固相萃取-氣質(zhì)聯(lián)用法測定水產(chǎn)品中撲草凈

唐秀，范廣宇，張?jiān)魄啵舷辇?，王海濤，徐文?/p>

（連云港出入境檢驗(yàn)檢疫局，江蘇連云港222042）

固相萃取-氣質(zhì)聯(lián)用法測定水產(chǎn)品中撲草凈

唐秀，范廣宇*，張?jiān)魄?，孟祥龍，王海濤，徐文?/p>

（連云港出入境檢驗(yàn)檢疫局，江蘇連云港222042）

建立檢測水產(chǎn)品中撲草凈殘留量的固相萃取-氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法。樣品用乙腈提取，濃縮后經(jīng)PSA固相萃取柱凈化，由氣質(zhì)聯(lián)用儀選擇離子監(jiān)測模式下測定。該方法條件下?lián)洳輧粼?.5 μg/L～40 μg/L濃度范圍內(nèi)線性良好，對空白樣品分別添加2、10、20μg/kg撲草凈標(biāo)準(zhǔn)溶液，平均回收率在80%～98%，RSD小于10%，檢出限為0.5μg/kg。

固相萃??；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀；水產(chǎn)品；撲草凈

撲草凈屬于一種均三氮苯類除草劑，被廣泛應(yīng)用于大豆、麥類、花生等作物防除雜草，有時(shí)也被應(yīng)用于魚、蝦、貝等養(yǎng)殖水體中的水草及有害藻類的清除［1］。因其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不易降解，能夠長期存在于環(huán)境和生物體中，并且容易隨降水和地表水徑流和滲透作用造成土壤和水體污染，進(jìn)而進(jìn)入食物鏈［2］。我國是水產(chǎn)大國，而由于除草劑的廣泛應(yīng)用造成水產(chǎn)品中撲草凈超標(biāo)影響了我國水產(chǎn)品的對外出口。2012年，日本查出從我國進(jìn)口的貝類中多批次撲草凈超標(biāo)，從而發(fā)布多個(gè)產(chǎn)品命令檢查通報(bào)。日本對撲草凈殘留的應(yīng)對措施已從紫菜產(chǎn)品擴(kuò)展到水產(chǎn)品中的貝類［3］。因而建立一種快速準(zhǔn)確檢測水產(chǎn)品中撲草凈殘留量的方法來減少出口水產(chǎn)品的檢測周期、提高水產(chǎn)品的通關(guān)效率十分必要。

目前，對于環(huán)境中撲草凈殘留量檢測的研究較多［4-6］，對于水產(chǎn)品中撲草凈的殘留檢測也有少量報(bào)道，其中前處理方法有QuEChERS-凝膠滲透色譜法［7］、凝膠滲透色譜-固相萃取法［8］、固相萃取法［9-10］、凝膠滲透色譜法［11］等，采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法［7］、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法［8］、氣相色譜法［9］、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法［10-11］等儀器方法測定。凝膠滲透色譜法在高脂肪含量樣品中應(yīng)用較多，但其儀器昂貴，并且樣品處理耗時(shí)較長、使用溶劑量較大。本研究選用固相萃取-氣質(zhì)聯(lián)用法測定水產(chǎn)品中的撲草凈，通過優(yōu)化前處理方法和儀器的檢測條件，縮短檢測時(shí)間，提高檢測效率。

1材料與方法

1.1儀器與試劑

7890A-5975C氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀：美國Agilent公司；THZ-92A恒溫振蕩器：上海賀德實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠；XW-80A旋渦混合器：上海青浦滬西；R215旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：瑞士布琪公司；TDL-40C臺式離心機(jī)：上海安亭。

色譜純乙腈、丙酮、乙酸乙酯、甲醇：德國merck公司；1 g/6 mL PSA柱、500 mg/6 mL CARBON/PSA、1 g/ 6 mL弗洛里柱、500 mg/6 mL氨基柱、1 g/6 mL中性氧化鋁柱：美國Agilent公司。

撲草凈標(biāo)準(zhǔn)品（純度大于99.0%）：德國Dr.公司，準(zhǔn)確稱取該標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈定容至100 mL，配制成濃度為100 mg/L的儲備液，使用時(shí)用乙腈逐級稀釋。

