斑馬魚Abcc2介導(dǎo)微囊藻毒素解毒功能探究

陸　星　鐘　山　何　力

（1. 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院長江水產(chǎn)研究所，武漢 430223； 2. 武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院遺傳學(xué)系，武漢 430071）

斑馬魚Abcc2介導(dǎo)微囊藻毒素解毒功能探究

陸星1鐘山2何力1

（1. 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院長江水產(chǎn)研究所，武漢 430223； 2. 武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院遺傳學(xué)系，武漢 430071）

研究克隆了斑馬魚（Danio rerio） abcc2基因序列，探討了其在微囊藻毒素（MC-LR）解毒中的潛在功能。結(jié)果表明：斑馬魚abcc2具有同哺乳動物ABCC2相似的介導(dǎo)熒光底物MCB外排的轉(zhuǎn)運活性，MC-LR處理可顯著誘導(dǎo)其在斑馬魚幼體中的轉(zhuǎn)錄表達(dá)； 過表達(dá)Abcc2蛋白能顯著增強ZF4細(xì)胞和斑馬魚胚胎對MC-LR的耐受性； Abcc2作為MC-LR的主要耐受因子，在組織防御和有毒物質(zhì)的排泄中起重要作用，但其解毒功能還不清楚。研究結(jié)果為進一步揭示魚類抗MC-LR積累的分子機理及培育低MC-LR殘留的養(yǎng)殖新品種提供理論基礎(chǔ)。

斑馬魚；Abcc2；微囊藻毒素；解毒

ABC轉(zhuǎn)運蛋白（ATP binding cassette transporter）是一類能利用ATP水解產(chǎn)生的能量，完成底物跨膜轉(zhuǎn)運的大分子量膜蛋白。該家族成員眾多，在進化中高度保守，存在于從原核生物到哺乳動物的所有生物體中。典型ABC轉(zhuǎn)運蛋白的分子結(jié)構(gòu)包括2個親水性的核酸結(jié)合結(jié)構(gòu)域（Nucleotide-binding domain，NBD）和2個疏水性的跨膜結(jié)構(gòu)域（Transmembrane domain，TMD）［1］。目前在人類中已發(fā)現(xiàn)了49個ABC轉(zhuǎn)運蛋白，根據(jù)他們的結(jié)構(gòu)特征和系統(tǒng)進化關(guān)系可分為ABCA到ABCG7個亞族。ABCC2屬于ABC轉(zhuǎn)運蛋白超家族中的C類亞族成員，是一類有機陰離子轉(zhuǎn)運蛋白，能排出II相解毒反應(yīng)的產(chǎn)物（還原型谷胱甘肽GSH、葡萄苷酸、硫酸酯和甘氨酸等的結(jié)合物），在細(xì)胞對多種有毒物質(zhì)的解毒和排泄中具有重要作用。

藻毒素（Microcystins，MCs）是淡水系統(tǒng)中最常見的一類具有生物活性的七肽單環(huán)肝毒素。迄今為止，已鑒定出80多種不同結(jié)構(gòu)類型的藻毒素且大多數(shù)都具有毒性［2］。微囊藻（Microcystin-LR，MCLR）是其中一種最常見、產(chǎn)量最多及危害最大的毒素，其毒性靶器官主要是肝臟。研究表明慢性暴露會使肝臟充血腫大，嚴(yán)重時直接導(dǎo)致肝出血［3］。目前比較受認(rèn)可的致毒機理是游離的MC-LR進入細(xì)胞后，立即競爭性結(jié)合到磷酸酶的絲氨酸和蘇氨酸亞基上，從而抑制其介導(dǎo)的下游級聯(lián)信號，導(dǎo)致胞內(nèi)活性氧的濃度升高［4］，打破蛋白磷酸化和脫磷酸化的平衡，最后致使肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)破化和肝功能發(fā)生紊亂，直至肝壞死［5］。

