醋白芍、炙甘草及其配伍載體中藥效組分變化規(guī)律分析

朱廣偉　張貴君　孫　奕　汪　萌　渠　磊　向　麗　魯麗娜　武亞楠　楊顏芳　鄭　婧

(1 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，北京，100700； 2 北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京，100102)

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中藥研究

醋白芍、炙甘草及其配伍載體中藥效組分變化規(guī)律分析

朱廣偉1張貴君2孫奕1汪萌2渠磊2向麗2魯麗娜2武亞楠2楊顏芳2鄭婧2

(1 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，北京，100700； 2 北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京，100102)

目的：研究醋白芍、炙甘草及其配伍載體中醋白芍及炙甘草藥效組分的變化規(guī)律。方法：以醋白芍、炙甘草單味藥及其藥對(duì)為研究對(duì)象，采用水煎煮法制備供試品溶液，采用HPLC法測(cè)定。結(jié)果：醋白芍4種藥效組分(氧化芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酰芍藥苷)含量分別為:醋白芍(1.07±0.12、0.36±0.02、2.00±0.21、0.37±0.03)mg/mL；醋白芍-甘草(1.89±0.11、0.86±0.05、3.25±0.13、0.52±0.03)mg/mL；醋白芍-炙甘草(1.90±0.09、0.87±0.04、3.30±0.24、0.52±0.01)mg/mL。炙甘草五種藥效組分(甘草酸、甘草苷、甘草素、異甘草苷、異甘草素)含量分別為：炙甘草(6.53±0.25、2.17±0.33、0.52±0.21、0.48±0.23、0.09±0.03、9.79±0.65)mg/mL；炙甘草-焦白芍(5.13±0.32、2.11±0.21、0.47±0.12、0.57±0.22、0.12±0.02、8.40±0.75)mg/mL；炙甘草-炒白芍(6.47±0.33、2.67±0.23、0.56±0.23、0.60±0.23、0.12±0.01、10.42±0.78)mg/mL；炙甘草-醋白芍(8.76±0.35、3.10±0.43、0.79±0.32、0.76±0.34、0.15±0.05、13.56±0.99)mg/mL。結(jié)論：配伍影響或改變了藥效組分的物理、化學(xué)性質(zhì)，進(jìn)而改變了藥效組分的溶出，最終改變了藥效組分在復(fù)方湯劑中存在狀態(tài)。中藥治療作用的關(guān)鍵在于藥效組分，包括藥效組分的組成及各藥效組分之間的比例。藥效組分的組成不同，療效也不同；藥效組分的組成相同，但比例不同，療效也不一樣。不同組成的藥效組分或不同比例的藥效組分分別代表不同的中藥，具有不同的臨床療效，其根源在于藥效組分的不同，應(yīng)加以區(qū)分。因此，對(duì)中藥藥效組分的研究與探討是解析中藥配伍機(jī)制的關(guān)鍵。

醋白芍；炙甘草；配伍載體；藥效組分；變化規(guī)律

芍藥甘草湯最早見于漢代張仲景《傷寒論·辨太陽病脈證并治》第29條，“……傷寒脈浮，自汗出，小便數(shù)，心煩，微惡寒，腳孿急，反與桂枝湯，欲攻其表，此誤也。得之便厥、咽中干，煩躁吐逆者，作甘草干姜湯與之，以復(fù)其陽。若厥愈足溫者，更作芍藥甘草湯與之，其腳即伸……?！庇腥岣问娼?、緩急止痛之功效，是歷代傳承常用中藥。

中藥中多種具有藥理作用的化學(xué)成分的含量、比例決定著中藥的療效，這些成分即為中藥的藥效組分。藥效組分之間相互作用、相互影響，從而改變其化學(xué)性質(zhì)和溶解性[1-4]，最終發(fā)揮不同的臨床療效，其根源在于藥效組分的不同。氧化芍藥苷，芍藥內(nèi)酯苷，芍藥苷，苯甲酰芍藥苷，甘草酸，甘草苷，甘草素，異甘草苷，異甘草素為芍藥甘草湯中存在的成分，研究較成熟，且均具有一定的解痙[5-9]、鎮(zhèn)痛[5-9]功效，還有研究表明：甘草酸與芍藥苷配伍，在鎮(zhèn)痛、解痙、解熱、抗炎[10]、抑制胃液分泌和松弛平滑肌方面均有協(xié)同增效作用，甘草酸可與中藥中多種生物堿起化學(xué)反應(yīng)生成不易溶解的沉淀物，既將這些沉淀物在體內(nèi)緩慢分解而逐漸發(fā)揮藥效，又可使藥性發(fā)作較緩，從而降低副作用，同時(shí)，這九種藥效組分均為水溶性成分，符合經(jīng)方水煎特點(diǎn)。

