鼻咽癌組織EB病毒潛伏膜蛋白1檢測(cè)及其臨床意義*

周鳳嬌　周小軍　汪蕓　王書(shū)芹

鼻咽癌組織EB病毒潛伏膜蛋白1檢測(cè)及其臨床意義*

周鳳嬌1，3周小軍1汪蕓2王書(shū)芹2

目的通過(guò)檢測(cè)鼻咽癌組織中的EB病毒潛伏膜蛋白1（EBV-LMP1）表達(dá)水平，探討其與鼻咽癌發(fā)病的關(guān)系及其臨床意義。方法采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)405例鼻咽癌患者鼻咽組織EB病毒EBV-LMP1表達(dá)情況，以105例鼻咽炎患者作為對(duì)照，分析EB病毒EBV-LMP1在不同鼻咽疾病及其在不同鼻咽癌病理類(lèi)型、性別及年齡的表達(dá)情況。結(jié)果鼻咽癌患者EBV-LMP1陽(yáng)性率為36.05%，而鼻咽炎患者陽(yáng)性率為14.29%，EBV-LMP1在不同病理類(lèi)型、性別及年齡的鼻咽癌患者中的表達(dá)無(wú)明顯差異。結(jié)論鼻咽組織EBV-LMP1感染與鼻咽癌有一定的相關(guān)。

鼻咽癌；EB病毒EBV-LMP1；臨床

經(jīng)過(guò)多年的研究發(fā)現(xiàn)EB病毒與鼻咽癌關(guān)系密切，EB病毒已公認(rèn)為致瘤病毒，并將EB病毒血清學(xué)檢查作為篩查鼻咽癌的指標(biāo)。但部分鼻咽癌患者血清EB病毒并不是陽(yáng)性，而且又發(fā)現(xiàn)其它惡性腫瘤如淋巴瘤、甲狀腺癌、胃癌等患者也與EB病毒感染相關(guān)［1-3］，故本研究擬在鼻咽癌高發(fā)區(qū)檢測(cè)EBV-LMP1在鼻咽癌患者鼻咽組織中的表達(dá)，探討EB病毒與鼻咽癌的關(guān)系，報(bào)告如下。

資料與方法

1病例資料

病例來(lái)源于廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山醫(yī)院，時(shí)間從2008年12月～2015年10月。鼻咽癌405例；病理分型：3例角化性癌，372例分化型非角化性癌，30例未分化型非角化性癌；男性282例，女性123例；年齡13～87歲，平均48.01±12.52歲。鼻咽炎105例；年齡15～71歲，平均40.91±13.82歲。

2EB病毒LMP1檢測(cè)方法

免疫組化所用試劑均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司，EBV-LMP1一抗產(chǎn)品編號(hào)：MAB-0063，二抗反應(yīng)系統(tǒng)采用即用型快捷免疫組化MaxVisionTM檢測(cè)試劑盒，產(chǎn)品編號(hào)：KIT-5001，實(shí)驗(yàn)步驟大致如下：組織切片后，常規(guī)烤片脫蠟，梯度酒精水化，檸檬酸鹽緩沖液高溫修復(fù)，沖洗后一抗室溫孵育3小時(shí)，后續(xù)步驟嚴(yán)格按照免疫組化染色試劑盒說(shuō)明的方法進(jìn)行。

3EB病毒免疫組化檢測(cè)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

EBV-LMP1染色在病灶活檢組織中的陽(yáng)性部位位于胞漿和胞膜，胞漿胞膜內(nèi)顯示棕黃色顆粒為陽(yáng)性。分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)：常規(guī)在“上下左右”隨機(jī)選擇4個(gè)視野進(jìn)行觀察，組織切片中上皮無(wú)染色，判斷為“-”；上皮組織細(xì)胞膜染色淺黃，判斷為“+”；上皮組織細(xì)胞漿/細(xì)胞膜內(nèi)染色黃色，或局灶深黃色，判斷為“++”；上皮組織細(xì)胞漿/細(xì)胞膜成片棕黃色，判斷為“+++”。

4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，本研究資料為分類(lèi)資料，采用非參數(shù)統(tǒng)計(jì)方法。

結(jié)果

1鼻咽癌患者鼻咽病灶組織EBV-LMP1表達(dá)情況

鼻咽癌405例，強(qiáng)陽(yáng)性5例，陽(yáng)性102例，弱陽(yáng)性39例，陰性259例，陽(yáng)性率36.05%；鼻咽炎105例，強(qiáng)陽(yáng)性1例，陽(yáng)性11例，弱陽(yáng)性3例，陰性90例，陽(yáng)性率14.29%；經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢查，χ2=18.282，P= 0.000＜＞0.01，見(jiàn)表1，顯示鼻咽癌患者鼻咽組織EB病毒的表達(dá)明顯高于鼻咽炎患者，說(shuō)明EB病毒感染鼻咽組織，與鼻咽上皮細(xì)胞癌變存在著一定的關(guān)系。

