地黃低聚糖聯(lián)合脂肪組織來源干細胞移植治療小型豬急性心肌梗死的療效

裴志勇，尹巧香，張曉晶，高偉，茍鵬，趙玉生

(1.陸軍總醫(yī)院干部病房一科，北京 100700；2.空軍總醫(yī)院干部病房心內(nèi)科；3.解放軍總醫(yī)院,a 放射診斷科,b 老年心血管病研究所,c 動物實驗室)

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·基礎研究·

地黃低聚糖聯(lián)合脂肪組織來源干細胞移植治療小型豬急性心肌梗死的療效

裴志勇1，尹巧香2，張曉晶3a，高偉3b，茍鵬3c，趙玉生3b

(1.陸軍總醫(yī)院干部病房一科，北京 100700；2.空軍總醫(yī)院干部病房心內(nèi)科；3.解放軍總醫(yī)院,a 放射診斷科,b 老年心血管病研究所,c 動物實驗室)

目的 探討地黃低聚糖(RGOs)聯(lián)合同種異體脂肪組織來源干細胞(ASCs)移植治療小型豬急性心肌梗死(AMI)的療效及其可能的機制。方法 經(jīng)皮球囊封堵冠狀動脈左前降支制備小型豬AMI模型(n=17)，隨機分為4組：對照組(n=5)，RGOs組(n=4)，ASCs組(A組，n=4)及RGOs+ASCs聯(lián)合治療組(n=4)。RGOs組及聯(lián)合治療組造模前3天及造模后1月飼以RGOs粗提物(4 g,2 次/天)；造模1周后(7～10 d)經(jīng)冠狀動脈移植同種異體ASCs(0.8×106kg-1)，對照組及RGOs組注入0.9%氯化鈉注射溶液。移植后8周，延遲增強核磁共振掃描(DE-MRI)評價各組心臟結構及功能變化，熒光顯微鏡及激光共聚焦掃描觀察ASCs存活及分化，免疫組織化學法觀察梗死區(qū)微血管密度，Masson三色染色法評價梗死區(qū)纖維化程度。結果 與對照組比較，聯(lián)合治療組可以明顯改善左心室功能，增加梗死區(qū)室壁厚度,減小左心室質量指數(shù)及梗死體積(均P<0.05)。病理和免疫組織化學結果顯示，聯(lián)合治療組ASCs的存活多于ASCs組(P<0.01)，并表達心肌細胞標記物(cTnT、α-actin)及血管標志物(vWF、α-SMA)。聯(lián)合治療組梗死區(qū)微血管密度明顯高于其他3組(P<0.01)。與對照組比較，ASCs組以及聯(lián)合治療組均能明顯降低梗死區(qū)纖維化程度(P<0.05，P<0.01)。結論 RGOs可以提高ASCs移植治療小型豬AMI療效，改善心功能，減輕左心室重構，其作用機制可能與RGOs促進ASCs增殖分化，抗纖維化有關。

心肌梗死；干細胞移植；地黃；心室重構；模型，動物

急性心肌梗死(AMI)現(xiàn)有的再灌注治療策略雖然可以部分或完全恢復梗死區(qū)血流，但不能修復已壞死的心肌，最終進展為心力衰竭。干細胞具有自我更新及多向分化潛能，干細胞移植為心肌再生治療帶來了新希望[1]。脂肪組織來源干細胞(ASCs)具有來源充足、取材方便、體外擴增能力強、不涉及免疫排斥及倫理學問題等優(yōu)勢，逐漸成為人們關注的焦點[2]。然而，心肌梗死區(qū)惡劣的微環(huán)境嚴重影響干細胞的存活，如何最大限度提高干細胞的移植效率成為目前該領域研究的熱點。干細胞的生存環(huán)境對其歸巢、存活、增殖、分化等方面都起著決定性作用，因此，改善缺血心肌局部微環(huán)境似乎更重要。

地黃低聚糖(RGOs)系從地黃中提取的低分子量多糖，體外研究證實，RGOs及其組分具有促進骨骼肌成肌細胞、骨髓干細胞及ASCs增殖、分化，抗氧化損傷，抗凋亡作用[3-8]。本研究旨在通過構建小型豬AMI模型，系統(tǒng)評價RGOs聯(lián)合ASCs移植治療小型豬AMI的療效。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 廣西巴馬小香豬，雌雄不拘，月齡5～7個月，體質量20～30 kg，由解放軍總醫(yī)院實驗動物中心提供，動物合格證號：SYXK(軍)2007-009。

