10種殺菌劑對蘋果輪紋病菌的室內(nèi)毒力及田間防治效果研究

范 昆,付 麗,張 勇,趙金平,曲健祿

(山東省果樹研究所,山東 泰安 271000)

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10種殺菌劑對蘋果輪紋病菌的室內(nèi)毒力及田間防治效果研究

范 昆,付 麗,張 勇,趙金平,曲健祿*

(山東省果樹研究所,山東 泰安 271000)

采用十字交叉法和噴霧法測定了10種殺菌劑對蘋果輪紋病菌的室內(nèi)毒力和田間防效。多菌靈和氟硅唑?qū)μO果輪紋病菌菌絲生長的抑制作用較強(qiáng),其EC50分別為0.0429 μg/mL和0.0507 μg/mL；其次為苯醚甲環(huán)唑和丙環(huán)唑,其EC50分別為0.1144 μg/mL和0.1959 μg/mL。采收前田間、貯藏期調(diào)查發(fā)現(xiàn),430 g/L戊唑醇懸浮劑3000～4000倍液、250 g/L吡唑醚菌酯乳油1000倍、400 g/L氟硅唑乳油4000倍、10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑1500倍、50%多菌靈可濕性粉劑600倍液對蘋果輪紋病均具有良好的防治效果，且對蘋果樹安全。

蘋果；殺菌劑;蘋果輪紋病;毒力測定;田間藥效

全球有80多個國家和地區(qū)栽培蘋果,蘋果已經(jīng)成為世界上食用最廣泛的水果品種之一[1]。近20年來,我國蘋果產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速,無論是種植面積還是總產(chǎn)量,我國都已名列世界第一,然而單位面積產(chǎn)量低于世界平均水平[2]。蘋果輪紋病危害是造成我國蘋果單產(chǎn)水平不高的重要原因之一[3]。蘋果輪紋病(Botryosphaeriadothidea)又名粗皮病、輪紋爛果病,是蘋果生產(chǎn)上最常見的一種病害[2],不僅可以危害枝干,引起枝干潰瘍,影響結(jié)果年限,導(dǎo)致樹勢衰弱、產(chǎn)量下降,造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失,還能造成大量爛果,田間病果率高達(dá)70%～80%,且貯藏期可持續(xù)發(fā)病[4]。近年來蘋果輪紋病發(fā)病率呈上升趨勢,影響果品的產(chǎn)量和質(zhì)量,造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

目前,生產(chǎn)上防治蘋果輪紋病仍以化學(xué)防治為主,果農(nóng)防治觀念落后,重治輕防,盲目用藥、濫用農(nóng)藥的現(xiàn)象比較普遍,造成農(nóng)殘超標(biāo)、果園生態(tài)環(huán)境惡化,嚴(yán)重影響了蘋果的產(chǎn)量和品質(zhì),對出口創(chuàng)匯也造成很大的不良影響,其產(chǎn)值大大降低。為此,本研究選取多種低毒、低殘留的殺菌劑于2013、2014年對蘋果輪紋病菌進(jìn)行了室內(nèi)毒力測定和田間藥效試驗(yàn),以期篩選出防治蘋果輪紋病的理想藥劑,有效防治該病害,為蘋果優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1供試菌株

從山東省肥城市安莊村富士果園采集病果,參照Fang[5]的組織分離法,從病果皮部病斑病健交界處切下3 mm×3 mm×1 mm的小塊,放入70%酒精消毒30 s,然后將其轉(zhuǎn)入1%升汞消毒1 min,用無菌水清洗3遍后,置于馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基上。在26 ℃條件下培養(yǎng)5 d后挑取菌落邊緣的菌絲進(jìn)行病原菌的初步純化,將純化后的菌株接種在PDA試管斜面中，于4 ℃冰箱中保存、備用。對純化后的菌絲培養(yǎng)5 d后鏡檢菌絲、孢子的形態(tài),并進(jìn)行病原菌鑒定[6-7]。

1.2供試藥劑

供試原藥:98%戊唑醇原藥,江蘇常隆化工有限公司;96.4%丙環(huán)唑原藥,江蘇揚(yáng)農(nóng)化工集團(tuán);92%氟硅唑原藥、95.8%苯醚甲環(huán)唑原藥、97%多菌靈原藥,青島瀚生生物科技股份有限公司;96%異菌脲原藥、95%二氰蒽醌原藥,江蘇禾益化工有限公司;97.5%吡唑醚菌酯原藥,巴斯夫歐洲公司;95%甲基硫菌靈原藥、97%咪鮮胺原藥,山東濰坊潤豐化工股份有限公司。

