榮成市兔多殺性巴氏桿菌的流行病學及血清學調(diào)查報告

陳 佳?。ㄉ綎|省榮成市俚島畜牧獸醫(yī)站　264317）

調(diào)查報告

榮成市兔多殺性巴氏桿菌的流行病學及血清學調(diào)查報告

陳 佳（山東省榮成市俚島畜牧獸醫(yī)站264317）

兔多殺性巴氏桿菌菌株血清型眾多，近年來從榮成各地區(qū)18個商品兔場送檢的病料中共分離出8株兔多殺性巴氏桿菌，革蘭氏染色為陰性短桿菌，單個或成對排列。無芽孢，大小0.2～0.4×0.6～.25μm；分離菌在麥康凱培養(yǎng)基上不生長，能發(fā)酵葡萄糖，不發(fā)酵乳糖，尿素酶試驗陰性，不產(chǎn)生硫化氫，吲哚試驗陽性，不液化明膠，過氧化氫酶試驗陽性；經(jīng)凝集試驗鑒定所分離到的細菌均為A群兔多殺性巴氏桿菌，易感兔接種試驗能夠復制出典型的病例。

兔多殺性巴氏桿菌是由兔多雜性巴氏桿菌引起的兔的一種接觸性、急性傳染病，由于病原的感染部位不同而呈現(xiàn)敗血癥、傳染性鼻炎、地方流行性肺炎、中耳炎、結(jié)膜炎、子宮積膿、睪丸炎和膿腫等病癥。我國大部分地區(qū)都有對該病的報道，證明兔巴氏桿菌病在我國已經(jīng)存在和流行，隨著養(yǎng)兔業(yè)的迅猛發(fā)展，本病的發(fā)生呈現(xiàn)上升趁勢。急性發(fā)病時常引起家兔大批量死亡，耐過兔生長緩慢、飼料報酬降低或大批死亡及藥物防治費用增加等，給養(yǎng)兔業(yè)造成了嚴重的直接或間接經(jīng)濟損失，是目前規(guī)?；B(yǎng)兔場的主要傳染病之一。

為研究兔多殺性巴氏桿菌病在榮成地區(qū)的流行病學情況及血清型分布情況，筆者對榮成地區(qū)的18個兔場送檢的病料進行分離鑒定，經(jīng)流行病學調(diào)查、臨床觀察、病理剖解、病原分離鑒定、動物攻毒試驗等，確診為兔多殺性巴氏桿菌病，從而確定了該病的廣泛存在，為切實做好該病的防制工作提供依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1　材料

1.1病料來源來自于榮成18個商品兔場的病死兔，用初步診斷為兔多殺性巴氏桿菌病的病兔的心血、肝臟、脾臟、輸卵管等組織進行病原菌分離鑒定，所有分離菌株均采自發(fā)病兔。

1.2培養(yǎng)基巧克力瓊脂平板、鮮血瓊脂平板、普通馬丁肉湯及含1%裂解血球全血培養(yǎng)基，均由自行配制。

1.3試驗動物1.5kg左右健康易感兔，購自山東榮成某養(yǎng)兔場。

1.4其它實驗儀器及設(shè)備各種容器、平板、培養(yǎng)箱等均由本站提供。

2　方法

2.1觀察并記錄發(fā)病兔臨床癥狀及剖解特征，總結(jié)關(guān)于兔多殺性巴氏桿菌病的臨床癥狀、剖檢特征及流行病學特點。

2.2病原菌分離培養(yǎng)對典型病例取心血、肝臟涂片，染色鏡檢，并無菌取心、肝、脾、肺、輸卵管等病料接種于巧克力瓊脂平板、鮮血瓊脂平板、普通馬丁肉湯及含1%裂解血球全血培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18～24h觀察結(jié)果。選擇可疑菌進行純培養(yǎng)并染色鏡檢。

2.3形態(tài)學觀察選擇可疑菌進行純培養(yǎng)并染色鏡檢，觀察菌體形態(tài)和染色特征。

2.4分離菌生化特性試驗取微量生化發(fā)酵管及各種生化培養(yǎng)基，將經(jīng)純化培養(yǎng)的各菌株接入后封口，37℃培養(yǎng)24～72h，觀察結(jié)果。

