發(fā)酵豆粕替代部分魚(yú)粉對(duì)中華絨螯蟹幼蟹生長(zhǎng)性能、體成分及相關(guān)消化酶活性的影響

沈城，方華，郭子好，朱校適，孫中超，焦春燕

（上海源耀生物股份有限公司，上海浦東201316）

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發(fā)酵豆粕替代部分魚(yú)粉對(duì)中華絨螯蟹幼蟹生長(zhǎng)性能、體成分及相關(guān)消化酶活性的影響

沈城，方華*，郭子好，朱校適，孫中超，焦春燕

（上海源耀生物股份有限公司，上海浦東201316）

為研究發(fā)酵豆粕替代部分魚(yú)粉對(duì)中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）幼蟹生長(zhǎng)性能、體組成及相關(guān)消化酶活性的影響，本試驗(yàn)選用初始均重為（4.0±1.0）g的中華絨螯蟹幼蟹280只，隨機(jī)分成7組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只。配制發(fā)酵豆粕替代量分別為0%、5%、10%、15%、20%、25%、30%（分別記為P0、P5、P10、P15、P20、P25、P30組）的7種等能等氮試驗(yàn)飼料。試驗(yàn)期為60 d。結(jié)果表明：發(fā)酵豆粕替代部分魚(yú)粉能提高中華絨螯蟹幼蟹的生長(zhǎng)性能，當(dāng)發(fā)酵豆粕替代15%魚(yú)粉時(shí)，中華絨螯蟹幼蟹的增重率（WGR）、成活率（SR）、攝食率（FI）和特定生長(zhǎng)率（SGR）較對(duì)照組分別提高了16.54%、10.09%、11.48%和7.06%（P＜0.05），餌料系數(shù)（FC）降低了6.58%（P＜0.05）；不同水平發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉對(duì)中華絨螯蟹幼蟹全蟹蟹體、肌肉和肝胰腺的水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和粗灰分含量均無(wú)顯著影響（P＞0.05）；當(dāng)發(fā)酵豆粕替代量小于15%時(shí)，脂肪酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和活性淀粉酶活性與對(duì)照組無(wú)顯著差異（P＞0.05）。由本試驗(yàn)結(jié)果可以看出，發(fā)酵豆粕可以適量替代中華絨螯蟹配合飼料中的魚(yú)粉，且適宜替代量為15%。

中華絨螯蟹；發(fā)酵豆粕；生長(zhǎng)性能；體組成；消化酶活性

發(fā)酵豆粕利用微生物發(fā)酵技術(shù)，降解大蛋白質(zhì)分子和大部分的抗?fàn)I養(yǎng)因子，可以顯著改善豆粕的適口性提高動(dòng)物的消化吸收能力，從而促進(jìn)動(dòng)物良好生長(zhǎng)（Feng等，2007）。近年來(lái)，發(fā)酵豆粕的應(yīng)用范圍從畜禽幼齡動(dòng)物逐步擴(kuò)大到水產(chǎn)動(dòng)物（宋文新和邵慶均，2009；馮杰等，2007）。研究表明，發(fā)酵豆粕可以適量替代水產(chǎn)動(dòng)物配合飼料中的魚(yú)粉（陳萱等，2005；羅智等，2004）。本試驗(yàn)旨在研究發(fā)酵豆粕替代部分魚(yú)粉對(duì)中華絨螯蟹幼蟹生長(zhǎng)性能、體組成及相關(guān)消化酶活性的影響，為發(fā)酵豆粕在中華絨螯蟹配合飼料中的合理使用提供理論依據(jù)。

1　材料和方法

1.1試驗(yàn)材料河蟹，購(gòu)于上海海洋大學(xué)崇明島優(yōu)秀苗種養(yǎng)殖基地，體質(zhì)量規(guī)格為（4.0±1.0）g，健康，附肢齊全，活力強(qiáng)。

1.2試驗(yàn)飼料在蛋白質(zhì)含量為36%～37%、能量蛋白比為37～38 kJ/g蛋白的原則下，分別在基礎(chǔ)飼料（P0）中按5%（P5）、10%（P10）、15%（P15）、20%（P20）、25%（P25）和30%（P30）的比例添加發(fā)酵豆粕。飼料原料過(guò)80目篩，混合均勻后加水調(diào)質(zhì)，用小型絞肉機(jī)制成顆粒飼料。基礎(chǔ)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1　基礎(chǔ)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平%