近年來，隨著我國近海水域和內(nèi)陸湖泊水體富營養(yǎng)化程度加重，導(dǎo)致有毒藍(lán)藻水華暴發(fā)。這些藍(lán)藻細(xì)胞破裂產(chǎn)生的藻毒素給人和動物的飲用水安全構(gòu)成了嚴(yán)重威脅［6］。流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，我國東南沿海一些地區(qū)原發(fā)性肝癌與居民飲用水源中MC-LR的高本底含量密切相關(guān)［7］。斑馬魚由于其突出的優(yōu)勢，已在發(fā)育生物學(xué)、毒理學(xué)、遺傳學(xué)和藥理學(xué)等多學(xué)科的研究中得到廣泛的應(yīng)用［8］。研究表明斑馬魚Abcc2在重金屬解毒和排泄中起重要作用［9］，但對MC-LR的解毒功能還沒有報道。本實驗克隆了斑馬魚abcc2基因的cDNA，構(gòu)建了其表達(dá)載體，在細(xì)胞和胚胎水平研究了過表達(dá)斑馬魚Abcc2在MC-LR解毒中的潛在功能。

1　材料與方法

1.1材料

分析純級的MC-LR（CAS#：101043-37-2）購自美國Aqua-Standard公司，用超純水將MC-LR配成100 μg/mL的母液，用時稀釋至所需濃度。MK571（CAS#：115104-28-4，Abcc2轉(zhuǎn)運蛋白特異性抑制劑）、脂肪醇聚氧乙烯烷基醚磺基琥珀酸二鈉鹽（Monochlorobimane，MCB）、噻唑藍(lán)（MTT）、曲拉通X-100（Triton X-100）和二甲基亞砜（DMSO）均購自美國Sigma-Aldrich公司。

1.2斑馬魚的飼養(yǎng)與MC-LR的暴露

AB系斑馬魚飼養(yǎng)于室內(nèi)恒溫循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中（水溫28.5℃，pH=7.0±0.5），用孵化的鹵蟲幼體和紅線蟲分別投喂。按照以受精后小時數(shù)（hpf）表示胚胎的各個發(fā)育階段。為收集整體原位雜交的材料，12 hpf以后的胚胎用含0.003%苯基硫脲（PTU，Sigma-Aldrich）的培養(yǎng)液培養(yǎng)，防止色素沉積。

為檢測低劑量MC-LR暴露對斑馬魚胚胎abcc2基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的誘導(dǎo)效應(yīng)，將24 hpf的斑馬魚胚胎用0.01 μg/L MC-LR處理至120 hpf，收集96和120 hpf的胚胎樣品。每個處理組用100枚胚胎，每隔12h將含MC-LR的胚胎培養(yǎng)液更換一次，處理過程中沒有發(fā)現(xiàn)胚胎死亡和其他非致死效應(yīng)，各實驗獨立重復(fù)3次以上。

1.3RNA提取、反轉(zhuǎn)錄和熒光定量PCR（qPCR）分析

收集的斑馬魚胚胎樣品用Trizol試劑（Invitrogen）提取總RNA，用紫外分光光度計（Biophotometer Eppendorf）檢測RNA的質(zhì)量，按照Fermentas RevertAidTMFirst試劑盒的操作說明書進行cDNA第一鏈的合成。

使用Bio-rad公司生產(chǎn)的SYBR Green Mixture試劑和CFX Connect實時定量PCR檢測系統(tǒng)進行qPCR分析。根據(jù)GenBank核苷酸數(shù)據(jù)庫（NM_200589）的預(yù)測序列設(shè)計斑馬魚abcc2基因的定量PCR引物（采用Primer Premier 6.0軟件設(shè)計）；研究表明用不同的化學(xué)物質(zhì)處理24—120 hpf斑馬魚胚胎不會影響β-actin基因的表達(dá)［10］，因此，本研究選用β-actin作為檢測MC-LR對abcc2誘導(dǎo)表達(dá)的內(nèi)參，引物序列見表1。PCR反應(yīng)體系：2×SYBER Green Master Mix 10 μL，2 μmol/L正、反向引物各1 μL，10倍稀釋的cDNA樣品1 μL，超純水補足至20 μL。qPCR反應(yīng)程序：95℃，30s；（95℃，10s；60℃，30s），40個循環(huán)；然后每個循環(huán)增加1℃，從65℃升高到95℃進行溶解曲線分析，各組反應(yīng)都重復(fù)3次。采用ΔΔCt方法計算MC-LR對abcc2基因表達(dá)的誘導(dǎo)率，誘導(dǎo)效率=2-ΔΔCt。

