• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    3 種脂環(huán)酸芽孢桿菌分離培養(yǎng)基的性能評(píng)價(jià)

    2016-11-11 07:34:33何天文盧勉飛蔡芷荷周梅連吳清平
    食品科學(xué) 2016年3期
    關(guān)鍵詞:環(huán)酸廠家芽孢

    何天文,盧勉飛,蔡芷荷,周梅連,吳清平*

    (1.廣東環(huán)凱微生物科技有限公司,廣東 廣州 510663;2.廣東省微生物研究所,廣東 廣州 510070)

    3 種脂環(huán)酸芽孢桿菌分離培養(yǎng)基的性能評(píng)價(jià)

    何天文1,盧勉飛1,蔡芷荷1,周梅連1,吳清平2,*

    (1.廣東環(huán)凱微生物科技有限公司,廣東 廣州 510663;2.廣東省微生物研究所,廣東 廣州 510070)

    目的:比較3 個(gè)廠家的K培養(yǎng)基、酵母粉淀粉葡萄糖(yeast extract starch glucose medium,YSG)培養(yǎng)基和耐酸耐熱芽孢菌(Alicycloba cillus)培養(yǎng)基(Bacillus acidoterrestris medium,BAT)對(duì)脂環(huán)酸芽孢桿菌的檢測(cè)效果。方法:選用標(biāo)準(zhǔn)菌株、分離株及實(shí)際樣品對(duì)3 個(gè)廠家(廣東環(huán)凱微生物科技有限公司(簡(jiǎn)稱HK,下同)、廠家Ⅰ和廠家Ⅱ)的K培養(yǎng)基、YSG培養(yǎng)基和BAT培養(yǎng)基進(jìn)行生長(zhǎng)菌落數(shù)及分離效果的評(píng)估。結(jié)果:酸土脂環(huán)酸芽孢桿菌標(biāo)準(zhǔn)株和脂環(huán)酸芽孢桿菌分離株4-2在K、YSG和BAT 3 種培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)(3 個(gè)廠家培養(yǎng)基上的 菌落數(shù)平均數(shù))均無顯著性差異(P>0.05);酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌標(biāo)準(zhǔn)株和脂環(huán)酸芽孢桿菌分離株5-3在K培養(yǎng)基上不生長(zhǎng),在YSG培養(yǎng)基和BAT培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好,其菌落平均數(shù)統(tǒng)計(jì)學(xué)上無顯著性差異(P>0.05);對(duì)實(shí)際樣品中酸土脂環(huán)酸芽孢桿菌的分離,3 個(gè)廠家的同種培養(yǎng)基分離率和符合率相當(dāng);對(duì)實(shí)際樣品中酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌的分離,在YSG和BAT培養(yǎng)基上,HK和廠家Ⅱ的分離率和符合率相當(dāng),優(yōu)于廠家Ⅰ。結(jié)論:K培養(yǎng)基不適合所有脂環(huán)芽孢桿菌,但 分離酸土脂環(huán)酸芽孢桿菌效果很好,YSG培養(yǎng)基和BAT培養(yǎng)基適合所有脂環(huán)酸芽孢桿菌。HK和廠家Ⅱ的培養(yǎng)基優(yōu)于廠家Ⅰ。

    脂環(huán)酸酸芽孢桿菌;培養(yǎng)基;性能評(píng)價(jià)

    微生物是使蘋果汁等果汁發(fā)生混濁、沉淀和腐敗 變質(zhì)的主要因素[1],特別是在低酸度下仍能長(zhǎng)期存活的脂環(huán)酸芽孢桿菌,對(duì)其進(jìn)行控制和快速檢測(cè)已成為令蘋果汁生產(chǎn)廠家困擾的問題[2-3]。脂環(huán)酸芽孢桿菌是Wisotzkey等[4]通過對(duì)酸熱脂環(huán)芽孢桿菌(Bacillus acidocaldarius)[5]、環(huán)庚烷芽孢桿菌(B. acidoterrestris)和酸土芽孢桿菌(B. cycloheptanicus)[6]進(jìn)行16S rDNA基因序列分析,以及對(duì)其細(xì)胞膜中都含有ω-環(huán)狀脂肪酸[7-8]的特點(diǎn)分析,把這3 種菌從芽孢桿菌屬中劃分出來,成立為一個(gè)新屬。該屬中的酸土脂環(huán)酸芽孢桿菌和酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌容易引起果汁腐敗,并產(chǎn)生異味。腐敗初期,產(chǎn)品并不會(huì)出現(xiàn)明顯的漲包或酸敗,但是萬億分之一濃度的該菌代謝產(chǎn)物就會(huì)使果汁口感風(fēng)味變劣,產(chǎn)生混濁乃至形成白色沉淀等[3,9]。

    Darland等[5]在1971年發(fā)明了耐酸耐熱芽孢桿菌(Bacillus acidocaldarius thermophilic agar medium,BAT)培養(yǎng)基。在1984年Gerny等[10]等利用BAT培養(yǎng)基從腐敗的蘋果汁中分離出第一株脂環(huán)酸芽孢桿菌[10]。然而Bevilacqua等[11]認(rèn)為BAT培養(yǎng)基適用果汁中脂環(huán)酸芽孢桿菌分離。1998年,Walls等[12]首先利用K培養(yǎng)基從蘋果汁中分離出脂環(huán)酸芽孢桿菌。Matsubara等[13]利用酵母粉淀粉葡萄糖(yeast extract starch glucose,YSG)瓊脂培養(yǎng)基分離酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌,有研究認(rèn)為,適用芙蓉花干中脂環(huán)酸芽孢桿菌分離,日本NDM公司使用YSG培養(yǎng)基,用于酸性飲料中脂環(huán)酸芽孢桿菌檢驗(yàn)[14]。隨后這3種培養(yǎng)基均被列入國(guó)際果汁生產(chǎn)商聯(lián)合會(huì)(International Federation of Fruit Juice Producers,IFU)標(biāo)準(zhǔn)方法12《果汁中脂環(huán)酸芽孢菌的檢測(cè)》[15]。各學(xué)者對(duì)這3 種培養(yǎng)基對(duì)脂環(huán)酸芽孢桿菌檢測(cè)效果持不同觀點(diǎn)。本研究通過對(duì)在這3 種培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)和對(duì)樣品中目標(biāo)菌的分離效果來比較培養(yǎng)基的性能,旨在為廣大檢驗(yàn)工作者選擇合適的培養(yǎng)基提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 菌株、培養(yǎng)基及試劑

