圓斑星鰈幼魚飼料中適宜的維生素C含量

王貞杰　陳四清　?！∏唷㈤L琳　胡建成　嚴(yán)俊麗　盧　斌

(1.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海201306；2.農(nóng)業(yè)部海洋漁業(yè)資源可持續(xù)利用重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所，青島266071)

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圓斑星鰈幼魚飼料中適宜的維生素C含量

王貞杰1,2陳四清2*常青2劉長琳2胡建成2嚴(yán)俊麗1,2盧斌1,2

(1.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海201306；2.農(nóng)業(yè)部海洋漁業(yè)資源可持續(xù)利用重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所，青島266071)

本試驗(yàn)通過研究飼料中維生素C含量對圓斑星鰈幼魚生長及消化、吸收、抗氧化、免疫功能的影響，以期得到圓斑星鰈幼魚飼料中適宜的維生素C含量。試驗(yàn)在(12.5±1.5) ℃的水溫下進(jìn)行，選擇體重為(38.0±0.8) g的健康圓斑星鰈幼魚，隨機(jī)分為7組(每組3個重復(fù)，每個重復(fù)30尾)，分別投喂維生素C含量為10.2、249.1、402.8、616.2、769.5、909.4和1 177.8 mg/kg的試驗(yàn)飼料。試驗(yàn)期為8周。結(jié)果表明：616.2 mg/kg維生素C組的增重率、飼料效率、攝食率均為最高，其增重率顯著高于10.2和909.4 mg/kg維生素C組(P<0.05)，飼料效率顯著高于其他各組(P<0.05)，攝食率顯著高于除1 177.8 mg/kg維生素C組外的其他各組(P<0.05)。達(dá)到組織肝臟和肌肉最大維生素C積累量的飼料維生素C含量為769.5 mg/kg。616.2和769.5 mg/kg維生素C組的血清中丙二醛含量顯著低于除402.8 mg/kg維生素C組外的其他各組(P<0.05)；402.8 mg/kg維生素C組的血清中過氧化氫酶和溶菌酶活力最高，顯著高于其他各組(P<0.05)；402.8、616.2、769.4 mg/kg維生素C組血清中超氧化物歧化酶活力顯著高于其他各組(P<0.05)。飼料維生素C含量為402.8、616.2或769.4 mg/kg時，胃和腸道蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶均處在較高水平。飼料中維生素C含量在249.1～616.2 mg/kg時可提高腸道皺襞高度，增加腸壁厚度，促進(jìn)腸道黏膜生長。結(jié)果顯示：飼料中維生素C含量在402.8～616.2 mg/kg時能有效滿足圓斑星鰈幼魚的生長需求，并可提高抗氧化能力、非特異性免疫力和消化吸收能力。

圓斑星鰈；維生素C；生長；免疫；抗氧化

維生素C(vitamin C)，又稱L-抗壞血酸，是動物機(jī)體生長、生產(chǎn)及維持正常生理機(jī)能必不可少的一種微量元素，具有調(diào)節(jié)血脂代謝，維持正常的心臟、中樞神經(jīng)和造血功能的作用，同時對機(jī)體內(nèi)眾多激素的合成起重要作用。維生素C還可以促進(jìn)魚類生長，緩解環(huán)境等不良應(yīng)激反應(yīng)，提高自身免疫力[1]。由于缺乏合成維生素C所必需的L-古洛糖酸內(nèi)酯氧化酶，多數(shù)魚類不能自身合成維生素C而必須從食物中獲取[2]。魚類缺乏維生素C常出現(xiàn)脊柱和軟骨變形、膠原物質(zhì)損傷、皮膚和內(nèi)臟出血癥狀等。

