大腸癌患者血清中硫氧還蛋白樣蛋白—2表達(dá)水平及臨床意義

陳細(xì)女

【摘要】目的：探討大腸癌患者血清中硫氧還蛋白樣蛋白-2（Txl-2）的表達(dá)及臨床意義。方法：采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)82例大腸癌患者和25例健康對(duì)照者外周靜脈血清中Txl-2含量。結(jié)果：大腸癌患者血清中Txl-2含量明顯高于健康對(duì)照者（P<0.05）；血清中Txl-2表達(dá)與大腸癌腫瘤分化程度、Dukes分期、淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移、3年內(nèi)復(fù)發(fā)情況密切相關(guān)，而與患者性別、年齡及腫瘤大小無(wú)明顯聯(lián)系（P>0.05）。結(jié)論：Txl-2表達(dá)與大腸癌生物學(xué)行為存在聯(lián)系，與大腸癌病情變化及預(yù)后密切相關(guān)（P<0.05），檢測(cè)血清中Txl-2的表達(dá)水平對(duì)于大腸癌的診斷、惡性程度及預(yù)后判斷具有良好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】 大腸癌；血清Txl-2；酶聯(lián)免疫吸附法

【中圖分類號(hào)】R446.11 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2016）16-0093-03

Abstract：Objective To investigate the serum of patients with colorectal thioredoxin-like protein -2 （Txl-2） expression and clinical significance. Methods Using enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） to detect 82 cases of colorectal cancer patients and 25 healthy controls peripheral vein serum Txl-2 content. Results The serum of patients with colorectal Txl-2 were significantly higher than healthy controls （P<0.05）； Txl-2 expression in serum and tumor differentiation degree of colorectal cancer， Dukes stage， lymph node and distant metastasis， recurrence within 3 years They are closely related（P<0.05）， but not with sex， age and tumor size had no significant contact （P>0.05）. Conclusion Txl-2 expression and the biological behavior of colorectal cancer there is a link， is closely related to changes in condition and prognosis of colorectal cancer， the expression levels of serum Txl-2 for diagnosis， degree of malignancy and prognosis of colorectal cancer have a good clinical application value.

Keywords：Colorectal Cancer； Serum Txl-2； ELISA

結(jié)腸癌為全球高發(fā)的惡性腫瘤，發(fā)病危險(xiǎn)因素主要包括肥胖、吸煙、運(yùn)動(dòng)量少和膳食中缺乏蔬果等，西方發(fā)達(dá)國(guó)家如歐洲和北美是大腸癌高發(fā)地區(qū)，大腸癌在歐美國(guó)家位居致死惡性腫瘤第二位[1-2]。在我國(guó)，大腸癌發(fā)病率也呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì)，篩選和鑒定大腸癌敏感標(biāo)志物，對(duì)于早期診斷和準(zhǔn)確判斷預(yù)后具有重要意義[3]。硫氧還蛋白樣蛋白2（Thioredoxin-like protein 2， Txl-2）是同時(shí)屬于硫氧還蛋白家族和核苷二磷酸激酶家族成員的蛋白[4]，有研究報(bào)道Txl-2在大腸癌組織中存在高表達(dá)，且促進(jìn)大腸癌的惡性進(jìn)展，調(diào)控結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、侵襲和凋亡抵抗等多種惡性生物學(xué)行為[5]，但Txl-2在大腸癌患者血清中的表達(dá)情況及其與臨床特征間的關(guān)系尚未見明確報(bào)道。本研究則通過(guò)檢測(cè)大腸癌患者外周血中Txl-2的表達(dá)水平，分析其表達(dá)與大腸癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系，探討其在大腸癌診斷及預(yù)后中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年11月至2014年2月82例經(jīng)病理學(xué)檢查確診為大腸癌的患者進(jìn)入本研究，其中男性49例，女性33例；>60歲45例，≤60歲37例；腫瘤直徑>4cm 38例，≤4cm 44例；高分化8例，中分化53例，低分化21例；Dukes分期：A+B期40例，C+D期42例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者45例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者37例；有遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移者33例，未見遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移者49例；術(shù)后復(fù)查患者29例，其中3年內(nèi)復(fù)發(fā)者16例，未復(fù)發(fā)者13例。選擇25例健康體檢者作為對(duì)照組。所有患者術(shù)前均未接受化療和放療，患者及健康對(duì)照組均簽署知情同意書?；颊咭话阗Y料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 檢測(cè)方法 采集試驗(yàn)對(duì)象外周靜脈血3mL，自然凝固后，3000rpm 離心5min，收集上層血清置-20℃儲(chǔ)存?zhèn)溆?。Txl-2 ELISA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海聯(lián)世生物科技有限公司，具體檢測(cè)方法按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（x[TX-*3]±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 健康對(duì)照組與大腸癌患者組血清中Txl-2的表達(dá)差異 采用ELISA方法對(duì)健康對(duì)照者和大腸癌患者血清中Txl-2含量進(jìn)行檢測(cè)，Txl-2在大腸癌患者組血清中表達(dá)為（150.17±26.83）pg/mL，明顯高于健康對(duì)照者血清中含量（68.34±9.65）pg/mL，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.2 Txl-2表達(dá)與大腸癌臨床病理特征的關(guān)系 Txl-2在大腸癌患者血清中的表達(dá)水平與患者性別、年齡及腫瘤大小均無(wú)明顯相關(guān)（P>0.05）；低分化大腸癌患者和Dukes C+D期患者血清中Txl-2的表達(dá)分別為（182.41 ± 11.65）pg/mL和（167.56±20.50）pg/mL，顯著高于中、高分化組（139.08±20.92）pg/mL及Dukes A+B組（133.62 ± 21.13）pg/mL，Txl-2在有淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移組大腸癌患者血清中的表達(dá)均高于無(wú)淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移者（P<0.05）；另外，術(shù)后復(fù)查患者中，3年內(nèi)有復(fù)發(fā)者血清中Txl-2的表達(dá)水平高于無(wú)復(fù)發(fā)者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

