頂空氣相色譜法測(cè)定苯并三嗪衍生物YABQ的溶劑殘留量

劉少磊　楊建云　肖炳坤　黃榮清軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所，北京100850

頂空氣相色譜法測(cè)定苯并三嗪衍生物YABQ的溶劑殘留量

劉少磊楊建云肖炳坤黃榮清
軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所，北京100850

目的建立頂空氣相色譜法測(cè)定苯并三嗪衍生物YABQ中3種殘留溶劑含量的方法。方法采用DBWAX毛細(xì)管色譜柱（0.45mm×30mm，0.85μm），程序升溫，柱頭壓為4 psi（1 psi=6.895 kPa），進(jìn)樣口溫度為200℃，F(xiàn)ID檢測(cè)器溫度為250℃，頂空進(jìn)樣，平衡溫度為70℃，平衡時(shí)間為10 min，以DMSO為溶劑，檢測(cè)殘留溶劑的含量。結(jié)果丙酮、吡啶和四氫呋喃檢測(cè)限分別為0.48、0.10、1.76μg/mL，3種殘留溶劑均能有效分離，丙酮、吡啶、四氫呋喃線(xiàn)性關(guān)系良好（r＞0.9996），平均回收率（n=3）分別為102.22%、99.21%、97.87%，RSD分別為0.56%、1.60%、1.09%，丙酮?dú)埩袅糠謩e為0.0676%、0.0342%、0.0833%，吡啶和四氫呋喃未檢出，殘留溶劑含量符合藥典規(guī)定。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，可用于YABQ中殘留溶劑的含量測(cè)定。

殘留溶劑；丙酮；吡啶；四氫呋喃；氣相色譜法

腫瘤是當(dāng)今社會(huì)的一大殺手，在我國(guó)腫瘤的死亡占全部死因的1/4［1］。國(guó)內(nèi)外學(xué)者經(jīng)過(guò)多年研究發(fā)現(xiàn)了一種化學(xué)物質(zhì)即放射增敏劑［2］，使癌細(xì)胞對(duì)射線(xiàn)的敏感性增強(qiáng)而對(duì)機(jī)體的免疫功能、造血系統(tǒng)不會(huì)造成大的傷害［3-9］。放射增敏劑YABQ是在苯并三嗪基礎(chǔ)上改造后的一個(gè)化合物，作為一種新型放射增敏劑，與市場(chǎng)上已有的相比，結(jié)構(gòu)上擺脫了硝基并且母核不再是五元含氮環(huán)，大大降低毒副作用，化學(xué)結(jié)構(gòu)獨(dú)特新穎；YABQ可在短時(shí)間、低劑量射線(xiàn)照射下提高乏氧細(xì)胞的敏感性，又可在腫瘤乏氧區(qū)還原，增強(qiáng)殺傷腫瘤細(xì)胞的能力，具有雙重功效和良好治療效果［10-17］。放射增敏劑YABQ在提取過(guò)程中使用了丙酮、吡啶和四氫呋喃，因此可能殘留上述溶劑。

頂空氣相色譜法具有檢測(cè)靈敏度高、選擇性好、所需樣品量少的特點(diǎn)，可以滿(mǎn)足樣品殘留溶劑的測(cè)定要求。本研究建立了頂空氣相色譜法測(cè)定丙酮、吡啶和四氫呋喃3種殘留溶劑的方法。

1　儀器與試藥

Agilent 6820氣相色譜儀，HP7694頂空進(jìn)樣器，F(xiàn)ID檢測(cè)器，Agilent DB-WAX毛細(xì)管色譜柱（30 m× 0.45 mm，0.85μm），德國(guó)sartorius（BP211D）電子天平，對(duì)照品YABQ（批號(hào)20140406，純度99.7%），YABQ原料藥（批號(hào)20140410、20140416、20140424）均由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所提供，丙酮、吡啶、四氫呋喃、二甲基亞砜（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)2014001，純度99.5%）。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件

Agilent DB-WAX毛細(xì)管柱（0.45 mm×30 mm，0.85μm），程序升溫，進(jìn)樣口溫度：200℃，檢測(cè)器溫度：250℃，柱頭壓：4 psi（1 psi=6.895 kPa），載氣：N2，頂空氣化室溫度：70℃，平衡10 min，定量環(huán)溫度：80℃，樣品傳輸管溫度：90℃，進(jìn)樣量：1.0 mL。柱溫：50℃，保持6 min，然后以35℃/min的速度升溫至200℃，保持10min。