    酸土脂環(huán)酸芽孢桿菌ATCC49025、酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌ATCC27009、脂環(huán)酸酸芽孢桿菌分離株4-2、脂環(huán)酸酸芽孢桿菌分離株5-3 廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。

    K培養(yǎng)基、YSG培養(yǎng)基、BAT培養(yǎng)基、糖醇生化鑒定試劑、革蘭氏染色液 廣東環(huán)凱微生物科技有限公司(簡(jiǎn)稱HK)。

    濃縮橙汁、濃縮蘋果汁、濃縮葡萄汁樣品 廣州卜蜂蓮花超市。所有試樣均按照無菌采樣原則采集,采樣后置4~8 ℃條件下保存。

    1.2 儀器與設(shè)備

    全自動(dòng)菌落分析儀、電熱恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱廣東環(huán)凱微生物科技有限公司;螺旋接種儀 瑞士SIB公司。

    1.3 方法

    1.3.1 實(shí)驗(yàn)菌株的生長(zhǎng)比較

    培養(yǎng)基的制備:K培養(yǎng)基、YSG培養(yǎng)基、BAT培養(yǎng)基分別按其使用說明書制備成平板,備用。使用前將其置于45 ℃培養(yǎng)箱中,直至培養(yǎng)基表面的水滴消失。

    實(shí)驗(yàn)菌懸液的制備:將酸土脂環(huán)酸芽孢桿菌ATCC49025、酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌ATCC27009、脂環(huán)酸酸芽孢桿菌分離株4-1和脂環(huán)酸酸芽孢桿菌分離株5-3接種于YSG培養(yǎng)基,于(45±1) ℃條件下培養(yǎng)72 h后,挑取菌苔懸浮于無菌生理鹽水中,制備在含活菌數(shù)約為1×10-4~1×10-5CFU/mL的菌懸液中,備用。

    實(shí)驗(yàn)菌懸液的接種:取上述兩種菌懸液0.1 mL,用全自動(dòng)螺旋接種儀分別接種至3 個(gè)廠家的K培養(yǎng)基、YSG培養(yǎng)基、BAT培養(yǎng)基平板上,于(45±1) ℃條件下培養(yǎng)72 h后,進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。

    1.3.2 樣品分離

    [16],與標(biāo)準(zhǔn)菌株一起進(jìn)行比較分析方法。

    1.3.2.1 陽性對(duì)照樣品處理

    各取50 mL樣品至兩個(gè)三角瓶,于121 ℃條件下滅菌15 min后,一瓶加入適量的酸土脂環(huán)酸芽孢桿菌ATCC49025,另一瓶加入酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌ATCC27009,另取相同體積的同一樣品于一個(gè)相同的瓶中做溫度控制用,在溫度控制瓶中插入溫度計(jì)。把兩個(gè)瓶都放入到水浴箱中(水浴箱中的水面應(yīng)高于瓶中的樣品)。70 ℃條件下開始計(jì)時(shí),20 min后,迅速將樣品冰浴。

    1.3.2.2 實(shí)驗(yàn)樣品處理

    取50 mL樣品于一個(gè)無菌瓶中,不接種,后續(xù)操作與1.3.2.1節(jié)同。

    1.3.2.3 陽性對(duì)照樣品和實(shí)驗(yàn)樣品的接種

    將經(jīng)過熱處理的樣品加入無菌生理鹽水稀釋,稀釋倍數(shù)約10 倍左右。用0.45 μm的濾膜過濾后把濾膜放到K培養(yǎng)基、YSG培養(yǎng)基、BAT培養(yǎng)基上,(45±1) ℃條件下培養(yǎng)3~5 d。

    1.3.2.4 可疑菌株分離

    在接種樣品的3 個(gè)廠家的K培養(yǎng)基、YSG培養(yǎng)基、BAT培養(yǎng)基平板上分別挑取與陽性對(duì)照樣品特征相似的菌落,為可疑菌株,對(duì)應(yīng)的樣品為可疑陽性樣品。分離率計(jì)算公式如下。

    1.3.2.5 生化鑒定

    分別將從上述培養(yǎng)基平板上所挑取的可疑菌株,轉(zhuǎn)接至YSG培養(yǎng)基上,于(45±1) ℃條件下培養(yǎng)72 h后,刮取YSG培養(yǎng)基上的菌苔進(jìn)行革蘭氏染色,涂片鏡檢、耐酸耐熱生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn),并參照陳世瓊等[17]方法進(jìn)行包括甘油、阿拉伯糖、松三糖、松二糖、木糖醇、棉子糖、葡萄糖酸鹽、肌醇、蔗糖、乳糖、麥芽糖、纖維二糖、水楊苷、七葉苷、苦杏仁苷、甘露糖、鼠李糖、山梨醇、半乳糖19 種糖醇生化鑒定。典型生化特征見表1[17]。

    表1 典型生化特征Table1 Typical biochemical characteristics of Alicyclobaciilllluuss

    符合以上所有生化反應(yīng)特征的可疑菌株確認(rèn)為陽性菌株,對(duì)應(yīng)樣品為陽性樣品。陽性菌株符合率計(jì)算見下式。

    1.4 數(shù)據(jù)分析

    所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS 19.0軟件分析,數(shù)據(jù)結(jié)果以±s表示。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 菌株在3 種培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況比較由表2可知,酸土脂環(huán)酸芽孢桿菌ATCC49025和脂環(huán)酸芽孢桿菌分離株4-2在K培養(yǎng)基、YSG培養(yǎng)基和BAT培養(yǎng)基3 種培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)(3 個(gè)廠家培養(yǎng)基上的菌落數(shù)平 均數(shù),下同)均無顯著性差異(P>0.05);酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌ATCC27009和脂環(huán)酸芽孢桿菌分離株5-3

