早期梅毒患者治療前后血清IL-27和IL-33水平檢測

章鵬飛季必華

(1.蕪湖市第一人民醫(yī)院　皮膚科，安徽　蕪湖　241000；2.皖南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 弋磯山醫(yī)院 皮膚科，安徽　蕪湖　241001)

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·臨床醫(yī)學(xué)·

早期梅毒患者治療前后血清IL-27和IL-33水平檢測

章鵬飛1，2季必華2

(1.蕪湖市第一人民醫(yī)院皮膚科，安徽蕪湖241000；2.皖南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 弋磯山醫(yī)院 皮膚科，安徽蕪湖241001)

目的：檢測早期梅毒患者的血清IL-27及IL-33水平，觀察梅毒患者在治療前是否已存在IL-27、IL-33水平的變化及此變化是否影響其預(yù)后。方法：選取早期梅毒患者的血清樣本，根據(jù)治療后的隨訪情況分為梅毒血清轉(zhuǎn)陰組和非轉(zhuǎn)陰組，采用雙抗體夾心ELISA法分別檢測兩組治療前后及正常對照組的IL-27和IL-33水平。結(jié)果：①IL-27水平在梅毒血清轉(zhuǎn)陰組治療前高于非轉(zhuǎn)陰組治療前(27.31±6.19)ng/Lvs.( 20.98±5.10)ng/L，P<0.05；IL-27水平在非轉(zhuǎn)陰組治療后高于治療前(25.34±6.66)ng/Lvs. (20.98±5.10)ng/L，P<0.05。②IL-33水平在梅毒血清轉(zhuǎn)陰組治療后低于治療前(4.41±1.33)ng/Lvs. (3.26±1.41)ng/L，P<0.05。結(jié)論：IL-27可能有利于機(jī)體對梅素螺旋體(treponema pallidum,TP)的清除，而IL-33可能不利于機(jī)體對TP的清除。

梅毒;IL-27;IL-33

既往研究發(fā)現(xiàn)梅毒患者體內(nèi)存在細(xì)胞免疫失衡，F(xiàn)itzgerald等[1]提出在梅毒病程發(fā)展中，存在Th1向Th2漂移的假說，認(rèn)為Th1/Th2免疫失衡，可能是梅毒螺旋體能夠逃避免疫監(jiān)視得以繼續(xù)增殖、梅毒進(jìn)入潛伏階段的原因。

IL-27與IL-33分別作為Th1和Th2的調(diào)節(jié)因子[2-3]，已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)參與較多感染性疾病的免疫反應(yīng)。在梅毒患者體內(nèi)，二者是否也存在異常？本研究旨在探討IL-27、IL-33分別作為Th1、Th2細(xì)胞的活化因子而在早期梅毒患者(病程小于2年[4])清除體內(nèi)梅毒螺旋體的免疫應(yīng)答中的作用。

1　資料與方法

1.1臨床資料病例來源于2012年6月～2013年8月在弋磯山醫(yī)院皮膚性病科門診就診者，選取符合診斷及入選標(biāo)準(zhǔn)的初診未治療早期梅毒患者共124例，以血清快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(rapid plasma reagent circle card test,RPR)檢測其滴度，并預(yù)留作為IL-27、IL-33檢測的治療前血清樣本?；颊呓?jīng)芐星青霉素G驅(qū)梅治療結(jié)束后的第6個月，在入組的124例中共收集到RPR轉(zhuǎn)陰者22例，RPR未下降4倍滴度者19例，從中分別選取18例，作為轉(zhuǎn)陰組及非轉(zhuǎn)陰組，并再次留取其血清作為IL-27、IL-33治療后的檢測樣本。所有患者否認(rèn)既往有驅(qū)梅治療史，排除合并HIV感染、自身免疫性疾病及近3個月內(nèi)使用糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑者。同時選取健康志愿體檢者18例為正常對照組，所有研究對象均簽署知情同意書。具體分組如下：①梅毒血清轉(zhuǎn)陰組共18例(男9例，女9例)，年齡20～49歲，平均(35.97±5.18)歲，正規(guī)驅(qū)梅治療6個月后復(fù)查血清RPR試驗(yàn)轉(zhuǎn)陰者；②梅毒血清非轉(zhuǎn)陰組共18例 (男8例，女10例)，年齡22～53歲，平均(38.24±5.74)歲，正規(guī)驅(qū)梅治療6個月后，復(fù)查血清RPR試驗(yàn)未下降4倍滴度者；③正常對照組共 18 例(男9例，女9例)，年齡20～50歲，平均(36.41±7.36)歲。3組間性別(χ2=0.148，P=0.929)和年齡(F=0.362，P=0.798)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2方法所有入選的早期梅毒患者治療前、治療后及正常對照組人群均抽取外周靜脈血5 mL，于室溫下靜置10～20 min后放入離心機(jī)分離血清(2500～3000 r/min，離心15 min)，取其中部分血清立即做RPR和TPPA試驗(yàn)，同時進(jìn)行HIV抗體的檢測。另取1 mL血清于凍存管分裝，并標(biāo)注編號、姓名、采集日期等放置于-70℃冰箱凍存待測。用雙抗體夾心ELISA法集中檢測血清IL-27及IL-33水平，試劑盒均購自上海源葉生物技術(shù)有限公司，操作按試劑盒說明書的步驟進(jìn)行。

