慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化和肝細(xì)胞癌患者T淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)差異

陳偉霞　楊麗麗　王磊　季光　邢練軍

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慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化和肝細(xì)胞癌患者T淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)差異

陳偉霞楊麗麗王磊季光邢練軍

目的探討HBV感染者生化指標(biāo)、外周血T細(xì)胞亞群在不同病程中的變化及臨床意義。方法選取慢性乙型肝炎23例，肝炎后肝硬化21例，原發(fā)性肝癌35例，采用全自動生化、流式細(xì)胞分析，觀察生化指標(biāo)，T淋巴細(xì)胞亞群的變化。結(jié)果ALT以慢性乙型肝炎組升高最顯著，和其他兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)、ALP、LDH以原發(fā)性肝癌組升高最明顯，膽堿酯酶(CHE)以原發(fā)性肝癌組降低最明顯，和其他兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；觀察3組外周血T淋巴細(xì)胞結(jié)果顯示，CD8+T細(xì)胞、CD8+CD28+T細(xì)胞在慢性乙型肝炎組中最高，CD4+CD25+T細(xì)胞在原發(fā)性肝癌組中最高。結(jié)論HBV感染者不同病程中生化指標(biāo)、T細(xì)胞亞群表達(dá)存在顯著差異，可作為病情演變、療效及預(yù)后評判的可靠依據(jù)。

HBV；生化指標(biāo)；T淋巴細(xì)胞亞群

乙型肝炎是乙型肝炎病毒(HBV)感染引起的以肝臟炎癥和壞死病變?yōu)橹鞯囊环N傳染病。據(jù)WHO報(bào)道，全世界約3.5億人感染HBV，其中有15%～40%的人因 HBV 感染逐漸發(fā)展形成肝硬化、肝衰竭、原發(fā)性肝細(xì)胞癌死亡[1-2]。慢性乙型肝炎形成的原因很復(fù)雜，人體感染HBV后，HBV并不直接對肝細(xì)胞造成損傷而與體內(nèi)的免疫細(xì)胞相互作用。其中機(jī)體T細(xì)胞免疫應(yīng)答是決定HBV感染臨床轉(zhuǎn)歸的主要因素，所以外周血T淋巴細(xì)胞亞群的特征能夠反映患者的免疫狀態(tài)[3-4]。本研究比較慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化和原發(fā)性肝癌患者主要生化指標(biāo)及T淋巴細(xì)胞亞群的變化，從而探討HBV感染后不同的臨床轉(zhuǎn)歸與宿主細(xì)胞免疫功能的關(guān)系。

資料和方法

一、臨床資料

79例HBV感染者均來上海龍華醫(yī)院感染科2013年1月至2015年12月期間住院患者。其中，慢性乙型肝炎23例(慢乙肝組)，男15例、女8例，平均年齡47.4歲；肝炎肝硬化21例(肝硬化組)，男14例、女7例，平均年齡50.5歲；原發(fā)性肝癌35例(肝癌組)，男25例、女10例，平均年齡53.2歲，慢性乙型肝炎和肝炎肝硬化患者均符合西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)，參照2015年中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會、感染病學(xué)分會聯(lián)合修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》[5]，原發(fā)性肝癌的診斷依據(jù)臨床、血清學(xué)和影像學(xué)檢查，并符合中國抗癌協(xié)會肝癌專業(yè)委員會制定的原發(fā)性肝癌的臨床診斷與分期標(biāo)準(zhǔn)。入選病例半年內(nèi)未接受免疫調(diào)節(jié)及抗病毒治療。

二、方法

抽取各組患者靜脈血4 mL，分2管。1管為普通管，分離血清后應(yīng)用全自動生化分析儀檢測生化指標(biāo)；另1管用乙二胺四乙酸二鉀抗凝，采用美國BD公司生產(chǎn)的FACS Calibur流式細(xì)胞儀直接免疫熒光法檢測外周T淋巴細(xì)胞亞群百分比。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件，組間差異比較采用方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)　　果

一、HBV感染者不同病程中生化指標(biāo)分析

慢性乙型肝炎組、肝炎肝硬化組、原發(fā)性肝癌組患者ALT、AST、CHE差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且以慢性乙型肝炎組升高最顯著，而原發(fā)性肝癌組和肝炎肝硬化組之間則變化不顯著，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；γ-GT、ALP、LDH以原發(fā)性肝癌組升高最明顯，CHE以原發(fā)性肝癌組降低最明顯(P<0.05)(表1)。