2.2溶液配制

2.2.1對(duì)照品溶液精密稱(chēng)定丙酮781.25mg于25mL量瓶中，加DMSO稀釋至刻度，作為丙酮溶液。精密稱(chēng)定吡啶31.25mg，同法處理，作為吡啶溶液。精密稱(chēng)定四氫呋喃137.5mg，同法處理，作為四氫呋喃溶液。分別取其1 mL置25 mL量瓶中，加DMSO刻度，為對(duì)照儲(chǔ)備液。精密移取2mL對(duì)照品儲(chǔ)備液，置10mL量瓶中，加DMSO稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。2.2.2供試品溶液取YABQ樣品（批號(hào)：20140410）100mg，精密稱(chēng)定，置20 mL頂空瓶中，加2.0 mL DMSO，密封，搖勻。

2.2.3空白溶液精密移取2mL的DMSO于頂空進(jìn)樣瓶中作為空白溶液。

2.3方法學(xué)驗(yàn)證

2.3.1系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)按“2.2.1”項(xiàng)下方法配制對(duì)照品溶液及空白溶液（溶劑DMSO），進(jìn)樣，記錄色譜圖，殘留溶劑峰均能夠完全分離，且溶劑DMSO無(wú)干擾，說(shuō)明系統(tǒng)適應(yīng)性良好。見(jiàn)圖1～2。

2.3.2檢測(cè)限堯定量限與線(xiàn)性范圍將對(duì)照品貯備液溶液逐級(jí)稀釋?zhuān)悦糠N殘留溶劑信噪比（S/N）≥3作為檢測(cè)限（LOD），信噪比（S/N）≥10作為定量限（LOQ）。結(jié)果表明，3種殘留溶劑均具有良好的線(xiàn)性關(guān)系（r≥0.9996），滿(mǎn)足殘留溶劑檢測(cè)方法要求。結(jié)果見(jiàn)表1。精密移取對(duì)照品貯備液1.6、2、2.4、3、4、5 m L分別置10mL量瓶中，加DMSO稀釋至刻度超聲混勻作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。各取2 mL置20mL頂空瓶中。進(jìn)樣，以濃度（X）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行線(xiàn)性回歸。結(jié)果見(jiàn)表1。

圖1　對(duì)照品溶液氣相色譜圖

圖2　空白溶劑氣相色譜圖

表1　線(xiàn)性范圍、檢測(cè)限和定量限（μg/m L）

2.3.3精密度試驗(yàn)精密移取2mL對(duì)照品溶液置頂空進(jìn)樣瓶中，加2mLDMSO，密封。連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算丙酮、吡啶和四氫呋喃對(duì)照品溶液峰面積，RSD分別為0.28%、1.84%、1.25%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.3.4重復(fù)性試驗(yàn)取YABQ樣品（批號(hào)：20140410），按“2.2.2”項(xiàng)下方法配制樣品溶液6份，頂空測(cè)定。結(jié)果吡啶和四氫呋喃未檢出，丙酮RSD=1.26%，表明重復(fù)性良好。

2.3.5穩(wěn)定性試驗(yàn)取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液（批號(hào)：20140410），分別于0、2、4、8、10、12 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果吡啶和四氫呋喃未檢出，丙酮RSD= 1.75%，表明溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.6回收率試驗(yàn)取對(duì)照品儲(chǔ)備液1.6、2.0、2.4 mL分別置10 mL量瓶中，加DMSO稀釋至刻度，配成3個(gè)濃度的待測(cè)溶液，相當(dāng)于對(duì)照的80%、100%、120%。取供試品溶液（批號(hào)：20140410），分別加3個(gè)不同濃度（每個(gè)濃度3份）的待測(cè)液2 mL，頂空測(cè)定。計(jì)算時(shí)扣除原料藥中所含的殘留劑量。結(jié)果平均回收率分別為102.22%、99.21%、97.87%，RSD分別為0.56%、1.60%、1.09%，3種殘留溶劑平均回收率均在95%～105%，結(jié)果表明樣品的回收率良好。

