高達80%以上[1]。隨著醫(yī)療水平的逐步提高，靶向藥物、特異性藥物成為新藥研發(fā)領域的熱門藥物，臨床數(shù)據(jù)表明，針對EGFR的靶向藥物在治療非小細胞肺癌方面具有較好的臨床治療效率[2]。根據(jù)這一結(jié)果相關學者認為EGFR基因與非小細胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展具有十分重要的關系，通過分析及評價非小細胞肺癌患者EGFR基因與正常人EGFR基因發(fā)生突變的差異可以為非小細胞肺癌的預防、診斷、治療等提供重要的臨床依據(jù)，以下是本次研究的全部內(nèi)容。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以我院2015年10月至2016年10月接受治療的126例確診(診斷標準：WHO肺癌分類及診斷標準[3])非小細胞肺癌患者為研究對象。126例受試患者年齡介于27～76歲，平均年齡為58歲，年齡≥60歲患者66例，60歲以下患者60例；男性患者85例，女性患者41例；病理分期結(jié)果表明I期、II期、III期、IV期非小細胞肺癌患者分別為16例、25例、66例、19例，其中67例患者發(fā)生淋巴結(jié)或遠處轉(zhuǎn)移，應用10%福爾馬林固定手術過程中患者癌癥組織，或分離晚期患者血漿。

1.2 方法

1.2.1 基因提取 將10%福爾馬林固定的肺癌組織切片離心管內(nèi)加入適量二甲苯進行脫蠟處理，用乙醇將脫脂后的標本清洗干凈后晾干。將晾干的標本置于干凈離心管內(nèi)加入適量配制號的解離液及200 L磷酸鹽緩沖液和無水乙醇，震蕩后離心。將離心管內(nèi)離心后吸附DNA轉(zhuǎn)移到干凈離心管，加入30～100 LBuffer DTE，靜置5min后8000r/min速度離心1min，將提取DNA保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 基因檢測 應用EGFR基因突變29種檢測試劑盒對上述提取的DNA進行基因檢測，以上述提取的DNA作為模板，以PCR擴增儀對EGFR基因19～21外顯子進行基因擴增，具體操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3 統(tǒng)計指標 分別以年齡、性別作為分組因素，統(tǒng)計性別、年齡與非小細胞肺癌患者EGFR基因突變及突變基因類型的關系。

1.4 統(tǒng)計學方法：應用統(tǒng)計學軟件SPSS22.0對受試者EGFR基因突變概率進行統(tǒng)計學分析，以外顯子19～21號基因作為統(tǒng)計依據(jù)，計數(shù)資料以百分比(%)的形式表示，以t檢驗或檢驗表示組間差異，以P<0.05記為統(tǒng)計結(jié)果具有顯著統(tǒng)計學差異。

2 結(jié)果

2.1 年齡、性別因素與非小細胞肺癌患者EGFR基因突變的關系：統(tǒng)計結(jié)果表明，126例非小細胞肺癌患者共計42例發(fā)生EGFR基因突變，其中60歲以上患者31例，女性患者39例，即非小細胞肺癌與EGFR基因突變概率相關性顯著，其中年齡、性別因素是影響EGFR基因突變的主要因素，年齡的增大會增加非小細胞肺癌患者EGFR基因突變概率，女性患者EGFR基因突變概率顯著高于男性，該統(tǒng)計結(jié)果具有顯著統(tǒng)計學意義。見表1

表1 年齡、性別因素與非小細胞肺癌患者EGFR基因突變相關性(n/%)

2.2 EGFR基因突變類型與非小細胞肺癌相關性分析：實驗統(tǒng)計結(jié)果表明外顯子19～21號基因突變與非小細胞肺癌的診斷、治療具有顯著臨床相關性，其中19、21號外顯子突變類型相關性更加顯著，即外顯子19、21與非小細胞肺癌相關性十分顯著，在非小細胞肺癌預防、診斷、治療中具有顯著臨床價值。見表2

表2 EGFR基因突變類型與非小細胞肺癌相關性(n/%)

3 結(jié)論

EGFR基因是一種細胞膜表面的糖蛋白受體，與細胞表皮生長顯著相關，該基因具有酪氨酸激酶活性，主要以信號轉(zhuǎn)導的形式進入細胞核，影響細胞的增殖、分化、凋亡等生命過程，因此該基因與非小細胞肺癌患者原癌基因的激活具有密切相關性[4]。隨著環(huán)境的惡化，生活壓力的增大，肺癌的發(fā)病率初步提高，非小細胞肺癌發(fā)病率占全部肺癌發(fā)病率總數(shù)的80%以上，且該疾病死亡率極高，5年內(nèi)存活率不足15%。相關文獻報道顯示，EGFR基因突變與非小細胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關，探討EGFR基因與非小細胞肺癌的相關性有助于非小細胞肺癌的預防、診斷、治療[5]。本文以統(tǒng)計學方法，應用PCR擴增儀及EGFR基因突變29種檢測試劑盒對EGFR基因突變與非小細胞肺癌的相關性進行統(tǒng)計學探討。

實驗結(jié)果表明，EGFR基因突變概率占非小細胞肺癌發(fā)病總概率的1/3，其中年齡、性別因素與EGFR基因突變概率密切相關，年齡60歲以上非小細胞肺癌患者EGFR基因突變概率顯著增大，女性非小細胞肺癌患者EGFR基因突變概率顯著高于男性，且外顯子19和21是EGFR基因主要突變部位。綜上所述，EGFR基因突變與非小細胞肺癌具有顯著相關性，通過檢測外顯子19、21可以達到對非小細胞肺癌高效的預防、診斷，并顯著提高非小細胞肺癌治療效率，為該病臨床治療提高監(jiān)控依據(jù)，具有很好的臨床價值。

[1] 林小梅,莫娟梅,鄒敏,等.EGFR突變的非小細胞肺癌患者EML4-ALK融合基因的檢測及其臨床特征分析[J].中國病理生理雜志,2012,28(6):1135-1139.

[2]陳順平,蘇海燕,吳文喬,等.非小細胞肺癌EGFR基因突變與擴增及蛋白表達的相關性分析[J].臨床與實驗病理學雜志,2015,31(6):657-665.

[3]趙瑾,田俏梅,黃玉梅,等.湖南地區(qū)238例非小細胞肺癌EGFR基因突變狀態(tài)分析[J].腫瘤藥學,2014,4(3):187-192.

[4]周曉秋,王東關,孫希印,等.非小細胞肺癌EGFR基因和蛋白檢測的比較分析[J].臨床與實驗病理學雜志,2012,28(10):1124-1126.

[5]羅煒,王慧.非小細胞肺癌患者外周血EGFR基因突變檢測的系統(tǒng)評價[J].現(xiàn)代預防醫(yī)學,2014,41(20):3751-3755.

10.3969/j.issn.2095-9559.2016.06.023

2095—9559(2016)06—2631—02

2016-02-29