本文在中藥藥效組分理論的指導(dǎo)下[11-15]，研究醋白芍或炙甘草單味藥及其復(fù)方中藥效組分的含量變化，以考查藥效組分的影響因素，旨在揭示配伍與藥效組分的對(duì)應(yīng)性關(guān)系，為臨床合理用藥和建立中藥藥效組分質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1儀器Agilent1260高效液相色譜儀，HP真空脫氣泵，HP四元泵，HP自動(dòng)進(jìn)樣，HP柱溫箱，HP DAD檢測(cè)器；WRX-1S型BP110S電子分析天平；Agilent Extend-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)。

1.2受試藥物氧化芍藥苷(含量≥98%，批號(hào)130317)、芍藥內(nèi)酯苷(含量≥98%，批號(hào)130518)、芍藥苷(含量≥98%，批號(hào)130815)、苯甲酰芍藥苷(含量≥98%，批號(hào)131227)、甘草酸(含量≥98%，批號(hào)121201)、甘草苷(含量≥98%，批號(hào)131029)、甘草素(含量≥98%，批號(hào)121102)、異甘草苷(含量≥98%，批號(hào)130110)、異甘草素(含量≥98%，批號(hào)131020)，均購(gòu)自成都普菲德生物技術(shù)有限公司。醋白芍，炒白芍，焦白芍，甘草，炙甘草，購(gòu)自河北省安國(guó)路路通中藥飲片有限公司，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院中藥鑒定系張貴君教授鑒定分別為毛莨科植物芍藥PaeonialactifloraPall.的干燥根、豆科甘草屬植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.的干燥根和根莖及其醋炙品、蜜炙品，生炒品和炒焦品。供試品配伍見表1。

圖1　(A)白芍水煎液、(B)甘草水煎液、(C)芍藥甘草湯水煎液、(D)混合對(duì)照品溶液的HPLC圖譜

注：1-氧化芍藥苷2-芍藥內(nèi)酯苷3-芍藥苷4-甘草苷5-異甘草苷6-甘草素7-苯甲酰芍藥苷8-異甘草素9-甘草酸

表1　供試品配伍

表2　醋白芍、炙甘草及其配伍載體中9個(gè)藥效組分的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程、相關(guān)系數(shù)和線性范圍

表3　醋白芍及其配伍載體中4種藥效組分含量(mg/mL，n=3)

注:與醋白芍組相比，P<0.05。

表4　醋白芍及其配伍載體中4種藥效組分的比例(n=3)

2　方法

2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取9種對(duì)照品適量，分別加甲醇配制成含甘草苷1.02 mg/mL，異甘草苷1.03 mg/mL，甘草素1.12 mg/mL，異甘草素1.03 mg/mL，甘草酸1.10 mg/mL，芍藥苷1.06 mg/mL，氧化芍藥苷1.05 mg/mL，苯甲酰芍藥苷1.18 mg/mL，芍藥內(nèi)酯苷1.17 mg/mL的單一對(duì)照品溶液。依次精密量取以上8種對(duì)照品溶液(甘草酸除外)2.5 mL、1 mL、1 mL、0.1 mL、4.5 mL、1 mL、1 mL、1.5 mL置同一25 mL容量瓶中，再加入11.01 mg的甘草酸對(duì)照品，加甲醇稀釋至刻度，配制成含甘草苷102 μg/mL，異甘草苷41.2 μg/mL，甘草素44.8 μg/ml，異甘草素4.12 μg/mL，甘草酸440 μg/mL，芍藥苷190.8 μg/mL，氧化芍藥苷42 μg/mL，苯甲酰芍藥苷47.2 μg/mL，芍藥內(nèi)酯苷70.2 μg/mL的混合對(duì)照品溶液，冰箱保存，備用。

