靈芝種質(zhì)資源研究進展

才曉玲 何偉 安福全

摘要 靈芝是食藥用真菌之一，查閱近20年國內(nèi)外相關(guān)文獻，概述了靈芝菌的本草考證、分類系統(tǒng)、資源分布、分子水平種質(zhì)資源研究等方面的研究進展，旨在為加快靈芝的進一步開發(fā)利用提供一定的參考。

關(guān)鍵詞 靈芝；種質(zhì)資源；研究進展

中圖分類號 S567.3+1 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2016）06-0099-02

Research Progress on Ganoderma lucidum Germplasm Resources

CAI Xiao-ling 1 HE Wei 2 AN Fu-quan 1

（1 Mathematical Department，Dianxi Normal University of Science and Technology，Lincang Yunnan 677000； 2 No.3 Middle School of Lincang）

Abstract Ganoderma lucidum is one of a fungi family which can be used as food and medicinal materials in the world .Through the review of research papers about ganoderma lucidum germplasm resources in the past twenty years，the current research of this resources including herb textual research，status and system of classification，investigation and distribution，germplasm research in molecular level had been discussed in this paper，in order to provide basis for further development and utilization.

Key words Ganoderma lucidum；germplasm；advances

靈芝（Ganoderma lucidum），俗稱赤芝、紅芝、木靈芝、萬年茸、神芝、瑞草，是我國著名的藥食兼用真菌[1]。據(jù)《本草綱目》[2]中記載靈芝具有扶正固本、滋補強壯、祛病延年的功效，可治療多種疾病?，F(xiàn)代藥理研究表明，靈芝對癌癥、腦溢血、心臟病、白血病、神經(jīng)衰弱、慢性支氣管炎、哮喘、過敏等疾病療效顯著[3]，因此越來越受到醫(yī)藥界的廣泛關(guān)注。

1 本草考證

靈芝（Ganoderma luncidum）一直被民間視為仙草，據(jù)記載[4]早在公元前400年，列子在《湯問篇》中有“朽壤之上，有菌芝者，生于朝，死于晦?！痹谖覈钤绲尼t(yī)學古籍《黃帝內(nèi)經(jīng)》中記載：“靈芝入五經(jīng)，補益五臟之氣，調(diào)六臟之陰陽，正氣存內(nèi)，邪不可干”[5]；《神農(nóng)本草經(jīng)》[6]認為靈芝是藥材中的上品，并稱靈芝“苦平、無毒、入五臟、益心氣、解胸中結(jié)、增智慧、不老延年”，據(jù)《本草綱目》[2]記載稱靈芝“明目、補肝氣”“祛心腹五邪、益脾氣”“主治咳逆上氣，益肺氣、通利口鼻”“癃利水道、益腎氣”。

2 分類地位與分類系統(tǒng)

靈芝屬是由芬蘭植物學家P. Karsten于1881年建立的，并以靈芝G. lucidum（W. Cur. Fr.）Karst.作為本屬的代表種[1，7]。鄧叔群曾在《中國的真菌》中記載了靈芝屬和假芝屬29種、1個變種、1個變型；戴芳瀾在《中國真菌總匯》中記載了靈芝屬27種、假芝屬11種。趙繼鼎在《中國靈芝新編》中描述了中國靈芝屬有62種，提出中國靈芝科分為靈芝屬、假芝屬、雞冠孢芝屬（Haddowia）和網(wǎng)孢芝屬（Humphreya）（后兩屬由R.L.Steyaert于1972年提出的2個新屬）4個屬，靈芝屬又分為3個亞屬——靈芝亞屬、樹舌靈芝亞屬和粗皮靈芝亞屬；《中國真菌志》（靈芝科）中記錄了靈芝科中的98種；戴玉成主編的《中國靈芝圖鑒》記錄了中國靈芝有103種，其中靈芝屬69種，假芝屬（Amauroderma）29種，雞冠孢芝屬（Haddowia）1種，網(wǎng)孢芝屬（Humphreya）1種。