近年來關(guān)于維生素C對魚類生理機(jī)能影響的報道很多，在飼料中添加高水平的維生素C可以增強(qiáng)魚類的免疫力，加快創(chuàng)傷修復(fù)等。萬金娟等[3]研究證明，飼料中添加高水平的維生素C可使團(tuán)頭魴幼魚免疫力顯著提高。周立斌等[4]報道，當(dāng)維生素C添加量達(dá)到396.4 mg/kg時，花鱸幼魚的血清總補(bǔ)體含量和溶菌酶活力較高。宋學(xué)宏等[1]、Eo等[5]分別報道了維生素C對提高異育銀鯽、東方紅鰭豚對環(huán)境中污染物、刺激物的耐受力及對病菌的抗感染力以及非特異性免疫力有顯著作用。近年來，研究人員廣泛利用維生素C增強(qiáng)水產(chǎn)動物的抗病力，圓斑星鰈(Veraspervariegatus)作為重要的經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖魚類，提高其抗氧化和免疫功能對養(yǎng)殖業(yè)有重要意義，但至今有關(guān)維生素C對圓斑星鰈幼魚抗氧化和免疫功能影響的研究還未見報道。本研究通過對圓斑星鰈幼魚投喂不同維生素C添加量的飼料8周后，通過檢測圓斑星鰈幼魚的生長性能、消化酶活力、血清生化指標(biāo)、腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)以及組織維生素C積累量，以期得到促進(jìn)生長、增強(qiáng)免疫力和抗氧化能力的圓斑星鰈幼魚最佳維生素C需要量，為魚類免疫學(xué)及營養(yǎng)需求研究積累資料，并為維生素C在魚類養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)飼料

本試驗(yàn)采用單因素試驗(yàn)設(shè)計，以魚粉和酪蛋白為蛋白質(zhì)源，魚油和豆油為脂肪源，配制基礎(chǔ)飼料，其組成及營養(yǎng)水平如表1所示。其中，魚粉、豆粕、小麥粉、啤酒酵母和魚油購自青島七好生物科技有限公司，羧甲基纖維素、微晶纖維素購自臨夏州華安生物制品有限責(zé)任公司，磷脂、預(yù)混料、膽堿、磷酸二氫鈣購自青島金海力水產(chǎn)科技有限公司。以維生素C多聚磷酸酯(購自青島金海力水產(chǎn)科技有限公司，維生素C有效含量為35%)作為維生素C添加源，參照謝全森等[6]的報道，在基礎(chǔ)飼料中分別添加0、1 500、3 000、4 500、6 000、7 500和9 000 mg/kg維生素C多聚磷酸酯，共配制7種試驗(yàn)飼料，試驗(yàn)飼料中維生素C含量實(shí)測值分別為10.2、249.1、402.8、616.2、769.5、909.4和1 177.8 mg/kg。將飼料原料粉碎后過60目篩，混勻并制成粒徑為5 mm顆粒飼料，烘干后-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2試驗(yàn)動物與飼養(yǎng)管理

圓斑星鰈幼魚來自煙臺天源水產(chǎn)有限公司，選擇體重為(38.0±0.8) g的同一批次健康幼魚，隨機(jī)分為7組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)30尾，組間初始體重差異不顯著(P>0.05)。在直徑為53 cm、高60 cm的圓柱型水槽內(nèi)暫養(yǎng)1周，正式試驗(yàn)前停食24 h。由于冬季水溫低，攝食率也較低，每天14：00飽食投喂試驗(yàn)飼料1次并記錄攝食量，連續(xù)充氣增氧，保證充足的氧氣，安靜環(huán)境，光照為自然光源。每天定時(08:00和15:00)換水。試驗(yàn)期間水溫(12.5±1.5) ℃，pH 7.8±0.2，溶解氧含量6.0 mg/L以上。試驗(yàn)期8周。

表1　基礎(chǔ)飼料組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1)維生素預(yù)混料為每千克飼糧提供The vitamin premix provided the following per kg of the diet：維生素A乙酸酯 VA acetate 9 000 IU，VD32 500 IU，維生素E乙酸酯 VE acetate 100 mg，VB125 mg，VB240 mg，VB620 mg，VB1250.1 mg，VK 11 mg，生物素 biotin 1.2 mg，肌醇 inositol 700 mg，葉酸 folic acid 20 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 500 mg，煙酸 niacin 1 500 mg。

2)礦物質(zhì)預(yù)混料為每千克飼糧提供The mineral premix provided the following per kg of the diet：FeSO4·H2O 80 mg，CuSO4·5H2O 50 mg，MnSO4·H2O 45 mg，ZnSO4·H2O 50 mg，MgSO41 500 mg，KIO3(1%) 80 mg，Na2SO320 mg，CoCl250 mg，沸石粉 zeolite powder 3 165 mg。