1.2 材料 L-DMED培養(yǎng)基、特級胎牛血清(FBS)、Ⅳ型膠原酶、胰蛋白酶(Gibco公司)，Dispase Ⅱ中性蛋白酶(Sigma公司)，小鼠抗肌鈣蛋白T(cTnT)單克隆抗體、小鼠抗α-肌動蛋白(α-actin)單克隆抗體、小鼠抗α-平滑肌(α-SMA)單克隆抗體、兔抗vWF多克隆抗體(美國,Abcam)，羊抗小鼠IgG-FITC及山羊血清(中杉金橋)，羊抗小鼠IgG-Cy3及羊抗兔IgG-Cy3(中國武漢博士德生物技術有限公司)，DAPI熒光染料(美國,Sigma)。釓貝葡胺注射液(上海博萊科信誼藥業(yè)有限公司)，阿司匹林腸溶片(青島黃海制藥有限公司)，酒石酸美托洛爾(阿斯利康制藥有限公司)。二氧化碳孵箱(美國,Thermo scientific公司)，普通光學顯微鏡(德國,Leica DM IL)，倒置相差顯微鏡(日本,Olympus BX51)，低溫離心機(美國,Sigma 3K18)，激光掃描共聚焦顯微鏡(日本,Fluoview 1000)。多導生理記錄儀(成都RM6240)，動脈鞘管、冠脈指引導管及冠脈球囊(美國,Cordis)，血管造影機(美國,GE OEC9800)，核磁共振機(美國,HD Signa Excite 1.5T)。RGOs以生地黃為原料加工后經(jīng)軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所提純，高效液相色譜法檢測RGOs提純物中水蘇糖含量為31.15%。

1.3 方法

1.3.1 小型豬ASCs的分離、培養(yǎng)及鑒定 具體過程見參考文獻5。

1.3.2 動物分組及AMI模型的制備 先后有31頭小型豬用來制備MI模型，成功造模、存活并完成整個實驗過程的有17只，隨機分為4組：對照組(Control)(n=5)，RGOs組(n=4)，ASCs移植組(n=4)，RGOs+ASCs組(n=4)。造模前3 d所有動物飼以阿司匹林腸溶片(100 mg/d)及酒石酸美托洛爾(50 mg/d),RGOs組及RGOs+ASCs組同時飼以RGOs粗提物(4 g，2次/d)。造模前1 d禁食12 h。動物稱重，肌內(nèi)注射氯胺酮200～300 mg(8～10 mg/kg)及速眠新Ⅱ號1.5～3.0 mL(0.075～0.1 mL/kg)，大約15～20 min動物進入淺麻醉狀態(tài)。建立耳緣靜脈液路，靜脈注射3 %戊巴比妥注射液3～5 mL(4 mg/kg)，其后視情況每隔40～60 min追加2～4 mL。氣管插管，接呼吸機及心電監(jiān)護儀，常規(guī)消毒鋪無菌巾。肝素鈉4000 U靜脈注射，以后每1小時追加1000 U；利多卡因50 mg靜脈注射，同時利多卡因150 mg+胺碘酮150 mg 靜滴。以Seldinger 法穿刺股動脈，左前斜位定位造影。置入直徑為2.0 mm×(15～20) mm的球囊至左前降支(LAD)中遠端1/3，以608～811 kPa充盈球囊，重復造影觀察遠端是否完全阻塞。缺血預適應3次，封堵及撤球囊時間分別為1 min、1 min，2 min、2 min，3 min、3 min，然后以608～811 kPa持續(xù)封堵LAD。嚴密監(jiān)測動物生命體征，20～30 min記錄1次心電圖。如出現(xiàn)室速或室顫，立即撤球囊，并給予150～300 J電擊除顫，同時給予利多卡因50 mg或鹽酸胺碘酮50 mg靜脈注射。球囊封堵時間總計達到90 min后撤球囊，拔動脈鞘管，局部壓迫20 min。待動物恢復自主呼吸后拔除氣管插管，青霉素320萬單位肌注。術后所有動物繼續(xù)飼以阿司匹林腸溶片及酒石酸美托洛爾1周，RGOs組及RGOs+ASCs組繼續(xù)飼以RGOs粗提物1月，劑量同造模前。