2　結(jié)果

2.1各組IL-27表達(dá)量治療前，梅毒血清轉(zhuǎn)陰組、梅毒非轉(zhuǎn)陰組的血清IL-27水平均高于正常對照組(F=47.79,P<0.05)，且梅毒血清轉(zhuǎn)陰組高于非轉(zhuǎn)陰組 (P<0.05)。治療后，梅毒血清轉(zhuǎn)陰組、梅毒非轉(zhuǎn)陰組的血清IL-27水平仍高于正常對照組(F=37.42,P<0.05)，但梅毒血清轉(zhuǎn)陰組與非轉(zhuǎn)陰組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。IL-27水平在梅毒血清轉(zhuǎn)陰組治療前后差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；在非轉(zhuǎn)陰組治療前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05)。見表1。

組別n治療前治療后d±sd配對t值P值轉(zhuǎn)陰組1827.31±6.1928.82±8.131.52±8.360.771>0.05非轉(zhuǎn)陰組1820.98±5.1025.34±6.664.36±8.452.189<0.05

注：正常對照組IL-27=(12.14±1.13)ng/L,F=47.79,P< 0.05。

2.2各組IL-33表達(dá)量治療前，梅毒血清轉(zhuǎn)陰組、梅毒非轉(zhuǎn)陰組的血清IL-33水平均高于正常對照組(F=46.66,P<0.05)，但梅毒血清轉(zhuǎn)陰組與非轉(zhuǎn)陰組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后，梅毒血清轉(zhuǎn)陰組、梅毒非轉(zhuǎn)陰組的血清IL-33水平仍高于正常對照組(F=21.57,P<0.05)，但梅毒血清轉(zhuǎn)陰組與非轉(zhuǎn)陰組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。IL-33水平在梅毒血清轉(zhuǎn)陰組治療前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在非轉(zhuǎn)陰組治療前后差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P>0.05)。 見表2。

組別n治療前治療后d±sd配對t值P值轉(zhuǎn)陰組184.41±1.333.26±1.411.15±1.064.603<0.05非轉(zhuǎn)陰組184.37±1.293.97±1.560.40±1.970.861>0.05

注：正常對照組IL-33=(1.38±0.25)ng/L，F(xiàn)=46.66,P< 0.05。

3　討論

IL-27是2002年發(fā)現(xiàn)并命名的IL-12家族細(xì)胞因子[5]。IL-27主要由巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生，是一種由EBI3和p28組成的異二聚體，EBI3與IL-12的p40亞基同源，p28則與IL-12的p35亞基相關(guān)[6]。IL-27可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生IL-12，促進(jìn)CD4+T細(xì)胞的增殖，也能夠激活STAT1途徑，誘導(dǎo)T-bet活化，從而誘導(dǎo)初始CD4+T細(xì)胞向Th1分化，并促進(jìn)IFN-γ的產(chǎn)生[7-9]。由此可見，IL-27屬于Th1系列細(xì)胞因子之一。

本實(shí)驗(yàn)中轉(zhuǎn)陰組IL-27水平在治療前明顯高于非轉(zhuǎn)陰組治療前，說明轉(zhuǎn)陰組的患者在治療前，其血清IL-27即已處于高水平狀態(tài)，提示對于早期梅毒患者，高水平的IL-27驅(qū)動的Th1反應(yīng)可能有利于對TP的清除。

