一次性使用鼻飼管的生物相容性研究

高勇　李強　趙小磊　張娟麗

1 河南省食品藥品審評查驗中心?。ㄠ嵵荨?50004）　2 河南省醫(yī)療器械檢驗所?。ㄠ嵵荨?50003）

一次性使用鼻飼管的生物相容性研究

高勇1李強1趙小磊1張娟麗2

1 河南省食品藥品審評查驗中心（鄭州450004）2 河南省醫(yī)療器械檢驗所（鄭州450003）

內(nèi)容提要： 一次性使用鼻飼管已經(jīng)廣泛應用于醫(yī)療機構(gòu)，特別是對危重、昏迷病人維持生命、配合臨床治療起到了非常重要的作用。本研究參照“GB/T16886.1-2011《醫(yī)療器械生物學評價第1部分：風險管理過程中的評價與試驗》”，對一次性使用鼻飼管進行了體內(nèi)外生物學評價。試驗結(jié)果表明，一次性使用鼻飼管具有良好的生物相容性。

鼻飼管細胞毒性試驗遲發(fā)型超敏反應試驗

一次性使用鼻飼管在臨床上的應用相當廣泛，特別是對危重、昏迷、外科手術(shù)后病人，對維持病人營養(yǎng)、延長生命、配合臨床治療起到了至關(guān)重要的作用。因此，鼻飼管是否具有良好的生物相容性，對病人的生命安全會產(chǎn)生直接的影響。為了系統(tǒng)評估鼻飼管的生物相容性，我們參照了GB/T16886.1-2011《醫(yī)療器械生物學評價第1部分：風險管理過程中的評價與試驗》的要求［1～2］，同時考慮了其制造材料聚氨酯本身的特點，以及與人體接觸的時間和方式等特點，選取了體外細胞毒性試驗、皮內(nèi)反應和遲發(fā)型超敏反應試驗等體內(nèi)外生物學試驗，對鼻飼管進行了系統(tǒng)的生物學評價。

1.試驗材料

1.1試驗樣品

一次性使用鼻飼管以聚氨酯為原材料，分別來自廠家A和廠家B。

1.2試驗試劑

小鼠成纖維細胞L-929（購自中國科學院上海生命科學研究院細胞庫），胎牛血清（賽默飛世爾生物化學制品有限公司），胰蛋白酶（Thermo），MTT溶液（Sigma公司），RPMI1640培養(yǎng)基（賽默飛世爾生物化學制品有限公司），完全弗氏佐劑（Sigma公司），植物油（天津嘉里糧油工業(yè)有限公司），雄性豚鼠（山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司，合格證號：0021950），日本大耳白（山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司，合格證號：37005400000006）。

2.樣品制備［3］

2.1細胞毒性試驗

在無菌條件下，以0.2g/mL的浸提比例，稱取鼻飼管4g，然后加入含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液20mL，放置于37°C的CO2細胞培養(yǎng)箱中孵育24h。陽性對照用5%二甲基亞砜（DMSO），陰性對照材料用高密度聚乙烯，稱取高密度聚乙烯4g，按0.2g/mL的浸提比例加入含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基20mL，置于37°C培養(yǎng)箱孵育24 h。

2.2皮內(nèi)反應試驗

參考國標GB/T16886.12-2005的要求，浸提介質(zhì)為0.9%的氯化鈉注射液，以0.2g/mL的浸提比例，稱取鼻飼管4g，然后加入0.9%的氯化鈉注射液20mL，密封后，放入70°C恒溫箱中浸提24h。植物油浸提液制備方法與0.9%的氯化鈉注射液浸提液的制備方法相同。分別取對照液0.9%氯化鈉注射液和植物油10mL，70°C恒溫箱中放置24h。

2.3遲發(fā)型超敏反應最大劑量試驗

浸提方法同皮內(nèi)反應試驗，皮內(nèi)誘導階段試劑的配置，注射弗氏完全佐劑與生理鹽水以50:50（體積比）比例混合的穩(wěn)定性乳化劑，試驗樣品液以50:50的體積比例與穩(wěn)定性乳化劑混合后進行皮內(nèi)注射。