二、HBV感染者不同病程中T細(xì)胞亞群功能分析

慢性乙型肝炎組CD8+T細(xì)胞、CD8+CD28+T細(xì)胞百分比均高于肝炎肝硬化組和原發(fā)性肝癌組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)；原發(fā)性肝癌組患者CD4+CD25+T細(xì)胞百分比高于慢性乙型肝炎組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；肝炎肝硬化組患者CD4+/CD8+高于慢性乙型肝炎組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；慢性乙型肝炎組、肝炎肝硬化組、原發(fā)性肝癌組患者CD3+細(xì)胞、CD4+細(xì)胞、NK細(xì)胞及CD4+CD45RA+細(xì)胞百分?jǐn)?shù)差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)(表2)。

表1　各組患者生化指標(biāo)分析(U/L)

注：▲與慢乙肝組比較P<0.05，★與肝硬化組比較P<0.05

表2　各組患者T細(xì)胞亞群分析(±s，%)

注：▲與慢乙肝組比較P<0.05

討　　論

人類HBV感染是世界范圍的公共衛(wèi)生問題。由于MHC多態(tài)性和易感性格局，以及其他關(guān)鍵基因的突變，中國有1.2億無癥狀攜帶者，在免疫低下的情況容易轉(zhuǎn)化為HBV慢性患者。HBV慢性感染可持續(xù)數(shù)十年，患者肝組織反復(fù)損傷，進(jìn)行性進(jìn)展為肝硬化和肝癌。

本研究中選擇慢性乙型肝炎患者、肝炎肝硬化患者及原發(fā)性肝癌患者為研究對象，進(jìn)行外周血生化指標(biāo)檢測。生化指標(biāo)結(jié)果提示γ-GT、ALP、LDH以原發(fā)性肝癌組升高最明顯，CHE以肝癌組降低最明顯(P<0.05)。血清γ-GT主要來自肝臟，肝膽疾病時(shí)，γ-GT水平升高；ALP是需要經(jīng)過肝臟由膽汁排出，排泄過程中出現(xiàn)異常，引起ALP偏高；當(dāng)肝病病情進(jìn)一步惡化時(shí)，肝細(xì)胞損傷加重，LDH含量有不同程度增高；CHE是一種催化?；憠A水解的酶，由肝細(xì)胞合成，主要反映肝臟的合成和儲備能力[6-7]。原發(fā)性肝癌組相比慢性乙型肝炎組和肝炎肝硬化組，肝臟損傷更為嚴(yán)重，肝臟的合成和儲備功能降低。因此γ-GT、ALP、LDH升高最明顯。

HBV慢性感染是一個(gè)極為復(fù)雜的過程，涉及HBV逃逸、免疫識別與攻擊等若干機(jī)制以及宿主發(fā)生免疫耐受的機(jī)制。HBV感染的結(jié)局直接與抗HBV適應(yīng)性細(xì)胞免疫應(yīng)答的類型和強(qiáng)度相關(guān)。慢性HBV感染患者病毒持續(xù)復(fù)制，肝組織經(jīng)歷慢性損傷，容易發(fā)生纖維硬化和功能喪失，更傾向發(fā)生肝癌。由于每一個(gè)被感染宿主免疫應(yīng)答差異以及HBV逃逸抗感染免疫策略的差異，并非每個(gè)慢性乙型肝炎患者發(fā)展為肝癌。本研究結(jié)果顯示，慢性乙型肝炎組CD8+T細(xì)胞、CD8+CD28+T細(xì)胞百分比均高于肝炎肝硬化組和原發(fā)性肝癌組(P均<0.05)。HBV 特異性T淋巴細(xì)胞免疫在病毒清除過程中起著重要作用，CD8+T細(xì)胞抑制病毒復(fù)制，決定是否能清除病毒的過程中起到關(guān)鍵作用。CD8+淋巴細(xì)胞上的 CD28+分子是參與乙型肝炎免疫應(yīng)答的重要組成部分。有證據(jù)表明，說明機(jī)體參加免疫反應(yīng)的免疫活性細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生改變。CD8+CD28+被認(rèn)為是T細(xì)胞亞群中的CD8+CTL，CD8+CD28+T淋巴細(xì)胞增多，為T細(xì)胞清除病毒做準(zhǔn)備[8-10]。 朱春蘭等[11]發(fā)現(xiàn)，在健康對照組，HBV攜帶組，CHB、肝硬化組中，外周血CD8+CD28+T細(xì)胞數(shù)目呈遞減趨勢，兩兩之間比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)，與本研究結(jié)果一致。研究發(fā)現(xiàn)在肝炎肝硬化組和原發(fā)性肝癌組患者CD8+CD28+T細(xì)胞明顯降低，可能與HBV病毒持續(xù)存在、病情遷延不愈有關(guān)。CD8+T淋巴細(xì)胞表面CD28+分子的表達(dá)下降，會引起細(xì)胞毒性T細(xì)胞比例下降，而抑制性T細(xì)胞比例上升，導(dǎo)致病毒難以清除，病情逐漸進(jìn)展。Franzese等通過四棱線蟲實(shí)驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)，CD4+CD25+Treg能抑制乙型肝炎特異性CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)[12]。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)是近十年發(fā)現(xiàn)的T細(xì)胞亞群，具有抑制效應(yīng)T細(xì)胞功能的作用[13]。本研究結(jié)果顯示，在CD4+CD25+T細(xì)胞在原發(fā)性肝癌組中最高(P<0.05)，提示原發(fā)性肝癌CD4+CD25+T細(xì)胞增多引起細(xì)胞免疫反應(yīng)下降。