1.3樣品采集與指標(biāo)測定

養(yǎng)殖試驗(yàn)起始和結(jié)束時分別對各桶中圓斑星鰈幼魚進(jìn)行記數(shù)、稱重，計算生長指標(biāo)。每桶隨機(jī)抽取5尾魚，從尾部靜脈取血2 mL左右，用1%的肝素鈉抗凝，低溫放置4 h后4 000 r/min離心10 min，分離的血清于-20 ℃保存，用于測定血清過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和溶菌酶活力及丙二醛(MDA)含量；隨后進(jìn)行解剖，分離出胃、腸道用于蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶活力測定；最后取肌肉，進(jìn)行肌肉營養(yǎng)成分分析。其中取1尾魚的腸道用Bouin氏液固定，制作常規(guī)石蠟切片，切片厚度為6 μm，蘇木精-伊紅(HE)染色。用目視測微尺測定每段腸樣中5個以上完整皺壁高度、黏膜厚度和腸壁厚度，并取平均值，顯微觀察并拍照(10×)。飼料及肌肉樣品均在105 ℃烘箱中烘至恒重，測得干物質(zhì)含量；采用失重法在馬福爐中(550±20) ℃灼燒5 h測定粗灰分含量；采用凱氏定氮法(VELP，UDK142 Autom Atic Distillation Unit，意大利)測定粗蛋白質(zhì)含量；以石油醚為抽提液，采用索氏抽提法(SOXTEC2050 FOSS脂肪測定儀，瑞典)測定粗脂肪含量；各種酶的活力采用南京建成生物工程研究生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行測定。維生素C含量采用2，4-二硝基苯肼法測定。

1.4計算公式

增重率(WGR)=100×(試驗(yàn)?zāi)┢骄w重-

試驗(yàn)初平均體重)/試驗(yàn)初平均體重；

成活率(SR)=100×試驗(yàn)?zāi)~體尾數(shù)/

試驗(yàn)初魚體尾數(shù)；

飼料效率(FER)=100×總增重/投飼總量；

特定生長率(SGR)=100×(ln試驗(yàn)?zāi)┢骄w重-

ln試驗(yàn)初平均體重)/養(yǎng)殖天數(shù)；

攝食率(FR)=100×投飼總量/[試驗(yàn)初魚體

總重+試驗(yàn)?zāi)~體總重)/2×

養(yǎng)殖天數(shù)]。

1.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計

試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SPSS 17.0軟件的ANOVA過程進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較檢驗(yàn)，P<0.05為差異顯著。

2　結(jié)果與分析

2.1飼料中維生素C含量對圓斑星鰈幼魚生長性能的影響

飼料中維生素C含量對圓斑星鰈幼魚生長性能的影響見表2。經(jīng)過56 d的養(yǎng)殖試驗(yàn)，圓斑星鰈幼魚表現(xiàn)出較好的生長趨勢，體重由38.8 g增長到84.6 g，增加了110%。各組間的特定生長率、成活率沒有顯著差異(P>0.05)。隨著飼料中維生素C含量的增加，圓斑星鰈幼魚攝食率、增重率、飼料效率先呈升高趨勢；當(dāng)維生素C含量達(dá)到或超過616.2 mg/kg時，出現(xiàn)生長平臺期或受到抑制呈下降趨勢。249.1、402.8、616.2、769.5和1 177.8 mg/kg維生素C組的增重率均顯著高于10.2和909.4 mg/kg維生素C組(P<0.05)，616.2 mg/kg維生素C組的飼料效率顯著高于其他各組(P<0.05)，616.2 mg/kg維生素C組的攝食率顯著高于除1 177.8 mg/kg維生素C組外的其他各組(P<0.05)。由表2中數(shù)據(jù)可以得出，圓斑星鰈幼魚達(dá)到最大生長時，飼料中維生素C含量為606.2 mg/kg。

表2　飼料中維生素C含量對圓斑星鰈幼魚生長性能的影響

同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

Values with different letter superscripts in the same row were significantly different (P<0.05). The same as below.

2.2飼料中維生素C含量對圓斑星鰈幼魚肌肉營養(yǎng)成分的影響

飼料中維生素C含量對圓斑星鰈幼魚肌肉營養(yǎng)成分的影響見表3。飼料中維生素C含量對圓斑星鰈幼魚肌肉中水分含量的影響沒有顯著差異(P>0.05)。249.1和402.8 mg/kg維生素C組肌肉中粗灰分的含量顯著高于除909.4 mg/kg維生素C組外的其他各組(P<0.05)。249.1、402.8、616.2、769.5 mg/kg維生素C組肌肉中粗蛋白質(zhì)含量差異不顯著(P>0.05)，但均顯著高于10.2、909.4、1 177.8 mg/kg維生素C組(P<0.05)。隨著飼料中維生素C含量由10.2 mg/kg增加到402.8 mg/kg，肌肉中粗脂肪含量顯著升高(P<0.05)，再繼續(xù)增加維生素C含量達(dá)到769.5 mg/kg后，肌肉中粗脂肪含量顯著降低(P<0.05)。

