分光光度法測(cè)定兩種開(kāi)封菊花總黃酮含量

王 橋，金月珍，朱凌佳，潘新迪，陳芳芳，王 震

河南大學(xué) 藥學(xué)院，河南 開(kāi)封475004

?

分光光度法測(cè)定兩種開(kāi)封菊花總黃酮含量

王 橋，金月珍，朱凌佳，潘新迪，陳芳芳，王 震

河南大學(xué) 藥學(xué)院，河南 開(kāi)封475004

〔目的〕 建立測(cè)定開(kāi)封菊花中總黃酮含量的測(cè)定方法?！卜椒ā?利用可見(jiàn)分光光度法測(cè)定開(kāi)封菊花中總黃酮的含量?！步Y(jié)果〕 總黃酮含量在0.02～0.10 mg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為95.95%，RSD為1.02%。黃飛舞和白線菊總黃酮含量分別為7.87%和10.37%?！步Y(jié)論〕該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于菊花中總黃酮的含量測(cè)定。

開(kāi)封；菊花；可見(jiàn)分光光度法；總黃酮

菊花系菊科植物(ChrysanthemummorifoliumRamat.)的干燥頭狀花序，具有散風(fēng)清熱、清肝明目之功效，臨床用于治療風(fēng)熱感冒、頭暈?zāi)垦?、眼目昏花等癥。2015年版《中國(guó)藥典》收載了亳菊、杭菊、滁菊、懷菊、貢菊等5種菊花[1]?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》中將菊花列為上品，《本草綱目》謂其能“除風(fēng)熱，益肝補(bǔ)陰”。現(xiàn)代研究表明，菊花中主要含有黃酮類、揮發(fā)油類、三萜類、氨基酸、多糖和有機(jī)酸等成分，具有抗脂肪肝、抗氧化、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛等作用[2-6]，其中的黃酮類化合物具有抗氧化、抗炎、舒張血管、改善心肌缺血、保肝護(hù)肝等多種藥理作用[7-12]。開(kāi)封菊花具有悠久的栽培觀賞歷史，但關(guān)于其活性成分的研究較少。本文利用可見(jiàn)分光光度法測(cè)定兩種開(kāi)封菊花中的總黃酮含量，為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)提供參考。

1　材料與儀器

1.1實(shí)驗(yàn)材料

黃飛舞、白線菊，采摘于開(kāi)封市通許縣開(kāi)封菊花種植基地，經(jīng)開(kāi)封市農(nóng)科所趙艷莉副研究員鑒定為菊科植物菊的栽培品種，標(biāo)本存放于河南大學(xué)藥物研究所。懷菊，購(gòu)自新鄉(xiāng)恒天藥業(yè)有限公司。

1.2試劑與儀器

乙醇(安徽安特食品股份有限公司)，亞硝酸鈉(天津市德恩化學(xué)試劑有限公司)，硝酸鋁(北京化工廠)，氫氧化鈉(天津市德恩化學(xué)試劑有限公司)。以上試劑皆為分析純。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，1000800-201408，含量≥92.8%)。

電熱套、冷凝管、BT-25S電子天平(德國(guó)Sartorius公司)、TP-114電子天平(美國(guó)Danver公司)、UV-2600型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本島津公司)。

2　實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1供試品溶液的制備

精密稱取菊花粗粉(過(guò)一號(hào)篩)1.0 g，加入70%的乙醇30 mL，80 ℃回流提取2 h，放冷、濾過(guò)；濾液置100 mL容量瓶中，用70%的乙醇定容至刻度，振蕩搖勻，備用。

2.2對(duì)照品溶液的制備

精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品5 mg，置25 mL容量瓶中，加70%的乙醇溶解，定容至刻度，振蕩搖勻，即得0.2 mg/mL對(duì)照品溶液。

2.3測(cè)定方法

精密吸取若干對(duì)照品或供試品溶液，置10 mL容量瓶中，加入5%的NaNO2溶液0.3 mL，搖勻，放置6 min；然后加入10%的Al(NO3)3溶液0.3 mL，搖勻，放置6 min；再加入4%的NaOH溶液4 mL，搖勻，最后用70%的乙醇定容至刻度；放置20 min后，于一定波長(zhǎng)下以試劑空白為對(duì)照測(cè)定其吸光度。

2.4測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

精密量取空白試劑、蘆丁對(duì)照品溶液、供試品溶液各2 mL，精密量取供試品溶液0.4 mL。按第2.3節(jié)所述方法，顯色后在紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描。發(fā)現(xiàn)對(duì)照品和供試品溶液在400～600 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)512 nm處有最大吸收，空白試劑在此處無(wú)吸收。最終確定，最大吸收波長(zhǎng)512 nm(見(jiàn)圖1-圖3)。

2.5穩(wěn)定性考察

精密量取5份對(duì)照品溶液2 mL，分別置10 mL容量瓶中。按第2.3節(jié)所述方法，于512 nm波長(zhǎng)下分別在10，20，30，40，50，60，90，120 min時(shí)測(cè)定吸光度。結(jié)果顯示，在20～120 min范圍內(nèi)吸光度基本穩(wěn)定，最終確定顯色后放置20 min后再進(jìn)行測(cè)定。

2.6標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密吸取對(duì)照品溶液1，2，3，4，5 mL，分別置10 mL容量瓶中。按第2.3節(jié)所述方法，于512 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程：

A=9.235 0 C+0.060 3，

R2=0.999 5。

結(jié)果顯示(見(jiàn)圖4)，蘆丁對(duì)照品在0.02～0.10 mg/mL之間具有良好的線性關(guān)系。

圖1　空白試劑吸光圖譜

圖2　標(biāo)準(zhǔn)品吸光圖譜

圖3　供試液吸收光譜

圖4　標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.7精密度實(shí)驗(yàn)