    表2 實(shí)驗(yàn)菌株在各培養(yǎng)基上的菌落數(shù)Table2 Colony counts of reference strains and isolates of Alicyclobaciilllluuss in different media lg(CFU/mL)

    在K培養(yǎng)基上不生長(zhǎng),在YSG培養(yǎng)基和BAT培養(yǎng)基上生長(zhǎng)菌落平均數(shù)無顯著性差異(P>0.05),表明K培養(yǎng)基不適合酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌ATCC27009和脂環(huán)酸芽孢桿菌分離株5-3的生長(zhǎng)。4 株實(shí)驗(yàn)菌株在3 個(gè)廠家的K培養(yǎng)基、

    YSG培養(yǎng)基、BAT培養(yǎng)基的生長(zhǎng)菌落平均數(shù)也有差異,總體上HK和廠家Ⅱ相當(dāng),均優(yōu)于廠家Ⅰ,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著差異(P<0.05)。

    2.2 樣品分離實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    2.2.1 酸土脂環(huán)酸芽孢桿菌

    表3 3 種培養(yǎng)基分離酸土脂環(huán)酸芽孢桿菌的結(jié)果Table3 Separation of A. acidoterrestris from three media

    標(biāo)準(zhǔn)菌株與可疑菌株在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)菌落特征相同,均為黃白色,菌落較大,邊緣不整齊,不透明,如表3所示,3 個(gè)廠家的K培養(yǎng)基均從10 份樣品中分離出3 份可疑陽性樣品,分離的可疑菌株最后經(jīng)生化反應(yīng)確認(rèn)為陽性樣為3 份,分離率均為30%,符合率均為100%,說明3 個(gè)廠家的K培養(yǎng)基分離酸土脂環(huán)酸芽孢桿菌的分離率相當(dāng),且特異性均較高;HK、廠家Ⅰ、廠家Ⅱ的YSG培養(yǎng)基分別從10 份樣品中分離出7、8、9 份可疑陽性樣品,分離的可疑菌株最后經(jīng)生化反應(yīng)確認(rèn)陽性樣品為3 份,分離率為30%,符合率分別為43%、38%、33%,說明3 個(gè)廠家的分離率基本相當(dāng),但HK的特異性比其他兩個(gè)廠家稍高;3 個(gè)廠家的BAT培養(yǎng)基均從10 份樣品中分離出6 份可疑陽性樣品,分離的可疑菌株最后經(jīng)生化反應(yīng)確認(rèn),陽性樣品均為3 份,分離率均為30%,符合率均為50%,說明3 個(gè)廠家BAT培養(yǎng)基分離酸土脂環(huán)酸芽孢桿菌的分離率與特異性相當(dāng)。

    傳統(tǒng)的電氣工程優(yōu)化設(shè)計(jì),主要是工作人員根據(jù)自己的經(jīng)驗(yàn),靠著工作人員以往的經(jīng)驗(yàn),根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)的人工測(cè)量,并運(yùn)用手工技術(shù)進(jìn)行設(shè)計(jì),很顯然,這樣的設(shè)計(jì)效率是很低的,一旦出現(xiàn)設(shè)計(jì)返工,或者由于設(shè)計(jì)人員自身水平導(dǎo)致設(shè)計(jì)結(jié)果不達(dá)標(biāo),就會(huì)給后期的電氣安裝和使用帶來不必要的麻煩,而且更容易導(dǎo)致系統(tǒng)故障,不利于電氣工程的安全性和穩(wěn)定性。通過智能化設(shè)計(jì),就可以從很大程度上對(duì)電氣工程的設(shè)計(jì)進(jìn)行提前優(yōu)化,大大的降低了設(shè)計(jì)人員的工作量。智能化設(shè)計(jì)的成果通過實(shí)際檢驗(yàn)后還可以很好的提升電氣工程的適用性,尤其是遺傳算法的使用,可以從很大程度上實(shí)現(xiàn)對(duì)設(shè)計(jì)的優(yōu)化,降低設(shè)計(jì)的錯(cuò)誤,提升整個(gè)系統(tǒng)設(shè)計(jì)的有效性,保證電氣工程設(shè)計(jì)更加高效。

    2.2.2 酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌

    標(biāo)準(zhǔn)菌株在K培養(yǎng)基上生長(zhǎng)受抑制,樣品在K培養(yǎng)基上也沒有發(fā)現(xiàn)與酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌菌落特征相似的可疑菌落,表明3 個(gè)廠家的K培養(yǎng)基均不適合分離酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌。樣品在YSG培養(yǎng)基和BAT培養(yǎng)基上有與標(biāo)準(zhǔn)株特征一致的可疑株,HK、廠家Ⅰ、廠家Ⅱ的YSG培養(yǎng)基分別從10 份樣品中分離出5、3、5 份可疑樣品,分離的可疑菌株最后經(jīng)生化反應(yīng)確認(rèn)陽性樣品分別為2、1、2 份,分離率分別為20%、10%、20%,符合率分別為40%、33%、40%;廠家Ⅰ的BAT培養(yǎng)基沒有從樣品中分離出可疑菌落,HK和廠家Ⅱ分別分離出2、3 份可疑樣品,分離的可疑菌株最后經(jīng)生化反應(yīng)確認(rèn)樣品均為1 份,分離率均為10%,符合率分別為50%和33%。結(jié)果表明YSG培養(yǎng)基和BAT培養(yǎng)基能適合酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌的分離,但不同廠家分離效果有差異,分離率HK和廠家Ⅱ相當(dāng),優(yōu)于廠家Ⅰ,但符合率HK最高。結(jié)果見表4。

    表4 3 種培養(yǎng)基分離酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌的結(jié)果Table4 Separation of A. acidocaldarius from three media