1.3飼養(yǎng)管理試驗(yàn)河蟹于3%的鹽水中浸洗5min后放入玻璃鋼水族箱中暫養(yǎng)。1周后，選擇活力強(qiáng)、附肢健全的河蟹，隨機(jī)分為7組，即一個(gè)基礎(chǔ)飼料組（P0）和P5、P10、P15、P20、P25、P30六個(gè)試驗(yàn)組，每組4個(gè)重復(fù)，每箱10只蟹，隨機(jī)分配到28個(gè)30 cm×25 cm×10 cm的聚乙烯水族箱中進(jìn)行養(yǎng)殖試驗(yàn)，箱中加入經(jīng)充分曝氣的自來(lái)水5 L，并放置PVC管作為遮蔽物，防止河蟹互相殘殺。持續(xù)充氣，試驗(yàn)期間采用12 h光照，12 h黑暗。當(dāng)多數(shù)河蟹脫2次殼后結(jié)束飼養(yǎng)，試驗(yàn)周期75 d。試驗(yàn)期間水溫（26±1）℃，DO≥7.0 mg/L，pH 7.5± 0.2，NH4+-N≤0.2 mg/L，NO2-N≤0.05 mg/L，H2S≤0.05 mg/L。投飼量開(kāi)始設(shè)為蟹體質(zhì)量的2%，每天08∶00、16∶00投喂兩次，早上投料約1/3，晚上約2/ 3。以投喂3 h后無(wú)殘餌來(lái)確定投喂量，用此方法使投喂量接近于養(yǎng)殖蟹飽食量。每天觀察養(yǎng)殖蟹攝食及活動(dòng)狀況，做好脫殼、死亡等詳細(xì)記錄。

1.4樣品收集養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，停食24 h排空腸道，分組稱重，并統(tǒng)計(jì)成活數(shù)。每個(gè)養(yǎng)殖箱中隨機(jī)選取成活數(shù)的1/3立即烘干，制成全蟹樣品用于體成分分析，另外2/3立即解剖，取其肝胰腺、腸道和肌肉用于消化酶活性和肌肉成分測(cè)定，-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5測(cè)定指標(biāo)

1.5.1生長(zhǎng)性能指標(biāo)測(cè)定試驗(yàn)正式開(kāi)始時(shí)測(cè)定每組蟹的初始體質(zhì)量，飼養(yǎng)60 d后，測(cè)定各組蟹的終末體質(zhì)量。計(jì)算增重率（WGR）、成活率（SR）、餌料系數(shù)（FC）、攝食率（FI）和特定生長(zhǎng)率（SGR）。計(jì)算公式如下：

式中：N0為初始時(shí)蟹的數(shù)量；Nt為試驗(yàn)結(jié)束時(shí)蟹的數(shù)量；W0為初始平均體質(zhì)量，g；Wt為終末平均體質(zhì)量，g；F為消耗飼料質(zhì)量，g；D為試驗(yàn)天數(shù)，d。

1.5.2常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定樣品中水分含量采用105℃恒重法測(cè)定；粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏定氮法測(cè)定；粗脂肪含量采用乙醚抽提法測(cè)定；粗灰分含量采用馬福爐550℃灼燒法測(cè)定。

1.5.3消化酶活性測(cè)定粗酶液制備：用分析天平準(zhǔn)確稱量肝胰腺和腸道，按組織重量加入9倍體積的預(yù)冷0.9%生理鹽水，制成10%的組織勻漿，4℃、2500 r/min離心10 min，取上清液待測(cè)。采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測(cè)定胰蛋白酶、胃蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，蛋白質(zhì)含量采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定。

胰蛋白酶活性定義：在pH 8.0、37℃條件下，每毫克組織蛋白質(zhì)中含有的胰蛋白酶每分鐘使吸光度變化0.003為1個(gè)酶活性單位（U/mg prot）。

胃蛋白酶活性定義：每毫克組織蛋白質(zhì)在37℃條件下每分鐘分解蛋白質(zhì)生成1 μg氨基酸為1個(gè)酶活性單位（U/mg prot）。

淀粉酶活性定義：每毫克組織蛋白質(zhì)在37℃條件下與底物作用30 min，水解10 mg淀粉為1個(gè)酶活性單位（U/mg prot）。

脂肪酶活性定義：在37℃條件下，每克組織蛋白質(zhì)在本反應(yīng)體系中與底物反應(yīng)1 min，每消耗1 μmol底物為1個(gè)酶活性單位（U/g prot）。