1.3.3 ASCs移植 造模后7～10 d行ASCs移植。移植當天收集細胞，細胞密度為107mL-1，加入無菌DAPI染色液，終濃度為50 μg/mL，37 ℃孵育染色30 min。PBS沖洗6遍，離心收集細胞，用PBS重懸至5×106mL-1濃度，置于冰上備用。移植前動物準備同造模。導絲放至LAD遠端，置1.5 mm×15 mm球囊至LAD中1/3處(球囊遠端人為造成破損)，注射器吸取干細胞懸液后加壓緩慢注入(移植細胞量0.8×106kg-1)，非移植組注入等體積的0.9%氯化鈉注射溶液。

1.3.4 心臟延遲增強核磁共振掃描(DE-MRI)及圖像分析 分別于造模后1周(移植前)、造模后9周(移植后8周)行DE-MRI 檢查。麻醉過程同前，具體MR掃描步驟如下：⑴三平面定位；⑵心臟定位，掃描四腔心及心臟長軸位，所用序列為穩(wěn)態(tài)采集快速成像(FIESTA)；⑶心臟黑血檢查：在四腔心和心臟長軸基礎上定位并掃描心臟短軸位，所用序列為Double IR；⑷心臟短軸亮血檢查：拷貝第三步中的定位，所用序列為FIESTA Cine；⑸心臟延遲增強：注入10 mL釓鋇葡胺注射液，10 min之后開始掃描心臟短軸位，拷貝第三步中的定位，所用序列為快速梯度回波(FGRE)。利用Mass 6心功能分析軟件計算出左心室舒張末期容積(LVEDV)，左心室收縮末期容積(LVESV)，心搏出量(SV)，左室射血分數(shù)(LVEF)，左心室質量指數(shù)(LVMI)，心肌梗死體積及梗死區(qū)室壁厚度。LVMI(g/m2)=1.05(心肌密度，g/cm3) ×[心包臟層容量(mL)-心內(nèi)膜容量(mL)]/體表面積(m2)。延遲對比增強分析：繪制左心室心內(nèi)膜與心包臟層輪廓，設置延遲增強與透壁性梗死閾值，計算心肌梗死質量(g)，心肌梗死體積(cm3)=心肌梗死質量(g)/1.05(心肌密度，g/cm3)。隨機測量延遲增強區(qū)及正常心室壁的厚度(mm)，分別測量3個部位及5個部位的室壁厚度，取平均值，梗死區(qū)室壁厚度用室壁縮短率來表示，即梗死區(qū)室壁縮短率(%)=(延遲增強區(qū)室壁厚度平均值-正常心室壁厚度平均值)/正常心室壁厚度平均值×100%。

1.3.5 小型豬心臟取材 動物稱重后采用穿刺股動脈放血法處死，取出心臟后記錄全心、心室及左心室的質量。垂直左心室長軸以5～6 mm厚度將左心室切成薄片，分別留取梗死區(qū)、梗死邊緣區(qū)及正常部位心肌標本-70℃保存及4%多聚甲醛固定后保存。

1.3.6 移植細胞存活、分化情況 取ASCs組及RGOs+ASCs組梗死邊緣區(qū)冰凍的心肌組織制成5 μm厚切片，熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)藍色熒光后連續(xù)切片。cTnT、α-actin、α-SMA及vWF抗體進行免疫熒光染色，陰性對照用PBS代替一抗。具體步驟如下：PBS沖洗切片2次，山羊血清封閉20 min；甩去血清，分別滴加工作濃度的一抗：小鼠抗cTnT單克隆抗體(1∶50)，小鼠抗α-actin單克隆抗體(1∶50)，小鼠抗α-SMA單克隆抗體(1∶50)，兔抗vWF多克隆抗體(1∶200)，置于濕盒中4℃過夜孵育；PBS漂洗5 min/次,3次，加入熒光二抗：羊抗小鼠IgG- FITC，羊抗小鼠IgG-Cy3，羊抗兔IgG-Cy3，室溫下避光孵育2 h；PBS漂洗5 min×3次，90 %緩沖甘油封片。激光共聚焦掃描顯微鏡下觀察移植細胞存活及分化情況。