2.2供試品溶液的制備按照表1配伍，稱取各種配置比例的藥材，加10倍量的水，先浸泡30 min，再煮沸30 min，過濾分離出煎煮液，最后再加10倍量水煎煮30 min。合并煎煮液，濃縮成濃度為0.1 g/ml的原藥材溶液，取該濃縮液1 mL至10 mL的容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，靜置20 min，分出上清液，即得濃度為0.01 g/ml的原藥材溶液，為供試品，進(jìn)樣前用0.45 μm濾膜過濾。

2.3色譜條件色譜柱為Agilent Extend-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相為乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)，梯度洗脫，0～5 min，5%～10%A，5～12 min，10%～14%A，12～15 min，1.4%～16%A，15～20 min，16%～18%A，20～25 min，18%～20%A，25～30 min，20%～22%A，30～40 min，22%～25%A，40～50 min，25%～40%A，50～60 min，40%～55%A，60～65 min，55%～5%A，體積流量1.0 mL/min，進(jìn)樣量10 μL，柱溫30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm(氧化芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、甘草酸)，276 nm(甘草苷、甘草素)，360 nm(異甘草苷、異甘草素)。色譜如見圖1。

2.4線性關(guān)系考察精密吸取1.2.1中混合對(duì)照品溶液2 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL，分別進(jìn)樣。按2.3色譜條件測(cè)定各成分的峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)，對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，結(jié)果見表2。

2.5精密度試驗(yàn)取醋白芍:炙甘草(12∶12)配伍藥材，制備供試品溶液，按照2.3色譜條件進(jìn)樣，連續(xù)6次，測(cè)定并計(jì)算氧化芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、甘草酸、甘草苷、甘草素、異甘草苷、異甘草素9個(gè)藥效組分峰面積的RSD值。RSD分別為1.65%、1.75%、0.58%、1.91%、1.64%、1.20%、1.02%、1.40%、1.28%，表明儀器精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取醋白芍:炙甘草(12∶12)配伍藥材，制備供試品溶液，按照2.3色譜條件進(jìn)樣，分別于配制后0、4、8、10、12、24 h進(jìn)樣，測(cè)定并計(jì)算氧化芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、甘草酸、甘草苷、甘草素、異甘草苷、異甘草素9個(gè)藥效組分峰面積的RSD值。RSD分別為1.96%、1.19%、1.32%、1.91%、1.53%、1.17%、1.43%、1.43%、1.29%，表明24 h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定性良好。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)取醋白芍:炙甘草(12∶12)配伍藥材，平行制備6批次供試品溶液，按照2.3色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定并計(jì)算氧化芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、甘草酸、甘草苷、甘草素、異甘草苷、異甘草素9個(gè)藥效組分峰面積的RSD值。RSD分別為1.00%、1.83%、1.84%、2.00%、1.75%、1.56%、0.92%、1.34%、0.96%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.8加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密吸取已知含量的醋白芍：炙甘草(12∶12)水煎液1 mL，平行6份，分別精密加入等量對(duì)照品溶液，制備成供試品溶液，按照2.3色譜條件進(jìn)樣，平均回收率為99%，99%，99%，100%，100%，101%，99%，100%，101%。RSD分別為1.28%，1.32%，2.12%，2.4%，1.18%，2.33%，0.89%，0.53%，2.53%。

3　結(jié)果

醋白芍、炙甘草及其配伍載體中藥效組分含量測(cè)定結(jié)果分別制備3批次供試品，每批供試品連續(xù)進(jìn)樣3次，進(jìn)樣量10 μL，測(cè)定峰面積，根據(jù)外標(biāo)法計(jì)算各組分含量，結(jié)果見表3，表4。

表5　炙甘草及其配伍載體中5種藥效組分含量(mg/mL，n=3)

表6　炙甘草及其配伍載體中5種藥效組分的比例(n=3)