3 資源調(diào)查與資源分布

全世界已發(fā)現(xiàn)的靈芝有250多種，從歐洲的溫帶到非洲的熱帶均有分布，主要集中在歐洲的北部、南部、非洲中部、南美及亞洲東部。在我國靈芝主要分布29個省市，海南島靈芝科78種，其中1個新種、3個新記錄等；貴州靈芝科共有47個種類，其中8個新種；四川靈芝屬26個已知種、2個新種；安徽靈芝屬13個種（含10個新記錄、1個新種）；吉林省靈芝科2屬8種；云南橡膠樹上與紅根病有關(guān)的6種靈芝；許瑞祥報道臺灣產(chǎn)一新種；范黎等報道假芝屬中一個新種——香港假芝。

4 分子水平的種質(zhì)研究

分子生物技術(shù)的發(fā)展為靈芝分子水平的研究開辟了新途徑。RAPD分析被廣泛應用于種間親緣關(guān)系的研究和分類鑒定[8-10]，趙明文等[11]采用RAPD技術(shù)對8個菌株分析結(jié)果證實了RAPD技術(shù)可有效區(qū)分供試菌株。唐傳紅等[12]通過遺傳多樣性分析，證明RAPD和酯酶同工酶技術(shù)在靈芝種間或種內(nèi)鑒定是有效的。隨著靈芝屬的分類學研究已逐步發(fā)展到核酸水平，Moncalvo等[13]研究表明ITS單獨使用或與25S rDNA D2變異區(qū)序列聯(lián)合使用都有助于區(qū)分靈芝屬的種，并鑒定了4個系統(tǒng)發(fā)育學上的相關(guān)族，該研究還發(fā)現(xiàn)，來自臺灣和日本的松杉靈芝同中國的松杉靈芝是近緣種，但與來自北美的松杉靈芝不是近緣種；來自北美和亞洲的靈芝與來自歐洲的靈芝不是近緣種[14-15]；蘇春麗等[16]對8組供試菌株的ITS序列進行系統(tǒng)發(fā)育分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)聚成一組菌株的ITS序列同源性高達98.5%～100.0%，研究人員[17]利用ITS序列技術(shù)對29個靈芝菌株的核苷酸序列進行分析，并運用PAUP軟件分析，發(fā)現(xiàn)29個菌株可以區(qū)分為6個組，組內(nèi)菌株的ITS區(qū)域核苷酸序列的差異性在0～2%，同組菌株可視為同種。劉月廉等[18]對野生菌株“HR-G3”（廣東河源）和栽培菌株“育山一號”利用18S rDNA的基因間區(qū)ITS的序列進行擴增，經(jīng)測序并進行Blast比對，確定2個菌株均為紫芝（G.sinense）。黃龍花等[19]對20個菌株的ITS序列進行PCR擴增，對其產(chǎn)物測序并進行Blast比對，進一步證實了該分類方法的有效性，也有研究人員[20]認為RAPD和ITS分子標記各自存在一些缺點，建議在研究中可以將兩種技術(shù)結(jié)合起來更有利于分類鑒定。

同工酶也可用于菌株鑒別，同種菌株間存在相似的酶帶和相近的Rf值，說明親緣關(guān)系較近，反之，則親緣關(guān)系較遠[21]。方白玉[22]采用垂直聚丙烯酰胺凝膠電泳分別對粵北5株野生靈芝與9株栽培靈芝進行酯酶和過氧化物酶同工酶進行比較與分析，發(fā)現(xiàn)酯酶和過氧化物酶同工酶酶譜在酶帶數(shù)量和酶活性方面都表現(xiàn)出一定的差異，表明同工酶技術(shù)在靈芝分類、鑒定和遺傳標記等方面具有一定參考價值。但也有研究人員認為這些方法具有局限性，研究者把過氧化物酶同工酶標記染色后，發(fā)現(xiàn)在PAGE膠上幾乎沒有出現(xiàn)條帶，說明過氧化物酶同工酶在靈芝屬菌株的分類鑒定中是無效標記。因此，只利用一種方法則不太可能得到完全準確可靠的結(jié)論，而有關(guān)這方面的研究還需不斷探索。

5 存在的問題及展望

靈芝具有重要醫(yī)藥學價值，研究人員發(fā)現(xiàn)靈芝會出現(xiàn)同名異物或異物同名的混亂現(xiàn)象，筆者認為靈芝形態(tài)學特征只能作初步鑒定，而分子水平種質(zhì)資源遺傳特征鑒定更具科學性。唐傳紅等[12]認為應該建立一個全國性的靈芝數(shù)據(jù)庫系統(tǒng)，其中包括每個獲得的靈芝菌株的形態(tài)、生理生化、生物活性物質(zhì)、生物活性和分子生物學指紋圖譜，從而為靈芝屬的分類鑒定、生物活性研究和靈芝種質(zhì)資源的開發(fā)提供理論依據(jù)。

6 參考文獻

[1] 鄧叔群.中國的真菌[M].北京：科學出版社，1964：445-454.