1.6統(tǒng)計(jì)與分析試驗(yàn)結(jié)果用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，統(tǒng)計(jì)分析所用的軟件為SPSS 13.0 for Windows。各處理的數(shù)據(jù)采用單因素方差分析（oneway ANOVA），并結(jié)合Duncan’s檢驗(yàn)法進(jìn)行多重比較，檢驗(yàn)處理間的差異顯著性（P＜0.05）。

2　結(jié)果與分析

2.1發(fā)酵豆粕替代部分魚(yú)粉對(duì)中華絨螯蟹幼蟹生長(zhǎng)性能的影響表2顯示，與對(duì)照組相比，當(dāng)以發(fā)酵豆粕替代10%和15%的魚(yú)粉時(shí)，中華絨螯蟹幼蟹的增重率分別提高了12.50%和16.54%（P＜0.05）；當(dāng)以發(fā)酵豆粕替代25%和30%的魚(yú)粉時(shí)，中華絨螯蟹幼蟹的增重率分別下降了2.1%和4.88%（P＜0.05）。與對(duì)照組相比，以發(fā)酵豆粕替代15%的魚(yú)粉時(shí)，中華絨螯蟹幼蟹的成活率提高了10.09%（P＜0.05），其余組差異不顯著（P＞0.05）。與對(duì)照組相比，當(dāng)以發(fā)酵豆粕替代10%、15%和20%的魚(yú)粉時(shí)，中華絨螯蟹幼蟹的飼料系數(shù)分別降低10.38%、11.48%和3.28%（P＜0.05）；當(dāng)以發(fā)酵豆粕替代30%的魚(yú)粉時(shí)，中華絨螯蟹幼蟹的飼料系數(shù)提高23.5%（P＜0.05）。與對(duì)照組相比，當(dāng)以發(fā)酵豆粕替代15%的魚(yú)粉時(shí)，中華絨螯蟹幼蟹的攝食率提高了6.58%（P＜0.05）；當(dāng)以發(fā)酵豆粕替代25%和30%的魚(yú)粉時(shí)，中華絨螯蟹幼蟹的攝食率分別下降了5.26%和9.21%（P＜ 0.05）。與對(duì)照組相比，當(dāng)以發(fā)酵豆粕替代15%的魚(yú)粉時(shí)，中華絨螯蟹幼蟹的特定生長(zhǎng)率提高了7.06%（P＜0.05）；當(dāng)以發(fā)酵豆粕替代25%和30%的魚(yú)粉時(shí)，中華絨螯蟹幼蟹的特定生長(zhǎng)率分別下降了9.41%和16.47%（P＜0.05）。上述結(jié)果表明，15%的替代量能降低飼料系數(shù)，達(dá)到節(jié)約飼料、提高平均增重率和成活率的效果。

表2　不同水平發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉對(duì)中華絨螯蟹幼蟹生長(zhǎng)性能的影響

2.2發(fā)酵豆粕替代部分魚(yú)粉對(duì)中華絨螯蟹幼蟹體成分的影響由表3可以看出，全蟹水分含量為64.37%～66.73%，粗蛋白質(zhì)含量為38.27%～39.11%，粗脂肪含量為10.07%～11.24%，粗灰分含量為11.21%～11.87%；肌肉中水分和干樣粗蛋白質(zhì)含量最高，分別為77.74%～79.19%和81.14%～83.79%，粗脂肪為10.99%～11.75%，粗灰分含量為11.11%～11.73%；肝胰腺的水分、干樣粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和粗灰分含量分別為：48.55%～49.37%、8.32%～9.11%、73.22%～74.54%和11.09%～11.32%，各處理組與對(duì)照組相比，中華絨螯蟹蟹體、肌肉和肝胰腺的水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和粗灰分含量，各組間均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表3　不同水平發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉對(duì)中華絨螯蟹幼蟹體成分的影響