綜上所述，本研究全面分析了慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化、原發(fā)性肝癌等HBV感染的不同階段T細(xì)胞亞群的變化。研究結(jié)果顯示，不同類型慢性HBV感染者T細(xì)胞亞群存在差異，細(xì)胞免疫功能紊亂，不同類型患者應(yīng)采用不同的免疫調(diào)節(jié)治療手段。

[1]Ma YJ， He M，Han JA， et al. A Clinical Study of HBsAg-Activated Dendritic Cells and Cytokine-Induced Killer Cells During the Treatment for Chronic Hepatitis B. Scandinavian Immunology，2013，78：387-393.

[2]Balmasova IP，Yashohuk ND, Mgnbaev OA, et al. Immunopatho-genesis of chronic hepatitis B. World J Gastroenterol，2014，20：14156-14171.

[3]Sakaki M，Hiroishi K，Baba T，et al. Intrahepatic status of regulatory T cells in autoimmune liver diseases and chronic viral hepatitis. Hepatol Res，2008，38：354-361

[4]李鴻賓，江曉萍，葉珺，等. 測定慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的臨床意義. 安徽醫(yī)藥，2006, 10:588-589.

[5]中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會、中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會. 慢性乙型肝炎防治指南(2015更新版). 肝臟，2015，20：915-932.

[6]李萍，史茜，王波，等. 多項(xiàng)生化指標(biāo)在常見肝病診斷中的價(jià)值.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34：3205-3207.

[7]彭健新. 8項(xiàng)生化指標(biāo)在常見肝病中的診斷意義及相關(guān)分析. 中國當(dāng)代醫(yī)藥，2011，18：77-78.

[8]王健，李朝品. HBV感染乙肝患者PBMC后對細(xì)胞免疫功能的影響. 中國人獸共患病雜志，1998，14：90-92.

[9]中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會、中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會. 病毒性肝炎的診斷標(biāo)準(zhǔn).中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，2001，11：56-60.

[10]姚光弼，王寶恩，崔振宇，等. 拉米夫定治療慢性乙型肝炎病人的長期療效. 中華肝臟病雜志，1999，7：80-83.

[11]朱春蘭，干迪郁，伍華東，等. 慢性乙型肝炎患者外周血 CD8+淋巴細(xì)胞上CD28抗原的表達(dá). 放射免疫學(xué)雜志，2013，26：238-239.

[12]Franzese O， Kenndy PT, Gehring AJ, et al. Modulation of the CD8+T cell response by CD4+CD25+ regulatory cells in patients with hepatitis B virus infection. Viral，2005，79：3322-3328.

[13]Akbar SM，F(xiàn)urukawa S，Horiike N，et al. Safety and immunogenicity of hepatitis B surface antigen-pulse dendritic cells in patents with chronic hepatitis B. J Viral Hepat，2011，18：408-414.

(本文編輯：易玲)

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81302891)，上海市自然科學(xué)基金項(xiàng)目(14ZR1441600)

201203上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院消化內(nèi)科/脾胃病研究所

邢練軍，Email：xingdoctor@126.com

2016-03-08)