阜寧縣2011～2015年生豬口蹄疫血清抗體監(jiān)測報告

吳文開

（江蘇省阜寧縣畜牧獸醫(yī)站，江蘇阜寧 224400）

阜寧縣2011～2015年生豬口蹄疫血清抗體監(jiān)測報告

吳文開

（江蘇省阜寧縣畜牧獸醫(yī)站，江蘇阜寧 224400）

目的:調查2011年～2015年間阜寧縣19個鎮(zhèn)（區(qū)）口蹄疫疫苗免疫保護率情況，為阜寧地區(qū)生豬口蹄疫強制免疫性疾病的免疫方案的制定和完善提供參考。結論:阜寧縣生豬口蹄疫抗體陽性率在2011年～2015年間總體效果較好，能達到國家規(guī)定的免疫效果，但還沒有達到100% 的免疫效率，建議堅持豬口蹄疫疫苗的免疫方案。

阜寧縣豬口蹄疫抗體

口蹄疫（Foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD）是生豬養(yǎng)殖中重要的傳染病[1］。危害嚴重，死亡率最高的可達25%～50%[2］。這些疫病的存在直接影響了養(yǎng)豬的效益，進而影響到公共衛(wèi)生的安全。我國在20世紀80年代開始就對豬瘟實行以強制免疫，2002年以后，采取了全面強制免疫與撲殺相結合的綜合防控策略來防控豬口蹄疫。如何制定合理的免疫程序，關系著豬場生產穩(wěn)定與健康發(fā)展[3］。通過血清抗體跟蹤檢測結果，結合生產數(shù)據觀察，制定合理的免疫程序及調整后的效果，對于養(yǎng)殖場的疾病防控和生產成績的提高極為有利的。

為了掌握江蘇省阜寧縣規(guī)模豬場和散養(yǎng)農戶飼養(yǎng)的生豬豬瘟、豬藍耳病、豬口蹄疫免疫抗體水平，有重點地開展相應的免疫預防，制定科學合理的免疫程序，分別于2011～2015年每年的5月分5批次采集阜寧縣2規(guī)模豬場和散戶的生豬（50～75kg體重）血樣進行生豬口蹄疫血清抗體檢測，以指導阜寧縣生豬口蹄疫強制免疫方案的制定和實施，最終提高阜寧縣生豬的健康生產。

1　材料與方法

1.1主要試劑

豬口蹄疫病毒VP1結構蛋白抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗診斷試劑盒購自上海優(yōu)耐特生物醫(yī)藥有限公司。

1.2主要儀器

DENLEY DRAGON Wellscan MK 3酶標儀，PYX-DHS數(shù)字顯示隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱型號，微量反應板及封條，TGL-168離心機型號，10～1000μl移液槍及300μl排槍。

1.3樣本來源

分別于2011年～2015年每年5月分5批次采集阜寧縣19個鎮(zhèn)區(qū)（街道）規(guī)模豬場和散戶的生豬（50～75kg體重）血樣進行生豬口蹄疫血清抗體檢測，累計采集樣品數(shù)量為6409份，其每個鎮(zhèn)區(qū)（街道）的采集數(shù)量詳見表1。

表1　2011年～2015年5批次血清樣品采集記錄表

1.4全血采集后處理

每次抽血后，斜45°室溫放置30min后立即放入有冰塊的疫苗運輸箱內帶回阜寧縣畜牧獸醫(yī)站實驗室，將血清倒入2mlEP管中，5000r/min離心10min，吸取上清移入另一干凈的2ml EP管中，做好標記，放于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5血清抗體檢測

每批次樣品全部采集完后，嚴格按相應試劑盒的操作說明進行豬口蹄疫的血清抗體ELISA檢測。

1.6FMD抗體ELISA法檢測

使用上海優(yōu)耐特生物醫(yī)藥有限公司的豬口蹄疫病毒VP1結構蛋白抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗診斷試劑盒檢測。使用前所有試劑應恢復至室溫（18℃～25℃）。濃縮洗滌液用蒸餾水10倍稀釋成洗液工作液。ELISA操作步驟如下：

（1）取出試劑盒中的樣品是稀釋板。選擇兩個陰性對照和兩個陽性對照孔。

（2）在稀釋板的各孔中加入200μl樣品稀釋液，在相應的孔中分別加入10μl對照血清或被檢測血清，加樣器重復吹洗3次。

（3）取出抗原包被板，分別從稀釋板上取稀釋后的對照血清和被檢血清各100μl，加入至抗原包被板的相應孔中，加蓋封膜，37℃恒溫培養(yǎng)箱中孵育60min。

（4）吸取各孔的液體棄去。300 μl洗滌工作液洗滌板孔3次。每次洗滌后應吸去孔內的液體，在最后一次洗滌液吸去后，將每塊板中殘留的洗滌液扣掉。

（5）酶結合物工作液配制：用酶結合物稀釋液將酶結合物作100倍稀釋，現(xiàn)配現(xiàn)用。每孔加入100μl酶結合物工作液，封膜后37℃孵育30min。

（6） 重復步驟（4）。

（7）TMB底物A液和TMB底物B液等量混合后每孔加入100μl TMB底物工作液，封膜后37℃孵育15min。

（8） 10min后每孔立即加入100μl終止液終止反應。

（9）測量樣品與對照孔在450nm 處的吸光值。

結果有效性判定：陰性對照平均OD值應小于等于0.2，每個陽性對照的平均值應大于0.5且小于等于2.0，則為有效，否則試驗無效。臨界值=0.23*陰性對照空平均OD值。