1.3.7 梗死區(qū)及梗死邊緣區(qū)微血管計數(shù)(免疫組織化學染色-ABC法) 石蠟切片常規(guī)脫蠟至水；0.01 M PBS中漂洗，3 min/次,3次；3 %的過氧化氫溶液作用10 min；0.01 M PBS中漂洗，3 min/次,3次；胃蛋白酶作用20 min，0.01 M PBS中漂洗，3 min,3次；5 %山羊血清37 ℃封閉30 min；加入以抗體稀釋液稀釋至工作濃度的一抗vWF，陰性對照一抗用0.01 M PBS 替代，4 ℃，置濕盒中過夜；0.01 M PBS中漂洗，3 min/次,3次；加入二抗37 ℃孵育20 min；0.01 M PBS中漂洗，3 min,3次；加入SABC辣根酶鏈霉卵白素37 ℃孵育20 min；0.01 M PBS中漂洗，3 min,3次；DAB顯色，顯微鏡下觀察顯色程度，控制顯色時間，自來水沖洗終止顯色；蘇木素復染細胞核，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。微血管測量的要求：vWF染色陽性，管腔可視并且對直徑在10～100 μm以內(nèi)的微血管進行計數(shù)。利用Image Pro Plus6.0圖像分析軟件測量管腔。每只小型豬取8張切片，每張切片在心肌梗死區(qū)及其周圍非重疊區(qū)域至少任取6個高倍鏡視野(×400)。

1.3.8 梗死區(qū)膠原沉積檢測 每只小型豬隨機取8張梗死區(qū)切片行Masson染色，利用Image Pro Plus6.0圖像分析軟件測量梗死區(qū)纖維化面積，取平均值。Masson染色步驟如下：石蠟切片常規(guī)脫蠟至水；Masson復合染色液3～5 min；0.2 %醋酸水溶液稍洗；5 %磷鎢酸2～5 min；0.2 %醋酸水溶液浸洗2次；亮綠染色液數(shù)秒，0.2 %醋酸水洗2次；無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS13.0軟件進行分析，兩組間比較采用t檢驗，多組之間比較先采用F檢驗而后進行q檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 移植前后心臟結構和功能的變化 如表1所示，移植前(基線)各組之間LVEDV、LVESV、LVEF、LVMI、梗死區(qū)體積、梗死區(qū)室壁厚度差異無統(tǒng)計學意義。移植后8周(終點)，各組間LVEDV差異無統(tǒng)計學意義；聯(lián)合治療組LVESV明顯小于對照組及RGOs組(P<0.05)，LVEF高于對照組及ASCs組(P<0.05)，梗死區(qū)體積小于對照組(P<0.05)，LVMI小于對照組及RGOs組(P<0.05)，梗死區(qū)室壁厚度顯著超過其他3組(P<0.05)。自身前后比較，對照組、RGOs組、ASCs組移植后8周LVMI均明顯增加(P<0.05，P<0.01)；ASCs組梗死體積顯著縮小(P<0.05)；聯(lián)合治療組LVEF明顯提高(P<0.05)，梗死區(qū)體積顯著縮小(P<0.05)，梗死區(qū)室壁厚度顯著增加(P<0.05)。綜上所述，RGOs+ASCs聯(lián)合治療可明顯改善左心室功能，縮小心肌梗死體積，增加梗死區(qū)室壁的厚度，減輕左心室重構。

2.2 移植細胞體內(nèi)存活及分化 移植后8周，ASCs組及RGOs+ASCs組梗死邊緣區(qū)心肌組織冰凍切片均可見發(fā)藍色熒光的細胞核，即DAPI陽性細胞。計數(shù)視野內(nèi)DAPI陽性細胞(×400)，統(tǒng)計分析顯示，RGOs+ASCs組DAPI陽性的細胞明顯多于ASCs組(P<0.01)(圖1)。免疫熒光染色后激光共聚焦顯微鏡下觀察：部分DAPI陽性的細胞呈現(xiàn)cTn-T、α-actin陽性表達，提示部分移植的ASCs分化成心肌樣細胞(圖2A、圖2B)。另外，部分DAPI陽性細胞也呈現(xiàn)vWF及α-SMA陽性表達，提示部分移植的ASCs分化成血管內(nèi)皮及血管平滑肌細胞(圖2C)。

2.3 梗死區(qū)及梗死邊緣區(qū)新生微血管 對照組、RGOs組、ASCs組及RGOs+ASCs組梗死區(qū)微血管密度分別為(30±12) mm-2、(31±13) mm-2、(30±10) mm-2、(42±11) mm-2；各組梗死邊緣區(qū)微血管密度分別為(30±10) mm-2、(32±13) mm-2、(34±12) mm-2、(48±14) mm-2。統(tǒng)計結果顯示，RGOs+ASCs組梗死區(qū)及梗死邊緣區(qū)微血管密度均明顯高于其他3組(P<0.01)，而對照組、RGOs組、ASCs組之間梗死區(qū)及梗死邊緣區(qū)微血管密度差異無統(tǒng)計學意義(圖3)。