供試制劑:430 g/L戊唑醇懸浮劑,興農(nóng)股份有限公司;250 g/L吡唑醚菌酯乳油,巴斯夫歐洲公司;400 g/L氟硅唑乳油,美國杜邦公司;10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑,瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司;50%多菌靈可濕性粉劑,江蘇省新沂農(nóng)藥有限公司;70%甲基硫菌靈可濕性粉劑,江蘇省新沂農(nóng)藥有限公司;40%二氰蒽醌懸浮劑,陜西韋爾奇作物保護(hù)有限公司;250 g/L丙環(huán)唑乳油、25%咪鮮胺乳油,江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司;50%異菌脲可濕性粉劑,美國富美實(shí)公司。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1含藥培養(yǎng)基的配制先將戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、異菌脲、吡唑醚菌酯、二氰蒽醌、咪鮮胺原藥溶于丙酮中, 用甲醇溶解丙環(huán)唑, 用環(huán)己酮溶解氟硅唑, 用質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%的鹽酸溶解多菌靈、甲基硫菌靈,配成10000 μg/mL的母液,以0.2%的體積分?jǐn)?shù)加入乳化劑Tween-80,于冰箱(4 ℃)中貯藏備用。在測定時,根據(jù)培養(yǎng)基的用量,用移液槍吸取一定量的藥劑母液，將其加入溶化并冷卻至50 ℃左右的培養(yǎng)基中,充分搖勻,配制成含系列濃度藥劑的培養(yǎng)基。每個處理重復(fù)4次,以不加藥劑為對照。

1.3.2蘋果輪紋病菌對供試藥劑的敏感性測定在PDA平板上培養(yǎng)(26 ℃,黑暗)5 d的菌落邊緣打出直徑7 mm的菌餅,分別移接到含有戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、氟硅唑、異菌脲、吡唑醚菌酯、二氰蒽醌、丙環(huán)唑、咪鮮胺、多菌靈、甲基硫菌靈6個梯度濃度(戊唑醇3.0、1.5、0.75、0.375、0.187、0.094 μg/mL;苯醚甲環(huán)唑0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.0156 μg/mL;氟硅唑1.0、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125 μg/mL;異菌脲10.0、5.0、2.5、1.25、0.625、0.3125 μg/mL;吡唑醚菌酯2.0、1.0、0.5、0.25、0.125、0.0625 μg/mL;二氰蒽醌320.0、160.0、80.0、40.0、20.0、10.0 μg/mL;咪鮮胺4.0、2.0、1.0、0.5、0.25、0.125 μg/mL;多菌靈0.5、0.25、0.125、0.0625、0.032、0.016 μg/mL;丙環(huán)唑2.0、1.0、0.5、0.25、0.125、0.0625 μg/mL;甲基硫菌靈0.5、0.25、0.125、0.0625、0.032、0.016 μg/mL)的PDA平板上,置26 ℃暗培養(yǎng)4 d,測定菌落徑向線性生長量,確定藥劑對菌落生長的抑制率，其計(jì)算公式為：抑制生長率(%) = [(對照菌落直徑-處理菌落直徑)/(對照菌落直徑-菌餅直徑)]×100。每個處理(各菌株每個濃度水平)重復(fù)4次。通過菌絲生長抑制概率值和藥劑濃度對數(shù)值之間的線性回歸分析,求出各藥劑對菌株的有效抑制中濃度(EC50)值[ 8 ]。

用Microsoft Excel 2003、DPS數(shù)據(jù)處理工作平臺對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.3.3田間藥效試驗(yàn)試驗(yàn)地設(shè)在山東省曲阜市吳村鎮(zhèn)。供試蘋果品種為短枝金帥,樹齡22年,株距×行距=3 m×5 m。試驗(yàn)的果樹全程不套袋,保持自然生長狀態(tài)。蘋果輪紋病田間防治試驗(yàn)分別于2013年、2014年的4～8月份進(jìn)行,于蘋果花后7～10 d開始施藥,每10～15 d施藥1次,共施藥8次。連同空白對照，本試驗(yàn)共設(shè)17個處理,即:430 g/L戊唑醇懸浮劑3000、4000倍液;250 g/L吡唑醚菌酯乳油1000、2000倍;400 g/L氟硅唑乳油4000、6000倍;10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑1500、2500倍;40%二氰蒽醌懸浮劑600倍;250 g/L丙環(huán)唑乳油500、800倍;25%咪鮮胺乳油800、1200倍;70%甲基硫菌靈可濕性粉劑700倍;50%多菌靈可濕性粉劑600倍;50%異菌脲可濕性粉劑1500倍。每個處理重復(fù)4次，每2株樹為1個小區(qū), 隨機(jī)區(qū)組排列。用臺灣產(chǎn)WL-ASBC型機(jī)動噴霧器對全樹均勻噴霧施藥,施藥量以葉片、果面均勻著藥,稍有藥滴下淌為度。

