苜草素對產(chǎn)蛋后期蛋雞脂肪肝出血綜合征的預(yù)防作用

高媛媛　楊長進(jìn)　董曉芳*　佟建明　高玉鵬

(1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京100193；2.西北農(nóng)林科技大學(xué)動物科技學(xué)院，楊凌712100)

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苜草素對產(chǎn)蛋后期蛋雞脂肪肝出血綜合征的預(yù)防作用

高媛媛1楊長進(jìn)2董曉芳1*佟建明1高玉鵬2

(1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京100193；2.西北農(nóng)林科技大學(xué)動物科技學(xué)院，楊凌712100)

本試驗(yàn)旨在研究苜草素對產(chǎn)蛋后期蛋雞脂肪肝出血綜合征(FLHS)的預(yù)防作用。選用500日齡京紅1號產(chǎn)蛋雞1 008只，隨機(jī)等分為7組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)24只雞。Ⅰ組為對照組，飼喂常規(guī)飼糧(代謝能11.10 MJ/kg，粗蛋白質(zhì)17.68%)；Ⅱ～Ⅶ組為試驗(yàn)組，飼喂高能低蛋白質(zhì)飼糧(代謝能12.87 MJ/kg，粗蛋白質(zhì)13.84%)，并分別在飼糧中添加0、200、400、600、800、1 000 mg/kg苜草素。試驗(yàn)期60 d。結(jié)果表明：1)與對照組相比，高能低蛋白質(zhì)飼糧組(Ⅱ組)蛋雞第30天時即可表現(xiàn)出明顯的FLHS病理特征，第1～30天平均日采食量、產(chǎn)蛋率、蛋重、產(chǎn)蛋量顯著降低(P<0.05)，料蛋比顯著升高(P<0.05)，第1～60天趨勢更加顯著(P<0.05)；第42天蛋白高度和哈氏單位顯著降低(P<0.05)。2)在高能低蛋白質(zhì)飼糧中添加不同梯度的苜草素均能降低FLHS發(fā)生率，提高第1～60天的平均日采食量、產(chǎn)蛋率、產(chǎn)蛋量，降低料蛋比；提高第42天的蛋白高度、哈氏單位。由此可見，高能低蛋白質(zhì)飼糧能夠誘導(dǎo)蛋雞FLHS，補(bǔ)充苜草素具有預(yù)防作用。

苜草素；蛋雞；脂肪肝出血綜合征

與哺乳動物不同，雞脂肪酸合成的主要場所是肝臟[1]，僅有很少部分在脂肪組織進(jìn)行。在產(chǎn)蛋期，蛋雞肝臟大量合成脂肪，與載脂蛋白等結(jié)合形成極低密度脂蛋白，轉(zhuǎn)運(yùn)到肝外組織以滿足蛋黃脂質(zhì)沉積的需要。此時，肝臟代謝負(fù)擔(dān)沉重，極易發(fā)生脂肪肝出血綜合征(fatty liver hemorrhagic syndrome，F(xiàn)LHS)。FLHS可使整個雞群產(chǎn)蛋率下降，造成經(jīng)濟(jì)損失[2]。目前，F(xiàn)LHS的誘發(fā)機(jī)制還不清楚，有研究報道，F(xiàn)LHS發(fā)生的主要原因?yàn)楦闻K脂肪合成多于輸出[3-4]。此外，蛋雞肝臟內(nèi)游離的脂肪酸較多，易被氧化產(chǎn)生自由基，破壞細(xì)胞生物膜結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致肝損傷[5]。