Txl-2在2003年被首次報(bào)道[4]，全長(zhǎng)編碼330個(gè)氨基酸，N端有一個(gè)硫氧還蛋白（Thioredoxin，Trx）結(jié)構(gòu)域，為硫氧還蛋白家族的新成員，Trx系統(tǒng)與谷胱甘肽系統(tǒng)一起，將生物體內(nèi)眾多蛋白質(zhì)半胱氨酸殘基保持在還原狀態(tài)，是細(xì)胞內(nèi)重要的氧化還原調(diào)節(jié)系統(tǒng)[6]，同時(shí)，Trx家族參與多種腫瘤惡性生物學(xué)行為，Moon等的研究表明，Trx-1可促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)，在結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29中抑制Trx-1的表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯，從而抑制細(xì)胞增殖[7]，Ramanathan 等的研究結(jié)果顯示，PX-12作為Trx-1的抑制劑，已進(jìn)入臨床Ⅱ期研究，與化療聯(lián)合用于治療實(shí)體瘤患者，具有良好的應(yīng)用前景[8]；Trx家族成員還可以參與黏附分子和整合素相關(guān)的信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中有重要作用[9]。Txl-2的C末端有一個(gè)核苷二磷酸激酶（Nucleoside diphosphate kinase，NDPK）結(jié)構(gòu)域，為nm23家族的新成員。目前nm23家族在細(xì)胞發(fā)育中的作用尚未完全清楚，但是其在腫瘤中的作用卻被廣泛關(guān)注，nm23-H1可促進(jìn)神經(jīng)母細(xì)胞瘤、胰腺癌等的轉(zhuǎn)移，并且與腫瘤的分期密切相關(guān)[10-12]，nm23-H2則是潛在的肝細(xì)胞癌致癌因子[13]。另外，Qu等的研究報(bào)道表明，Txl-2可通過(guò)氧化還原平衡及NF-kB信號(hào)通路調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移[14]，構(gòu)建Txl-2 siRNA載體，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染入SW620細(xì)胞，獲得Txl-2表達(dá)抑制的細(xì)胞株；對(duì)其功能學(xué)進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，下調(diào)Txl-2的表達(dá)能夠顯著抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的無(wú)限增殖、凋亡抵抗和侵襲轉(zhuǎn)移等惡性表型 [15] 。

本研究結(jié)果顯示，大腸癌患者血清中Txl-2表達(dá)為（150.17±26.83）pg/mL，其表達(dá)水平明顯高于健康對(duì)照者血清中含量（68.34±9.65）pg/mL（P<0.05），而且，Txl-2在低分化組患者血清中的表達(dá)顯著高于中、高分化組（P<0.05），說(shuō)明Txl-2與大腸癌的惡性程度呈現(xiàn)正相關(guān)；Dukes A+B期和Dukes C+D期患者血清中Txl-2表達(dá)分別為（133.62±21.13）pg/mL和（167.56±20.50）pg/mL，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明隨著大腸癌臨床分期的進(jìn)展，Txl-2表達(dá)逐漸升高，Txl-2可能參與了大腸癌的發(fā)展。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移患者血清中Txl-2分別為（166.57±19.68）pg/mL和（173.56±16.65）pg/mL，均高于無(wú)淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移患者（130.23±20.03）pg/mL和（134.42±20.00）pg/mL，（P<0.05）。而這些結(jié)果提示，Txl-2參與了結(jié)腸癌的發(fā)展，可能在腫瘤生長(zhǎng)、侵襲轉(zhuǎn)移方面發(fā)揮重要作用。對(duì)術(shù)后復(fù)查患者血清中Txl-2進(jìn)行檢測(cè)，復(fù)查患者血清中Txl-2水平與術(shù)前相比有所下降，且3年內(nèi)無(wú)復(fù)發(fā)者血清中Txl-2表達(dá)較有復(fù)發(fā)者也存在降低趨勢(shì)（P<0.05），同時(shí)，對(duì)大腸癌患者血清中Txl-2的表達(dá)與臨床病理特征的分析比較與組織中的檢測(cè)結(jié)果相一致[4]。

本研究結(jié)果表明，Txl-2在大腸癌患者血清中呈現(xiàn)高表達(dá)，其表達(dá)水平與患者體內(nèi)腫瘤負(fù)荷程度密切相關(guān)，在治療過(guò)程中，測(cè)定Txl-2水平有助于對(duì)大腸癌患者進(jìn)行療效評(píng)定、腫瘤復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)和預(yù)后判斷，同時(shí)也為大腸癌的靶向治療提供新的思路和理論依據(jù)。

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（編輯：程鵬飛）