3.試驗方法

3.1細胞毒性試驗

將生長旺盛的小鼠成纖維細胞L929，用胰蛋白酶消化成細胞懸液后，調(diào)節(jié)細胞密度至1×104個細胞/mL，將配置好的細胞懸液接種于96孔培養(yǎng)板，分別設空白對照組、陰性對照組、陽性對照組和供試品組。每組各設6孔，每孔接種100μL細胞懸液，然后將96孔板放置于37°C5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，棄去原培養(yǎng)液?？瞻讓φ战M加入新鮮的RPMI1640培養(yǎng)液，陰性對照組加入高密度聚乙烯（HDPE）浸提液，陽性對照組用5%DMSO溶液。供試品組加入樣品浸提液，每孔100μL，置于37°C5%CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)72h。更換培養(yǎng)液72h后，將96孔板放置于倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，然后每孔加入質(zhì)量濃度為5g/L的MTT溶液20μL，然后放入37°C5%CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)4h后，棄去孔內(nèi)液體，每孔加入150μLDMSO，置振蕩器上振蕩10min，在酶標儀570nm和630nm波長下測定吸光度OD值，計算相對增殖率（relative growth rate，RGR，RGR=實驗組OD值/空白對照組OD值×100%）［4］。

3.2皮內(nèi)反應試驗

日本大耳白兔6只，試驗前4h～18h的，徹底除去動物背部脊柱兩側(cè)被毛，然后用75%的酒精消毒皮膚暴露區(qū)域，在每只兔脊柱一側(cè)的5個點皮內(nèi)注射0.2mL生理鹽水制備的樣品浸提液，每注射點間隔2cm，后5個點注射生理鹽水對照液。在每只兔的脊柱另一側(cè)注射植物油制備的樣品浸提液和植物油對照液，操作步驟同上。注射后在24h、48h、72h觀察記錄各注射部位狀況，按標準給出的記分系統(tǒng)對每一觀察期各注射部位的紅斑和水腫的組織反應評分，并記錄試驗結(jié)果。在72h評分后，分別將每一試驗樣品和溶劑對照的全部紅斑與水腫記分相加，再除以18［3（動物數(shù)）×3（觀察期）×2（記分類型）］，計算出每一試驗樣品和每一對應溶劑對照的綜合平均記分［5］。

3.3遲發(fā)型超敏反應最大劑量試驗

取豚鼠25只，分成三組，分別是試驗樣品組A、B和對照組，試驗樣品組A、B各10只豚鼠，對照組5只豚鼠。皮內(nèi)誘導階段：每只豚鼠在約2 cm×4 cm剪毛區(qū)內(nèi)注射3排（每排注射2個點）。第1排皮內(nèi)注射弗氏完全佐劑與生理鹽水以50:50（體積比）比例混合的穩(wěn)定性乳化劑。第2排皮內(nèi)注射試驗樣品浸提液，對照組只注射生理鹽水。第3排樣品浸提液以50:50的體積比例與弗氏完全佐劑和生理鹽水配制成的穩(wěn)定性乳化劑混合后進行皮內(nèi)注射，對照組注射生理鹽水與佐劑配制成的乳化劑。局部誘導階段后7d，試驗區(qū)用10%的十二烷基硫酸鈉進行預處理，按摩導入皮膚，采用面積約8cm2的敷貼片浸透樣品浸提液后，局部貼敷于每只動物的肩胛骨內(nèi)側(cè)部位，覆蓋誘導注射點。用封閉式包扎帶固定濾紙片，并于48h±2h后除去包扎帶和敷貼片。對照組使用生理鹽水同法操作。激發(fā)階段：局部誘導階段后14 d（±1d），用試驗樣品激發(fā)全部試驗動物和對照動物，將適宜的敷貼片置于試驗樣品或生理鹽水中浸透，局部貼敷于誘導階段未試驗的每只動物的上腹部。用封閉式包扎帶固定，并于24h±2h后除去包扎帶和敷貼片。除去敷貼片后24h和48h后，觀察試驗組和對照組動物激發(fā)部位皮膚情況。按Magnusson和Kligman分級標準對每一激發(fā)部位和每一觀察時間皮膚紅斑和水腫反應進行描述并分級［5］。

