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    蒿甲醚體外抗毛囊蠕形螨活性分析

    2016-11-02 07:01:50王國江高曉燕李婷張海清陳向明胡陽
    中華皮膚科雜志 2016年11期
    關鍵詞:酒渣鼻蠕形甲醚

    王國江 高曉燕 李婷 張海清 陳向明 胡陽

    201318上海市浦東新區(qū)周浦醫(yī)院皮膚科(王國江、高曉燕);上海市嘉定區(qū)南翔醫(yī)院皮膚科(李婷、張海清、陳向明、胡陽)

    蒿甲醚體外抗毛囊蠕形螨活性分析

    王國江 高曉燕 李婷 張海清 陳向明 胡陽

    201318上海市浦東新區(qū)周浦醫(yī)院皮膚科(王國江、高曉燕);上海市嘉定區(qū)南翔醫(yī)院皮膚科(李婷、張海清、陳向明、胡陽)

    目的觀察蒿甲醚體外抗毛囊蠕形螨效果,為蒿甲醚治療毛囊蠕形螨感染性皮膚病提供依據(jù)。方法采用花生油將蒿甲醚分別稀釋成濃度為20、10、5和2.5 g/L,分別處理實驗組蠕形螨;對照組蠕形螨單純用花生油處理。各組均隨機選取32只活體毛囊蠕型螨進行體外抗螨實驗,pH儀分別測定各組蒿甲醚pH值。結果20、10、5和2.5 g/L蒿甲醚組及對照組體外殺螨時間中位數(shù)(P25~P75)分別為3.00(2.00~3.88)、6.00(4.13~7.25)、13.00(11.63~14.50)、17.00(15.25~20.75)和34.00(23.50~39.50)h,差異有統(tǒng)計學意義(H=133.954,P<0.001);各蒿甲醚組蟲體死亡時間均短于對照組,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.001),且隨蒿甲醚濃度增高殺螨時間逐步縮短,但10 g/L蒿甲醚組和20 g/L蒿甲醚組間蟲體死亡時間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。各蒿甲醚組與對照組藥液pH均在7.0~7.1之間,接近中性。結論20、10、5和2.5 g/L蒿甲醚對體外活體蠕形螨均有殺滅作用,蒿甲醚可能成為治療毛囊蠕型螨感染的備選藥物之一。

    螨感染;螨;殺螨劑;寄生蟲敏感性試驗;蒿甲醚

    蒿甲醚是青蒿素的衍生物之一,同類藥物還有蒿乙醚和青蒿琥酯等,主要用于各類瘧疾的治療。近年研究發(fā)現(xiàn),青蒿素及其衍生物還具有廣譜抗寄生蟲作用,對血吸蟲、肺孢子蟲、弓形蟲、陰道毛滴蟲、利什曼原蟲、鞭毛蟲等均有殺滅作用[1]。本課題組既往研究顯示,口服青蒿琥酯治療酒渣鼻的療效與鹽酸多西環(huán)素腸溶膠囊相似[2]。然而蒿甲醚是否對毛囊蠕形螨有殺滅作用還值得進一步探索。傳統(tǒng)毛囊蠕形螨感染的治療藥物主要是硝基咪唑類藥物,但該類藥物只對部分毛囊蠕型螨皮炎有效,對部分患者療效較差。本研究采用不同濃度蒿甲醚進行體外抗螨實驗,觀察其有無抗毛囊蠕型螨的藥理作用,并尋找該藥的有效抗螨濃度。

    一、材料與方法

    1.試劑:蒿甲醚注射液(昆明制藥集團股份有限公司,批號20140820),每支1ml,含蒿甲醚80mg,溶劑為花生油(上海遠香貿(mào)易有限公司生產(chǎn),批號201401205)。

    2.蠕形螨來源:2014年1-12月期間,選擇本院皮膚科門診2個月內(nèi)未經(jīng)任何藥物治療的酒渣鼻且實驗室檢查有蠕形螨感染者32例,常規(guī)消毒皮膚,采用擠壓刮拭法,用一次性刮匙刮取毛囊螨感染者面部皮脂置于潔凈載玻片上,每例患者隨機選取活體螨蟲5條,分別分配到5組中,每組1條。32例患者共獲取活毛囊蠕形螨160只,每組32只活螨。室溫22~25℃,將載玻片放入濕盒,在1 h內(nèi)開始實驗。

    3.藥物與分組:根據(jù)小鼠預實驗結果,>20 g/L蒿甲醚可能會增大引起小鼠刺激性皮炎的概率,故確定20 g/L蒿甲醚為濃度上限。用花生油將蒿甲醚分別稀釋成濃度為20、10、5和2.5 g/L,分別處理實驗組蠕形螨。對照組蠕形螨單純用花生油處理。