苜草素是紫花苜蓿經(jīng)水提后噴霧干燥形成的植物飼料添加劑，主要成分為苜蓿多糖、苜蓿黃酮和苜蓿皂苷。飼糧中添加苜草素可以改善體內(nèi)脂質(zhì)代謝[6-7]，其中，苜蓿多糖具有抗氧化作用[8]，可保護(hù)肝臟防止自由基損傷[5]；苜蓿黃酮具有增強(qiáng)免疫和調(diào)節(jié)內(nèi)分泌的功能[9]；苜蓿皂苷具有調(diào)控膽固醇代謝的作用[10-14]。目前，尚未見直接使用苜草素預(yù)防蛋雞FLHS的報道。因此，本試驗(yàn)通過飼喂高能低蛋白質(zhì)飼糧人工誘發(fā)FLHS，研究苜草素的預(yù)防作用，旨在為控制FLHS提供解決方案。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

苜草素是以天然植物藥物提取原理，采用破壁萃取技術(shù)從干燥的紫花苜蓿中提取的一種植物飼料添加劑，其主要有效成分為多糖(≥15%)、黃酮(≥5%)、皂苷(≥5%)，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所提供。

1.2試驗(yàn)設(shè)計和試驗(yàn)飼糧

選取健康的500日齡京紅產(chǎn)蛋雞1 008只(購自北京正大畜牧有限公司)，隨機(jī)分為7組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)24只雞。密閉雞舍階梯式籠養(yǎng)，自由采食、飲水，光照時間為16 h/d，自動控制舍內(nèi)溫濕度，溫度為(22±3) ℃，相對濕度為45%～65%，按正常免疫程序免疫接種。預(yù)試期7 d，試驗(yàn)期60 d。

7組試驗(yàn)蛋雞中，Ⅰ組為對照組，飼喂常規(guī)飼糧(代謝能11.10 MJ/kg，粗蛋白質(zhì)17.68%)；Ⅱ～Ⅶ組為試驗(yàn)組，飼喂高能低蛋白質(zhì)飼糧(代謝能12.87 MJ/kg，粗蛋白質(zhì)13.84%)，并分別添加0、200、400、600、800、1 000 mg/kg的苜草素。所有飼糧均為玉米-豆粕型，試驗(yàn)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3檢測指標(biāo)和方法

1.3.1產(chǎn)蛋性能指標(biāo)的測定

試驗(yàn)期每天觀察雞只健康狀況，以重復(fù)為單位，記錄每天產(chǎn)蛋情況并稱重，每周結(jié)料1次。計算平均日采食量、產(chǎn)蛋量、產(chǎn)蛋率、蛋重和料蛋比。

1.3.2蛋品質(zhì)指標(biāo)測定

試驗(yàn)期每2周末，取當(dāng)天每個重復(fù)所有雞蛋測定蛋品質(zhì)。

蛋殼強(qiáng)度測定采用蛋殼強(qiáng)度測試儀(Model-Ⅲ,Robotmation Co. Ltd.,Tokyo,Japan)；蛋殼厚度測定采用蛋殼厚度檢測器(Model P-1,Ozaki MFG.Co.Ltd.,Tokyo,Japan)；蛋白高度、哈氏單位及蛋黃顏色測定采用蛋品質(zhì)分析儀(EMT-5200,Robotmation Co. Ltd.,Tokyo,Japan)。

1.3.3蛋雞肝臟病變指標(biāo)的測定

試驗(yàn)第30天和第60天，每個重復(fù)取4只蛋雞，每組24只蛋雞，禁食12 h后空腹稱雞體重，并翅下靜脈采血，3 000 r/min離心10 min，制備血漿，-20 ℃凍存；采血后麻醉處死，小心取出整個肝臟，用預(yù)冷的生理鹽水沖洗上面血漬，然后用濾紙擦干并稱重記錄，取5 g肝組織，錫箔紙包裝，液氮速凍，-20 ℃凍存。

肝臟指數(shù)(%)=(肝臟濕重/活體重)×100。

肝臟出血指數(shù)和FLHS發(fā)生率觀測：參照董曉芳等[15]試驗(yàn)的劃分標(biāo)準(zhǔn)，將本試驗(yàn)肝臟出血程度劃分為4級：0=沒有出血，1=有少數(shù)出血點(diǎn)或斑，2=有明顯的出血區(qū)或血腫；3=有廣泛的局灶性出血區(qū)或大出血。2、3級判為FLHS雞，1級為亞臨床FLHS雞。肝臟出血分級見圖1。

