正交試驗優(yōu)選貓豆提取工藝

馮淑萍

（山西省運城市食品藥品檢驗所，山西運城044000）

正交試驗優(yōu)選貓豆提取工藝

馮淑萍

（山西省運城市食品藥品檢驗所，山西運城044000）

目的優(yōu)選貓豆提取工藝條件。方法以提取溫度、提取時間、提取次數(shù)和加酸水倍量為考察因素，以左旋多巴含量為評價指標(biāo)，采用正交試驗優(yōu)選最佳提取工藝。結(jié)果最佳工藝條件為0.1 mol/L鹽酸水溶液浸漬提取3次，提取溫度為50℃，提取時間分別為2，2，1 h，加酸水倍量為藥材重量的20倍。結(jié)論該提取工藝穩(wěn)定可行，可適用于貓豆制劑化生產(chǎn)和貓豆制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升。

貓豆；左旋多巴；正交試驗

貓豆是豆科植物黎豆屬龍爪黎豆Stizolobium cochinchinensis（Lour）Tang et Wang的干燥種子［1］，在印度醫(yī)學(xué)中，貓豆很早就被用來治療蛇蟲咬傷、男性不育、神經(jīng)衰弱、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病等疾病。近年來隨著對其藥理研究的不斷深入，貓豆在抗帕金森病、鎮(zhèn)靜安眠、抗蛇毒、治療男性不育癥及其營養(yǎng)作用、毒性作用、貯藏與種植應(yīng)用等方面均取得了明顯的進(jìn)展，尤其是貓豆提取物左旋多巴已明確可用于治療帕金森病，貓豆胍單體經(jīng)動物實驗已證實有促進(jìn)睡眠作用［2］。左旋多巴屬于苯丙氨酸類化合物，化學(xué)名為3-羥基-L-酪氨酸，可用于治療原發(fā)性震顫麻痹癥及非藥源性震顫麻痹綜合征（帕金森?。?］。本研究中針對貓豆中左旋多巴的提取工藝進(jìn)行研究，旨在為貓豆相關(guān)中藥制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。

1　儀器與試藥

1.1儀器

LC-2010A型高效液相色譜儀（包括紫外可見光檢測器、自動進(jìn)樣器，日本島津公司）；Sartorius R200D型及BGA2100S-G型電子天平（德國）。

1.2試藥

貓豆購自廣西壯族自治區(qū)東蘭縣，經(jīng)陜西中醫(yī)學(xué)院雷國蓮教授鑒定為豆科植物龍爪黎豆Stizolobium cochinchinensis（Lour）Tang et Wang的干燥種子。左旋多巴（供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所，批號為100170）；甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1.1色譜條件

色譜柱：HypersilODS2C18柱（250mm×4.6mm，5μm，十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑）；流動相：甲醇-0.1 mol/L冰醋酸溶液（25∶75）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：280 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.1.2溶液制備

稱取左旋多巴對照品5.03 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，制成每1 mL含0.503 mg的溶液，即得對照品溶液。

取本品粉末（60目）約0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入20倍量50℃的0.1 mol/L鹽酸水溶液浸漬、攪拌、提取3次，提取時間分別為2，2，1 h，靜置30 min，取上清液，合并上清液，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.1.3方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密量取左旋多巴對照品溶液（質(zhì)量濃度為0.503 g/L），分別進(jìn)樣2，4，8，10，12，16，20 μL注入液相色譜儀，按擬訂色譜條件測定峰面積，以進(jìn)樣量（X，mg）為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=89 230 X+3 042.7，r=0.999 90（n=7）。結(jié)果表明，左旋多巴進(jìn)樣量在1.006 4～10.064 mg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：精密量取同一左旋多巴對照品溶液10 μL，按擬訂色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。結(jié)果的RSD為0.2%（n=6），表明儀器精密度良好。

目前，百安居通過第三方物流對門店的配送形式是，由三大區(qū)域物流中心配送至全國的38家門店，配送線路總計達(dá)到120條，非常煩瑣。簡單來說，也就是現(xiàn)在北京的門店、深圳等門店的配送有時也會需要上海物流中心進(jìn)行配送。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，按擬訂色譜條件，分別在0，2，4，8，10，12 h時測定峰面積。結(jié)果的RSD為0.9%（n=6），表明供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗：精密稱取同一樣品5份，依法制備供試品溶液，測定峰面積并計算左旋多巴含量，結(jié)果的RSD為1.2%（n=5），表明方法重復(fù)性好。