2.4樣品的測(cè)定

按照“2.2.1、2.2.2”項(xiàng)下方法制備對(duì)照品及供試品溶液，頂空進(jìn)樣并計(jì)算樣品中殘留溶劑的含量。3批樣品中丙酮?dú)埩羧軇┝烤陀谒幍錁?biāo)準(zhǔn)0.5%［18］附錄63，其他殘留溶劑未檢出。見(jiàn)表2。

表2　樣品中殘留溶劑含量測(cè)定結(jié)果（%）

3　討論

3.1溶劑的選擇

本實(shí)驗(yàn)采用DMSO作為溶劑［19］61-65。對(duì)3種殘留的溶劑的溶解和分離均良好。

3.2進(jìn)樣方式的選擇

藥典規(guī)定丙酮、吡啶、THF限量為0.005%、0.002%、0.072%，采用一般的分析方法很難準(zhǔn)確檢測(cè)。溶液直接進(jìn)樣法，不僅對(duì)色譜柱有污染而且樣品基線(xiàn)會(huì)漂移，產(chǎn)生鼓包，頂空進(jìn)樣可以避免污染色譜柱［19-20］。本研究采用頂空進(jìn)樣，檢測(cè)結(jié)果顯示YABQ中殘留溶劑量符合藥典規(guī)定。

3.3頂空平衡溫度和時(shí)間的選擇

選擇了60、70、80℃頂空平衡，結(jié)果表明溫度越高峰面積響應(yīng)越大，過(guò)高溫度對(duì)儀器有一定損傷，考慮溫度和峰靈敏度，故選擇70℃；平衡時(shí)間選擇了10、20、30、40 min，結(jié)果顯示平衡時(shí)間對(duì)峰面積影響不大，故選擇10min。

綜上所述，放射敏感性是腫瘤放射治療的核心問(wèn)題，如何提高敏感性是腫瘤放射治療所關(guān)注的問(wèn)題，長(zhǎng)期的臨床研究并沒(méi)有找到理想的低毒高效的放射增敏劑［21］，對(duì)物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行改造為其提供了一種重要思路。本研究通過(guò)對(duì)YABQ殘留溶劑的研究，成功建立了頂空氣相色譜法測(cè)定YABQ中殘留溶劑的含量，為質(zhì)量控制、制劑生產(chǎn)提供了科學(xué)保障。

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Head-space gas chrom atography determ ination of residual solvents in benzene and triazine derivatives YABQ

LIU Shaolei YANG Jianyun XIAO Bingkun HUANG Rongqing
Institute of Radiation Medicine，Academy of Military Medical Science，Beijing 100850，China

Objective To establish a head-space gas chromatography method for determination of three residual solvents in benzene and triazine derivatives YABQ.Methods DB-WAX capillary column（0.45mm×30 mm，0.85μm）and temperature program were adopted，the stigma pressure was 4 psi（1 psi=6.895 kPa），the inlet temperaturewas 200℃，the FID detector temperature was 250℃，the head-space equilibrium temperature was 70℃，the equilibrium time was 10 min，DMSO was selected as the solvent，the content of residual solventswere detected.Resu lts The results of acetone，pyridine and tetrahydrofuran detection limits were 0.48μg/mL，0.10μg/mL and 1.76μg/mL，three kinds of residual solvents could be separated，a good linear relationship（r＞0.9996）ofacetone，pyridine，tetrahydrofuran were showed，the average recoveries（n=3）were 102.22%，99.21%，97.87%，the RSD were 0.56%，1.60%，1.09%，the residual amount of acetone were 0.0676%，0.0342%，0.0833%，pyridine and tetrahydrofuran were undetected，the residual solvent content in line with the pharmacopoeia.Conclusion Themethod is simple，rapid，accurate，and can be used as a method for the determination YABQ residual solvent.

Residual solvent；Acetone；Pyridine；Tetrahydrofuran；Gas chromatography

R917

A

1673-7210（2016）06（c）-0135-03

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（21375147）；國(guó)家科技重大新藥創(chuàng)制專(zhuān)項(xiàng)（2013ZX09102-016）。

劉少磊（1984-），男，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院2012級(jí)藥物分析專(zhuān)業(yè)在讀碩士研究生；研究方向：新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

黃榮清（1965-），男，博士生導(dǎo)師；研究方向：新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、代謝組學(xué)。

（2016-02-12本文編輯：趙魯楓）