表1　試驗(yàn)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1)預(yù)混料為每千克飼糧提供 The premix provides the following per kg of diets：VA 7 500 IU，VD32 500 IU，VE 15 IU，VK 2 mg，VB64 mg，VB120.01 mg，煙酸 niacin 20 mg，核黃素 riboflavin 4 mg，硫胺素 thiamine 2 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 5 mg，生物素 biotin 0.1 mg，葉酸 folic acid 1 mg，Se 0.2 mg，Mn 63.6 mg，F(xiàn)e 45 mg，Cu 6 mg，I 0.4 mg，Zn 34 mg。

2)營養(yǎng)水平均為計算值。Nutrient levels are calculated values.

A：正常肝 normal liver；B：1級肝出血 first-degree hepatorrhagia；C：2級肝出血 second-degree hepatorrhagia；D：3級肝出血 third-degree hepatorrhagia。

圖1肝臟出血分級

Fig.1Classification of liver hemorrhage

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

試驗(yàn)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差或平均值表示。采用SAS 9.2統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析，Duncan氏法進(jìn)行多重比較，以P<0.05為差異顯著水平。

2　結(jié)　果

2.1苜草素對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，試驗(yàn)第1～60天，高能低蛋白質(zhì)飼糧組(Ⅱ組)平均日采食量顯著低于對照組(P<0.05)，添加600 mg/kg苜草素的高能低蛋白質(zhì)飼糧組平均日采食量顯著高于高能低蛋白質(zhì)飼糧組(P<0.05)；高能低蛋白質(zhì)飼糧組產(chǎn)蛋率顯著低于對照組(P<0.05)，添加400、600、800、1 000 mg/kg苜草素的高能低蛋白質(zhì)飼糧組產(chǎn)蛋率顯著高于高能低蛋白質(zhì)飼糧組(P<0.05)；高能低蛋白質(zhì)飼糧組蛋重顯著低于對照組(P<0.05)；高能低蛋白質(zhì)飼糧組料蛋比顯著高于對照組(P<0.05)，添加400、600、800、1 000 mg/kg苜草素的高能低蛋白質(zhì)飼糧組料蛋比顯著低于高能低蛋白質(zhì)飼糧組(P<0.05)；高能低蛋白質(zhì)飼糧組產(chǎn)蛋量顯著低于對照組(P<0.05)，添加200、400、600、800、1 000 mg/kg苜草素的高能低蛋白質(zhì)飼糧組產(chǎn)蛋量顯著高于高能低蛋白質(zhì)飼糧組(P<0.05)。

表2　苜草素對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

續(xù)表2項(xiàng)目Items時間Time/d對照組Controlgroup苜草素添加水平Polysavonesupplementallevel/(mg/kg)02004006008001000產(chǎn)蛋量Eggmass/(g/d)1～3030．4±1．5a22．1±1．5c23．5±1．6bc25．7±3．3b24．6±2．1bc25．0±1．5b25．3±2．1b31～6032．1±3．5a19．7±1．9c23．2±3．9b23．7±1．5b23．8±2．1b22．9±1．5b22．2±2．5bc1～6031．1±1．9a21．0±1．1c23．4±2．0b24．8±2．3b24．2±2．0b24．1±1．3b23．9±2．2b