表3　飼料中維生素C含量對圓斑星鰈幼魚肌肉營養(yǎng)成分的影響

2.3飼料中維生素C含量對圓斑星鰈幼魚組織維生素C積累量的影響

由圖1可知，肝臟、肌肉和血清中維生素C含量均隨著飼料中維生素C含量的增加呈先顯著上升(P<0.05)后趨于平穩(wěn)的趨勢。圖1-A和圖1-B顯示當(dāng)飼料中維生素C含量達(dá)到769.5 mg/kg時，肝臟和肌肉中維生素C的積累達(dá)到飽和，飼料中維生素C含量在1 177.8 mg/kg時肝臟維生素C含量有所下降但仍顯著高于飼料中維生素C含量為10.2、249.1、402.8、616.2 mg/kg時(P<0.05)。血清中維生素C含量在飼料中維生素C含量達(dá)到909.4 mg/kg后出現(xiàn)平臺期(圖1-C)。綜合以上結(jié)果得出，維生素C在組織中最大積累量出現(xiàn)在飼料維生素C含量為769.5 mg/kg時。

2.4飼料中維生素C含量對圓斑星鰈幼魚血清抗氧化系統(tǒng)及溶菌酶活力的影響

由圖2-A可知，隨著飼料中維生素C含量的增加，血清中MDA含量先降低，在飼料中維生素C含量為616.2和769.5 mg/kg時出現(xiàn)低谷，顯著低于除402.8 mg/kg維生素C組外的其他各組(P<0.05)；當(dāng)飼料中維生素C含量高于769.5 mg/kg時，血清中MDA含量又開始升高。

由圖2-B可知，血清中CAT活力在飼料中維生素C含量為402.8 mg/kg時達(dá)到最高(9.05 U/mL)，顯著高于其他各組(P<0.05)；飼料中維生素C含量超過402.8 mg/kg后，血清中CAT活力受到抑制呈下降趨勢，但仍顯著高于10.2 mg/kg維生素C組(P<0.05)。

由圖2-C可知，血清中SOD活力在飼料中維生素C含量為402.8、616.2、769.4 mg/kg時處在高峰并出現(xiàn)平臺期；飼料中維生素C含量高于769.4 mg/kg后血清中SOD活力顯著下降(P<0.05)，但仍顯著高于10.2 mg/kg維生素C組(P<0.05)。

由圖2-D可知，血清中溶菌酶活力隨著飼料中維生素C含量的增加出現(xiàn)先升高后下降的趨勢，在飼料中維生素C含量為402.8 mg/kg時達(dá)到最高，顯著高于其他各組(P<0.05)，飼料中維生素C含量高于402.8 mg/kg后溶菌酶活力受到抑制呈下降趨勢。

2.5飼料中維生素C對圓斑星鰈幼魚消化酶活力的影響

飼料中維生素C對圓斑星鰈幼魚淀粉酶和蛋白酶活力的影響見表4。胃和腸道蛋白酶活力隨著飼料中維生素C含量的增加呈先升高后降低的趨勢。胃蛋白酶活力在769.5 mg/kg維生素C組最高，顯著高于10.2、249.1、402.8 mg/kg維生素C組(P<0.05)；腸道蛋白酶活力在616.2 mg/kg維生素C組最高，顯著高于除769.5 mg/kg維生素C組外的其他各組(P<0.05)。胃淀粉酶活力在飼料中維生素C含量為402.8 mg/kg時達(dá)到最高，繼續(xù)增加維生素C含量后未發(fā)生顯著變化(P>0.05)，但在維生素C含量達(dá)到1 177.8 mg/kg時出現(xiàn)下降，但仍顯著高于10.2 mg/kg維生素C組(P<0.05)。腸道淀粉酶活力隨著飼料中維生素C含量的增加而呈先升高后下降趨勢，在維生素C含量為616.2 mg/kg時達(dá)到最高。