    3 討論與結(jié)論

    美國(guó)庫(kù)克實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)脂環(huán)酸芽孢桿菌時(shí)選用的培養(yǎng)基是K培養(yǎng)基,按庫(kù)克實(shí)驗(yàn)室的配制方法,將10 mL經(jīng)過濾除菌的12.5% L-蘋果酸溶液加至于121 ℃滅菌25 min的K培養(yǎng)基中,攪拌均勻,使其pH值達(dá)到3.7±0.1,其配制方法簡(jiǎn)單,操作過程中不易受污染,被廣泛用于分離濃縮果汁中的脂環(huán)酸芽孢桿菌。Walls等[12]對(duì)K培養(yǎng)基、橙血清瓊脂、馬鈴薯葡糖糖瓊脂比較,發(fā)現(xiàn)在不同溫度下,K培養(yǎng)基生長(zhǎng)的脂環(huán)酸芽孢桿菌均是最好。薛晚利等[18]也利用K培養(yǎng)基從濃縮蘋果汁中分離脂環(huán)酸芽孢桿菌。但是均沒有說明是脂環(huán)酸芽孢桿菌屬中哪個(gè)種,本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌在K培養(yǎng)基上生長(zhǎng)很差,說明K培養(yǎng)基不適合所有脂環(huán)酸芽孢桿在K培養(yǎng)基上的生長(zhǎng),同時(shí)發(fā)現(xiàn)因其對(duì)脂環(huán)酸芽孢桿菌有一定的抑制,因此分離酸土脂環(huán)芽孢桿菌時(shí),特異性很高。Chang Susen等[19]對(duì)K培養(yǎng)基進(jìn)行改進(jìn),添加了糖和鈣離子等研發(fā)成SK培養(yǎng)基,并證明其比K培養(yǎng)基更有利于分離脂環(huán)酸芽孢桿菌。YSG培養(yǎng)基是日本NDM公司檢測(cè)脂環(huán)酸芽孢桿菌使用的培養(yǎng)基。根據(jù)其配制方法,將YSG液體培養(yǎng)基和瓊脂各加一半蒸餾水,于121 ℃條件下分開滅菌15 min。然后YSG液體培養(yǎng)基用鹽酸或硫酸調(diào)節(jié)其pH值至3.7±0.1,并與瓊脂溶液混合。但是IFU中的YSG培養(yǎng)基配制方法與日本NDM公司不同,其方法與配制BAT培養(yǎng)基相似,于121 ℃條件下滅菌15 min后用鹽酸或硫酸調(diào)節(jié)pH值。本實(shí)驗(yàn)選用的是日本NDM公司的方法,因?yàn)槠涓欣刂谱罱KpH值。因?yàn)閷?shí)驗(yàn)證明培養(yǎng)基的最終pH值對(duì)脂環(huán)酸芽孢桿菌的檢測(cè)很關(guān)鍵,其最終pH值高于4.2時(shí)抑制耐熱菌凝結(jié)芽孢桿菌生長(zhǎng)的效果差,而pH值過低會(huì)影響脂環(huán)酸芽孢桿菌的生長(zhǎng)。BAT培養(yǎng)基是IFU最早推薦檢測(cè)脂環(huán)酸芽孢桿菌的培養(yǎng)基。BAT培養(yǎng)基也是滅菌后用鹽酸或硫酸調(diào)節(jié)其pH值至4.0±0.1。此培養(yǎng)基的瓊脂粉是與配方中的其他原料一起混勻后制備成干粉培養(yǎng)基的,受存儲(chǔ)環(huán)境的影響,當(dāng)培養(yǎng)基pH值下降至5.0以下時(shí),由于過度酸性,滅菌后培養(yǎng)基的凝膠強(qiáng)度會(huì)產(chǎn)生下降或不凝固的現(xiàn)象,因此該干粉培養(yǎng)基儲(chǔ)存條件更苛刻。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,YSG培養(yǎng)基與BAT培養(yǎng)基的檢測(cè)效果相當(dāng)。然而Murray等[20]對(duì)6 株酸土脂環(huán)酸芽孢桿菌、3 株酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌和1 株庚烷脂環(huán)酸芽孢桿菌實(shí)驗(yàn),認(rèn)為BAT培養(yǎng)基回收孢子優(yōu)于YSG培養(yǎng)基。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,不同廠家生產(chǎn)的相同培養(yǎng)基之所以存在差異,是與培養(yǎng)基使用的原料和配制方法有關(guān),且薛晚利等[18]也持相同觀點(diǎn)。

    參考文獻(xiàn):

    [1] 張欣, 張愛東, 葛毅強(qiáng), 等. 濃縮果汁及其后渾濁現(xiàn)象[J]. 食品科技, 1997, 22(5): 28-30. DOI:10.13684/j.cnki.spkj.1997.05.015.

    [2] KEIICHI G, KAORU M, MIKA A, et al. Alicyclobacillus pomorum sp.nov., a novel thermo-acidophilic, endospore-forming bacterium that does not possess ω-alicyclic fatty acids, and emended description ofthe genus Alicyclobacillus[J]. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 2003, 53(5): 1537-1544. DOI:10.1099/ ijs.0.02546-0.

    [3] 姚培鑫, 馬小魁. 濃縮果汁生產(chǎn)廠中嗜酸耐熱菌的跟蹤檢測(cè)[J]. 飲料工業(yè), 2001, 4(3): 42-45. DOI:10.3969/j.issn.1007-7871.2001.03.014.

    [4] WISOTZKEY J D, JR J P, FOX G E, et al. Comparative sequence analyses on the 16S r RNA (rDNA) of Bacillus acidocaldarius, Bacillus acidoterrestris, and Bacillus cycloheptanicus and proposal for creation of a new genes, Alicyclobacillus gen. bov.[J]. I nternational Journal of Systematic Bacteriology, 1992, 42(2): 263-269. DOI:10.1099/00207713-42-2-263.

    [5] DARLAND G, BROCK T D. Bacillus acidocaldarius sp. nov. an acidophilic thermophlic spore-forming bacterium[J]. Journal of Gen Microbiology, 1971, 67(1): 9-15. DOI:10.1099/00221287-67-1-9.

    [6] DEINHARD G, SAAR J, KRISCHKE W, et al. Bacillus cycloheptanicus sp. nov., a new thermoacidophile containing omegacycloheptane fatty acids[J]. Systematic and Applied Microbiology, 1987, 10(1): 68-73. DOI:10.1016/S0723-2020(87)80013-9.