2.4 梗死區(qū)域纖維化檢測 對照組、RGOs組、ASCs組及RGOs+ASCs組纖維化程度分別為：(56.9±20.0)%，(54.8±19.7)%，(50.6±18.7)%，(34.9±13.4) %。統(tǒng)計結果顯示，RGOs組與對照組的纖維化程度差異無統(tǒng)計學意義；ASCs組及RGOs+ASCs組與對照組相比均能明顯減輕纖維化(P<0.05，P<0.01)，但ASCs組與RGOs組相比纖維化差異無統(tǒng)計學意義；RGOs+ASCs組纖維化程度明顯小于RGOs組及ASCs組(P<0.05)。提示RGOs聯(lián)合ASCs減少纖維化的效果最佳(圖4)。

表1 延遲增強核磁共振掃描評估左心室結構及功能±s)

注：LVEDV：左心室舒張末期容積；LVESV：左心室收縮末期容積；LVEF：左心室射血分數(shù)；LVMI：左心室質量指數(shù)；與對照組比較，aP<0.05；與RGOs組比較,bP<0.05；基點與終點比較，cP<0.05，eP<0.01；與ASCs組比較,dP<0.05

3 討論

本研究以ASCs為種子細胞，以小型豬為研究對象，從ASCs在體內(nèi)的存活與分化、心功能改善、心室重構、梗死區(qū)域新生血管形成及纖維化程度等方面，系統(tǒng)觀察了冠脈內(nèi)注射ASCs并飼以RGOs粗提物對AMI小型豬的影響。結果表明，RGOs聯(lián)合ASCs移植治療小型豬AMI能明顯改善心功能，縮小梗死體積，增加梗死區(qū)室壁厚度；其作用機制可能與RGOs促進ASCs存活與分化，促進微血管形成，抗纖維化，改善心室重構有關。

目前，干細胞移植改善心功能的作用機制尚未完全明了，主要涉及兩種機制：一是細胞分化或融合機制，二是旁分泌機制。近年研究認為后者可能發(fā)揮了主導作用，如促進新生血管形成、改善心室重構、抗纖維化、抗凋亡等[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，ASCs組及RGOs+ASCs聯(lián)合治療組均有少數(shù)移植細胞存活并分化成心肌細胞、血管內(nèi)皮細胞及血管平滑肌細胞。另外，該研究還發(fā)現(xiàn)聯(lián)合治療組單位視野移植細胞的存活率明顯高于ASCs組。提示RGOs具有促進ASCs存活的作用，其機制可能與RGOs抗氧化應激損傷、抗凋亡、改善梗死區(qū)血液供應等因素有關[4,6-8]。由于本研究僅發(fā)現(xiàn)極少數(shù)干細胞向心肌細胞及血管內(nèi)皮、平滑肌細胞分化，故干細胞治療組間未進行統(tǒng)計學分析。目前，已有多項研究證實體外培養(yǎng)的ASCs在5-氮胞苷、心肌細胞提取液誘導下可以分化為心肌細胞[10-11]。ASCs植入心肌后，其所處的微環(huán)境對于ASCs分化為心肌細胞起了關鍵作用，可能的機制如下：①心肌微環(huán)境中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、干細胞因子等與干細胞、宿主細胞和細胞外基質之間的相互作用，促使干細胞分化為心肌細胞；②通過誘導與心肌細胞發(fā)育有關基因的表達，促使干細胞向心肌細胞分化；③心肌細胞、血管內(nèi)皮細胞、內(nèi)胚層樣細胞等均可能分泌有助于心肌細胞生長的物質和信號，當心臟發(fā)生病損時，心臟可能分泌產(chǎn)生大量有利于心肌細胞再生的物質和信號，刺激植入的干細胞分化為心肌細胞。

梗死區(qū)域血液供應的恢復與重建對于損傷心肌及干細胞的存活都至關重要，因此建立有效微循環(huán)是改善AMI后心功能的前提條件。本研究發(fā)現(xiàn)，RGOs與ASCs聯(lián)合治療組梗死區(qū)及梗死邊緣區(qū)微血管密度均高于其他組，提示兩者聯(lián)合治療可以促進梗死區(qū)域新生微血管形成，這有利于梗死區(qū)域的血流灌注，挽救損傷心肌及干細胞存活，改善心功能。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)，RGOs可促進體外培養(yǎng)hASCs分泌VEGF、HGF、SDF-1、IGF-1[12]，據(jù)此推測在體內(nèi)RGOs及其代謝產(chǎn)物也可能具有促旁分泌作用，從而促進新生血管的生成。另外，RGOs還可能通過促進ASCs增殖及存活[5,8]，進一步加強其旁分泌功能，促進新生血管的再生。