加樣回收試驗：稱取已知含量樣品約0.1 g，精密稱定，精密加入左旋多巴對照品溶液（質(zhì)量濃度為0.503 g/L）10 mL，依法制備供試品溶液，測得峰面積并計算含量。結(jié)果見表1。

表1　左旋多巴加樣回收試驗結(jié)果（n=5）

2.2正交試驗

2.2.1因素水平設(shè)計

以加酸水倍量（因素A）、提取溫度（因素B）、提取時間（因素C）、提取次數(shù)（因素D）為考察因素，每個因素選取3個水平，以左旋多巴含量為評價指標(biāo)，設(shè)計L9（34）正交試驗。因素水平表見表2。

表2　正交試驗因素水平表

2.2.2正交試驗結(jié)果

正交試驗結(jié)果見表3，方差分析結(jié)果見表4?？芍?，各因素對工藝的影響順序為B＞C＞D＞A，確定最佳水提工藝條件為A2B2C3D3，即加酸水倍量為藥材質(zhì)量的20倍，提取溫度為50℃，浸漬提取3次，提取時間分別為2，2，1 h。

2.3工藝驗證試驗

按正交試驗優(yōu)選所得提取條件開展工藝驗證試驗，以提取溫度為50℃，浸漬提取3次，提取時間分別為2，2，1 h，加酸水倍量為藥材質(zhì)量的20倍進(jìn)行提取，依法測定左旋多巴的含量。結(jié)果顯示，按正交試驗優(yōu)化的提取工藝，經(jīng)3次提取驗證，工藝穩(wěn)定可行。結(jié)果見表5。

3　討論

3.1提取溶劑選擇

根據(jù)左旋多巴在乙醇、氯仿中不溶，在水中微溶，在稀酸中易溶，在堿性條件下易分解的性質(zhì)［4-6］，本研究中設(shè)計采用不同質(zhì)量濃度（0.05，0.1，0.2 mol/L）的稀鹽酸作為提取溶劑進(jìn)行預(yù)試驗，結(jié)果0.1 mol/L的稀鹽酸提取率較高。因此，采用0.1 mol/L的稀酸水溶液作為提取溶劑。

表3　正交試驗結(jié)果

表4　方差分析結(jié)果

表5　最佳工藝驗證試驗結(jié)果

3.2粉碎粒度選擇

選取同一批號的貓豆樣品，分別粉碎為24目、60目、80目，結(jié)果測得粉碎粒度為60目與粉碎粒度為80目的樣品中左旋多巴含量接近，差異無統(tǒng)計學(xué)意義?？紤]到過細(xì)粉末產(chǎn)生的微粒易導(dǎo)致過濾困難，不適用于制劑化生產(chǎn)，故選用粉碎粒度為60目。

［1］陳新謙，金有豫.新編藥物學(xué)［M］.第15版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：165.

［2］吳春嵐，潘衛(wèi)東，劉云，等.貓豆的現(xiàn)代研究進(jìn)展［J］.上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2011，25（5）：104-106.

［3］黃增瓊，蔣偉哲，巫世紅.貓豆的研究進(jìn)展［J］.中國藥業(yè)，2008，17（24）：15-16.

［4］路玫，黃雪梅，蒙太平.反相高效液相色譜法測定人血清中左旋多巴的濃度［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2001，21（10）：602-604.

［5］黃海濱，許學(xué)健，奉建芳.高效液相色譜法測定貓豆中左旋多巴的含量［J］.廣西植物，1994，14（3）：293.

［6］蔣偉哲，周燕文，吳闖，等.不同產(chǎn)地貓豆中左旋多巴的含量比較［J］.中草藥，2000，31（11）：860-862.

Extraction Process of Mucuna Pruriens by Orthogonai Design

Feng Shuping
（Yuncheng Institute for Drug and Food Control，Yuncheng，Shanxi，China044000）

ObjectiveTo study the technological parameters of the extraction process of Mucuna pruriens.MethodsThe best extraction process was selected with the extraction temperature，extraction time，extraction times and acid water as the examine factors，and levodopa content as evaluation index by orthogonal design.ResultsThe best process conditions for the extraction were 0.1 mol/L HCL aqueous solution impregnation 3 times，extraction temperature 50℃，extracting time of 2，2，1 h respectively and sour water 20 times the weight of the medicinal materials.ConclusionThe extraction process stability is feasible and can be applied to the quality standard of Mucuna prurien production and its chemical products.

Mucuna pruriens；levodopa；orthogonal design

TQ461；R284.2；R282.71

A

1006-4931（2016）15-0049-03

馮淑萍（1979-），女，碩士研究生，主管中藥師，研究方向為中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，（電子信箱）2355787422@qq.com。

（2016-03-22）