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.2苜草素對蛋雞蛋品質(zhì)的影響

由表3可知，第42天，高能低蛋白質(zhì)飼糧組蛋白高度顯著低于對照組(P<0.05)，添加200、400、600、800、1 000 mg/kg苜草素的高能低蛋白質(zhì)飼糧組蛋白高度顯著高于高能低蛋白質(zhì)飼糧組 (P<0.05)；第42天，高能低蛋白質(zhì)飼糧組哈氏單位顯著低于對照組(P<0.05)，添加200、400、600、800 mg/kg苜草素的高能低蛋白質(zhì)飼糧組哈氏單位顯著高于高能低蛋白質(zhì)飼糧組(P<0.05)。第28天和第42天，高能低蛋白質(zhì)飼糧組及添加200、400、600、800、1 000 mg/kg苜草素的高能低蛋白質(zhì)飼糧組蛋黃顏色顯著高于對照組(P<0.05)；第14天，高能低蛋白質(zhì)飼糧組及添加400、600、800、1 000 mg/kg苜草素的高能低蛋白質(zhì)飼糧組蛋殼強(qiáng)度顯著低于對照組(P<0.05)。

表3　苜草素對蛋品質(zhì)的影響

2.3苜草素對蛋雞肝臟病變的影響

由表4可知，第30天，高能低蛋白質(zhì)飼糧組肝臟指數(shù)顯著高于對照組(P<0.05)。第60天，高能低蛋白質(zhì)飼糧組肝臟指數(shù)顯著高于對照組(P<0.05)；高能低蛋白質(zhì)飼糧組肝臟出血指數(shù)顯著高于對照組(P<0.05)。本研究中，第30天，各組的FLHS發(fā)生率分別為10%、60%、26%、25%、21%、31%、40%，第60天，各組的FLHS發(fā)生率分別為0、47%、39%、27%、24%、22%、30%。

表4　苜草素對肝臟病變的影響

3　討　論

3.1產(chǎn)蛋后期蛋雞FLHS病理模型的建立

利用高能低蛋白質(zhì)飼糧飼喂蛋雞能夠誘發(fā)蛋雞FLHS。董曉芳等[15]采用代謝能13.46 MJ/kg、粗蛋白質(zhì)13.0%的飼糧，飼喂36周齡海蘭灰商品蛋雞24 d即可誘發(fā)。本試驗(yàn)采用代謝能12.87 MJ/kg、粗蛋白質(zhì)13.84%的飼糧飼喂產(chǎn)蛋后期蛋雞30 d，蛋雞表現(xiàn)出明顯的FLHS病理特征。蛋雞FLHS的發(fā)生與諸多因素有關(guān)，飼糧能量過高或蛋白質(zhì)不足是其中之一。高能低蛋白質(zhì)飼糧引起FLHS，可能有3條途徑：1)在產(chǎn)蛋期，肝臟從頭大量合成脂肪，與載脂蛋白等結(jié)合形成極低密度脂蛋白，轉(zhuǎn)運(yùn)到肝外組織以滿足蛋黃對脂質(zhì)的需要；當(dāng)肝臟中脂肪合成速度大于向外轉(zhuǎn)運(yùn)速度時，過量的脂肪就會沉積在肝臟中；當(dāng)?shù)半u采食高能低蛋白質(zhì)飼糧后，合成的脂肪過多，由于低蛋白質(zhì)飼糧的供給，從而使載脂蛋白合成減少，阻礙了肝脂肪的轉(zhuǎn)運(yùn)，造成肝臟脂肪的沉積，從而誘發(fā)病征[16]。2)蛋雞采食高能低蛋白質(zhì)飼糧，會使體內(nèi)能量物質(zhì)過高，從而使脂肪酸β氧化作用增強(qiáng)，產(chǎn)生大量的自由基，超過了機(jī)體的生理補(bǔ)償能力，肝細(xì)胞受損，肝功能降低，發(fā)生脂肪肝[5]。3)蛋雞采食高能低蛋白質(zhì)飼糧，造成脂類物質(zhì)的堆積，肝細(xì)胞線粒體功能下降，阻礙了呼吸鏈電子的傳遞，生成有毒有害物質(zhì)，導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷，形成脂肪肝[17]。