本研究還發(fā)現(xiàn)，ASCs組以及聯(lián)合治療組均能明顯減輕梗死區(qū)纖維化，而聯(lián)合治療組減輕纖維化的效果最明顯，提示RGOs可以加強ASCs的抗纖維化作用。另外，心臟DE-MRI提示聯(lián)合治療組LVMI明顯小于其他治療組，提示兩者聯(lián)合可能具有改善心室重構作用。纖維化的減輕以及心室重構的改善均有利于心功能的恢復。細胞外基質合成與降解之間的平衡決定了AMI后心肌組織的纖維化程度。梁麗玲等[13]發(fā)現(xiàn)，MSCs通過降低梗死區(qū)Ⅰ、Ⅲ型膠原沉積，改善心肌梗死后心室重構，改善心臟功能。趙然尊等[14]研究發(fā)現(xiàn)，基因修飾的MSCs能顯著促進梗死區(qū)心肌組織MMP-9表達，降低梗死區(qū)膠原沉積，抑制心肌纖維化，進而改善心室重構，提高心功能?？梢娦募〖毎饣|穩(wěn)態(tài)的恢復及纖維化的減輕均有利于心室重構和心功能改善。RGOs聯(lián)合ASCs抗纖維的確切機制尚不清楚，推測可能與恢復心肌細胞外基質穩(wěn)態(tài)有關，值得進一步深入研究。

(本文圖1,2見插圖5-2;圖3，4見封三)

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Effecacy of rehmannia glutinosa oligosaccharides combined with adipose tissue-derived stem cells transplantation therapy for acute myocardial infarction of miniswine

PeiZhiyong*,YinQiaoxiang，ZhangXiaojing，GaoWei，GouPeng，ZhaoYusheng

(*DepartmentofGeriatricCardiology,ArmyGeneralHospital,Beijing100700,China)

Objective To explore the efficacy and potential mechanisms of Rehmannia Glutinosa Oligosaccharides (RGOs) combined with allogenic adipose tissue-derived stem cells (ASCs) transplantation for acute myocardial infarction (AMI) of miniswine. Methods AMI models were performed by occlusion of the left anterior descending coronary artery.A total of 17 miniswines survived after AMI were divided into four groups: control group(n=5),treated with saline; RGOs group (n=4), ASCs group(n=4) and RGOs+ASCs group (n=4). RGOs and RGOs+ASCs group were administration crude extract of RGOs from 3 days prior to AMI to one month post AMI (4g,two times per day). ASCs (0.8×106kg-1) were delivered by intracoronary one week later (7 to 10 days post-AMI). Left ventricular function, scar size, and transmural extension will be assessed by delayed-enhanced magnetic resonance imaging at baseline and after 8 weeks post cell transplantation.The infarct area and implanted cells were histologically studied. Results The combination therapy improve left ventricular ejection fraction, increased wall thickness of myocardial infarction,reduced left ventricular mass index and infarct size compared with control group(allP<0.05). ASCs survival was significantly better in combined group than that in ASCs group (P<0.01),and the markers of the cardiomyocytes(cTnT and α-actin) and vessel(vWF and α-SMA)were detected. The microvessel density in combination group was significantly higher than that in the others three groups(P<0.01).Combination therapy can reduce fibrosis of myocardial infarction in ASCs and in combination group compared with control group (P<0.05 andP<0.01 respectively). Conclusion The RGOs+ASCs combination therapy can enhance the effect of ASCs in the treatment of AMI,improve cardiac function and prevent ventricular remodeling.The mechanism may be related to RGOs in promoting the proliferation,survivals of ASCs and the anti-fibrosis effect.

Myocardial infarction; Stem cell transplantation; Rehmannia glutinosa；Ventricular remodeling；Models,animal

國家高科技研究發(fā)展計劃(2006AA02A105)

裴志勇，博士，副主任醫(yī)師，Email:peizy6618222@sina.com

R542.22

A

10.3969/J.issn.1672-6790.2016.05.017

2015-12-22)