2.3發(fā)酵豆粕替代部分魚(yú)粉對(duì)中華絨螯蟹幼蟹消化酶活性的影響由表4可見(jiàn)，與對(duì)照組相比，不同水平的發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉對(duì)中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺和腸道脂肪酶活性的影響不顯著（P＞0.05）。與對(duì)照組相比，當(dāng)以發(fā)酵豆粕替代15%、20%、25%、30%的魚(yú)粉時(shí)，中華絨螯蟹幼蟹的肝胰腺和腸道淀粉酶活性分別提高23.51%、24.11%、24.32%、24.92%（P＜0.05）和24.94%、31.26%、33.56%、34.67%（P＜0.05）。與對(duì)照組相比，當(dāng)以發(fā)酵豆粕替代30%的魚(yú)粉時(shí)，中華絨螯蟹幼蟹的肝胰腺胃蛋白酶降低了9.89%（P＜0.05），其余組差異不顯著（P＞0.05）。與對(duì)照組相比，當(dāng)以發(fā)酵豆粕替代20%、25%和30%的魚(yú)粉時(shí)，中華絨螯蟹幼蟹的腸道胃蛋白酶活性分別降低了18.89%、27.43%、36.74%（P＜0.05）。與對(duì)照組相比，當(dāng)以發(fā)酵豆粕替代20%、25%和30%的魚(yú)粉時(shí)，中華絨螯蟹幼蟹的肝胰腺和腸道胰蛋白酶活性分別降低8.59%、10.00%、11.11%（P＜0.05）和15.78%、24.14%、25.09%（P＜0.05）。

表4　不同水平發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉對(duì)中華絨螯蟹幼蟹消化酶活性的影響

3　討論

3.1發(fā)酵豆粕替代部分魚(yú)粉對(duì)中華絨螯蟹生長(zhǎng)性能和體成分的影響植物蛋白來(lái)源廣泛、價(jià)格低廉，且營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高，是替代魚(yú)粉的理想蛋白源之一。研究表明，在水產(chǎn)動(dòng)物飼料中適量使用植物蛋白替代魚(yú)粉是可行的（王亞軍等，2013）。符廣才（2004）用不同大豆蛋白源替代凡納濱對(duì)蝦飼料中33.33%的魚(yú)粉后發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵豆粕組增重率和特定生長(zhǎng)率高于魚(yú)粉組、大豆?jié)饪s蛋白組和膨化大豆組。李小梅和張家學(xué)（2012）用發(fā)酵豆粕等量替代日糧中28.6%的魚(yú)粉，試驗(yàn)組對(duì)蝦成活率和增重率分別較對(duì)照組提高11.29%和7.92%，餌料系數(shù)則較對(duì)照組降低19.22%。王新霞（2009）研究發(fā)現(xiàn)，飼料中含有5%和10%發(fā)酵豆粕，加州鱸有較好的生長(zhǎng)、生理及表觀消化率表現(xiàn)。本研究結(jié)果顯示，以發(fā)酵豆粕替代15%魚(yú)粉可以顯著提高中華絨螯蟹生長(zhǎng)性能，而高替代量卻對(duì)生長(zhǎng)有一定的抑制作用。這與過(guò)高替代量對(duì)石斑魚(yú)、黃河鯉、金鯧魚(yú)等的生長(zhǎng)有抑制作用的相關(guān)研究結(jié)果一致（殷海成等，2014；趙麗梅等，2011）。分析其原因，主要是由于發(fā)酵豆粕用微生物發(fā)酵降解了豆粕中植酸等大部分的抗?fàn)I養(yǎng)因子，以及大分子蛋白質(zhì)被水解為小肽、多肽和游離氨基酸，使其適口性得到改善，改善了飼料利用率，從而促進(jìn)了中華絨螯蟹生長(zhǎng)性能的提高（Feng等，2007）。但是發(fā)酵豆粕與魚(yú)粉中氨基酸組成上的差異又限制了其使用量。同時(shí)發(fā)酵豆粕中風(fēng)味氨基酸、不飽和脂肪酸等促攝食物質(zhì)的缺乏還會(huì)降低飼料的適口性，最終不利于水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)（符廣才，2004）。

在體成分方面，水產(chǎn)動(dòng)物的體組成不僅代表水產(chǎn)動(dòng)物將飼料營(yíng)養(yǎng)轉(zhuǎn)化為自身營(yíng)養(yǎng)的情況，還能反映水產(chǎn)動(dòng)物產(chǎn)品質(zhì)量上的差異。有研究表明發(fā)酵豆粕適量替代魚(yú)粉對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的體組成沒(méi)有顯著影響。Luo等（2004）在石斑魚(yú)飼料中用發(fā)酵豆粕替代0%～20%的魚(yú)粉后，各試驗(yàn)組的全魚(yú)水分、蛋白質(zhì)、脂肪、灰分含量與其他各組無(wú)顯著差異。程成榮（2004）研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵豆粕替代40%的魚(yú)粉對(duì)雜交羅非魚(yú)全魚(yú)脂肪、灰分含量影響不顯著。以上結(jié)果與本試驗(yàn)結(jié)果相同。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，不同水平發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉對(duì)中華絨螯蟹的水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和粗灰分含量均無(wú)顯著差異。這表明發(fā)酵豆粕替代部分魚(yú)粉不會(huì)對(duì)中華絨螯蟹的產(chǎn)品質(zhì)量產(chǎn)生明顯影響。