1.3.4藥效調(diào)查及統(tǒng)計(jì)分析田間果實(shí)發(fā)病情況:在第8次(末次)施藥后10 d(果實(shí)近成熟期)調(diào)查樹上、樹下(落地)的總果數(shù)和輪紋病果數(shù),統(tǒng)計(jì)爛果率。

貯藏期果實(shí)發(fā)病情況:在田間果實(shí)發(fā)病情況調(diào)查當(dāng)日,每樹分上、中、下三層,從東、西、南、北、中五個方位隨機(jī)共采25個果,裝入保鮮袋中。每小區(qū)50個果混裝在一起,每處理共采200個果。在常溫下室內(nèi)存放,于貯藏15、30 d后各調(diào)查1次,剔除輪紋病果,統(tǒng)計(jì)累計(jì)爛果率,計(jì)算防治效果[9]。

有關(guān)計(jì)算公式如下：病果率(%)=[(樹上輪紋病果數(shù)+落地輪紋病果數(shù))/(樹上總果數(shù)+落地總果數(shù))]×100；累積病果率(%)=(貯藏期兩次調(diào)查時剔除的輪紋病果數(shù)之和/每小區(qū)采果總數(shù))×100；防治效果(%)=[(對照區(qū)輪紋病果率-處理區(qū)輪紋病果率)/對照區(qū)輪紋病果率]×100。

2　結(jié)果與分析

2.110種殺菌劑對蘋果輪紋病菌的抑制作用

室內(nèi)毒力測定結(jié)果(見表1)表明:供試的10種殺菌劑對蘋果輪紋病菌均有一定的毒力,且隨著藥劑濃度的增加相對抑制率也增加,但不同藥劑之間毒力差異較大,對蘋果輪紋病菌菌絲生長的抑制作用差異較大。其中多菌靈和氟硅唑?qū)喖y病菌的抑制作用居前2位，其EC50分別為0.0429 μg/mL和0.0507 μg/mL；其次為苯醚甲環(huán)唑和丙環(huán)唑,EC50分別為0.1144 μg/mL和0.1959 μg/mL;吡唑醚菌酯、戊唑醇、甲基硫菌靈、咪鮮胺等藥劑對輪紋病菌也具有較強(qiáng)的抑制作用,EC50值在0.20～0.30 μg/mL之間;二氰蒽醌的EC50值高于其他9種藥劑,其對蘋果輪紋病菌的毒力最弱。

表1　10種殺菌劑對蘋果輪紋病菌的抑制作用

2.210種殺菌劑對蘋果輪紋病的田間防治效果

田間藥效試驗(yàn)結(jié)果(表2)表明:供試藥劑在田間對蘋果輪紋病均表現(xiàn)出一定的防效,但不同藥劑之間,同種藥劑的不同質(zhì)量濃度之間均表現(xiàn)出一定差異。采收前田間防治效果調(diào)查發(fā)現(xiàn),430 g/L戊唑醇懸浮劑3000、4000倍，250 g/L吡唑醚菌酯乳油1000、2000倍，400 g/L氟硅唑乳油4000、6000倍，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑1500、2500倍，250 g/L丙環(huán)唑乳油500、800倍，25%咪鮮胺乳油800倍，70%甲基硫菌靈可濕性粉劑700倍，50%多菌靈可濕性粉劑600倍液在田間均表現(xiàn)出較好的防治效果,其中,250 g/L吡唑醚菌酯乳油1000倍、400 g/L氟硅唑乳油4000倍、10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑1500倍、50%多菌靈可濕性粉劑600倍液的防治效果均達(dá)93.0%以上,與其他供試藥劑的防效相比差異顯著。蘋果在常溫下存放30 d后調(diào)查發(fā)現(xiàn),430 g/L戊唑醇懸浮劑3000倍、430 g/L戊唑醇懸浮劑 4000倍、250 g/L吡唑醚菌酯乳油1000倍、400 g/L氟硅唑乳油4000倍、10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑1500倍、50%多菌靈可濕性粉劑600倍液對蘋果輪紋病仍保持較好的防治效果,防效在80.0%以上,顯著優(yōu)于其他藥劑的防治效果。