1.2儀器工作條件

HP-5MS毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度250℃；進(jìn)樣量1 μL；柱流量1 mL/min；不分流進(jìn)樣；輔助通道溫度280℃；升溫程序?yàn)椋撼跏紲囟?0℃保持2 min，20℃/min升至180℃，10℃/min升至260℃；離子源溫度230℃；四極桿溫度150℃；掃描離子為m/z 241、184、226、199。

1.3樣品前處理

水生動(dòng)物樣品取可食部分打碎，稱取5.0 g于錐形瓶中，加入乙腈50 mL混勻，放入振蕩器中振蕩提取0.5 h。加入適量氯化鈉混勻靜置，提取液經(jīng)無水硫酸鈉過濾于平底燒瓶中，用乙腈分3次清洗錐形瓶內(nèi)殘?jiān)^濾于同一燒瓶中，于40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。

用3 mL丙酮+正己烷（1∶4，體積比）混合溶液溶解以上殘?jiān)?，將PSA柱用6 mL正己烷清洗活化，然后將以上溶液加入PSA柱內(nèi)，再用丙酮+正己烷（1∶4，體積比）混合溶液2 mL分二次清洗燒瓶并過柱，收集的洗脫液于40℃水浴中氮吹至干。用1 mL乙腈定容，3 500 r/min下離心5 min，取上清液過0.22 μm濾膜后上機(jī)檢測。

2結(jié)果與討論

2.1儀器方法選擇

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)和參考文獻(xiàn)，考慮撲草凈與雜質(zhì)有效分離，并保證高沸點(diǎn)雜質(zhì)能流出色譜柱，選取了氣相色譜升溫程序，在1.2所述條件下，撲草凈保留時(shí)間為12.99 min，撲草凈總離子流圖見圖1。

根據(jù)撲草凈全掃描質(zhì)譜圖確定撲草凈的定量離子為m/z 241，定性離子為m/z 184、226、199。

2.2提取溶劑選擇

圖1　撲草凈總離子流圖Fig.1Total ion chromatogram of prometryn

農(nóng)藥殘留測定前處理常用的提取劑主要有乙腈、丙酮、乙酸乙酯和甲醇，試驗(yàn)分別對4種提取劑的提取效果進(jìn)行對比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)丙酮和甲醇會(huì)提取出較多的水分，導(dǎo)致提取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮時(shí)無法完全蒸干，從而影響提取效率，而用乙酸乙酯提取不如用乙腈提取的效率高，經(jīng)過對比，試驗(yàn)選用乙腈作為提取溶劑。

2.3固相萃取柱選擇

常用的固相萃取柱有PSA柱、弗洛里柱、氨基柱和中性氧化鋁柱，試驗(yàn)對比了4種固相萃取柱的凈化效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)回收效率均能達(dá)到80%以上，但弗洛里柱和中性氧化鋁的基線較高，容易受到干擾，而氨基柱凈化效果不理想，干擾峰與撲草凈沒有達(dá)到基線分離，故最終選擇了PSA柱。

2.4洗脫溶液選擇

試驗(yàn)以丙酮和正己烷的混合溶液為洗脫液，分別配制丙酮和正己烷的體積比為1∶9、2∶8、3∶7、4∶6和5∶5的混合溶液，數(shù)據(jù)見表1。

表1　洗脫溶劑影響Table 1Effect of elution solvent

表1結(jié)果顯示，丙酮和正己烷的體積比為2∶8時(shí)回收率達(dá)到最大，隨著丙酮體積比例的增加色譜峰的基線不斷升高，添加回收率也隨之下降。最終選用丙酮與正己烷體積比為2∶8的混合溶液為洗脫液。

2.5洗脫體積的選擇

洗脫溶液的用量為剛好能把目標(biāo)物質(zhì)洗脫下來為宜，過多使用反而會(huì)引入其他干擾，在確定洗脫混合溶液比例的基礎(chǔ)上，分別對5個(gè)不同體積洗脫液的洗脫效率進(jìn)行了對比，數(shù)據(jù)見表2。