4　結(jié)論

表3可以看出，醋白芍的4種藥效組分在醋白芍單味藥及其藥對(duì)中的含量變化規(guī)律：醋白芍-炙甘草(1.90±0.09、0.87±0.04、3.30±0.24、0.52±0.01)mg/mL>醋白芍-甘草(1.89±0.11、0.86±0.05、3.25±0.13、0.52±0.03)mg/mL>醋白芍(1.07±0.12、0.36±0.02、2.00±0.21、0.37±0.03)mg/mL，芍藥甘草湯藥效組分總量變化規(guī)律為：醋白芍-炙甘草(6.59±0.42)mg/mL>醋白芍-甘草(6.52±0.32)mg/mL>醋白芍(3.80±0.24)mg/mL。

由表3數(shù)據(jù)分析可以看出，醋白芍與甘草配伍后，藥效組分溶出率顯著提高，均高于白芍單味藥材的溶出率，且藥效組分總量也最高。而甘草經(jīng)過炮制后，增容作用顯著提高，炙甘草對(duì)醋白芍藥效組分的增溶作用顯著高于甘草對(duì)醋白芍藥效組分的溶出。

由表4可以看出，醋白芍與炙甘草配伍后，湯劑中的藥效組分之間的比例也發(fā)生變化，藥效組分之間的比例關(guān)系影響著復(fù)方湯劑藥效組分的構(gòu)成，對(duì)復(fù)方的療效有重要影響。

表5可以看出，芍藥甘草湯中5種藥效組分在炙甘草單味藥及其藥對(duì)中的含量變化規(guī)律為：炙甘草-醋白芍(8.76±0.35、3.10±0.43、0.79±0.32、0.76±0.34、0.15±0.05、13.56±0.99)mg/mL>炙甘草-炒白芍(6.47±0.33、2.67±0.23、0.56±0.23、0.60±0.23、0.12±0.01、10.42±0.78)mg/mL>炙甘草(6.53±0.25、2.17±0.33、0.52±0.21、0.48±0.23、0.09±0.03、9.79±0.65)mg/mL>炙甘草-焦白芍(5.13±0.32、2.11±0.21、0.47±0.12、0.57±0.22、0.12±0.02、8.40±0.75)mg/mL，藥效組分的總量變化規(guī)律為：炙甘草-醋白芍(13.56±0.99)mg/mL>炙甘草-炒白芍(10.42±0.78)mg/mL>炙甘草(9.79±0.65)mg/mL>炙甘草-焦白芍(8.40±0.75)mg/mL。

由表5數(shù)據(jù)分析可以看出，炙甘草與白芍及其炮制品配伍后，炙甘草的藥效組分溶出率顯著增高，提示:配伍對(duì)炙甘草的藥效組分具有增容效果。且醋白芍對(duì)炙甘草藥效組分的增溶作用強(qiáng)于炒白芍，炒白芍對(duì)炙甘草藥效組分的增容作用強(qiáng)于焦白芍。配伍后，炙甘草的藥效組分溶出率呈規(guī)律性上升，藥效組分的總量變化規(guī)律與之一致。

表3、表5可以看出，醋白芍、炙甘草的藥效組分與復(fù)方藥效組分總量變化規(guī)律趨勢(shì)一致。表4、表6可以看出，4種藥效組分之間的比例也發(fā)生改變，因此，配伍改變了藥效組分在復(fù)方中的存在狀態(tài)。配伍后，醋白芍藥效組分或炙甘草藥效組分的含量明顯增加(P<0.05)，原因可能為：甘草中的甘草酸等藥效組分與醋白芍中的芍藥苷等藥效組分相互作用，增加了藥效組分的溶解性，甘草經(jīng)過炮制后化學(xué)成分發(fā)生變化，增溶效果更明顯。

以上研究可以得出結(jié)論：配伍使中藥中多種藥效組分之間發(fā)生物理、化學(xué)作用，影響或改變了藥效組分的物理、化學(xué)性質(zhì)，進(jìn)而改變了藥效組分的溶出，最終改變了藥效組分在復(fù)方湯劑中存在狀態(tài)，從而形成了具有不同療效的復(fù)方。中藥治療作用的關(guān)鍵在于藥效組分，包括藥效組分的組成及各藥效組分之間的比例。藥效組分的組成不同，療效也不同；藥效組分的組成相同，但比例不同，療效也不一樣。不同組成的藥效組分或不同比例的藥效組分分別代表不同的中藥，具有不同的臨床療效，其根源在于藥效組分的不同，藥效組分是中藥治療的根本，應(yīng)加以區(qū)分，臨床用藥應(yīng)遵循中醫(yī)傳統(tǒng)理論，根據(jù)病情轉(zhuǎn)變調(diào)整用藥比例。因此，對(duì)中藥藥效組分的研究與探討是解析中藥配伍機(jī)制的關(guān)鍵。