1.4斑馬魚 abcc 2基因cDNA克隆和表達(dá)載體構(gòu)建

從GenBank搜尋斑馬魚abcc2 mRNA序列（登錄號見1.3），根據(jù)該序列設(shè)計正向引物abcc2-F1和反向引物abcc2-R1（表1），同時在正向引物引入Korzak序列以提高abcc2 cDNA的表達(dá)。PCR產(chǎn)物經(jīng)凝膠回收后與表達(dá)載體pT2/CMV連接，構(gòu)建表達(dá)載體pT2/CMV-Abcc2-Flag（C末端引入了Flag標(biāo)簽序列）。用引物GFP-F/R（表1）將pEGFP-F載體上的GFP編碼區(qū)亞克隆到pT2/CMV相應(yīng)位點，構(gòu)建pT2/CMV-GFP。

1.5整體原位雜交

用引物abcc2-F2/R2擴增斑馬魚abcc2 cDNA，得到533 bp片段。將PCR產(chǎn)物用SalⅠ和NotⅠ酶切后插入pBluescript SK載體相應(yīng)位點。將構(gòu)建好的質(zhì)粒模板單酶切線性化后，分別用T7和T3 RNA聚合酶合成摻入地高辛標(biāo)記UTP的反義和正義RNA探針。按照Thisse等的方法［11］進行胚胎整體原位雜交和拍照。

表1　本研究所用的引物序列Tab. 1　Primers used in this study

1.6細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染

ZF4細(xì)胞按照文獻(xiàn)報道的方法培養(yǎng)［12］。簡要地，轉(zhuǎn)染前24h將細(xì)胞按照1×105/孔的密度種于24孔板。用X-tremeGENE HP轉(zhuǎn)染試劑（Roche）轉(zhuǎn)染細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后24h更換細(xì)胞培養(yǎng)基和進行后續(xù)實驗。

1.7Western blot

Western blot實驗方法參照文獻(xiàn)［13］，F(xiàn)lag標(biāo)簽鼠源單克隆抗體和內(nèi)參照β-Actin抗體均購自美國Sigma-Aldrich公司。

1.8熒光底物積累試驗

用ABCC家族特異性的熒光底物MCB和其抑制劑MK571檢測過表達(dá)斑馬魚Abcc2在ZF4細(xì)胞中的轉(zhuǎn)運活性。實驗前將表達(dá)載體pT2/CMV-GFP和pT2/CMV-Abcc2-Flag按照1.6所述方法轉(zhuǎn)染ZF4細(xì)胞，24h后小心吸盡原來的培養(yǎng)基，加入0.5 mL含25 μmol/L MCB的培養(yǎng)基（同時添加或不添加25 μmol/L MK571），并迅速放入28℃培養(yǎng)箱孵育1h，用預(yù)冷的磷酸鹽緩沖液（PBS）將細(xì)胞清洗兩遍，然后用0.1% Triton X-100/PBS（250 μL/孔）裂解細(xì)胞。用酶標(biāo)儀（SpectraMax M2，USA）在激發(fā)光波長595 nm和發(fā)射光波長530 nm條件下測定熒光值。

1.9細(xì)胞毒性實驗

MTT法檢測MC-LR處理條件下細(xì)胞的成活率［14］。簡要地，處理前24h將瞬時轉(zhuǎn)染GFP和斑馬魚Abcc2的ZF4細(xì)胞按2×104細(xì)胞/孔的密度種于96孔板。MC-LR處理12h后，每孔加入10 μL MTT，并迅速放入37 ℃培養(yǎng)箱孵育3h，然后徹底吸盡培養(yǎng)基，每孔加入100 μL DMSO溶解活細(xì)胞內(nèi)形成的藍(lán)紫色甲瓚結(jié)晶，充分震蕩后用酶標(biāo)儀在550 nm波長測定吸光值。細(xì)胞的成活率表示為相應(yīng)對照組吸光值的百分比，各實驗至少獨立重復(fù)3次以上。

1.10顯微注射和急性毒性試驗

參照Lu等［15］的方法，將表達(dá)載體pT2/CMVAbcc2-Flag通過顯微注射儀導(dǎo)入斑馬魚單細(xì)胞期胚胎中，同時用注射pT2/CMV-GFP的胚胎作對照。各質(zhì)粒注射量均為150 pg/卵。