圖2　飼料中維生素C含量對圓斑星鰈幼魚血清抗氧化系統(tǒng)及溶菌酶活力的影響

飼料中維生素C對圓斑星鰈幼魚脂肪酶活力的影響見表5。胃和腸道脂肪酶活力隨著飼料中維生素C含量的增加呈先升高后降低的趨勢。胃脂肪酶活力飼料中在維生素C含量為616.2 mg/kg時最高，與249.1、402.8、769.5 mg/kg維生素C組差異不顯著(P>0.05)；飼料中維生素C含量高于769.5 mg/kg后胃脂肪酶活力有所下降，與10.2 mg/kg維生素C組差異不顯著(P>0.05)。腸道脂肪酶活力在402.8 mg/kg維生素C組最高，顯著高于除616.2 mg/kg維生素C組外的其他各組(P<0.05)。

表5　飼料中維生素C含量對圓斑星鰈幼魚脂肪酶活力的影響

2.6飼料中維生素C含量對圓斑星鰈幼魚腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

飼料中維生素C含量對圓斑星鰈幼魚腸道顯微結(jié)構(gòu)指標(biāo)的影響見表6。402.8、616.2、769.5 mg/kg維生素C組的皺襞高度與腸壁厚度均顯著高于其他組(P<0.05)，909.4、1 177.8 mg/kg維生素C組的皺襞高度雖較上述幾組顯著降低(P<0.05)，但仍顯著高于10.2 mg/kg維生素C組(P<0.05)，而10.2、249.1、909.4、1 177.8 mg/kg維生素C組的腸壁厚度差異不顯著(P>0.05)。隨著飼料中維生素C含量的增加，黏膜厚度呈先增加后降低的趨勢，616.2、769.5 mg/kg維生素C組顯著高于其他各組(P<0.05)，402.8、909.4、1 177.8 mg/kg維生素C組間無顯著差異(P>0.05)，但均顯著高于10.2 mg/kg維生素C組(P<0.05)。

飼料中維生素C對圓斑星鰈腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響(中腸)見圖3。10.2 mg/kg維生素C組中腸壁厚度較薄，腸皺襞較粗，排列稀疏，絨毛黏膜厚度較薄(圖3-Ⅰ)；隨著飼料中維生素C含量的逐漸增加，腸壁厚度開始增加，腸皺襞變得細(xì)長，排列緊密整齊，絨毛厚度增厚，上皮細(xì)胞保持完整(圖3-Ⅱ、圖3-Ⅲ、圖3-Ⅳ、圖3-Ⅴ)；飼料中維生素C含量超過769.5 mg/kg后腸皺襞變得粗短稀疏，腸壁厚度變薄(圖3-Ⅵ、圖3-Ⅶ)。

表6　飼料中維生素C含量對圓斑星鰈幼魚腸道顯微結(jié)構(gòu)指標(biāo)的影響

IM:腸道黏膜 intestinal mucosa；IT:腸壁厚度 intestinal wall thickness；FH:皺襞高度 fold height。圖Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ分別表示10.2、249.1、402.8、616.2、769.5、909.4、1 177.8 mg/kg維生素C組 Figures Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ, Ⅴ, Ⅵ and Ⅶ represented 10.2, 249.1, 402.8, 616.2, 769.5, 909.4 and 1 177.8 mg/kg vitamin C groups, respectively.

圖3飼料中維生素C含量對圓斑星鰈幼魚腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響(中腸)

Fig.3Effects of dietary vitamin C content on intestinal morphology of juvenile spotted halibut (mid-intestine, 10×)

3　討　論

3.1飼料中維生素C含量對圓斑星鰈幼魚生長性能的影響

研究報道，在飼料中添加一定水平的維生素C可以有效加快魚類的生長，但是過高水平的維生素C反而對魚類的生長起到抑制作用[7]，由于本試驗(yàn)在冬季進(jìn)行，養(yǎng)殖水溫較低，試驗(yàn)結(jié)果中最大增重率為110%，整體增重率和成活率相對工廠生產(chǎn)養(yǎng)殖較低，隨著飼料中維生素C含量的增加，圓斑星鰈幼魚的成活率沒有顯著影響，這一結(jié)果與張道波等[8]報道的飼料中添加維生素C對牙鲆的成活率影響不顯著的研究結(jié)果相一致。隨著飼料中維生素C含量的增加，圓斑星鰈幼魚的特定生長率、增重率和飼料效率先呈升高趨勢，當(dāng)飼料中維生素C含量達(dá)到或超過616.2 mg/kg時，出現(xiàn)生長平臺期或受到抑制呈下降趨勢，該結(jié)果與在花鱸[9]、大口黑鱸[10]等的上的研究結(jié)果一致，證明在飼料中添加適量的維生素C可以提高海水魚類的生長性能。數(shù)據(jù)顯示圓斑星鰈幼魚獲得最大特定生長率、增重率和飼料效率的飼料維生素C含量為616.2 mg/kg，低于漠斑牙鲆[6]最適生長所需維生素C(0.1%～0.2%)，但高于鱸[6]、翹嘴紅鲌[11]等，其維生素C有效需求量分別為50.1和70.0 mg/kg，結(jié)果的差異可能是不同魚類生理代謝維生素C的效率不同所致。