2.5血清學鑒定將分離菌純培養(yǎng)后，進行平板凝集反應，鑒定病原菌的血清型。

2.6兔多殺性巴氏桿菌分離株的毒力試驗兔多殺性巴氏桿菌各分離菌株的毒力分開測定。將兔多殺性巴氏桿菌各分離菌株接種于含0.1%紅血球的馬丁肉湯中，37℃培養(yǎng)18～24h，進行活菌計數(shù)。將各菌株菌液分別稀釋為1.0×104CFU/ml、1.0×103CFU/m、1.0×102CFU/m、10CFU/ml、5CFU/ml、2CFU/ml等6個不同劑量組，每個劑量組用1.5kg左右健康易感兔10只，頸部皮下注射兔多殺性巴氏桿菌各分離菌株菌液1ml，觀察10d，記錄臨床發(fā)病、死亡情況（死亡兔進行細菌的再分離），觀察10d，所有試驗兔全部剖殺，觀察病理變化并進行細菌的再分離鑒定。

3　結(jié)果

3.1臨床癥狀及病理變化（1）通過對18例兔多殺性巴氏桿菌病病例的觀察，臨床癥狀及病理變化總結(jié)如下：由于侵害部位不同，臨床上可表現(xiàn)為敗血癥、鼻炎、肺炎、中耳炎、結(jié)膜炎、子宮積膿、睪丸炎等。（2）敗血癥病兔多表現(xiàn)為精神萎頓、食欲廢絕、呼吸迫促，體溫在40℃以上，鼻腔有分泌物，有時出現(xiàn)腹瀉，有的無任何明顯癥狀突然死亡。病程稍長者表現(xiàn)為呼吸困難，鼻腔流出粘液性鼻液，打噴嚏，食欲減退，有時見腹瀉，病程一周左右，最終因衰竭死亡。（3）解剖病變主要表現(xiàn)為全身性出血、充血或壞死。鼻腔黏膜充血，有粘液膿性分泌物，氣管黏膜充血出血，伴有多量紅色泡沫，肺臟嚴重出血、充血，高度水腫，肝臟有許多針尖大小黃白色壞死點，脾臟、淋巴結(jié)腫大、出血。腸黏膜充血、出血，胸、腹腔有淡黃色積液。（4）肺炎型常呈急性經(jīng)過，很快死亡。病變主要集中在肺尖葉、心葉和膈葉前下部。其病變表現(xiàn)為肺充血、出血、實變、膨脹不全、膿腫和出現(xiàn)灰色小結(jié)節(jié)。肺胸膜與心包膜常有纖維素附著，胸腔積液。鼻腔和氣管粘膜充血、出血，有粘稠的分泌物。淋巴結(jié)充血腫大。（5）鼻炎型病程較長，但病死率低。主要表現(xiàn)為鼻孔流出漿液性、粘液性或粘膿性鼻液，經(jīng)常打噴嚏、咳嗽，并用前爪抓鼻部，使鼻孔周圍被毛潮濕、粘結(jié)甚至脫落。如病菌侵入眼、耳、皮下等部位，可引起相應部位的結(jié)膜炎、中耳炎、皮下膿腫和乳腺炎等。（6）中耳炎也較常見，單純中耳炎無明顯癥狀，但如果病變蔓延至內(nèi)耳及腦部，則病兔出現(xiàn)頭頸歪斜，有時會出現(xiàn)運動失調(diào)或其他神經(jīng)癥狀。剖檢時可見病兔一側(cè)或兩側(cè)鼓室內(nèi)有白色奶油狀滲出物，如炎癥蔓延至腦部，則可見化膿性腦膜炎變化。（7）母兔感染常無明顯臨床癥狀，但有時表現(xiàn)為不孕，并伴有膿性分泌物從陰道中流出，如轉(zhuǎn)為敗血癥，則往往造成死亡。公兔變現(xiàn)一側(cè)或兩側(cè)睪丸腫大。解剖可見母兔子宮炎和子宮積膿。公兔睪丸和附睪腫大、質(zhì)地堅硬，有的伴有膿腫。