24 hpf時挑選顯微注射后表型正常的胚胎進行MC-LR急性毒性實驗。毒性實驗在60 mm細(xì)胞培養(yǎng)皿中進行，各實驗都獨立重復(fù)3次，每次用180枚胚胎，隨機分成60枚/盤，從24 hpf開始，將胚胎分別暴露于含MC-LR的胚胎培養(yǎng)液中直至120 hpf。按照沒有心跳和血流、對刺激無反應(yīng)等標(biāo)準(zhǔn)判定胚胎的死亡。每隔12h更換一次溶液，將死亡的胚胎挑出，實驗結(jié)束時計算累計的胚胎死亡率。

1.11統(tǒng)計分析

采用SPSS 15.0統(tǒng)計軟件中的Student's t test進行差異顯著性分析（**表示P＜0.01，*表示P＜0.05）。

2　結(jié)果

2.1MC-LR 對斑馬魚abcc 2 mRNA的誘導(dǎo)表達(dá)

首先，用0.01 μg/L MC-LR處理24 hpf斑馬魚胚胎至120 hpf，分別收集96 hpf和120 hpf胚胎樣品進行熒光定量 PCR分析，檢測MC-LR對斑馬魚abcc2 mRNA的誘導(dǎo)效應(yīng)。如圖1A結(jié)果顯示，0.01 μg/L MC-LR暴露能顯著誘導(dǎo)96和120 hpf斑馬魚幼體abcc2基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，誘導(dǎo)效率分別為1.5和1.7倍。整體原位雜交結(jié)果表明（圖1B），與對照組（CK）相比，0.01 μg/L MC-LR暴露能顯著誘導(dǎo)abcc2基因在96和120 hpf斑馬魚幼體腸道中的表達(dá)。

圖1　MC-LR對斑馬魚胚胎abcc2基因轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)的誘導(dǎo)效應(yīng)Fig. 1　The role of MC-LR in the expression of zebrafish embryos abcc2 gene

2.2重組載體pT2/CMV-Abcc2-Flag表達(dá)活性的鑒定及轉(zhuǎn)運功能的分析

將構(gòu)建體pT2/CMV-Abcc2-Flag和pT2/CMVGFP轉(zhuǎn)染斑馬魚ZF4細(xì)胞，利用Western blot檢測目標(biāo)蛋白的表達(dá)。如圖2A結(jié)果所示，CMV啟動子驅(qū)動的斑馬魚Abcc2能夠在ZF4細(xì)胞中有效表達(dá)。其次，用熒光底物積累試驗檢測過表達(dá)Abcc2在ZF4細(xì)胞中對MCB的轉(zhuǎn)運活性。結(jié)果表明（圖2B），MCB在過表達(dá)Abcc2 ZF4細(xì)胞中的含量顯著低于過表達(dá)GFP的細(xì)胞。當(dāng)加入抑制劑MK571后，Abcc2的轉(zhuǎn)運功能被阻遏，MCB在ZF4中的積累量顯著增加（P＜0.05）。

2.3過表達(dá)斑馬魚Abcc2增強了ZF4細(xì)胞對MCLR的耐受性

將瞬時轉(zhuǎn)染表達(dá)載體pT2/CMV-GFP和pT2/ CMV-Abcc2-Flag的ZF4細(xì)胞分別暴露于含不同濃度MC-LR（0—50 μg/mL）的培養(yǎng)液中，孵育12h后MTT法檢測細(xì)胞的成活率。如圖3結(jié)果顯示，過表達(dá)Abcc2細(xì)胞的成活率顯著高于過表達(dá)GFP的細(xì)胞（P＜0.01），當(dāng)MC-LR暴露的濃度為50 μg/mL時，過表達(dá)Abcc2細(xì)胞的成活率相比GFP對照組提高了5.27倍。