2不同病理類(lèi)型鼻咽癌患者鼻咽病灶組織EBVLMP1表達(dá)情況

角化性癌3例，陽(yáng)性者1例，陰性者2例；分化型非角化性癌372例，強(qiáng)陽(yáng)性者3例，陽(yáng)性者95例，弱陽(yáng)性者36例，陰性者238例，陽(yáng)性率為36.02%；未分化型非角化性癌30例，強(qiáng)陽(yáng)性者2例，陽(yáng)性者7例，弱陽(yáng)性者2例，陰性者19例，陽(yáng)性率36.67%。（因角化性鼻咽癌組病例較少，故不予統(tǒng)計(jì)分析）。分化型非角化性癌組與未分化型非角化性癌兩組差異比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，χ2=0.005，P= 0.944＞0.05，見(jiàn)表2，說(shuō)明不同病理類(lèi)型的鼻咽癌患者，其鼻咽病灶組織EB病毒表達(dá)無(wú)明顯差異。

3不同年齡鼻咽癌患者鼻咽病灶組織EBV-LMP1表達(dá)情況

年齡≤20歲共3例，陽(yáng)性1例，弱陽(yáng)性1例，陰性1例，陽(yáng)性率66.67%；20＜年齡≤40歲共99例，陽(yáng)性29例，弱陽(yáng)性11例，陰性59例，陽(yáng)性率40.40%；40＜年齡≤60歲共229例，強(qiáng)陽(yáng)性4例，陽(yáng)性60例，弱陽(yáng)性20例，陰性145例，陽(yáng)性率36.68%；年齡＞60歲共74例，強(qiáng)陽(yáng)性1例，陽(yáng)性12例，弱陽(yáng)性7例，陰性54例，陽(yáng)性率27.03%。χ2= 4.729，P=0.193＞0.05，見(jiàn)表3，說(shuō)明不同年齡鼻咽癌患者，其鼻咽組織EB病毒表達(dá)無(wú)明顯差異。

4不同性別鼻咽癌患者鼻咽病灶組織EBV-LMP1表達(dá)情況

男性282例，強(qiáng)陽(yáng)性4例，陽(yáng)性69例，弱陽(yáng)性26例，陰性183例，陽(yáng)性率為35.11%；女性123例，強(qiáng)陽(yáng)性1例，陽(yáng)性33例，弱陽(yáng)性13例，陰性76例，陽(yáng)性率為38.21%。χ2=0.358，P=0.550＞0.05，見(jiàn)表4，說(shuō)明不同性別鼻咽癌患者鼻咽組織中EB病毒表達(dá)情況無(wú)明顯差異。

表1　鼻咽癌及鼻咽炎患者鼻咽病灶組織EBV-LMP1表達(dá)情況

表2　不同病理類(lèi)型鼻咽癌患者鼻咽病灶組織EBV-LMP1表達(dá)情況

表3　不同年齡鼻咽癌患者鼻咽病灶組織EBV-LMP1表達(dá)情況（歲）

表4　不同性別鼻咽癌患者鼻咽病灶組織EBV-LMP1表達(dá)情況

討論

鼻咽癌在世界各地發(fā)病率差異很大，高發(fā)區(qū)為中國(guó)的廣東、廣西、湖南、福建、江西五??；另外，東南亞、北非及格陵蘭島發(fā)病率也較高。EB病毒在世界各地人群中卻有普遍感染，90%以上人群在成年前都感染過(guò)EB病毒。EB病毒的人群普遍高感染與鼻咽癌僅局部地區(qū)高發(fā)不一致。因此EB病毒與鼻咽癌的關(guān)系一直是鼻咽癌研究的重要內(nèi)容。

在EB病毒致癌性研究中，EBV-LMP1致鼻咽癌是研究最為透徹的和數(shù)量較多者，故本研究通過(guò)檢測(cè)其在鼻咽癌高發(fā)區(qū)鼻咽癌患者鼻咽病灶組織中的表達(dá)，探討EB病毒與鼻咽癌的關(guān)系。顯示鼻咽癌患者鼻咽組織EBV-LMP1的表達(dá)明顯高于鼻咽炎患者，說(shuō)明EB病毒感染鼻咽組織，與鼻咽上皮細(xì)胞癌變存在著一定的關(guān)系。這與蔡蘭等［4］采用熒光定量PCR法檢測(cè)鼻咽活檢組織EB病毒所得研究結(jié)果一致。這也是目前在鼻咽癌高發(fā)區(qū)進(jìn)行EB病毒普查及早期篩查鼻咽癌的基礎(chǔ)。在本研究中鼻咽癌組織EB病毒陽(yáng)性率為36.05%，這與大部分研究中鼻咽癌患者血清中EB病毒相關(guān)抗體的陽(yáng)性率（較高）存在著一定的差異。造成差異的原因很多，2009年在江蘇的研究表明［5］LMP1在鼻咽癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率就達(dá)到了72.50%；這可能與江蘇鼻咽癌病理類(lèi)型及病例數(shù)（40例）過(guò)少有關(guān)，而血清學(xué)EB病毒檢查，本身由于檢查的EBV抗體不一樣，其陽(yáng)性率同樣就存在差異，如采用ELISA方法檢測(cè)血清中EB病毒衣殼抗原VCA-IgA［6］其陽(yáng)性率達(dá)91.0%，另外目前研究發(fā)現(xiàn)其它腫瘤如惡性淋巴瘤、胃癌、肝癌等也與EB病毒有關(guān)，非鼻咽組織來(lái)源同樣也可產(chǎn)生血清中EB病毒相關(guān)抗體的陽(yáng)性，故造成組織學(xué)檢查與血清學(xué)檢查的差異。