    [7] de ROSA M, GAMBACORTA A, MINALE L, et al. Cyclohexane fatty acids from a thermophilic bacterium[J]. Journal of the Chemical Society D: Chemical Communications, 1971, 21(21): 1344a. DOI:10.1039/C2971001334A.

    [8] PORALLA K, K?ENIG W A. The occurrence of ω-cycloheptane fatty acids in a thermo-acidophilic Bacillus[J]. FEMS Microbiol Letters, 1983, 16(2/3): 303-306. DOI:10.1111/j.1574-6968.1983.tb00307.x.

    [9] 曾祥奎, 黃斌, 于娟. 濃縮蘋果汁主要技術(shù)指標(biāo)控制的研究[J]. 飲料工業(yè), 2002, 5(1): 19-30. DOI:10.3969/j.issn.1007-7871.2002.01.006.

    [10] GERNY G, HENNLICH W, PORALLA K. Spoilage of fruit juice by bacilli: isolation and characterisation of the spoiling microorganism[J]. Journal of Applied Microbiology, 1984, 179(3): 224-227. DOI:10.1016/j.fm.2014.09.019.

    [11] BEVILACQUA A, SINIGAGLIA M, CORBO M R. Alicyclobacillus acidoterrestris: new methods for inhibiting spore germination[J]. International Journal of Food Microbiology, 2008, 125(2): 103-110. DOI:10.1016/j.ijfoodmicro.2008.02.030.

    [12] WALLS I, CHUYATE R. Alicyclobacillus-hi storical perspective and preliminary characterization study[J]. Dairy, Food and Environmental Sanitation, 1998, 18(8): 499-503. DOI:10.1007/978-4-431-69850-0_8.

    [13] MATSUBARA H, GOTO K, MATSUMURA T. Alicyclobacillus acidiphilus sp. nov., a novel thermacidophilic, ω-alicyclic fatty acidcontaining bacterium isolated from acidic beverages[J]. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 2002, 52(5): 1681-1685. DOI:10.1099/00207713-52-5-1681.

    [14] 趙貴明, 趙勇勝. 環(huán)狀脂環(huán)酸芽孢桿菌的檢測(cè)與控制研究進(jìn)展[J].檢驗(yàn)檢疫學(xué)刊, 2011, 21(3): 8-12.

    [15] International Federation of Fruit Juice Producers. IFU-Method on the detection of taint producing Alicyclobacillus in fruit juices[S].

    [16] 王峰, 李建科, 郭玉蓉, 等. 蘋果濃縮汁中嗜酸耐熱菌的分離與鑒定[J]. 微生物學(xué)通報(bào), 2008, 35(11): 1755-1759. DOI:10.3969/ j.issn.0253-2654.2008.11.014.

    [17] 陳世瓊, 胡小松, 石維妮, 等. 濃縮蘋果汁生產(chǎn)過程中脂環(huán)酸酸芽孢桿菌的分離及初步鑒定[J]. 微生物學(xué)報(bào), 2004, 44(6): 816-818. DOI:10.13343/j.cnki.wsxb.2004.06.024.

    [18] 薛晚利, 周玲, 李選社, 等. 濃縮蘋果汁中嗜酸耐熱菌的分離及檢測(cè)條件探討[J]. 西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版), 2005, 26(2): 199-200. DOI:10.3969/j.issn.1671-8259.2005.02.031.

    [19] CHANG S S, KANG D H. Alicyclobacillus spp. in the fruit juice industry: history, characteristics, and current isolation/detection procedures[J]. Critical Reviews in Microbiology, 2008, 30(2): 1051-1060. DOI:10.1080/10408410490435089.

    [20] MURRAY M B, GURTLER J B, RYU J H, et al. Evaluation of direct plating methods to enumerate Alicyclobacillus in beverages[J]. International Journal of Food Microbiology, 2007, 115(1): 59-69. DOI:10.1007/978-1-4419-0826-1_9.

    Performance Evaluation of Three Media for Alicyclobacillus Iso lation

    HE Tianwen1, LU Mianfei1, CAI Zhihe1, ZHOU Meilian1, WU Qingping2,*
    (1. Guangdong Huankai Microbial Sci.&Tech.Co. Ltd., Guangzhou 510663, China; 2. Guangdong Institute of Microbiology, Guangzhou 510070, China)

    Objective: To evaluate the efficacy of three media, K agar, yeast extract starch glucose (YSG) medium and Bacillus acidoterrestris (BAT) agar medium each from three manufacturers (Guangdong huankai, manufacturer II and manufacturer I), in detecting Alicyclobacillus. Methods: The colony growth of standard strains and the separation of Alicyclobacillus isolates from real samples were evaluated using the three media. Results: The number of colonies of Alicyclobacillus acidoterrestris reference culture and Alicyclobacillus isolate 4-2 in K medium, YSG medium and BAT medium did not significantly diff er (P > 0.05). Similarly, there was no significant difference in the number of colonies of A. acidoterrestris reference culture and Alicyclobacillus isolate 5-3 in YSG medium and BAT medium (P > 0.05), but neither could grow in K medium. The separation and consistency rates of three media from three manufacturers for isolating A. acidoterrestris in samples w ere similar. The separa tion and consistency rates of YSG medium for isolating A. acidocaldarius in samples were similar to those of BAT medium from HK and manufacturer II, which were better than those from manufacturer I. Conclusion: K medium was more effective for isolating A. acidoterrestris, but it was not suitable for isolating all Alicyclobacillus iso lates. YSG medium and BAT medium were suitable for isolating all Alicyclobacillus isolates. The media from HK and manufacturer II had superior performance than those from manufacturer I.