表2　洗脫體積影響Table 2Effect of elution volume

試驗(yàn)結(jié)果顯示當(dāng)洗脫液體積達(dá)到5 mL時(shí)即可將大部分目標(biāo)物質(zhì)洗脫出來，隨后隨著洗脫體積的增加目標(biāo)物質(zhì)的回收率并沒有增加而且色譜峰的干擾變大，由此確定洗脫體積為5 mL。

2.6方法的分析特性

配制標(biāo)準(zhǔn)系列，在選定的儀器條件下進(jìn)行測定，以濃度為橫坐標(biāo)，響應(yīng)值峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線方程為A=176.2C-83.04，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 8，線性范圍為2.5 μg/L～40 μg/L，根據(jù)3倍信噪比計(jì)算出本試驗(yàn)方法的檢出限為0.5 μg/kg。

稱取空白貽貝肉樣品各5 g，分別添加2、10、20 μg/kg標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)加標(biāo)水平平行測定6次，按照選定的實(shí)驗(yàn)條件和儀器條件得到的添加回收率和測定值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）見表3。

表3　添加回收率和精密度（n=6）Table 3Recoveries and precision of the method（n=6）

2.7實(shí)際樣品分析

試驗(yàn)對文蛤、河蜆、赤貝、蝦、貽貝肉等11種樣品進(jìn)行了測定，其中10個(gè)樣品檢測值低于2 μg/kg，1個(gè)皺紋蛤樣品中的撲草凈檢出量33 μg/kg，超出標(biāo)準(zhǔn)限量10 μg/kg。

3結(jié)論

本研究建立了一種固相萃取-氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法測定水產(chǎn)品中撲草凈殘留量的方法。樣品采用乙腈提取，PSA固相萃取柱凈化，由氣質(zhì)聯(lián)用儀檢測和確證，外標(biāo)法定量。該方法條件下?lián)洳輧粼?.5 μg/L～40 μg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，通過向空白水產(chǎn)品樣品中添加不同濃度水平的撲草凈標(biāo)準(zhǔn)溶液，平均回收率在80%～98%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）為2.7%～8.6%，方法檢出限為0.5 μg/kg。該方法具有操作簡單、定性準(zhǔn)確、靈敏度高的特點(diǎn)，可以應(yīng)用于進(jìn)出口水產(chǎn)品中撲草凈的檢測。

水產(chǎn)品中撲草凈的殘留問題已經(jīng)影響到我國對日本和歐盟出口，應(yīng)該引起水產(chǎn)養(yǎng)殖和出口加工企業(yè)關(guān)注。撲草凈檢出率高有可能是養(yǎng)殖水體污染或者在除去養(yǎng)殖中的雜草過量使用撲草凈，相關(guān)企業(yè)可以分析具體原因妥善應(yīng)對。

［1］張騫月，吳偉.撲草凈在養(yǎng)殖水體中的生態(tài)毒理效應(yīng)及其微生物降解的研究進(jìn)展［J］.生物災(zāi)害科學(xué)，2014，37（1）：64-69

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Determination of Prometryn in Aquatic Products by Solid Phase Extraction-Gas Chromatography Mass Sepectrometry

TANG Xiu，F(xiàn)AN Guang-yu*，ZHANG Yun-qing，MENG Xiang-long，WANG Hai-tao，XU Wen-ke
（Lianyungang Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau，Lianyungang 222042，Jiangsu，China）

A method for the determination of prometryn in aquatic products with solid phase extraction-gas chromatography mass sepectrometry（SPE/GC-MS）was established.The prometryn in samples was extracted with acetonitrile，and the supernatant was purified by primary secondary amine（PSA）solid phase column. Then，the analyte was determined in selected ion monitoring of GC-MS.The calibration curves of prometryn showed good linearity in 2.5 μg/L-40 μg/L.The mean recoveries of the prometryn varied from 80%to 98% when spiked at 2，10，20 μg/kg，and the relative standard deviations were less than 10%.The limit of the quantitative was 0.5 μg/kg.

solidphase extraction（SPE）；gas chromatography-mass spectrometry（GC-MS）；aquatic products；prometryn

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.19.033

2015-11-12

連云港市科技公共服務(wù)平臺資助項(xiàng)目（JC1404）

唐秀（1986—），女（漢），助理工程師，學(xué)士，主要從事進(jìn)出口食品中農(nóng)藥殘留檢測工作。