3.2飼料中維生素C含量對圓斑星鰈幼魚肌肉營養(yǎng)成分的影響

由本試驗(yàn)結(jié)果可知，圓斑星鰈幼魚肌肉中水分含量不受飼料維生素C含量的顯著影響，粗灰分含量在249.1和402.8 mg/kg維生素C組較其他組升高。而肌肉粗蛋白質(zhì)含量隨維生素C含量增加先顯著升高，在維生素C含量達(dá)到909.4 mg/kg后開始下降，這與在羅非魚[9]、軍曹魚[12]上得出的肌肉中粗蛋白質(zhì)、粗灰分含量不受飼料維生素C含量的影響的結(jié)果不同。維生素C是肉堿合成的輔助因子[13]，而肉堿又與脂肪代謝有密切聯(lián)系，缺乏維生素C時，機(jī)體還表現(xiàn)出膠原蛋白合成受阻，因此維生素C在某種程度上可以調(diào)控魚體的成分。目前這些研究結(jié)果存在差異除了與試驗(yàn)對象和試驗(yàn)條件有關(guān)，還可能與維生素C的添加量有關(guān)。圓斑星鰈幼魚肌肉中粗脂肪含量隨維生素C含量的增加呈先升高后下降的趨勢，這與周歧存等[7]在點(diǎn)帶石斑魚的研究中得出的飼料中缺乏維生素C或添加量過高均可使體脂含量下降的結(jié)果相同，其可能原因是維生素C參與體內(nèi)脂肪的代謝，其作用機(jī)理還需進(jìn)一步研究。

3.3飼料中維生素C含量對圓斑星鰈幼魚組織維生素C積累量的影響

肝臟、血清和肌肉中的維生素C含量通常作為評價魚類維生素C營養(yǎng)狀態(tài)的重要指標(biāo)[9]。Dabrowski等[14]研究認(rèn)為使組織中維生素C含量達(dá)到穩(wěn)定時的飼料中維生素C含量即為最適需要量。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著飼料維生素C含量的增加，組織中維生素C含量先呈上升趨勢，當(dāng)飼料中維生素C含量達(dá)到769.5 mg/kg時肝臟和肌肉中維生素C的積累達(dá)到飽和狀態(tài)。肝臟中維生素C含量明顯高于肌肉和血清，說明肝臟是體內(nèi)維生素C主要的積累和代謝場所。隨著飼料維生素C含量的增加血清中維生素C含量持續(xù)上升，各組間差異較大，說明魚體血清中維生素C含量取決于飼料中維生素C的含量，這與文杰[15]的研究報道一致。本試驗(yàn)結(jié)果得出圓斑星鰈幼魚飼料中維生素C含量在769.5 mg/kg時組織維生素C積累量最大。

3.4飼料中維生素C含量對圓斑星鰈幼魚血清抗氧化系統(tǒng)及溶菌酶活力的影響

動物機(jī)體提高抗氧化能力，清除體內(nèi)過多自由基的防御系統(tǒng)有酶系統(tǒng)和非酶系統(tǒng)。其中酶系統(tǒng)主要包括SOD和CAT等抗氧化酶。SOD和CAT可以有效清除體內(nèi)自由基，從而使自由基處于形成與消除的平衡狀態(tài)，避免機(jī)體產(chǎn)生過氧化損傷。但機(jī)體抗氧化酶活力不高時機(jī)體抗氧化能力下降，使機(jī)體不能及時有效地清除產(chǎn)生的氧自由基。氧自由基加快機(jī)體脂質(zhì)過氧化，從而使脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA的含量增加[16]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)飼料中維生素C含量達(dá)到402.8 mg/kg時，血清中SOD和CAT的活力最高，MDA含量最低，此時機(jī)體抗氧化能力增強(qiáng)。此結(jié)果表明通過外源添加維生素C可以中和或消除一定量的MDA，從而使機(jī)體油脂氧化減輕。當(dāng)飼料中維生素C含量超過769.5 mg/kg時，血清中SOD和CAT活力下降，從而清除體內(nèi)自由基的能力下降，使機(jī)體脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物增加，MDA含量上升。上述結(jié)果說明飼料中維生素C含量過高或過低都不利于圓斑星鰈幼魚的抗氧化能力的發(fā)揮，這與周顯青等[17]、明建華等[18]的研究結(jié)果一致。

