婦炎消膠囊含量測(cè)定方法的改進(jìn)

袁文靜，袁文鵬

（1.河南省周口市食品藥品檢驗(yàn)所，河南周口466000；2.河南省項(xiàng)城市中醫(yī)院，河南項(xiàng)城466200）

婦炎消膠囊含量測(cè)定方法的改進(jìn)

袁文靜1，袁文鵬2

（1.河南省周口市食品藥品檢驗(yàn)所，河南周口466000；2.河南省項(xiàng)城市中醫(yī)院，河南項(xiàng)城466200）

目的建立測(cè)定婦炎消膠囊中大黃素和大黃酚含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流動(dòng)相為甲醇-0.1%的H3PO4（80∶20），波長(zhǎng)為288 nm，流速為1.0 mL/min。結(jié)果大黃素進(jìn)樣量在0.048 7～0.292 2 g范圍內(nèi)、大黃酚進(jìn)樣量在0.122 7～0.736 1 g范圍內(nèi)與峰面積積分值線(xiàn)性關(guān)系良好；回歸方程大黃素為Y=0.363 77 X-0.387 1（r=0.999 8，n=6），大黃酚為Y=0.306 31 X-2.466 7（r=0.999 9，n=6）。大黃素的平均回收率為98.53%，RSD為1.49%（n=6）；大黃酚的平均回收率為100.01%，RSD為0.97%（n=6）。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、靈敏，結(jié)果準(zhǔn)確，回收率高，精密度和重復(fù)性均較好，可作為婦炎消膠囊含量的測(cè)定方法。

婦炎消膠囊；大黃素；大黃酚；含量測(cè)定

婦炎消膠囊為苗族藥［1］，主要由大黃、漿草和敗醬草等7種中藥組方，有除濕止帶、行氣化瘀、清熱解毒的功效［1］，主要用于治療婦女生殖系統(tǒng)炎癥和痛經(jīng)、帶下?，F(xiàn)行婦炎消膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［1］含量測(cè)定只以大黃素為質(zhì)量指標(biāo)對(duì)大黃進(jìn)行質(zhì)量控制。在臨床檢驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)，多數(shù)含有藥材大黃的制劑［2］均以大黃素和大黃酚作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。本研究中參考文獻(xiàn)［2-9］，采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定婦炎消膠囊中大黃素和大黃酚的含量，其操作方法簡(jiǎn)單，所用色譜系統(tǒng)普通，精密度和重復(fù)性均較好，可作為該藥品的質(zhì)量控制方法。

1　儀器與試藥

1.1儀器

Agilent 1260型四元低壓高效液相色譜儀，包括G1311C 1260 Quat Pump VL四元泵，G1329B 1260 Als自動(dòng)進(jìn)樣器，G1316A 1260 Tcc恒溫箱，G1314F 1260 VWD型紫外檢測(cè)器，Rev.B.04.03［52］Agilent Chemstation色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（安捷倫科技有限公司）；CPA 2255D型天平（德國(guó)賽多利斯公司）。

1.2試藥

大黃素對(duì)照品（批號(hào)為110756-201512），大黃酚對(duì)照品（批號(hào)為110796-201520），均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；婦炎消膠囊（貴州益佰女子大藥廠(chǎng)有限責(zé)任公司，批號(hào)分別為20150412，20150507，20150903）；甲醇（Merck KgaA）為色譜純；磷酸為分析純；純化水。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸（80∶20）；檢測(cè)波長(zhǎng)：288 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：30℃。理論板數(shù)以大黃素峰計(jì)不低于5 000。在此色譜條件下的色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2溶液制備

對(duì)照品溶液：分別稱(chēng)取大黃素和大黃酚對(duì)照品0.012 17，0.030 67 g，置25 mL容量瓶中，用甲醇溶解，分別吸取大黃素和大黃酚對(duì)照品溶液各1 mL，定容至50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，制成含大黃素9.712 μg/mL和大黃酚24.54 μg/mL的對(duì)照品溶液。