3.2發(fā)酵豆粕替代部分魚(yú)粉對(duì)中華絨螯蟹幼蟹消化酶活性的影響已有研究表明發(fā)酵豆粕適量替代魚(yú)粉，可以提高水產(chǎn)動(dòng)物的消化酶活性，但是替代量過(guò)高則顯著降低水產(chǎn)動(dòng)物的消化酶活性。黃峰等（2008）在試驗(yàn)中用發(fā)酵豆粕替代日糧中25%和50%的魚(yú)粉后，替代組魚(yú)腸和肝胰臟的蛋白酶酶活性高于對(duì)照；各試驗(yàn)組魚(yú)胃、腸和肝胰臟的淀粉酶活性均高于對(duì)照組。殷海成等（2014）認(rèn)為用發(fā)酵豆粕替代10%～50%的黃河鯉飼料中魚(yú)粉時(shí)，蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性均能顯著提高。在本試驗(yàn)中，當(dāng)發(fā)酵豆粕替代量為0%～15%時(shí)不但不會(huì)引起脂肪酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶活性的迅速下降，反而會(huì)促進(jìn)淀粉酶活性的提高。分析其原因主要在于豆粕經(jīng)發(fā)酵后一方面部分或全部抗?fàn)I養(yǎng)因子被去除，以及豆粕發(fā)酵過(guò)程中有少量的消化酶產(chǎn)生，同時(shí)發(fā)酵豆粕中益生菌能夠改善魚(yú)類(lèi)消化道功能，促進(jìn)消化酶分泌；另一方面豆粕經(jīng)過(guò)微生物發(fā)酵后其營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)更容易被水產(chǎn)動(dòng)物消化吸收（吳暉等，2008；陳京華，2006）。替代量過(guò)高則顯著降低消化酶活性，可能是由于大豆蛋白中尚含有未除干凈的胰蛋白酶抑制因子、大豆抗原蛋白、大豆凝集素等抗?fàn)I養(yǎng)因子。大豆蛋白酶抑制因子能夠和肝胰腺和腸道蛋白酶結(jié)合，使蛋白酶失活。大豆抗原蛋白和大豆凝集素能夠破壞腸道黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)，降低消化酶活性（程秋根等，2008）。大豆中含有的植酸和胰蛋白酶抑制因子可與蛋白質(zhì)的堿性殘基結(jié)合，抑制胰蛋白酶活性（吳莉芳等，2010）。

4　結(jié)論

本研究結(jié)果表明，以發(fā)酵豆粕替代15%魚(yú)粉時(shí)，能顯著提高中華絨螯蟹幼蟹的生長(zhǎng)性能，同時(shí)未對(duì)中華絨螯蟹幼蟹的體組成和消化酶活性產(chǎn)生明顯影響。

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To determine the effects of fish meal replaced by fermented soybean in diets on growth performance，body composition and digestive enzyme activities of juvenile Chinese mitten crabs（Eriocheir sinensis），a total of 280 juvenile Chinese mitten crab with average body weight of（4.0±1.0）g were randomly assigned to 7 groups with 4 replicates of 10 each. Seven isonitrogenous and isocaloric experimental diets were formulated in which fermented soybean supplemental levels were 0%，5.0%，10.0%，15.0%，20.0%，25.0%and 30.0%（named as groups P0，P5，P10，P15，P20，P25，P30，respectively）. The expriment lasted for 60 days.The results indicated that fermented soybean replacing appropriate amount of fish meal could promote growth performance，when the 15%of fish meal was replaced，weight gaining ratio（WGR），survival ratio（SR），feeding intake（FI）and special growth rate（SGR）was increased significantly by 16.54%，10.09%，11.48%and 7.06%，feed coefficient（FC）was decreased significantly by 6.58%，compared with control group（P＜0.05）.No significant differences were found among all groups in the contents of moisture，crude protein，lipid and ash（P＞0.05）.However，by using the appropriate replacement level，there was no big difference between the experiment groups and the control group in digestive enzyme activities.The results obtained from the present study indicated that fish meat could be replaced by fermented soybean，and the suitable replacement amount was 15%.

juvenile Chinese mitten crab（Eriocheir sinensis）；fermented soybean；growth performance；body composition；digestive enzyme activities

資源開(kāi)發(fā)利用

S963

A

1004-3314（2016）06-0029-05

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20160608