作為Th1細(xì)胞的代表性因子，IL-2、IFN-γ與梅毒的關(guān)系已多有報道。有學(xué)者檢測梅毒患者外周血IL-2水平，發(fā)現(xiàn)血清IL-2水平在早期梅毒患者治療后RPR轉(zhuǎn)陰組最高，未治療組次之，而治療后RPR非轉(zhuǎn)陰組最低，表明IL-2水平與RPR的轉(zhuǎn)陰具有正相關(guān)性，提示IL-2有利于機(jī)體對TP的清除[10]。師金川等[11]采用ELISA分別檢測梅毒患者血清復(fù)發(fā)組、RPR轉(zhuǎn)陰組和正常人群組血清IFN-γ的含量，發(fā)現(xiàn)血清復(fù)發(fā)組IFN-γ水平明顯低于正常對照組及RPR轉(zhuǎn)陰組，提示若IFN-γ參與的Th1反應(yīng)減弱，則不利于TP的清除。以上均提示Th1型反應(yīng)有利于梅毒螺旋體的清除；而IL-27對Th1型細(xì)胞因子的促進(jìn)作用，可能是其有利于清除TP的原因。

但本實(shí)驗(yàn)中，非轉(zhuǎn)陰組的IL-27水平在治療后明顯升高，而梅毒患者血清試驗(yàn)仍未轉(zhuǎn)陰。IL-27對IL-10(Th2型細(xì)胞因子)生成的促進(jìn)作用，可能有助于解釋這個現(xiàn)象。Anderson等[12]以利什曼原蟲感染小鼠，檢測皮損及淋巴結(jié)中的白介素及CD4+T細(xì)胞數(shù)，發(fā)現(xiàn)IL-27及IL-10、IFN-γ水平在感染后均增高，再感染IL-27受體缺陷(WSX-1-/-)的小鼠，發(fā)現(xiàn)IL-10水平逐漸下降，證明IL-27對IL-10生成的促進(jìn)作用。IL-27對IL-10的促進(jìn)作用是否影響對TP的清除，仍需進(jìn)一步探討。

IL-33是2005年由Schmitz等[13]鑒定發(fā)現(xiàn)的IL-1家族成員，主要由上皮細(xì)胞、呼吸道平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和脂肪細(xì)胞產(chǎn)生，可促進(jìn) IL-4、IL-5 以及IL-13等Th2型細(xì)胞因子產(chǎn)生，在多種炎癥過程中發(fā)揮重要作用[14]。因此IL-33屬于Th2系列細(xì)胞因子之一。本研究中，梅毒血清轉(zhuǎn)陰組的IL-33水平在治療后降低，而非轉(zhuǎn)陰組的IL-33水平在治療后未明顯降低，提示IL-33不利于機(jī)體清除TP，這可能與其能夠促進(jìn)Th2反應(yīng)有關(guān)。

有學(xué)者[15]發(fā)現(xiàn)，梅毒血清固定患者血清中Th2細(xì)胞分泌的IL-4、IL-10明顯高于梅毒血清轉(zhuǎn)陰組，提示在梅毒患者體內(nèi)的Th2型反應(yīng)不利于梅毒螺旋體清除。最近Sattler等[16]發(fā)現(xiàn)在炎癥性腸病模型的小鼠體內(nèi)，IL-33能促進(jìn)IL-10分泌。有學(xué)者[17]用流式細(xì)胞儀檢測梅毒血清固定患者外周血CD4+CD25+IL-10+細(xì)胞比例，再用實(shí)時PCR技術(shù)檢測CD4+CD25+細(xì)胞的IL-10 mRNA相對表達(dá)量。結(jié)果顯示梅毒血清固定患者組外周血CD4+CD25+IL-10+細(xì)胞比例及IL-10 mRNA表達(dá)水平均比健康對照組明顯增高，認(rèn)為IL-10參與Th2型免疫反應(yīng)，造成梅毒患者外周血RPR滴度不轉(zhuǎn)陰。IL-33導(dǎo)致患者體內(nèi)TP難以清除，是否是因?yàn)閷L-4、IL-10等Th2型細(xì)胞因子的促進(jìn)作用，亦需進(jìn)一步論證。