    Alicyclobacillus; culture media; performance evaluation

    10.7506/spkx1002-6630-201603032

    TS201.3

    A

    1002-6630(2016)03-0175-05

    何天文, 盧勉飛, 蔡芷荷, 等. 3 種脂環(huán)酸芽孢桿菌分離培養(yǎng)基的性能評(píng)價(jià)[J]. 食品科學(xué), 2016, 37(3): 175-179. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201603032. http://www.spkx.net.cn

    HE Tianwen, LU Mianfei, CAI Zhihe, et al. Performance evaluation of three media for Alicyclobacillus iso lation[J]. Food Science, 2016, 37(3): 175-179. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201603032. http://www.spkx.net.cn

    2014-12-13

    廣州市科技基金項(xiàng)目(2014Y2-00148)

    何天文(1983—),男,工程師,本科,主要從事微生物快速檢測(cè)技術(shù)研究。E-mail:hetianwe.n@163.com

    *通信作者:吳清平(1962—),男,研究員,博士,主要從事微生物快速檢測(cè)技術(shù)研究。E-mail:wuqp203@163.com

    猜你喜歡
    環(huán)酸廠家芽孢
    氨甲環(huán)酸對(duì)初次單側(cè)人工全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)后失血的療效觀察
    解淀粉芽孢桿菌Lx-11
    解淀粉芽孢桿菌的作用及其產(chǎn)品開發(fā)
    側(cè)孢短芽孢桿菌A60
    百萬級(jí)水產(chǎn)經(jīng)銷商是怎么練成的!哪種經(jīng)銷商最受廠家青睞,最易獲取資源?
    在對(duì)患者進(jìn)行全髖關(guān)節(jié)置換術(shù)期間用不同的氨甲環(huán)酸止血法對(duì)其進(jìn)行止血的效果
    美小運(yùn)載廠家簽多次發(fā)射協(xié)議
    太空探索(2016年12期)2016-07-18 11:13:43
    “上下床廠家”玩轉(zhuǎn)“互聯(lián)網(wǎng)+”
    關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射氨甲環(huán)酸對(duì)單髁置換術(shù)圍手術(shù)期失血量的影響
    尿素廠家的長(zhǎng)期虧損牌能打多久
    日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 丰满迷人的少妇在线观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 精品亚洲成国产av| 久久中文字幕一级| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 精品国内亚洲2022精品成人 | 无限看片的www在线观看| 成人永久免费在线观看视频 | 十八禁人妻一区二区| 亚洲成a人片在线一区二区| 久久这里只有精品19| 精品午夜福利视频在线观看一区 | 亚洲一区中文字幕在线| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 午夜91福利影院| 99国产精品一区二区三区| 一边摸一边做爽爽视频免费| 亚洲国产成人一精品久久久| 91成人精品电影| 精品一品国产午夜福利视频| 久久av网站| 亚洲av电影在线进入| 国产成人精品久久二区二区91| 十八禁人妻一区二区| 女警被强在线播放| 成人三级做爰电影| 91老司机精品| 色播在线永久视频| 亚洲精品在线观看二区| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲国产欧美在线一区| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 亚洲一区中文字幕在线| 超碰97精品在线观看| 在线观看一区二区三区激情| 最近最新中文字幕大全免费视频| 美女扒开内裤让男人捅视频| 久热爱精品视频在线9| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 国产成人精品久久二区二区91| 老司机午夜福利在线观看视频 | 99在线人妻在线中文字幕 | 日本av手机在线免费观看| 麻豆成人av在线观看| 久久亚洲精品不卡| 午夜福利在线观看吧| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产日韩欧美视频二区| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 中文欧美无线码| 丰满迷人的少妇在线观看| 亚洲中文字幕日韩| 国产精品二区激情视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 真人做人爱边吃奶动态| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 操美女的视频在线观看| e午夜精品久久久久久久| 三级毛片av免费| 亚洲avbb在线观看| 天堂8中文在线网| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 女同久久另类99精品国产91| 乱人伦中国视频| 国产av一区二区精品久久| 五月开心婷婷网| 一级,二级,三级黄色视频| 人人妻人人澡人人看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 精品国产国语对白av| 一边摸一边做爽爽视频免费| 午夜福利视频在线观看免费| 91精品三级在线观看| 欧美激情极品国产一区二区三区| 黑丝袜美女国产一区| kizo精华| 亚洲三区欧美一区| 黄色成人免费大全| 亚洲精品中文字幕在线视频| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 搡老岳熟女国产| 国产三级黄色录像| 国产成人精品久久二区二区91| 免费观看a级毛片全部| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 黄色怎么调成土黄色| 757午夜福利合集在线观看| 在线观看www视频免费| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲七黄色美女视频| 最黄视频免费看| 中文字幕色久视频| 精品高清国产在线一区| 在线观看人妻少妇| 欧美精品一区二区大全| 丰满迷人的少妇在线观看| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 视频区图区小说| 色综合婷婷激情| 老熟女久久久| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 久久久久久久国产电影| 国产精品.久久久| 视频区图区小说| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 久久精品国产a三级三级三级| 午夜福利在线免费观看网站| 国产精品亚洲av一区麻豆| 99国产精品一区二区三区| 午夜福利欧美成人| 老司机影院毛片| 桃红色精品国产亚洲av| 国产精品免费大片| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲精品国产区一区二| 日韩视频在线欧美| 1024香蕉在线观看| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 91国产中文字幕| 久久久久国产一级毛片高清牌| 怎么达到女性高潮| 曰老女人黄片| 99久久人妻综合| 亚洲av美国av| 黄色视频,在线免费观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 婷婷丁香在线五月| 男男h啪啪无遮挡| 午夜视频精品福利| 中文字幕人妻丝袜制服| 高清在线国产一区| 亚洲精品中文字幕在线视频| 91av网站免费观看| 欧美久久黑人一区二区| av天堂在线播放| 久久中文字幕人妻熟女| 大码成人一级视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国产精品久久久av美女十八| 久久中文看片网| 国产亚洲精品久久久久5区| 夜夜爽天天搞| 最近最新免费中文字幕在线| 美女主播在线视频| 成人三级做爰电影| 青青草视频在线视频观看| 中文字幕高清在线视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| www.