3.2苜草素對產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的影響

本研究中，與對照組比較，高能低蛋白質(zhì)飼糧飼喂產(chǎn)蛋后期蛋雞第1～30天時，其平均日采食量、產(chǎn)蛋率、平均蛋重、產(chǎn)蛋量顯著降低，料蛋比顯著升高，與前人研究結(jié)果[18]一致，飼喂第1～60天時，趨勢更加顯著。與高能低蛋白質(zhì)飼糧組相比，第1～60天高能低蛋白質(zhì)飼糧中添加600 mg/kg苜草素能夠使蛋雞平均日采食量增加，第1～60天添加400、600、800、1 000 mg/kg苜草素能夠改善其引起的產(chǎn)蛋率降低、飼料利用率降低、產(chǎn)蛋量降低的情況。前人研究表明，飼糧中添加苜草素可促進(jìn)動物生長發(fā)育，提高飼料轉(zhuǎn)化率[6]。還有研究顯示，隨著苜蓿皂苷添加量的增多，蛋雞采食量在一定程度上表現(xiàn)出上升的趨勢[19]。另有研究報道，苜草素可顯著降低58～65周齡蛋雞的料蛋比[20]。此外，本研究中，高能低蛋白質(zhì)飼糧組與對照組比較，高能低蛋白質(zhì)飼糧飼喂產(chǎn)蛋后期蛋雞第42天時，雞蛋蛋白高度、哈氏單位顯著降低，與前人研究結(jié)果[21]一致。與高能低蛋白質(zhì)飼糧組相比，高能低蛋白質(zhì)飼糧中添加200、400、600、800 mg/kg苜草素后，能夠升高蛋白高度和哈氏單位。

本研究表明，添加苜草素能夠改善高能低蛋白質(zhì)飼糧引起的生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)下降，這可能與苜草素的活性成分有關(guān)。苜草素的主要活性成分有多糖、黃酮、皂苷。蛋雞長期進(jìn)食高脂飼糧可能會降低血液雌激素水平進(jìn)而引發(fā)產(chǎn)蛋率降低，而黃酮具有弱雌激素和抗雌激素活性雙向調(diào)節(jié)作用，當(dāng)雌激素水平低時，黃酮與雌激素受體結(jié)合表現(xiàn)出雌激素作用，從而改善高能低蛋白質(zhì)飼糧引起的產(chǎn)蛋率下降的情況[22]。作為苜草素的另一重要成分，潘俊良[19]研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，苜蓿皂苷對提高蛋雞采食量具有促進(jìn)作用，這與本試驗(yàn)的研究結(jié)果一致。另外，有研究表明，苜蓿草粉可以提高雞蛋哈氏單位[23]，這也與本試驗(yàn)的研究結(jié)果一致。

3.3苜草素對產(chǎn)蛋后期蛋雞肝臟病變的影響

蛋雞FLHS是由于脂肪代謝紊亂而造成肝臟脂肪堆積的營養(yǎng)性代謝疾病，目前對其發(fā)病機(jī)制還不清楚，但臨床最典型特征是肝出血。本研究中，高能低蛋白質(zhì)飼糧飼喂產(chǎn)蛋后期蛋雞30 d，顯著提高了肝臟指數(shù)，F(xiàn)LHS發(fā)生率為60%；而添加不同比例苜草素后，F(xiàn)LHS發(fā)生率顯著降低，表明苜草素能夠調(diào)控肝臟脂肪代謝。蛋雞長期進(jìn)食高脂飼糧，會使體內(nèi)能量儲存增加，體內(nèi)胰島素含量升高，胰島素會激活乙酰輔酶A羧化酶α的表達(dá)，促進(jìn)脂肪酸的合成，抑制脂肪的水解，這樣就會導(dǎo)致肝臟堆積過多的脂肪[24]，過多的脂肪容易發(fā)生過氧化作用而產(chǎn)生過多的自由基，改變生物膜的功能和結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致肝臟損傷[25]；筆者認(rèn)為這可能是高能低蛋白質(zhì)飼糧飼喂蛋雞導(dǎo)致FLHS發(fā)生的機(jī)制。有研究報道，苜草素能夠降低肉仔雞血液胰島素水平，升高血液甲狀腺激素水平，降低肝臟中脂肪酸合成酶mRNA的表達(dá)量，從而降低肝臟脂肪酸合成[26]；作為苜草素的重要成分，苜蓿皂苷能夠降低動物對脂肪的消化吸收，降低肝臟脂肪酸重新合成的原料乙酰輔酶A含量，進(jìn)而導(dǎo)致肝臟脂肪酸合成減少[19]；此外，苜蓿皂苷具有抗氧化作用[19]，苜草素的另一重要成分苜蓿多糖也具有清除自由基的抗氧化作用[8]；筆者認(rèn)為這可能是苜草素能夠降低蛋雞FLHS的機(jī)制。