3.4統(tǒng)計學處理

實驗組數(shù)據(jù)以x±s表示，組間比較采用t檢驗。

4.試驗結(jié)果

4.1細胞毒性試驗（MTT比色法）

在倒置顯微鏡下觀察，空白對照組、陰性對照組及試驗樣品組A、B的細胞貼壁生長良好，細胞呈梭形或不規(guī)則三角形；而陽性對照組細胞貼壁很少，死亡細胞較多。試驗結(jié)果顯示來自廠家A和B的鼻飼管的細胞毒性均為1級。見表1。

表1.試驗樣品的細胞相對增值率

4.2皮內(nèi)反應試驗

試驗樣品A、B組：生理鹽水浸提液與生理鹽水對照平均記分之差均為0；植物油浸提液與植物油對照平均記分之差也均＜1.0（A為0.2，B為0）。所以在本試驗條件下，試驗樣品浸提液A、B對皮膚無刺激作用。

4.3遲發(fā)型超敏反應試驗

對照組動物記分均為0，試驗組A、B動物記分均為0，所以，在本試驗條件下，試驗樣品浸提液A、B對豚鼠無遲發(fā)型致敏作用。

5.討論

一次性使用鼻飼管在臨床使用中直接與鼻腔粘膜、食管粘膜以及胃粘膜直接接觸，因此，細胞形態(tài)和數(shù)量的變化能夠最直接地反應鼻飼管材料對細胞增值及代謝功能的影響。實驗結(jié)果表明，鼻飼管A、B的細胞毒性均為1級，皮內(nèi)反應試驗、遲發(fā)性超敏反應試驗未發(fā)現(xiàn)異常，通過生物學評價試驗（體外細胞毒性試驗、刺激以及遲發(fā)型致敏試驗）的結(jié)果分析，以聚氨酯為原材料的鼻飼管具有良好的生物相容性。

［1］國家藥品監(jiān)督管理局.GB/T16886.1-2011《醫(yī)療器械生物學評價第1部分:風險管理過程中的評價與試驗》［S］.北京:中國標準出版出，2011.

［2］奚廷斐.醫(yī)療器械生物學評價［J］.中國醫(yī)療器械信息，1999，5（3）:4-9.

［3］國家藥品監(jiān)督管理局.GB/T16886.12-2005《醫(yī)療器械生物學評價第12部分:樣品制備與參照樣品》［S］.北京:中國標準出版社，2005.

［4］國家藥品監(jiān)督管理局.GB/T14233.2-2005《醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗方法第2部分:生物學試驗方法》［S］.北京:中國標準出版社，2005.

［5］國家藥品監(jiān)督管理局.GB/T16886.10-2005《醫(yī)療器械生物學評價第10部分:刺激與遲發(fā)型超敏反應試驗》［S］.北京:中國標準出版社，2005.

Study of Biocompatibility of Sterile Disposable Nasal Feeding Tubes

GAO Yong1LI Qiang1ZHAO Xiao-lei1ZHANG Juan-li2
1 Henan Provincial Food and Drug Evaluation and Inspection Center（Zhengzhou450004）2 Medical Instrument Testing Institute of Henan（Zhengzhou450003）

Sterile disposable nasal feeding tubes are widely used in medical institutions， so it is very important to sustain life and support clinical treatment for critical and narcose patients especially. In the study，according to GB/T16886.1-2011 Biological evaluation of medical devices-Part 1：Evaluation and testing within a risk management process， we evaluate its biological evaluation in vitro and vivo. The results show that sterile disposable nasal feeding tubes have good biocompatibility.

nasal feeding tube， cytotoxicity，delayed-type hypersensitivity

1006-6586（2016）10-0065-03

R318.08

A

2016-09-01

高勇，工程師，研究方向：醫(yī)療器械檢測、技術(shù)審評。