結果判定：

被檢測樣品孔OD值小于臨界值時，為陰性，即為抗口蹄疫病毒VP1結構大白白抗體陰性。

被檢樣品OD值大于等于0.8時，判為陽性。

2　豬口蹄疫抗體檢測結果

豬口蹄疫血清抗體流行病學調查結果見表2至表3。阜寧縣豬口蹄疫血清抗體陽性率從2011年到2015年間分別為83.9%，86.9%，90.0%，93.8%和94.8%，抗體陽性率較高，且呈逐年升高趨勢。說明阜寧縣口蹄疫免疫效果良好。

表2　2011年～2015年口蹄疫抗體檢測結果

表3　2011年～2015年口蹄疫抗體檢測結果

3　討論

《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）》指出[4］，隨著畜牧業(yè)生產規(guī)模不斷擴大，養(yǎng)殖密度不斷增加，畜禽感染病原機會增多，病原變異概率加大，新發(fā)疫病發(fā)生風險增加。

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一種急性、熱性、高度接觸性和可快速遠距離傳播的動物疫病。屬牛、羊、豬和駱駝等偶蹄獸急性、熱性、高度接觸性傳染病?，F(xiàn)在的FMD已經可以在不同的地區(qū)，一年四季皆可發(fā)生[5］。口蹄疫病毒在進化過程中變異很大，各亞型之間不一定有交叉保護[6］，對口蹄疫的防治帶來了極大的困難?？谔阋咭呙缡峭ㄟ^刺激機體產生特異性的抗體，進而抑制和殺滅口蹄疫病毒達到保護動物健康作用的，在預防和控制動物口蹄疫的發(fā)生和流行方面做出了巨大的貢獻。為落實《國家疫病防控中長期規(guī)劃》，促進口蹄疫防控工作開展.自2013年9月1日起. 國家強制免疫用口蹄疫疫苗將逐步執(zhí)行新的疫苗質量標準，新生產的口蹄疫滅活疫苗及合成肽疫苗效力檢驗標準由每頭份3PD50提高到6PD50：新生產的口蹄疫滅活疫苗內毒素每頭份疫苗不超過50EU。所以，對口蹄疫疫苗免疫后的血清抗體監(jiān)測，有助于口蹄疫的防控。龔小莉[23］對南川地區(qū)2012年豬口蹄疫血清抗體進行了檢測評估分析，結果平局合格率達到89.7%，按照農業(yè)部農醫(yī)發(fā)[2012］1號文件規(guī)定的標準，全年各月抗體合格率均超過標準。說明阜寧地區(qū)2012-2015年口蹄疫疫苗免疫良好。本研究發(fā)現(xiàn)從2011年5月到2015年5月，阜寧縣豬口蹄疫血清抗體陽性率分別為83.9%，86.9%，90.0%，93.8%和94.8%，均達到了農業(yè)部農醫(yī)發(fā)〔2012〕1號文件規(guī)定的標準，且隨著時間的推移，到2015年平均陽性率近95%，說明阜寧縣最近5年內豬口蹄疫疫苗免疫效果良好，需要堅持執(zhí)行豬口蹄疫免疫方案。然而近兩年來口蹄疫其他毒株如A型毒株的感染率正在升高，必須引起足夠的重視。

疫苗免疫的關鍵在于疫苗的質量和疫苗接種程序及技術。影響疫苗免疫效率主要有：疫苗質量差，滴度不夠，過期；疫苗污染；防疫操作不規(guī)范，交叉感染意識不強；春、秋防疫措施的缺陷；母源抗體的干擾及免疫程序不合理等。所以一般疫苗免疫需要注意以下幾個注意事項：（1）使用正規(guī)廠家生產的疫苗；（2）嚴格按照產品說明書的要求對疫苗和稀釋液進行保管、運輸和使用；（3）注意疫苗包裝完整與過期與否；（4）免疫前注意預免疫豬群的健康狀態(tài)；（5）選擇合適免疫方式及合適的注射針頭，做到一畜一針頭，避免交叉感染；（6）疫苗接種前、后各一周內，嚴禁使用抗病毒藥物或抗生素。（7）用過的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等應進行消毒處理，嚴禁隨意丟棄。

4　結論

在2011年到2012年期間對江蘇省阜寧縣19個鎮(zhèn)區(qū)（街道）內各地區(qū)口蹄疫血清學調查發(fā)現(xiàn)的豬口蹄疫血清抗體陽性率總體較高，免疫保護力呈逐漸遞增趨勢，免疫效果良好，但還未達到100%保護率，需堅持執(zhí)行疫苗免疫方案。

[1]董保豫，猶銀俊，周啟澤，等.豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍耳病疫苗不同組合免疫效果觀察[J］.貴州畜牧獸醫(yī)，2011，35 （5）：16-18.

[2]Alexandrov T，Stefanov D，Kamenov P，Miteva A，Khomenko S，Sumption K，Meyer-Gerbaulet H，Depner K. Surveillance of footand-mouth disease（FMD）in susceptible wildlife and domestic ungulates in Southeast of Bulgaria following a FMD case in wild boar[J］.Veterinary microbiology，166（1-2）：84-90.

[3]李國友，葉陽.血清抗體跟蹤監(jiān)測藍耳病苗和豬瘟苗抗體水平及相互影響[J］.今日畜牧獸醫(yī)，2007，（9）：7-10.

[4]馬雪蓮.對口蹄疫的綜合防治的探究[J］.畜牧獸醫(yī)，2013，（6）：188.

[5]劉玉梅，趙利平，劉國英，等.應用ELISA方法判定口蹄疫疫苗毒株血清學相關關系[J］.廣東畜牧獸醫(yī)科技，2013，38（3）：29-32.

[6]白曉亮，張慶德.使用口蹄疫疫苗的必備知識[J］.畜牧獸醫(yī)科技信息，2013，（5）：31.

本項目受2015年省年農業(yè)三新項目資助