自偷自拍.com| 久久久欧美国产精品| 国产成人精品在线电影| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲国产欧美在线一区| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 久久人人97超碰香蕉20202| 美女视频免费永久观看网站| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲精品av麻豆狂野| 不卡一级毛片| 国产精品国产av在线观看| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 亚洲性夜色夜夜综合| 成人黄色视频免费在线看| 我的亚洲天堂| 蜜桃国产av成人99| 欧美黑人欧美精品刺激| 丝袜人妻中文字幕| 欧美国产精品一级二级三级| 女性被躁到高潮视频| 18禁观看日本| 丝袜喷水一区| 国产午夜精品久久久久久| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| a在线观看视频网站| 一级毛片电影观看| 欧美日韩av久久| 超碰97精品在线观看| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 91成年电影在线观看| 69精品国产乱码久久久| 制服人妻中文乱码| 9热在线视频观看99| 免费少妇av软件| 51午夜福利影视在线观看| 国产成人欧美在线观看 | 亚洲欧美色中文字幕在线| 极品教师在线免费播放| 69精品国产乱码久久久| 动漫黄色视频在线观看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| a在线观看视频网站| 青青草视频在线视频观看| 中文字幕精品免费在线观看视频| 一边摸一边抽搐一进一出视频| avwww免费| 性高湖久久久久久久久免费观看| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 成年人黄色毛片网站| 在线av久久热| 最近最新中文字幕大全电影3 | 久久精品国产亚洲av高清一级| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 制服人妻中文乱码| 亚洲色图av天堂| 国产不卡一卡二| 满18在线观看网站| 婷婷丁香在线五月| 亚洲欧美激情在线| 满18在线观看网站| 精品久久久精品久久久| 国产在线视频一区二区| 一级毛片电影观看| 日韩视频在线欧美| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 九色亚洲精品在线播放| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 日本av手机在线免费观看| 国产一区有黄有色的免费视频| a在线观看视频网站| 亚洲欧美一区二区三区久久| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲 国产 在线| 欧美精品一区二区大全| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 中文欧美无线码| 高清欧美精品videossex| 午夜福利,免费看| 国产区一区二久久| 国产精品免费视频内射| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 看免费av毛片| 考比视频在线观看| av片东京热男人的天堂| 亚洲精品中文字幕在线视频| 中国美女看黄片| 亚洲av成人一区二区三| 捣出白浆h1v1| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 三上悠亚av全集在线观看| 国产成人精品久久二区二区91| 久久青草综合色| 国产又色又爽无遮挡免费看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 一边摸一边做爽爽视频免费| 日本a在线网址| 国产av国产精品国产| 精品视频人人做人人爽| 日本wwww免费看| 在线观看66精品国产| 天天添夜夜摸| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲第一av免费看| 亚洲国产av新网站| 飞空精品影院首页| 亚洲精品自拍成人| 欧美激情久久久久久爽电影 | av电影中文网址| 亚洲,欧美精品.| 老司机午夜十八禁免费视频| 精品国产亚洲在线| a级毛片在线看网站| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 久久久水蜜桃国产精品网| 伦理电影免费视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产国语露脸激情在线看| 九色亚洲精品在线播放| 天堂中文最新版在线下载| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 18在线观看网站| 午夜免费鲁丝| 午夜福利视频精品| 两个人看的免费小视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 欧美激情 高清一区二区三区| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 日韩大片免费观看网站| 亚洲精品av麻豆狂野| 好男人电影高清在线观看| 精品少妇黑人巨大在线播放| 99riav亚洲国产免费| 久久久久精品国产欧美久久久| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 在线观看免费视频网站a站| av超薄肉色丝袜交足视频| 免费av中文字幕在线| 麻豆成人av在线观看| 精品久久久久久久毛片微露脸| 伦理电影免费视频| 免费黄频网站在线观看国产| 免费不卡黄色视频| 国产成人欧美| 嫁个100分男人电影在线观看| www日本在线高清视频| av有码第一页| 精品少妇久久久久久888优播| 久久天堂一区二区三区四区| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 老熟女久久久| 黄色片一级片一级黄色片| 在线观看免费视频日本深夜| 亚洲七黄色美女视频| 午夜免费鲁丝| 日韩欧美三级三区| 黄色丝袜av网址大全| 免费黄频网站在线观看国产| 一区二区av电影网| 纯流量卡能插随身wifi吗| 丝袜人妻中文字幕| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 母亲3免费完整高清在线观看| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 露出奶头的视频| 看免费av毛片| 老汉色av国产亚洲站长工具| 久久久久久久久免费视频了| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 交换朋友夫妻互换小说| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 欧美变态另类bdsm刘玥| 男女之事视频高清在线观看| 国产91精品成人一区二区三区 | 欧美中文综合在线视频| 高清av免费在线| 国产99久久九九免费精品| 国产高清视频在线播放一区| 18禁国产床啪视频网站| 国产精品 国内视频| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 亚洲国产成人一精品久久久| av欧美777| 国产av精品麻豆| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲 国产 在线| 亚洲国产欧美一区二区综合| 美女福利国产在线| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 岛国毛片在线播放| 免费在线观看完整版高清| 久久香蕉激情| 久久99热这里只频精品6学生| 18禁观看日本| 亚洲一码二码三码区别大吗| av一本久久久久| 超碰97精品在线观看| 国产欧美亚洲国产| 最新在线观看一区二区三区| 岛国在线观看网站| 精品少妇黑人巨大在线播放| 高清黄色对白视频在线免费看| 成人18禁在线播放| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 午夜精品国产一区二区电影| 91av网站免费观看| 亚洲情色 制服丝袜| 亚洲精品成人av观看孕妇| 精品国内亚洲2022精品成人 | 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 成人永久免费在线观看视频 | 我的亚洲天堂| 国产亚洲精品第一综合不卡| 日韩大码丰满熟妇| 国产免费现黄频在线看| 99香蕉大伊视频| 超碰成人久久| www.999成人在线观看| 操美女的视频在线观看| 麻豆成人av在线观看| 色94色欧美一区二区| 