3.2流行特點該病一年四季均可發(fā)生，冬季及春季多發(fā)。主要發(fā)生于2～3月齡的幼兔，也有斷奶后仔兔發(fā)病。發(fā)病率為20%～80%，死亡率為30%～60%不等；發(fā)病不死亡的家兔往往生長緩慢。在飼養(yǎng)管理條件差、通風不良、地面潮濕、墊草更換不勤或反復使用的兔場發(fā)病和死亡嚴重。本病的發(fā)生還表現(xiàn)明顯的“疫點”特征，某個兔場一旦發(fā)生該病，其周圍的兔場也相繼發(fā)生該病的流行。

3.3細菌分離從18份病死兔病料中共分離出8株兔多殺性巴氏桿菌，分離率為44.4%（8/18）。心血、肝和淋巴結(jié)涂片中可以觀察到無芽孢的革蘭氏陰性短桿菌存在。分離菌在巧克力瓊脂平板和鮮血瓊脂平板上，經(jīng)37℃、18～24h培養(yǎng)，可長出灰白色、表面光滑、隆起、邊緣整齊的中等大小菌落，并有熒光性，但不溶血。麥康凱上不生長，在肉湯中培養(yǎng)時，初期均勻渾濁，24h后上清液清亮，管底有灰白色絮狀沉淀，輕搖時呈絮狀上升，表面形成附壁菌環(huán)。

3.4形態(tài)學觀察病死兔心血、肝組織及培養(yǎng)物、純培養(yǎng)菌涂片染色鏡檢可見到革蘭氏陰性短桿菌，不形成芽孢，無運動性，菌體呈單個、成對或偶呈鏈狀排列，大小為0.2～0.4×0.6～2.5μm，用瑞氏染色則見菌體兩端濃染。

3.5生化試驗8株分離菌分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不發(fā)酵乳糖、鼠李糖，M.R試驗、尿素酶試驗陰性，吲哚、氧化酶、硫化氫試驗陽性，不液化明膠。

3.6血清型的鑒定結(jié)果經(jīng)凝集試驗證實，所分離到的8株細菌均為A群兔多殺性巴氏桿菌。

3.7兔多殺性巴氏桿菌分離株的毒力試驗對兔多殺性巴氏桿菌各分離菌株的毒力進行單獨測定。將兔多殺性巴氏桿菌各分離菌株培養(yǎng)菌液分別稀釋為1.0×104CFU/ ml、1.0×103CFU/m、1.0×102CFU/ml、10CFU/ml、5CFU/ ml、2CFU/ml等6個不同劑量組，每個劑量組用1.5kg左右健康易感兔10只，頸部皮下注射兔多殺性巴氏桿菌各分離菌株菌液1ml，觀察10d，記錄臨床發(fā)病、死亡情況（死亡兔進行細菌的再分離），觀察10d，能使試驗兔出現(xiàn)不同程度的發(fā)病。詳細結(jié)果見附表。

附表　14株兔多殺性巴氏桿菌分離株的毒力試驗發(fā)病死亡結(jié)果

4　小結(jié)

（1）本試驗對不同兔場送檢的初步診斷為兔多殺性巴氏桿菌病的病死兔的病料進行了各項實驗室檢查，包括分離培養(yǎng)、形態(tài)學觀察、生化反應試驗、血清型鑒定、毒力試驗等，共分離出8株兔多殺性巴氏桿菌，分離率為44.4%（8/18）。經(jīng)鑒定，該分離的8株兔多殺性巴氏桿菌的生化反應符合兔多殺性巴氏桿菌菌屬的特性，這與有關(guān)資料的報道是一致的。（2）兔多殺性巴氏桿菌4號菌株頸部皮下注射2～5CFU菌液，能夠使試驗兔10/10發(fā)病，并全部死亡，表現(xiàn)明顯的兔多殺性巴氏桿菌病癥狀，剖檢試驗兔可見明顯的兔多殺性巴氏桿菌病病理變化，死亡兔均分離到血清A群兔多殺性巴氏桿菌，表明兔多殺性巴氏桿菌4號菌株具有較強毒力。

S858.291

A

1007-1733（2016）10-0047-02

2016-07-13）