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(2014-10-06收稿責(zé)任編輯：張文婷)

Analysis of Different Active Components in Radix Paeoniae Alba (Stir-baked with Vinegar),Glyycrrhizae Radix Et Rhzoma (Stir-baked with Honey) and their Drug Pairs

Zhu Guangwei1, Zhang Guijun2, Sun Yi1, Wang Meng2, Qu Lei2, Xiang Li2, Wu Yanan2, Yang Yanfan2, Zheng Jing2

(1 Institute of Chinese Materia Medica China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700, China; 2 SchoolofTraditionalChineseMateria,BeijingUniversityofTraditionalChineseMedicine,Beijing100102,China)

Objective:To explore different active chemical components in Radix paeoniae alba (stir-baked with vinegar), Glyycrrhizae radix (stir-baked with honey) and their drug pairs. Methods:Water boiled Radix paeoniae alba, Glyycrrhizae radix respectively and use HCPL method to test their solution. Results:The four active constitutes (Oxypaeoniflorin, Albiflorin, Paeoniflorin, Benzoylpaeoniflorin) were [1.07+0.12, 0.36+0.02, 2.00+0.21, 0.37+0.03] in Radix paeoniae alba(vinegar baked); [1.89+0.11, 0.86+0.05, 3.25+0.13, 0.52+0.03] in Radix Paeoniae alba(vinegar baked)-Glyycrrhizae radix and [1.90+0.09,0.87+0.04,3.30+0.24,0.52+0.01] in Radix paeniae alba-Glyycrrhizae radix(honey-fried); The five active constituents(Glycyrrhizic acid, Liquiritin, Liquiritigenin, Isoliquiritin, Isoliquiritigenin) were[6.53+0.25,2.17+0.33,0.52+0.21,0.48+0.23,0.09+0.03,9.79+0.65] in Glyycrrhizae radix; [5.13+0.32,2.11+0.21,0.47+0.12,0.57+0.22,0.12+0.02,8.40+0.75] in honey-fried Glyycrrhizae radix-focal Radix paeoniae alba; [6.47+0.33,2.67+0.23,0.56+0.23,0.60+0.23, 0.12+0.01, 10.42+0.78] in honey-fried Glyycrrhizae radix-parched Radix paeoniae alba and [8.76+0.35,3.10+0.43,0.79+0.32,0.76+0.34,0.15+0.05,13.56+0.99] in honey-fried Glyycrrhizae radix-vigar baked Radix paeoniae alba. Conclusion:Different combination of herbs changed the physical and chemical nature of the single herb, and thus changed its active components. The crucial point in Chinese medicine decoction lies in different components and their proportion of active components. These could affect the curative effect of decoction. It is of great significance to discriminate different active constitutes in drug pairs as it has distinct clinical effect.

Radix paeoniae alba (stir-baked with vinegar); Glyycrrhizae radix (stir-baked with honey); Carrier of herb combination;Active component; Change regularity

中央級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金資助項(xiàng)目(編號(hào)：ZXKT15037)

朱廣偉(1982—)，男，博士研究生，助理研究員，研究方向：中藥藥效組分評(píng)價(jià)體系研究、中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究，E-mail：gwzhu@icmm.ac.cn

張貴君(1954—)，男，博士研究生，教授，博士研究生導(dǎo)師，研究方向：中藥鑒定方法學(xué)、中藥藥效組分、中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化研究，E-mail：guijunzhang@163.com；孫奕，女，博士研究生，副研究員，研究方向：藥用植物內(nèi)生菌的生物活性代謝產(chǎn)物，海洋微生物天然產(chǎn)物，中藥化學(xué)等，E-mail：ysun@icmm.ac.cn

R285.5

A doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2016.01.038