供試品溶液：取樣品10粒，除去囊殼，將內(nèi)容物混均，研磨，精密稱(chēng)取0.5 g，置錐形瓶中，加入乙醇25.00 mL，加熱回流提取1 h，放冷，用乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，量取續(xù)濾液10.00 mL置燒瓶中蒸干，加30%乙醇-鹽酸（10∶1）混合溶液15 mL，再水浴回流提取1 h，冷卻，用三氯甲烷60 mL分4次進(jìn)行萃取提取，將三氯甲烷液蒸干后，用甲醇溶解定容至25 mL容量瓶中，搖勻，濾過(guò)，續(xù)濾液即為供試品溶液。

陰性對(duì)照品溶液：按婦炎消膠囊處方工藝，稱(chēng)取缺大黃的其他6味中藥，制成陰性對(duì)照品，依法制備缺大黃的陰性對(duì)照品溶液。

2.3方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn)：按擬訂色譜條件，取陰性對(duì)照品溶液10 μL，進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果在大黃素和大黃酚對(duì)照品溶液色譜峰相應(yīng)位置處無(wú)相同色譜峰（見(jiàn)圖1），表明陰性對(duì)照無(wú)干擾。

圖1　高效液相色譜圖

線(xiàn)性關(guān)系考察：分別吸取對(duì)照品溶液5，10，15，20，25，30 μL，依次進(jìn)樣測(cè)定峰面積，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回歸方程，大黃素為Y=0.363 77 X-0.387 1，r=0.999 8（n=6）；大黃酚為Y=0.306 31X-2.466 7，r=0.999 9（n=6）。結(jié)果表明，大黃素進(jìn)樣量在0.048 7～0.292 2 μg、大黃酚進(jìn)樣量在0.122 7～0.736 1 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線(xiàn)性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取同一對(duì)照品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣10 μL，平行進(jìn)樣6次，測(cè)定。結(jié)果大黃素峰面積的RSD為0.63%（n=6），大黃酚峰面積的RSD為0.41%（n=6）。表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取批號(hào)為20150507的樣品，平行制備供試品溶液5份，依法進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果大黃素含量的RSD為2.03%（n=5），大黃酚含量的RSD為1.26（n=5），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取批號(hào)為20150507的樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件分別于0，1，3，7，15 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果的RSD大黃素為1.09%，大黃酚為2.17%（n=5），表明供試品溶液在15 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取批號(hào)為20150507的樣品6份，各5 g，作好標(biāo)示，隨機(jī)分為3組，每組2份，用移液管分別加入大黃素對(duì)照品（0.012 17 g→25 mL）和大黃酚對(duì)照品（0.030 67 g→25 mL）的對(duì)照品溶液1，2，3 mL，依法進(jìn)樣測(cè)定樣品含量，并計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4樣品含量測(cè)定

取批號(hào)20150412，20150507，20150903的3批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件，進(jìn)樣測(cè)定，按外標(biāo)法分別計(jì)算大黃素和大黃酚的含量，并與大黃素標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定方法測(cè)定結(jié)果相比較。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　婦炎消膠囊中大黃素和大黃酚的含量測(cè)定結(jié)果（mg/粒）

3　討論

3.1指標(biāo)性成分的選擇

大黃為蓼科植物掌葉大黃Rheum palmatum L.、唐古特大黃Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.或藥用大黃Rheum officinale Baill.的干燥根和根莖［10-11］。游離性蒽醌衍生物大黃素為大黃的主要抗菌成分［12-13］，是中藥大黃的主要單體，其化學(xué)名稱(chēng)為1，3，8-三羥基-6-甲級(jí)蒽醌，是自然界分布較廣的蒽醌類(lèi)物質(zhì)。大黃酚是大黃的次生代謝產(chǎn)物［14］。婦女生殖系統(tǒng)炎癥、痛經(jīng)、帶下多是肝郁不舒、熱毒蘊(yùn)結(jié)、氣血瘀積導(dǎo)致。婦炎消膠囊治療婦科病應(yīng)用的是大黃性味苦寒，瀉熱毒、破積滯、行瘀血的作用，近代研究逐步證實(shí)了大黃的抗菌性［12-13］。故筆者參考文獻(xiàn)［2-9］，并結(jié)合檢驗(yàn)工作的實(shí)際，把大黃素和大黃酚作為婦炎消膠囊的質(zhì)量控制指標(biāo)。