精密量取對(duì)照品溶液2 mL，置10 mL容量瓶中。按第2.3節(jié)所述方法，于512 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。測(cè)量5次，計(jì)算得，平均吸光度=0.428 8，RSD=1.30%，表明本方法具有良好的精密度。

2.8重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

精密稱取白線菊1.0 g，共6份，分別按第2.1節(jié)所述方法制備供試品溶液。精密吸取0.4 mL供試品溶液，按第2.3節(jié)所述方法，于512 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。平均含量為10.28%，RSD為2.05%，表明該顯色反應(yīng)穩(wěn)定、重復(fù)性良好。

2.9加樣回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取菊花0.5 g(已知含量7.93%)，共6份，分別加入蘆丁對(duì)照品若干克，按第2.1節(jié)所述方法制備加樣供試品溶液。按第2.3節(jié)所述方法，于512 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，并計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　加樣回收率實(shí)驗(yàn)

由表1得，平均回收率=95.95%，RSD=1.02%。

2.10樣品含量測(cè)定

分別精密稱取黃飛舞、白線菊、懷菊各1.0 g，按第2.1節(jié)所述方法制備供試品溶液。按第2.3節(jié)所述方法，于512 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，得出總黃酮含量(見(jiàn)表2)。

表2　開(kāi)封菊花部分品種與懷菊總黃酮含量比較

3　結(jié)論

本文對(duì)開(kāi)封產(chǎn)菊花黃飛舞、白線菊與懷菊總黃酮含量進(jìn)行了測(cè)定研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：白線菊的總黃酮含量最高，且開(kāi)封產(chǎn)菊花黃飛舞、白線菊的總黃酮含量均高于藥用菊花懷菊，具有潛在的開(kāi)發(fā)價(jià)值。通過(guò)對(duì)開(kāi)封菊花中總黃酮含量的測(cè)定，可為其質(zhì)量評(píng)價(jià)提供依據(jù)，也為進(jìn)一步的活性研究提供參考。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典[S]. 北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015:310-311.

[2] 謝占芳，張倩倩，朱凌佳，等. 菊花化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展[J]. 河南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2015,34(4):290-300.

[3] CUI Y, WANG X L, XUE J, et al. Chrysanthemum morifolium extract attenuates high-fat milk-induced fatty liver through peroxisome proliferator-activated receptor α-mediated mechanism in mice[J]. Nutrition Research, 2014,34(3):268-275.

[4] ZHENG C P, DONG Q, CHEN H J, et al. Structural characterization of a polysaccharide from Chrysanthemum morifolium flowers and its antioxidant activity[J]. Carbohydrate Polymers, 2015,130:113-121.

[5] JING S Q, CHAI W J, GUO G, et al. Comparison of antioxidant and antiproliferative activity between Kunlun Chrysanthemum flowers polysaccharides (KCCP) and fraction PII separated by column chromatography[J]. Journal of Chromatography B, 2016,1019:169-177.

[6] SHI G B, ZHAO M H, ZHAO Q C, et al. Mechanisms involved in the antinociception of petroleum ether fraction from the EtOH extract of Chrysanthemum indicum in mice[J]. Phytomedicine, 2011,18(7):609-616.

[7] 張爾賢，方黎，張捷，等. 菊花提取物的抗氧化活性研究[J]. 食品科學(xué)，2000,21(7):6-9.

[8] 吳曉寧，余陳歡，包啟年. 杭白菊總黃酮抗炎作用及其機(jī)制初探[J]. 中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2009(9):1000-1004.

[9] 張寬朝，文漢，胡雅萍，等. 貢菊黃酮抗小鼠急性肝損傷作用的研究[J]. 天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2014,26(2):183-187.

[10] 沈炳香，王桐生，魏慶紅，等. 亳菊總黃酮對(duì)大鼠急性心肌缺血的保護(hù)作用[J]. 安徽中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014,33(1):56-59.

[11] 俞浩，肖新，劉漢珍，等. 滁菊總黃酮對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的影響[J]. 食品科學(xué)，2012,33(15):283-286.

[12] HE D X, RU X C, WEN L, et al. Total flavonoids of Flos Chrysanthemi protect arterial endothelial cells against oxidative stress[J]. Journal of Ethnopharmacology, 2012,139(1):68-73.

[責(zé)任編輯李麥產(chǎn)]

Determination of total flavonoids from two kinds of Chrysanthemums in Kaifeng by spectrophotometry

WANG Qiao, JIN Yuezhen, ZHU Lingjia, PAN Xindi, CHEN Fangfang, WANG Zhen

Pharmacy College of Henan University, Henan Kaifeng 475004, China

〔Objective〕Thesis aims to develop a method to determine the total flavonoids content of Chrysanthemum in Kaifeng.〔Methods〕Spectrophotometry is used to determine the total flavonoids content in two Chrysanthemums in Kaifeng.〔Results〕The result shows the total flavonoids content is a linear range of 0.02～0.10 mg/mL. The averagerecoveryis 95.95%,RSD is 1.02%. The total flavonoids content of Huang feiwu and Bai xian ju are 7.87% and 10.37% respectively.〔Conclusion〕The method is simple and accurate, which could be used for the determination total flavonoids content.

Kaifeng; Chrysanthemum; spectrophotometry; total flavonoids

1672-7606(2016)03-0172-03

2016-05-16

開(kāi)封市菊花藥食功效開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目(FX2224F03751)

王橋(1989-)，男，河南開(kāi)封人，碩士研究生，從事藥物質(zhì)量研究與評(píng)價(jià)工作。

R927.2

A