油酸致急性呼吸窘迫綜合征大鼠血清甲狀腺素的變化*

寧夏醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院(銀川 750004)

鐘紅平 陳彥香▲ 劉世平△

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油酸致急性呼吸窘迫綜合征大鼠血清甲狀腺素的變化*

寧夏醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院(銀川 750004)

鐘紅平陳彥香▲劉世平△

目的：探討油酸誘導(dǎo)的急性呼吸窘迫綜合征(RDS)大鼠血清甲狀腺素的變化規(guī)律。方法：SD大鼠50只,隨機(jī)分為4組,油酸組39只,再分為3 h、18 h和24 h組各13只,對照組11只不做任何處理。油酸組39只SD大鼠尾靜脈注射0.17 mg/kg油酸建立RDS大鼠模型,分別于注射后3 h、18 h、24 h檢測血清甲狀腺素水平。結(jié)果：油酸3 h組、18 h組中的FT4水平與正常對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；油酸3 h組中T4與正常對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；油酸18 h組中T4水平與正常對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：FT4、T4甲狀腺激素在RDS大鼠3 h、18 h有明顯下降趨勢，RDS與血清甲狀腺素水平有相關(guān)性。

新生兒呼吸窘迫綜合征(Neonatal respiratory distress syndrome,NRDS)是新生兒早期死亡的重要原因，本病由于早產(chǎn)兒肺結(jié)構(gòu)不成熟、缺乏肺表面活性物質(zhì)(PS)引起。研究證明[1-2]：I型肺泡細(xì)胞負(fù)責(zé)進(jìn)行氣體交換，Ⅱ型肺泡細(xì)胞產(chǎn)生PS,降低肺表面張力,糖皮質(zhì)激素及其同源受體可以促進(jìn)Ⅱ型肺泡的成熟,協(xié)調(diào)PS的產(chǎn)生。Pei等[3]在小鼠的研究中發(fā)現(xiàn)SMRT(甲狀腺受體中的蛋白)的突變從而導(dǎo)致I型肺泡細(xì)胞的早熟,出現(xiàn)一種新型的RDS,盡管對糖皮質(zhì)激素反應(yīng)不敏感，但是聯(lián)合應(yīng)用抗甲狀腺激素類藥物完全可以減少SMRT引起的NRDS,表明甲狀腺激素受體(TR)在肺發(fā)育中有重要作用。本研究通過油酸所導(dǎo)致RDS大鼠,同時(shí)檢測不同時(shí)間段RDS大鼠的血清甲狀腺素水平,探討RDS大鼠血清甲狀腺素的變化規(guī)律,為早期給NRDS患兒甲狀腺素替代治療提供可能的理論依據(jù)。

材料和方法

1 材 料 健康雄性SD大鼠50只(購自西安交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心),平均體重193.53±8.79 g。油酸、大鼠固定器、微量進(jìn)液器、手術(shù)剪刀、固釘木板、止血鉗、鑷子、紗布、一次性采血針、真空采血管、10%水合氯醛、玻璃分針。飼喂于延安大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物房,自由飲食進(jìn)水,適應(yīng)喂養(yǎng)5 d。

2 方 法 ①動物分組及造模：將50只健康雄性SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字法分為4組：正常對照組(11只)：體重220.47±11.64 g；實(shí)驗(yàn)組SD大鼠注射0.17 mg/kg油酸,制造成RDS動物模型,分為注射油酸后3 h、18 h和24 h組各13只，3組平均體重分別為222.58±12.23 g,219.73±15.32 g,224.32±11.86 g。體重組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。②尾靜脈血采集方法：大鼠腹腔注射0.03 ml/kg,10%水合氯醛麻醉,仰臥位固定于木板上,消毒腹部,用剪刀沿腹正中線剪開腹腔(勿破壞胸腔),用鑷子將腹腔臟器翻轉(zhuǎn)到右側(cè),分離腹主動脈和腹腔靜脈。用兩個血管鉗夾住一段長約1.5 cm的腹主動脈,右手持穿刺針,針尖斜面朝下,入針角度約30°左右,朝向心端方向刺入,見回血后另一端插入真空管之中,打開近心端血管鉗,待真空管中血液收集至3～5 ml時(shí),用血管鉗夾住腹主動脈近心端,取出穿刺針。兩人配合,一人進(jìn)針,另一人備采血管。將采取的動/靜脈血,3000 r/min,離心15 min,常規(guī)分離血清,于-80°冰箱保存,檢測 T4、T3、FT3、FT4、TSH水平。

結(jié) 果

各組檢測結(jié)果見附表。油酸3 h組、18 h組中的FT4水平與正常對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；油酸3 h組中T4水平與正常對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；油酸18 h組中T4水平與正常對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

討 論

在本實(shí)驗(yàn)中結(jié)果表明RDS大鼠與健康大鼠相比,血清甲狀腺素下降。黃烈華等[4]的研究亦表明NRDS患兒與健康早產(chǎn)兒比較血清T3、T4、FT3、FT4下降,血清IL-6升高,提示NRDS可對患兒甲狀腺功能產(chǎn)生影響,導(dǎo)致甲狀腺激素水平下降。結(jié)合在臨床上目前對NRDS的治療主要是采用補(bǔ)充外源性的PS聯(lián)合機(jī)械通氣治療,外源性的PS價(jià)格非常昂貴。但值得注意的是約20%～30%NRDS的患兒對表面活性劑替代療法不敏感[3],尤其是胎齡越小的早產(chǎn)兒由于肺泡結(jié)構(gòu)發(fā)育不成熟,對外源性表面活性劑無反應(yīng)。Pei等[3]在小鼠的研究中同樣發(fā)現(xiàn)甲狀腺激素與甲狀腺激素受體作用形成TR-SMRI復(fù)合物,激活下游Krüppel樣鋅指轉(zhuǎn)錄因子(KLFs)中的 KLF2因子,促進(jìn)肺泡Ⅰ型細(xì)胞的分化和成熟,沒有KLF2的小鼠會缺乏成熟I型肺泡,最終導(dǎo)致小鼠在生后很短時(shí)間內(nèi)死亡。結(jié)合在本實(shí)驗(yàn)中,健康雄性SD大鼠油酸3 h組、18 h組中的FT4水平低于正常對照組(P<0.01)；油酸3 h組中T4水平低于與正常對照組(P<0.01),說明SD大鼠RDS與血清甲狀腺素水平下降有明顯的相關(guān)性。