2.4過表達(dá)斑馬魚 Abcc2 降低了 MC-LR 對斑馬魚胚胎的毒性

進一步在胚胎水平檢測了過表達(dá)斑馬魚Abcc2對MC-LR解毒的分子功能。研究表明50 μg/L MCLR能夠?qū)?0%囊胚形成期（Blastula stage）的斑馬魚胚胎或者發(fā)育至晚期的幼體殺死［16］。因此，選用50 μg/L MC-LR對24—120 hpf斑馬魚胚胎進行急性毒性試驗，檢測過表達(dá)Abcc2介導(dǎo)斑馬魚胚胎在96和120 hpf抵御MC-LR脅迫的毒性效應(yīng)。如圖4結(jié)果顯示，在96和120 hpf，過表達(dá)Abcc2胚胎的死亡率都顯著低于過表達(dá)GFP的胚胎（P＜0.05），說明過表達(dá)Abcc2也增強了斑馬魚胚胎對MC-LR的耐受性。

圖2　斑馬魚Abcc2在ZF4細(xì)胞中的表達(dá)及對MCB轉(zhuǎn)運活性的分析Fig. 2　The expression of Zebrafish Abcc2 and its role in transport of MCB in ZF4 cells

圖3　過表達(dá)Abcc2增強了ZF4細(xì)胞對MC-LR的耐受性Fig. 3　Overexpression of Abcc2 protected ZF4 cells from acute toxicity of MC-LR

圖4　過表達(dá)Abcc2降低了MC-LR對斑馬魚胚胎的毒性Fig. 4　Overexpression of Abcc2 decreased toxic effects of MCLR on zebrafish embryos

3　討論

3.1Abcc2轉(zhuǎn)運蛋白具有介導(dǎo)魚類多毒物耐受性的功能

藻毒素的產(chǎn)生主要是因為含有氮和磷等營養(yǎng)物質(zhì)的生活污水或工業(yè)廢棄物排放入湖泊和河流中，進而改變了水體的生態(tài)結(jié)構(gòu)和平衡，導(dǎo)致某些藻類尤其是藍(lán)藻的異常增殖。在適宜的溫度和一定的光照條件下，就會出現(xiàn)嚴(yán)重的藍(lán)藻水華現(xiàn)象［17］。藍(lán)藻細(xì)胞破裂釋放的藻毒素在環(huán)境中極難被降解從而在水體中大量積聚，嚴(yán)重破壞了水生態(tài)系統(tǒng)的平衡［18］，也給水產(chǎn)養(yǎng)殖帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟損失［19］。另外，人類某些疾病，例如腸胃炎、原發(fā)性肝癌及其他一些過敏原性反應(yīng)都直接或間接與藻毒素的慢性暴露相關(guān)［20］。為了抵抗這種毒物的毒性，水生動物包括魚類在長期的進化過程中形成了有效的防御機制。Abcc2轉(zhuǎn)運蛋白是魚類多毒物耐受性機制中的主要因子之一，在Hg、Cd和Pb等重金屬的解毒和排泄中具有重要作用［9］。但其在MC-LR的解毒功能還未被研究，本實驗在ZF4細(xì)胞和胚胎上采用過表達(dá)的方式研究了斑馬魚Abcc2對MCLR解毒的分子功能。

3.2斑馬魚Abcc2的結(jié)構(gòu)和功能具有高度保守性

一系列實驗結(jié)果表明斑馬魚Abcc2在脊椎動物進化過程中是高度保守的。首先，在分子結(jié)構(gòu)上高度保守，包含人ABCC2所有的功能域和關(guān)鍵基序，是人ABCC2基因的直系同源基因。其次，斑馬魚Abcc2能夠有效介導(dǎo)ZF4細(xì)胞對熒光底物MCB的外排，且其轉(zhuǎn)運活性能被ABCC家族特異性的抑制劑MK571阻遏。第三，過表達(dá)斑馬魚Abcc2能夠顯著增強ZF4細(xì)胞和斑馬魚胚胎對MC-LR的耐受性。