表2　不同殺菌劑對蘋果輪紋病的田間防治效果

3　結(jié)論與討論

山東省是全國重要的蘋果主產(chǎn)區(qū),當(dāng)?shù)貧夂蚣爸饕寥李愋瓦m于生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)蘋果；該省同時也是病害發(fā)生發(fā)展的重點(diǎn)區(qū)域，其中蘋果輪紋病是當(dāng)?shù)靥O果生產(chǎn)中的主要病害之一。施用化學(xué)殺菌劑是目前防治蘋果輪紋病的有效措施之一,常用藥劑有多菌靈、甲基硫菌靈等內(nèi)吸性藥劑，以及代森錳鋅、福美雙等保護(hù)劑[7]。由于生產(chǎn)上使用的農(nóng)藥品種較為單一,蘋果輪紋病菌已經(jīng)產(chǎn)生了抗藥性[10-11]。

本試驗(yàn)研究結(jié)果表明：從蘋果花后7～10 d開始噴藥,戊唑醇、吡唑醚菌酯、氟硅唑、苯醚甲環(huán)唑、二氰蒽醌、丙環(huán)唑、咪鮮胺、甲基硫菌靈、多菌靈、異菌脲的不同劑型及適宜的濃度均能較好地防治田間和貯藏期的蘋果輪紋病，且各藥劑在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)對蘋果樹安全,未見對果樹生長發(fā)育和果實(shí)外觀品質(zhì)有不良影響。因此供試的10種殺菌劑可以應(yīng)用于蘋果輪紋病的防治。

另外，在防治蘋果樹病害的過程中, 建議將不同作用機(jī)制的殺菌劑合理混用或輪換使用,以延緩病原菌抗藥性的產(chǎn)生,延長殺菌劑在果樹病害管理體系中的使用壽命。

[1] 孫鑫垚.陜西省蘋果輪紋病病原菌鑒定與多樣性研究[D].楊凌:西北農(nóng)林科技大學(xué),2010.

[2] 國立耘,李金云,李保華,等.中國蘋果枝干輪紋病發(fā)生和防治情況[J].植物保護(hù),2009,35(4):120-123.

[3] 李保華,王彩霞,董向麗.我國蘋果主要病害研究進(jìn)展與病害防治中的問題[J].植物保護(hù),2013,39(5):46-54.

[4] 范昆,李曉軍,張勇,等.山東省蘋果輪紋病菌對三種三唑類殺菌劑的敏感性檢測[J].植物保護(hù),2013,39(1):133-136.

[5] 方中達(dá).植病研究方法[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1998.

[6] 陸家云.植物病原真菌學(xué)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2001.

[7] 魏景超.真菌鑒定手冊[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1979.

[8] 范昆,張雪丹,余閑美,等.無花果炭疽病菌的生物學(xué)特性及8種殺菌劑對其抑制作用[J].植物病理學(xué)報(bào),2013,43(1):75-81.

[9] 農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所.農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則(一、二)[M].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2004.

[10] 李曉軍,范昆,曲健祿,等.蘋果輪紋病菌對多菌靈的敏感性測定[J].果樹學(xué)報(bào),2009,26(4):516-519.

[11] Yourman L F, Jeffers S N. Resistance to benzimidazole and dicarboximide fungicides in greenhouse isolates ofBotrytiscinerea[J]. Plant Disease, 1999, 83: 569-575.

(責(zé)任編輯:黃榮華)

Indoor Toxicities and Field Control Effects of 10 Fungicides toBotryosphaeriadothidea

FAN Kun, FU Li, ZHANG Yong, ZHAO Jin-ping, QU Jian-lu*

(Shandong Institute of Pomology, Taian 271000, China)

The indoor toxicities and field control effects of 10 fungicides againstBotryosphaeriadothideawere determined by crossing method and foliar spray method. Carbendazim and flusilazole had higher inhibitory activities to the mycelial growth ofBotryosphaeriadothidea, and their EC50was 0.0429 μg/mL and 0.0507 μg/mL, respectively. The EC50of difenoconazole and propiconazole was 0.1144 μg/mL and 0.1959 μg/mL, separately. The investigations in field and during storage found that the 3000～4000-fold solution of 430 g/L tebuconazole SC, the 1000-fold solution of 250 g/L pyraclostrobin EC, the 4000-fold solution of 400 g/L flusilazole EC, the 1500-fold solution of 10% difenoconazole WG, and the 600-fold solution of 50% carbendazim WP all had a better control effect againstBotryosphaeriadothidea, and they were safe to apple trees.

Apple; Fungicide;Botryosphaeriadothidea; Toxicity test; Field control effect

2016-05-13

山東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(ZR2013CQ040);泰安市科技攻關(guān)項(xiàng)目(201540699);國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)資金項(xiàng)目(CARS-28);山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院青年科研基金項(xiàng)目(2016YQN32);山東省果樹研究所所長基金項(xiàng)目。

范昆,女,助理研究員,從事果樹病蟲害綜合防治及有害生物抗藥性研究。*通訊作者:曲健祿。

S482.2

A

1001-8581(2016)10-0032-04