附表 各組實(shí)驗(yàn)動物血清指標(biāo)比較

注：與對照組比較,*P<0.05,△P<0.01

Dilli等[5]在新生兒研究中表明甲狀腺激素的水平變化可以反映疾病的嚴(yán)重程度,在早產(chǎn)兒非甲狀腺疾病中,血清T3水平和感染新生兒的病死率密切相關(guān),血清T3水平越低,病死率越高,需要機(jī)械通氣的NRDS 患兒其血清T4水平較低,可能是疾病的反應(yīng)，而非甲狀腺疾病。另外的研究表明[6]：胎齡<32周的早產(chǎn)兒出生時(shí)有高的TSH水平，即高TSH血癥,無論這些早產(chǎn)兒時(shí)適于胎齡兒(AGA)還是小于胎齡兒(SGA),和正常出生的足月兒相比,追蹤至成年期他們的甲狀腺功能均正常。Srinivasan等[7]近期對10 652個非甲狀腺疾病的早產(chǎn)兒的研究資料中顯示，早產(chǎn)兒存在甲狀腺功能暫時(shí)性紊亂,主要表現(xiàn)為暫時(shí)性甲狀腺功能低下,部分發(fā)展成永久性甲低。應(yīng)用血濾紙篩查甲狀腺功能(用T4,而不是TSH),發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重的甲狀腺功能減退癥增加了圍產(chǎn)兒的發(fā)病率和病死率,同時(shí)會增加吸氧時(shí)間、延長機(jī)械通氣混雜因素的情況下,也會發(fā)生智力低下甚至腦癱。近年來對NRDS的認(rèn)識逐步發(fā)展到對肺泡整體細(xì)胞功能的調(diào)控上,尤其是肺泡Ⅰ型細(xì)胞的功能調(diào)控越來越受到重視。因此本研究以RDS大白鼠模型和健康大白鼠通過檢測RDS大鼠血清甲狀腺素水平的變化,發(fā)現(xiàn)甲狀腺素在Ⅰ型細(xì)胞功能調(diào)控以及在RDS發(fā)病中所起的作用和機(jī)制,提出了在對肺表面活性物質(zhì)治療不敏感的NRDS中一種新型的治療選擇,而在本實(shí)驗(yàn)中T3、TSH、FT3與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,可能與樣本量小有關(guān)。需進(jìn)一步擴(kuò)大實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及用RDS大鼠行肺組織進(jìn)行HE染色和免疫組化實(shí)驗(yàn)等來進(jìn)一步證明KLF2、KLF2 mRNA以及甲狀腺素在NRDS的發(fā)病機(jī)制中起到關(guān)鍵的作用，甚至給RDS大鼠補(bǔ)充一定量的甲狀腺素，觀察大鼠活動情況,為臨床提高新生兒RDS的治愈率提供可能的理論及實(shí)踐依據(jù)。

[1] Dobbs LG, Johnson MD, Vanderbilt J,etal. The great bigalveolar TI cell: evolvingconcepts and paradigms[J]. Cell Physiol Biochem,2010,25(1)：55-62.

[2] Herzog EL, Brody AR, Colby TV,etal. Knowns and unknowns of the alveolus[J].Proc Am Thorac Soc,2008,5:778-782.

[3] Pei LM,Leblanc M,Barish G,etal.Thyroid Hormone Receptor Repression Linked to Type IPneumocyte Associated Respiratory Distress Syndrome[J].Nat Med,2011,17(11)：1466-1472.

[4] 黃烈華,吳慧蓮.新生兒呼吸窘迫綜合征、感染性肺炎患兒甲狀腺激素、IL-6、TNF-α的變化及其相關(guān)性分析[J].中國婦幼保健,2015,3(5)：716-718.

[5] Dilli D,Dilmen U.The Role of Interleukin-6 and C-Reactive Protein inNon-Thyroidal Illness in Premature InfantsFollowed in Neonatal Intensive Care Unit[J].J Clin Res Pediatr Endocrinol,2012,4(2)：66-71.

[6] Mollee TS, Finken MJ, van Weissenbruch MM,etal. Normal thyroid function in young adults who were born very preterm[J]. J Pediatr Endocrinol Metab,2011,24(11-12):887-891.

[7] Srinivasan R, Harigopal S, Turner S,etal.Permanent and transient congenital hypothyroidism in preterm infants[J]. Acta Paediatr,2012,101(4)：179-182 .

(收稿：2016-05-26)

*寧夏回族自治區(qū)自然科學(xué)基金項(xiàng)目(NZ13205)

△延安大學(xué)附屬醫(yī)院兒科

▲通訊作者：銀川市第一人民醫(yī)院

油酸 呼吸窘迫綜合征,新生兒 大鼠 甲狀腺素 因果律

R722.19

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2016.10.003