3.3斑馬魚Abcc2及其他家族成員在MC-LR解毒和排泄中的潛在功能

本研究結(jié)果顯示0.01 μg/L MC-LR暴露能夠明顯誘導(dǎo)96和120 hpf斑馬魚胚胎abcc2 mRNA的上調(diào)表達(dá)，并在腸道中也檢測到其轉(zhuǎn)錄本的高表達(dá)，這表明斑馬魚Abcc2可能是胚胎早期發(fā)育過程中抵御環(huán)境毒物吸收和排泄的重要解毒因子。但不排除ABC其他家族成員也參與對MC-LR解毒和排泄，首先MC-LR對96和120 hpf斑馬魚胚胎abcc2基因的誘導(dǎo)效率分別只有1.5和1.7倍。其次，谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GSTs）催化合成的谷胱甘肽（GSH）能顯著降低藻毒素在魚體內(nèi)的積聚［21］，GSH被認(rèn)為是細(xì)胞內(nèi)II相解毒產(chǎn)物，通過與游離的有毒物質(zhì)結(jié)合形成可溶性復(fù)合體即GS-X，可作為ABCC轉(zhuǎn)運蛋白的高親和性底物而被排出胞外［22］。此外，有報道表明MCLR能顯著誘導(dǎo)多齒任氏鳉（Jenynsia multidentata）鰓中abcb4基因3倍左右的上調(diào)表達(dá)［2］，而鰓又是機體與環(huán)境有毒物質(zhì)接觸的主要生理屏障，說明Abcb4在限制MC-LR的吸收和排泄中也發(fā)揮著重要功能。

綜上所述，本研究已經(jīng)證實了過表達(dá)斑馬魚Abcc2能增強ZF4細(xì)胞和斑馬魚胚胎對MC-LR的耐受能力，說明其具有同哺乳動物ABCC2相似的功能—介導(dǎo)多毒物耐受機制（Multi-xenobiotic resistance，MXR），進而抵御毒物對細(xì)胞和組織的毒性效應(yīng)。由于MC-LR是環(huán)境水體中廣泛分布的藍(lán)藻水華污染物，因此還需更深層次去揭示水生生物ABC轉(zhuǎn)運蛋白對MC-LR解毒和排泄的分子機制。

致謝：

感謝中國科學(xué)院水生生物研究所崔宗斌研究員課題組提供的實驗材料和技術(shù)支持。

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PRELIMINARY STUDY ON THE ROLES OF ZEBRAFISH ABCC2 IN THE DETOXIFICATION OF MICROCYSTIN-LR

LU Xing1，ZHONG Shan2and HE Li1
（1. Yangtze River Fisheries Research Institute，Chinese Academy of Fishery Sciences，Wuhan 430223，China； 2. Department of Genetics，School of Basic Medical Science，Wuhan University，Wuhan 430071，China）

Eutrophication in aquatic environment caused the release of microcystin-LR（MC-LR） into a water body during a period of cyanobacterial blooms，which pose serious threat to the fish survival and public health. In this study，we cloned the cDNA sequence of zebrafish（Danio rerio） abcc2 gene，and explored its role in MC-LR detoxification. Our results showed that zebrafish abcc2，similar to its mammalian counterparts，played roles in transport of its fluorescent substrate MCB，and that MC-LR treatment induced its transcriptional expression. Overexpression of Abcc2 significantly improved the survival rates of ZF4 cells and zebrafish embryos exposed to MC-LR. Zebrafish Abcc2 mediates MC-LR resistance and tissue defense and toxicants excretion，but it's role the detoxification of MC-LR remains unclear. These data reveal molecular mechanisms of fish in preventing accumulation of MC-LR and provide theoretical fundamentals for breeding cultured fish strains with MC-LR-resistant ability.

Zebrafish； Abcc2； Microcystin-LR； Detoxification

Q344+.1

A

1000-3207（2016）05-0997-06

10.7541/2016.129

2015-12-23；

2016-01-21

國家農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險評估項目子課題（GJFP201501004）； 國家自然科學(xué)基金項目（31172395）資助 ［Supported by the Program for Risk Assessment of National Agri-products Quality and Safety（GJFP201501004） and the National Natural Science Foundation of China（31172395）］

陸星（1988—），男，湖北洪湖人； 博士，助理研究員； 主要研究方向為分子營養(yǎng)學(xué)。E-mail：luxing@yfi.ac.cn

鐘山（1963—），男，湖北洪湖人； 博士，教授； 主要研究方向為遺傳與發(fā)育生物學(xué)。E-mail：zhongshan@whu.edu.cn；

何力（1963—），男，湖北石首人； 博士，研究員； 主要研究方向為漁業(yè)資源與水產(chǎn)品安全。E-mail：Heli28@sohu.com