通過(guò)分析不同病理類(lèi)型鼻咽癌患者鼻咽病灶組織EBV-LMP1表達(dá)情況，顯示分化型非角化性癌組與未分化型非角化性癌兩組差異比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但卻不能說(shuō)EB病毒與鼻咽癌病理分型無(wú)關(guān)，因本研究所選的病例在廣東中山市，為世界鼻咽癌最高發(fā)區(qū)之一，其地鼻咽癌病例多為非角化性癌，而角化性癌少見(jiàn)［7］，故本研究只能說(shuō)明非角化癌中的分化型及未分化型兩亞型EB病毒感染無(wú)明顯差異。

通過(guò)分析不同年齡及不同性別鼻咽癌患者鼻咽病灶組織EBV-LMP1表達(dá)情況，顯示不同年齡及不同性別鼻咽癌患者，其鼻咽病灶組織EB病毒EBV-LMP1表達(dá)并無(wú)明顯差異。而一般研究［7，8］認(rèn)為40～60歲為鼻咽癌發(fā)病高峰期，男性患鼻咽癌要多于女性，似乎可認(rèn)為EB病毒感染是鼻咽癌的病因之一，而導(dǎo)致40～60為鼻咽癌高發(fā)年齡及男性易患鼻咽癌應(yīng)該另有原因。

1張建國(guó)，郭芳芳，趙瑞皎，等.原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤的臨床病理特征及其與EB病毒的關(guān)系［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2013，30（6）：1300-1302.

2李清懷，李筱雨，孫建平，等.甲狀腺癌發(fā)生與EB病毒感染的關(guān)系［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2014，31（3）：627-629.

3郭云娣，白光輝.EB病毒相關(guān)胃癌臨床病理特征分析［J］.山東醫(yī)藥，2011，51（44）：104-105.

4蔡蘭，羅凱，劉穎，等.熒光定量PCR檢測(cè)活檢組織EB病毒感染的臨床意義［J］.中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2003，11（5）：29-30.

5王娟，徐潔潔，喬明哲，等.EB病毒潛伏膜蛋白1在鼻咽癌中的表達(dá)及臨床意義［J］.江蘇醫(yī)藥，2009，35（5）：508 -509.

6周鷹，朱洪.血清EB病毒抗體檢測(cè)對(duì)鼻咽癌的臨床診斷價(jià)值［J］.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，30（12）：1102.

7陳應(yīng)智，儲(chǔ)兵，曾玉梅，等.廣東省中山市1647例鼻咽活檢標(biāo)本的臨床病理學(xué)特征分析［J］.山東醫(yī)藥，2015，55（18）：87.

8徐建慧，陳新野，王思陽(yáng)，等.珠海市住院鼻咽癌患者626例臨床首發(fā)癥狀調(diào)查分析［J］.中華腫瘤防治雜志，2012，19（24）：1845-1847.

（收稿：2016-04-01修回：2016-05-16）

Nasopharyngeal carcinoma tissue EB virus-LMP1 detection and its clinical significance

ZHOU Fengjiao，ZHOU Xiaojun，WANG Yun，WAN Shuqin
Department of otorhinolaryngology，Zhongshan Hospital Affiliated to Guangzhou University of Chinese Medicine，Zhongshan，Guangzhou，528400，China

Objective Through detecting the expression of EB virus-LMP1 in nasopharyngeal carcinoma tissue，to explore its relationship with nasopharyngeal carcinoma and its clinical significance.Methods Using immunohistochemical method to detect nasopharyngeal tissue EB virus-LMP1 expression in 405 cases of patients with nasopharyngeal carcinoma（NPC），compared with 105 patients with nasopharyngitis，to analyze the expression of EB virus-LMP1 in the different nasopharyngeal disease and different pathological type，gender，age in patients with nasopharyngeal carcinoma.Results The positive rate of EB virus-LMP1 in patients with nasopharyngeal carcinoma（NPC）was 36.05%，while it was 14.29%in nasopharyngitis patients.The expression of EB virus-LMP1 in different pathological type，gender and age of nasopharyngeal carcinoma patients（NPC）showed no significant difference. Conclusion There is a certain correlation between EB virus-LMP1 infection in nasopharyngeal tissues and nasopharyngeal carcinoma（NPC）.

nasopharyngeal carcinoma；EB virus-LMP1；clinical

10.16542/j.cnki.issn.1007-4856.2016.04.002

*國(guó)家自然科學(xué)基金（81373698）

1廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山醫(yī)院耳鼻咽喉科（廣東中山，528400）

2廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山醫(yī)院病理科

3廣州中醫(yī)藥大學(xué)

周小軍，主任醫(yī)師.Email：zd1232@126.com