    4.藥液pH值測定:各實驗組與對照組隨機抽取8份藥液,測定pH值。

    5.體外抗螨實驗[3]:在22~25℃室溫下進行。先將刮取的皮脂標本均勻涂布,再用蓋玻片的一角挑取少許皮脂,均勻涂布在各組載玻片上,逐張按以下步驟觀察:光鏡下鑒定活動良好的毛囊蠕形螨1條,細針蘸取出活螨,放到另外一張潔凈載玻片上,滴加藥液或?qū)φ栈ㄉ?,加蓋玻片,即刻分別觀察上述各組每條螨蟲存活時間,每0.5 h觀察1次,以螨蟲肢體在1min內(nèi)不運動判斷為死亡。

    6.統(tǒng)計學分析:用SPSS19.0統(tǒng)計軟件,多組間蠕形螨死亡時間比較采用Kruskal?WallisH檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    二、結果

    1.藥液pH值:20、10、5和2.5 g/L蒿甲醚組和對照組pH值分別為7.05±0.27、7.01±0.03、7.02±0.02、7.1±0.03、7.08±0.03,各組pH值差別微小,基本為中性,對實驗結果的影響可以忽略不計。

    2.體外抗螨實驗:各實驗組與對照組的蟲體死亡時間見表1。經(jīng)Kruskal?WallisH檢驗,各組間蟲體死亡時間差異有統(tǒng)計學意義(H=133.954,P<0.001)。各實驗組蟲體死亡時間均短于對照組,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.001),隨蒿甲醚濃度增高殺螨時間逐步縮短,但10 g/L蒿甲醚組和20 g/L蒿甲醚組間蟲體死亡時間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

    3.光鏡下觀察蟲體:活體蠕形螨多呈黑色,彎曲,肢體運動(圖1)。蠕型螨在死亡前運動幅度逐漸減小,顏色變淡灰色,蟲體變直、皺縮(圖2)。

    三、討論

    近年研究顯示,酒渣鼻患者皮膚單位面積毛囊蠕型螨數(shù)量明顯增多[4]。反射式共聚焦顯微鏡顯示,抗螨治療后面部皮疹好轉(zhuǎn),毛囊蠕型螨數(shù)量同時也明顯減少[5]。O′Reilly等[6]發(fā)現(xiàn),毛囊蠕型螨相關性菌體蛋白與紅斑性毛細血管擴張型酒渣鼻存在正相關。青蒿類藥物有抗多種寄生蟲、抗炎及抗腫瘤等藥理作用。本研究顯示,在室溫下,5 g/L以上濃度蒿甲醚體外具有殺滅毛囊蠕形螨的作用,5~20 g/L蒿甲醚殺滅毛囊蠕形螨時間為3.09~12.84 h,是一種溫和的殺蟲藥物。有文獻[7]報道,青蒿素類藥物可以通過抑制基質(zhì)金屬蛋白酶2、基質(zhì)金屬蛋白酶9和血管內(nèi)皮細胞生長因子發(fā)揮抗血管生成作用,這可能是外用青蒿素類藥物治療酒渣鼻炎性紅斑的機制之一。

    因蒿甲醚注射液是以花生油做藥物溶劑,所以本實驗藥物稀釋液及對照組均采用花生油。研究發(fā)現(xiàn),室溫下單純用花生油處理的蠕形螨平均存活時間約為35 h,而石蠟油處理的蠕形螨平均存活時間約為27 h[8],前者蟲體存活時間長可能與花生油提供了蟲體所需部分能量有關。

    表1 不同濃度蒿甲醚體外抗蠕形螨實驗各組蠕形螨死亡時間比較(h)

    圖1 活體蠕型螨呈黑色、彎曲(×100)圖2 20 g/L蒿甲醚作用3 h,蠕型螨死亡,呈灰色,蟲體伸直、萎縮(×100)

    總之,蒿甲醚有明顯抗毛囊蠕形螨活性,為其治療毛囊蠕形螨感染性皮膚病提供重要用藥依據(jù),但其殺蟲機制還需進一步研究。

    [1]李洪軍,汪偉,梁幼生.雙氫青蒿素抗寄生蟲作用研究進展[J].中國血吸蟲病防治雜志,2011,23(4):460?464.DOI:10.3969/j.issn.1005?6661.2011.04.032.Li HJ,Wang W,Liang YS.Advances in research of dihydroar?temisinin against parasitic diseases[J].Chin J Schisto Control,2011,23(4):460?464.DOI:10.3969/j.issn.1005?6661.2011.04.032.

    [2]李婷,胡陽,俞愛華,等.口服青蒿琥酯治療酒渣鼻31例臨床觀察[J].中國皮膚性病學雜志,2015,29(3):330?332.DOI:10.13735/j.cjdv.1001?7089.201402021.Li T,Hu Y,Yu AH,et al.Clinical research of the efficacy of artesunate in 31 patients with rosacea[J].Chin JDerm Venereol,2015,29(3):330?332.DOI:10.13735/j.cjdv.1001?7089.201402021.