溶菌酶是魚類非特異性免疫系統(tǒng)中重要的水解酶。吞噬細(xì)胞之所以能吞噬有害物質(zhì)，是因?yàn)槿芫杆飧锾m氏陽性菌細(xì)胞壁中黏肽的乙酰氨基多糖并使之裂解釋放，消解入侵的有害細(xì)菌等，以防御機(jī)體受損[19-20]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在飼料中維生素C含量為402.8 mg/kg時溶菌酶活力達(dá)到最高，當(dāng)維生素C含量超過402.8 mg/kg時開始下降，在凡納濱對蝦[21]、花鱸[4]、大菱鲆[22]等上也得到相似的結(jié)果。該結(jié)果表明圓斑星鰈幼魚飼料中維生素C含量為402.8 mg/kg時非特異性免疫力最強(qiáng)。

3.5飼料維生素C含量對圓斑星鰈幼魚消化酶活力的影響

魚類要依靠胃腸道消化吸收營養(yǎng)物質(zhì)，反映胃腸道消化能力的重要指標(biāo)是其消化酶的活力。當(dāng)營養(yǎng)條件變化時，魚類自身會調(diào)節(jié)酶的合成和分泌，以適應(yīng)新的代謝。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著飼料中維生素C含量的增加，蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活力呈先升高后降低的趨勢，消化酶活力與快速生長增重呈正相關(guān)。飼料中添加一定量的維生素C提高了圓斑星鰈的胃腸道消化酶活力，進(jìn)而促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，這一結(jié)果與葉元土等[23]的研究結(jié)果相一致。當(dāng)飼料中維生素C含量超過769.5 mg/kg時，胃和腸道蛋白酶和淀粉酶的活力下降，這與生長性能、血清抗氧化酶活力的下降節(jié)點(diǎn)一致，說明維生素C添加過量對圓斑星鰈幼魚各項(xiàng)生理指標(biāo)起抑制作用。據(jù)報道，幼健鯉對于泛酸[24]、煙酸[25]等營養(yǎng)物質(zhì)的研究也得到這一規(guī)律。胃和腸道脂肪酶活力在維生素C含量為402.8 mg/kg時最高，維生素C含量高于402.8 mg/kg后脂肪酶活力與維生素C含量呈負(fù)相關(guān)，該結(jié)果與在雜食性的鯉魚[26]上所得結(jié)果相反，可能原因是飼料中蛋白質(zhì)水平較高，使其有充足的蛋白質(zhì)用于供能和沉積，使機(jī)體對脂肪的需求減少。本試驗(yàn)得出促進(jìn)圓斑星鰈幼魚消化吸收的飼料維生素C最低含量為616.2 mg/kg。

3.6飼料維生素C含量對圓斑星鰈幼魚腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

動物主要在腸道吸收營養(yǎng)物質(zhì)，但水生動物的腸道一般沒有腸絨毛只有皺璧，具有吸收營養(yǎng)物質(zhì)功能的腸上皮細(xì)胞分布在皺襞上。研究表明，魚類腸道皺璧高度可以反映腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力[27]。皺襞高度越高、數(shù)量越多，小腸的吸收面積越大。腸壁厚度影響營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用率[28]，黏膜厚度反映腸道發(fā)育成熟程度[29]。從本試驗(yàn)對圓斑星鰈幼魚腸道切片組織的觀察可知，249.1、402.8和616.2 mg/kg維生素C組的皺襞高度、黏膜厚度與腸壁厚度均顯著高于其他組，表明飼料中適宜含量的維生素C能有效促進(jìn)魚類腸道皺襞高度和黏膜厚度的增加；其他組皺襞高度較短，排列稀疏，黏膜及腸壁較薄，說明飼料中缺乏或過量的維生素C不利于魚類腸道的生長發(fā)育及對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。本試驗(yàn)中，促進(jìn)圓斑星鰈幼魚腸道生長發(fā)育，利于營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的維生素C含量為249.1～616.2 mg/kg。目前關(guān)于添加維生素C對海水魚腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)影響的研究較少，對幼建鯉[30-31]的研究較多，其研究結(jié)果與本試驗(yàn)結(jié)果一致。