3.2色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的選擇

在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［1］的色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)比較切合實(shí)際，色譜檢測(cè)的各項(xiàng)指標(biāo)可達(dá)到最佳，故繼續(xù)使用。

3.3供試品溶液制備方法的選擇

婦炎消膠囊原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［1］含量測(cè)定項(xiàng)下，制備供試品溶液的方法比較繁瑣，在樣品溶液的制備過(guò)程中容易流失。筆者參考文獻(xiàn)［2-9］，采用本研究中供試品溶液的制備方法，同時(shí)與原制備方法相比較，樣品含量提取明顯提高。故將其作為供試品溶液的制備方法。

［1］國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)（試行）頒布件［Z］. 2002ZD-0265.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：23-24，494-495，709-710，1 472-1 474.

［3］張勇鋼.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方大黃痔瘡栓中大黃素大黃酚的含量［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，19（2）：465-466.

［4］張炬，常軍民，劉濤.HPLC法測(cè)定天山大黃中大黃素和大黃酚的含量［J］.新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，26（6）：603.

［5］劉芳，陳建偉.HPLC法測(cè)定炒決明子中總大黃酚的含量［J］.中成藥，2005，27（5）：549.

［6］馬濤，熊春媚，郭亞?wèn)|.高效液相色譜法快速測(cè)定大黃中大黃素和大黃酚的含量［J］.昆明師范高等專(zhuān)科學(xué)校學(xué)報(bào)，2005，27（4）：9-11.

［7］趙曉波，丁紅強(qiáng)，袁銳利，等.HPLC法測(cè)定乙肝清熱解毒膠囊中大黃素的含量［J］.中醫(yī)學(xué)報(bào)，2010，25（6）：1 136-1 138.

［8］王輝，陳曉艷，白麗杰.醒腦安神片中大黃素和大黃酚的含量［J］.中國(guó)藥業(yè)，2005，14（9）：48-49.

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［11］任仁安.中藥鑒定學(xué)［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1991：44-47.

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Improvement of Content Determination Method for Fuyanxiao Capsules

Yuan Wenjing1，Yuan Wenpeng2
（1.Zhoukou Institute for Food and Drug Control，Zhoukou，Henan，China466000；2.Xiangcheng Hospital of Traditional Chinese Medicine，Xiangcheng，Henan，China466200）

ObjectiveToestablish amethod forthecontent determinationof emodinand chrysophanol inFuyanxiaoCapsulesby HPLC.MethodsAgilent Eclipse XDB-C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）was used，the mobile phase was composed of Methods-0.1%H3PO4（80∶20），the flow rate was 1.0 mL/min with detection wavelength at 288 nm.ResultsThe calibration curve was linear in the range of 0.048 7-0.292 2 μg for emodin.The calibration curve was linear in the range of 0.122 7-0.736 1 μg for chrysophanol.The regression equation of emodin wasY=0.363 77 X-0.387 1（r=0.999 8，n=6）.The regression equation of chrysophanol wasY=0.30631 X-2.4667（r=0.9999，n=6）.Theaveragerecoveryrateofemodinandchrysophanolwere98.53%and 100.01%，and RSD were 1.49%and 0.97%（n=6）.ConclusionThe method is simple，sensitive，accurate with high recovery rate and repeatability，which can be used for the content determination of Fuyanxiao Capsules.

Fuyanxiao Capsules；emodin；chrysophanol；content determination

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2016）18-0067-03

袁文靜（1980-），女，河南項(xiàng)城人，大學(xué)本科，主管藥師，研究方向?yàn)榕R床藥學(xué)，（電子信箱）ymz502@126.com。

（2016-04-20；

2016-05-27）