    [3]田曄,李朝品,鄧云.蒲公英提取物體外抗毛囊蠕形螨活性及皮膚安全性的實驗研究[J].中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志,2007,25(2):133?136.DOI:10.3969/j.issn.1000?7423.2007.02.012.Tian Y,Li CP,Deng Y.Anti?mite activity and skin safety of herba taraxaci extract for demodex folliculorum[J].Chin J Parasitol ParasitDis,2007,25(2):133?136.DOI:10.3969/j.issn.1000?7423.2007.02.012.

    [4]Bahadoran P.Reflectance confocal microscopy:a new key for assessing the role ofDemodex in rosacea?[J].Br JDermatol,2015,173(1):8?9.DOI:10.1111/bjd.13903.

    [5]Sattler EC,Hoffmann VS,Ruzicka T,et al.Reflectance confocal microscopy formonitoring the density ofDemodexmites in patients with rosacea before and after treatment[J].Br JDermatol,2015,173(1):69?75.DOI:10.1111/bjd.13783.

    [6]O′Reilly N,Menezes N,Kavanagh K.Positive correlation between serum immunoreactivity toDemodex?associated Bacillus proteins and erythematotelangiectatic rosacea[J].Br JDermatol,2012,167(5):1032?1036.DOI:10.1111/j.1365?2133.2012.11114.x.

    [7]Ho WE,Peh HY,Chan TK,et al.Artemisinins:pharmacological actions beyond anti?malarial[J].Pharmacol Ther,2014,142(1):126?139.DOI:10.1016/j.pharmthera.2013.12.001.

    [8]趙亞娥,郭娜.三種環(huán)境條件對毛囊蠕形螨殺滅作用的實驗研究[J].中國媒介生物學及控制雜志,2005,16(5):372?373.DOI:10.3969/j.issn.1003?4692.2005.05.014.Zhao YE,Guo N.The experiment of killing demodex folliculorum in three environmental conditions[J].Chin JVector Bio&Control,2005,16(5):372?373.DOI:10.3969/j.issn.1003?4692.2005.05.014.

    In vitro activity of artemether against Demodex folliculorum


    Wang Guojiang,Gao Xiaoyan,Li Ting,Zhang Haiqing,Chen Xiangming,Hu Yang

    Department ofDermatology,Zhoupu Hospital of Pudong New Distrct,Shanghai 201318,China(Wang GJ,Gao XY);Department ofDermatology,Nanxiang Hospital of Jiading District,Shanghai 201802,China(Li T,Zhang HQ,Chen XM,Hu Y)

    Chen Xiangming,Email:LC_1212@sina.com

    Objective To assess thein vitroantimite activity ofartemether againstDemodex folliculorum,and to provide evidence for the use of artemether in the treatment of skin diseases caused byDemodex folliculoruminfection.M ethods Artemetherwas diluted to different concentrations(20,10,5 and 2.5 g/L)with peanut oil.The pH values ofworking solutions of artemether and peanut oilweremeasured.Demodex folliculorummiteswere divided into several groups(32mites in each group)to be treated with artemether(20,10,5 and 2.5 g/L,artemether groups)or peanutoil(control group).Results There were significant differences in the time required for killing ofDemodex folliculorumamong the 20?,10?,5?and 2.5?g/L artemether groupsand controlgroup(Median[P25-P75]:3.00[2.00-3.88]vs.6.00[4.13-7.25]vs.13.00[11.63-14.50]vs.17.00[15.25-20.75]vs.34.00[23.50-39.50]hours,H=133.954,P<0.001).Additionally,the time required for killing ofDemodex folliculorumwas significantly shorter in these artemether groups than in the control group(allP<0.001),and was gradually shortened with the increase of artemether concentrations,butwas similar between the 10?and 20?g/L artemether groups(P>0.05).Moreover,the pH values ofworking solutions of artemether and peanut oil ranged between 7.0 and 7.1,and were close to neutral.Conclusion Artemether at20,10,5 and 2.5 g/L can killDemodex folliculorum in vitro,so artemethermay serve asan alternative drug for the treatmentofDemodex folliculoruminfection.

    Mite infestations;Mites;Acaricides;Parasitic sensitivity tests;Artemether

    陳向明,Email:LC_1212@sina.com

    10.3760/cma.j.issn.0412?4030.2016.11.012

    上海市浦東新區(qū)科委項目(PKJ2016?Y09)

    Fund program:Pudong New DistrictScience and Technology Committee Project in Shanghai(PKJ2016?Y09)

    2016?02?15)

    (本文編輯:周良佳顏艷)

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