4　結(jié)　論

高能低蛋白質(zhì)飼糧中添加200、400、600、800 和1 000 mg/kg苜草素在一定程度上可降低FLHS發(fā)生，綜合各個方面添加600 mg/kg苜草素預(yù)防FLHS效果最好。

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(責(zé)任編輯武海龍)

Prophylactic Effects of Polysavone on Fatty Liver Hemorrhagic Syndrome of Laying Hens in Late-Phase

GAO Yuanyuan1YANG Changjin2DONG Xiaofang1*TONG Jianming1GAO Yupeng2

(1. Institute of Animal Science, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China; 2. College of Animal Science and Technology, Northwest A&F University, Yangling 712100, China)

This experiment was conducted to investigate the prophylactic effects of polysavone (alfalfa extract) on fatty liver hemorrhagic syndrome (FLHS) of laying hens in late-phase. A total of 1 008JinghongNo. 1 laying hens aged 500 days were randomly divided into 7 groups, with 6 replicates per group and 24 hens per replicate. Hens in group Ⅰ (control group) were fed a common diet (metabolic energy 11.10 MJ/kg; crude protein 17.68%), while hens in groups Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ, Ⅴ, Ⅵ and Ⅶ (experimental groups) were fed high-energy and low-protein diets (metabolic energy 12.87 MJ/kg; crude protein 13.84%) supplemented with 0, 200, 400, 600, 800, 1 000 mg/kg ploysavone, respectively. The experiment lasted for 60 days. The results were as follows: 1) compared with the control group, feeding a high-energy and low-protein diet without polysavone for 30 days induced FLHS, at the 1 to 30 days, the average daily feed intake (ADFI), laying rate, egg weight and egg mass were significantly decreased (P<0.05), and the ratio of feed to egg was significantly increased (P<0.05), and at the 1 to 60 days, the trend was more obvious (P<0.05); at the 42 days, the albumen height and Haugh unit were significantly decreased (P<0.05). 2) Adding different gradients of ploysavone in high-energy low-protein diet could decrease the incidence rate of FLHS; increase the ADFI, laying rate, egg mass at the 1 to 60 days, decrease the ratio of feed to egg; increase albumen height and haugh unit at the 42 days. In conclusion, high-energy low-protein diet can induce FLHS in laying hens, while supplement of ploysavone can prevent the induction of FLHS.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2016, 28(10)：3153-3160]

polysavone; laying hens; fatty liver hemorrhagic syndrome

, associate professor， E-mail: xiaofangd1124@sina.com

10.3969/j.issn.1006-267x.2016.10.017

2016-04-11

“十二五”國家科技支撐計劃課題(2013BAD10B04)；國家蛋雞產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)(CARS-41-K16)；中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程(ASTIP-IAS08)

高媛媛(1989—)，女，山西柳林人，碩士研究生，研究方向?yàn)閯游餇I養(yǎng)與飼料科學(xué)。E-mail: gaoyuanyuan312@126.com

董曉芳，副研究員，碩士生導(dǎo)師，E-mail: xiaofangd1124@sina.com

S831

A

1006-267X(2016)10-3153-08