4　結(jié)　論

① 由結(jié)果可知，促進(jìn)圓斑星鰈幼魚生長的飼料維生素C含量為616.2 mg/kg，達(dá)到組織最大維生素C積累量的飼料維生素C含量為769.5 mg/kg，使圓斑星鰈幼魚具有最高抗氧化能力和非特異性免疫力的飼料維生素C含量為402.8 mg/kg，促進(jìn)圓斑星鰈幼魚營養(yǎng)物質(zhì)消化的飼料維生素C含量為616.2 mg/kg，促進(jìn)腸道生長發(fā)育、利于營養(yǎng)物質(zhì)吸收的飼料維生素C含量為249.1～616.2 mg/kg。

② 從水產(chǎn)養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)效益和病害方面考慮，建議圓斑星鰈幼魚飼料中維生素C的實(shí)際含量在402.8～616.2 mg/kg。

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(責(zé)任編輯菅景穎)

Optimal Dietary Vitamin C Content for Juvenile Spotted Halibut (Veraspervariegates)

WANG Zhenjie1,2CHEN Siqing2*CHANG Qing2LIU Changlin2HU Jiancheng2YAN Junli1,2LU Bin1,2

(1. College of Fishers and Life Sciences, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China; 2. Key Laboratory for Sustainable Utilization of Marine Fisheries Resource, Yellow Sea Fisheries Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China )

This experiment was conducted to study the effects of dietary vitamin C content on growth and the functions of digestion, absorption, antioxidant and immune of juvenile spotted halibut (Veraspervariegates), in order to get the optimal dietary vitamin C content for juvenile spotted halibut. Water temperature was maintained at (12.5±1.5) ℃ in this experiment. Juvenile spotted halibut with the body weight of (38.0±0.8) g were randomly assigned into 7 groups with 3 replicates per group and 30 fish per replicate, and fed 7 experimental diets with the vitamin C content were 10.2, 249.1, 402.8, 616.2, 769.5, 909.4 and 1 177.8 mg/kg, respectively. The experiment lasted for 8 weeks. The results showed as follows: the highest weight gain rate, feed efficiency ratio and feeding rate were found in 616.2 mg/kg vitamin C group. The weight gain rate of 616.2 mg/kg vitamin C group was significantly higher than that of 10.2 and 909.4 mg/kg vitamin C groups (P<0.05), the feed efficiency ratio of 616.2 mg/kg vitamin C group was significantly higher than that of other groups (P<0.05), and the feeding rate of 616.2 mg/kg vitamin C group was significantly higher than that of other groups except 1 177.8 mg/kg vitamin C group (P<0.05). The fish had the maximal liver and muscle vitamin C accumulation when dietary vitamin C content was 769.5 mg/kg. Serum malondialdehyde content of 616.2 and 769.5 mg/kg vitamin C groups was significantly lower than that of other groups except 402.8 mg/kg vitamin C group (P<0.05). The activities of serum catalase and lysozyme in 402.8 mg/kg vitamin C group had the highest values, which were significantly higher than those of other groups (P<0.05). Serum superoxide dismutase activity of 402.8, 616.2 and 769.4 mg/kg vitamin C groups was significantly higher than that of other groups (P<0.05). Protease, amylase and lipase activities in stomach and intestine were at a high level when dietary vitamin C content was 402.8, 616.2 or 769.4 mg/kg. Dietary vitamin C content within the scope of 249.1 to 616.2 mg/kg could promote the growth of the intestinal mucosa and increase the fold height and intestinal wall thickness. These results suggest that dietary vitamin C content within the scope of 402.8 to 616.2 mg/kg can effectively meet the need of growth, and improve the antioxidant capacity, non-specific immunity, digestion and absorption ability of juvenile spotted halibut.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2016, 28(10)：3134-3144]

juvenile spotted halibut (Veraspervariegates); vitamin C; growth; immunity; antioxidant

, professor, E-mail: chensq@ysfri.ac.cn

10.3969/j.issn.1006-267x.2016.10.015

2016-04-24

山東省自主創(chuàng)新成果轉(zhuǎn)化專項(xiàng)(2013ZHZX2A0803)；鰲山科技創(chuàng)新計劃(2015ASKJ02-03)

王貞杰(1990—)，女，山東棗莊人，碩士研究生，從事水產(chǎn)養(yǎng)殖研究。E-mail: 1218370725@qq.com

陳四清，研究員，碩士生導(dǎo)師，E-mail: chensq@ysfri.ac.cn

S963

A

1006-267X(2016)10-3134-11