IL-33對梅毒感染的免疫反應(yīng)的影響，可能還存在于Th1/Th2平衡的變化中，Leader[18]將芝加哥株梅毒螺旋體感染兔睪丸，實(shí)時反轉(zhuǎn)錄PCR定量檢測外周血的mRNA水平，發(fā)現(xiàn)在感染后第11天，IFN-γ的mRNA水平達(dá)到最高峰，而IL-4的水平僅為微量，提示在病程早期，機(jī)體抵抗梅毒螺旋體的免疫應(yīng)答以Th1型為主，而隨著梅毒病程的進(jìn)展，IL-10的mRNA水平在感染后第18天達(dá)到最高峰，提示病程后期階段轉(zhuǎn)為以Th2為主的免疫應(yīng)答。王瑞等[19]也證實(shí)了此觀點(diǎn)，以ELISA法檢測早期梅毒患者的血清IFN-γ水平，結(jié)果Ⅰ期、Ⅱ期組的IFN-γ水平均顯著高于正常組，且Ⅰ期梅毒組高于Ⅱ期梅毒組，(231±19.7)ng/Lvs.(199.0±16.5)ng/L,P<0.05。IFN-γ在早期梅毒患者血清中呈高表達(dá),且隨著患者梅毒分期進(jìn)展而降低,其免疫應(yīng)答由Th1優(yōu)勢型轉(zhuǎn)為Th2優(yōu)勢型。

本實(shí)驗(yàn)中數(shù)據(jù)的變化也體現(xiàn)了在早期梅毒患者體內(nèi)，存在Th1/Th2平衡的變化，治療前的IL-27水平在轉(zhuǎn)陰組比非轉(zhuǎn)陰組明顯較高，轉(zhuǎn)陰組IL-27/IL-33較高，提示轉(zhuǎn)陰組的早期梅毒患者，機(jī)體抵抗TP的免疫反應(yīng)以Th1型為主，而IL-27參與的Th1反應(yīng)，在機(jī)體抵抗TP的免疫應(yīng)答的早期即已占主要地位；并且轉(zhuǎn)陰組治療前后的IL-27/IL-33均高于非轉(zhuǎn)陰組，提示IL-27有利于機(jī)體對TP的清除；非轉(zhuǎn)陰組的IL-33水平在治療后未明顯下降，提示隨著病程進(jìn)展，非轉(zhuǎn)陰組患者體內(nèi)的Th2反應(yīng)未能受到足夠的抑制，不利于TP的清除。

綜上所述，IL-27及IL-33均可能參與TP感染過程中的免疫應(yīng)答，IL-27可能有利于機(jī)體對TP的清除，而IL-33可能不利于機(jī)體對TP的清除。鑒于本實(shí)驗(yàn)樣本量較小，尚需擴(kuò)大樣本量、豐富檢測方法等進(jìn)一步證實(shí)。

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Measurement of serum levels of IL-27 and IL-33 in early syphilis patients before and after therapy

ZHANG Pengfei,JI Bihua

Department of Dermatology,Wuhu No.1 People′s Hospital,Wuhu 241000,China

Objective： To measure the serum levels of IL-27 and IL-33 in patients with early syphilis infection before and after treatment for estimating the association of level changes in the two proteins with prognosis.Methods:Serum samples were obtained in patients with early syphilis infection.Then the patients were allocated to group of serological conversion(negative) or persistence(remaining positive) based on the follow-up serology measurement.Double-antibody sandwich ELISA was performed to detect the serum levels of IL-27 and IL-33 in the two groups of patients.Results:① Serological conversion group had higher serum IL-27 level than the persistence group before treatment (27.31±6.19)ng/Lvs.(20.98±5.10)ng/L,P<0.05,and the level of IL-27 was increased in the persistence group after therapy (25.34±6.66)ng/Lvs.(20.98±5.10)ng/L，P<0.05;②Serum IL-33 level was significantly decreased in serological conversion group after treatment compared to pre-treatment (4.41±1.33)ng/Lvs.(3.26±1.41)ng/L,P<0.05.Conclusion:IL-27 may facilitate clearance ofTreponemapallidum,yet IL-33 can not.

syphilis;IL-27;IL-33

1002-0217(2016)05-0453-04

2015-12-15

章鵬飛(1987-)，男，住院醫(yī)師，碩士，(電話)13956204533，(電子信箱)cleanspy@163.com；

.1

A

10.3969/j.issn.1002-0217.2016.05.014

季必華，男，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，(電子信箱)jibihua@aliyun.com，通信作者.