[2] 李時珍.本草綱目[M].北京：人民出版社，1975.

[3] 中華人民共和國國家藥典委員會.中國藥典一部[S].北京：化學工業(yè)出版社，2005：130.

[4] 楊新美.中國食用菌栽培學[M].北京：農(nóng)業(yè)出版社，1988.

[5] 正坤.黃帝內(nèi)經(jīng)[M].北京：中國文藝出版社，2003.

[6] 吳普.神農(nóng)本草經(jīng)[M].北京：商務印書館，1955.

[7] 林志彬.靈芝的現(xiàn)代研究[M].2版.北京：北京醫(yī)科大學出版社，2001.

[8] 李海波，昊學謙，應國華，等.緣蓋牛肝菌純培養(yǎng)菌種的RAPD和ITS分子標記鑒定[J].食用曲學報，2007，14（1）：1-5.

[9] 李海波，吳學謙，魏海龍，等.幾種森林大型真菌純培養(yǎng)菌種的RAPD和ITS分子標記鑒定[J].林業(yè)科學，2007，43（12）：94-100.

[10] 曹穎，賀新生.用RAPD與ITS標記鑒定斑褶菇屬與裸蓋傘屬間疑難菌株[J].食用菌，2007（6）：16-17.

[11] 趙明文，陳明杰，王南，等.靈芝生產(chǎn)用種的親緣關(guān)系研究[J].南京農(nóng)業(yè)大學學報，2003，26（3）：60-63.

[12] 唐傳紅，蘇春麗，張勁松，等.靈芝屬分類學研究進展[J].食用菌學報，2007，14（3）：86 -90.

[13] MONCALVO J M，WANG H H，HSEU R S.Phylogenetic relationships in Ganodermainferred from the internal transcribed spacers and 25Sribos-omal DNA sequences[J].Mycologia，1995，87：223-238.

[14] MONCALVO J M，WANG H F，WANG H H.The use of ribosomal DNA sequence data for species identification and phylogeny inGanoderma tsugae[C]//UCHANAN P K，HSEU R S，MONCALVO J M.Ganoderma：systematics，phytopathology and pharmacology.Vancouver：Proceedings of Contributed Symposium 59 A，B，5th International Mycological Congress，1995：31-44.

[15] SMITH B J，SIVASITHAMPARAM K.Internal transcribed spacer ribos-omal DNA sequence of five species of Ganoderma from Australia[J].MycolRes，2000，104（8）：943-951.

[16] 蘇春麗，唐傳紅，張勁松，等.基rDNA ITS序列探討中國栽培靈芝菌株的親緣關(guān)系[J].微生物學報2007，47（1）：11-16.

[17] 靈芝屬菌株鑒定系統(tǒng)之研究[D].臺灣：臺灣大學農(nóng)業(yè)化學研究所，1990.

[18] 劉月廉，吳鈿，陳曉春.來自廣東河源兩個靈芝菌株的比較鑒定[J].廣東農(nóng)業(yè)科學，2011（4）：123-125.

[19] 黃龍花，楊小兵，張智，等.基于ITS 序列分析鑒定靈芝屬菌種[J].中國食用菌，2010，29（1）：55-57.

[20] 黃浩，許國權(quán)，周世力.幾種中國栽培靈芝品種的RAPD及rDNA分子標記鑒定[J].江漢大學學報（自然科學版），2013，41（2）70-74.

[21] 蘭進，徐錦堂，王秋穎，等.靈芝過氧化物同工酶和酯酶同工酶的研究[J].中國藥學雜志，1998，33（12）：714-716.

[22] 方白玉.粵北野生靈芝與栽培靈芝同工酶及可溶性蛋白的研究[J].食用菌，2013（1）：9-11.