免费在线观看日本一区| 亚洲精品粉嫩美女一区| 丁香六月欧美| 视频区欧美日本亚洲| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 色尼玛亚洲综合影院| 欧美av亚洲av综合av国产av| 老司机午夜福利在线观看视频 | bbb黄色大片| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲人成电影免费在线| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 日本一区二区免费在线视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 日本vs欧美在线观看视频| 好男人电影高清在线观看| 人人妻人人澡人人看| 三上悠亚av全集在线观看| 免费观看a级毛片全部| 欧美日韩黄片免| 亚洲五月婷婷丁香| 天堂俺去俺来也www色官网| 十八禁人妻一区二区| 又紧又爽又黄一区二区| 超色免费av| 亚洲成人免费电影在线观看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| www日本在线高清视频| 日本a在线网址| 不卡av一区二区三区| 男女之事视频高清在线观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产成人精品久久二区二区91| 美女国产高潮福利片在线看| 天堂动漫精品| 真人做人爱边吃奶动态| 大陆偷拍与自拍| 亚洲专区字幕在线| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | av又黄又爽大尺度在线免费看| 久久久精品区二区三区| 日韩欧美免费精品| 99精品在免费线老司机午夜| 久久中文看片网| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 99国产精品免费福利视频| www.精华液| 精品一区二区三区四区五区乱码| 五月天丁香电影| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产男女内射视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 桃红色精品国产亚洲av| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 日本五十路高清| 一夜夜www| 精品国内亚洲2022精品成人 | 国产亚洲精品一区二区www | 国产三级黄色录像| 夫妻午夜视频| 亚洲欧美色中文字幕在线| 日韩有码中文字幕| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 精品欧美一区二区三区在线| 国产不卡av网站在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 精品乱码久久久久久99久播| 亚洲精品av麻豆狂野| 90打野战视频偷拍视频| 国产色视频综合| 日韩欧美免费精品| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 一进一出好大好爽视频| 色视频在线一区二区三区| 五月开心婷婷网| 无限看片的www在线观看| 69av精品久久久久久 | 国产免费福利视频在线观看| 又紧又爽又黄一区二区| 免费观看a级毛片全部| 乱人伦中国视频| 99热网站在线观看| avwww免费| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 老汉色av国产亚洲站长工具| 在线观看舔阴道视频| 亚洲av日韩在线播放| 少妇 在线观看| 99香蕉大伊视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产成人啪精品午夜网站| 国产精品免费一区二区三区在线 | 欧美人与性动交α欧美软件| 亚洲国产欧美一区二区综合| 12—13女人毛片做爰片一| 性少妇av在线| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 精品第一国产精品| 黑丝袜美女国产一区| 女性被躁到高潮视频| 18在线观看网站| 大型黄色视频在线免费观看| 久久久久视频综合| 国产一卡二卡三卡精品| 91精品国产国语对白视频| 极品教师在线免费播放| 久久国产精品影院| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲精品国产色婷婷电影| www.999成人在线观看| 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲一码二码三码区别大吗| 欧美亚洲日本最大视频资源| 桃花免费在线播放| 日韩欧美一区视频在线观看| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 精品一区二区三卡| 国产一区二区 视频在线| 久久久国产精品麻豆| 成年人午夜在线观看视频| 久久性视频一级片| 国产在线一区二区三区精| 午夜成年电影在线免费观看| 成年人免费黄色播放视频| 又黄又粗又硬又大视频| 丝袜人妻中文字幕| 亚洲少妇的诱惑av| 伦理电影免费视频| 视频区欧美日本亚洲| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 69精品国产乱码久久久| 在线观看一区二区三区激情| 色视频在线一区二区三区| 丝袜美腿诱惑在线| 国产视频一区二区在线看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 成年动漫av网址| 我的亚洲天堂| 免费观看人在逋| 亚洲欧美激情在线| 免费不卡黄色视频| 国产不卡av网站在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 夜夜爽天天搞| 久久久久久久国产电影| 欧美另类亚洲清纯唯美| 五月开心婷婷网| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 男人操女人黄网站| 精品一区二区三卡| 国产99久久九九免费精品| 黄频高清免费视频| 妹子高潮喷水视频| 亚洲成国产人片在线观看| 亚洲第一青青草原| 一本大道久久a久久精品| 又大又爽又粗| 精品人妻1区二区| 午夜成年电影在线免费观看| 国产免费现黄频在线看| 欧美日韩精品网址| 操出白浆在线播放| 日韩欧美一区视频在线观看| 午夜福利视频精品| 男女免费视频国产| 久久久久久久国产电影| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲精品粉嫩美女一区| 老司机在亚洲福利影院| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 欧美黑人精品巨大| 午夜日韩欧美国产| 亚洲精华国产精华精| 自线自在国产av| 一级毛片电影观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 午夜两性在线视频| 首页视频小说图片口味搜索| 国产欧美日韩精品亚洲av| 欧美国产精品va在线观看不卡| 成人手机av| 国产一区有黄有色的免费视频| 精品一区二区三区av网在线观看 | 精品高清国产在线一区| 久久免费观看电影| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产精品免费大片| 免费高清在线观看日韩| 亚洲精品成人av观看孕妇| 日本vs欧美在线观看视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产精品二区激情视频| 亚洲av电影在线进入| 最新美女视频免费是黄的| 欧美激情 高清一区二区三区| 久久国产精品人妻蜜桃| 久久久水蜜桃国产精品网| netflix在线观看网站| 99国产精品一区二区蜜桃av | 亚洲五月色婷婷综合| 18在线观看网站| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 操出白浆在线播放| 在线观看一区二区三区激情| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 黄色视频不卡| 国产亚洲精品一区二区www | 视频区图区小说| tube8黄色片| 色综合欧美亚洲国产小说| 宅男免费午夜| 99国产精品99久久久久| 在线看a的网站| 欧美日韩av久久| 久久性视频一级片| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 亚洲国产av影院在线观看| 精品国产一区二区三区四区第35| www.精华液| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 啦啦啦在线免费观看视频4| 久久国产精品大桥未久av| 亚洲专区字幕在线| 男女免费视频国产| 久久国产精品影院| 成年人黄色毛片网站| 欧美日韩亚洲高清精品| 两人在一起打扑克的视频| 欧美黑人精品巨大| 两个人看的免费小视频|