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    隱性乳房炎奶牛乳清中部分酶活性變化

    2016-10-20 15:21:04尹柏雙王秋竹付連軍
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年7期
    關(guān)鍵詞:乳清奶牛

    尹柏雙 王秋竹 付連軍

    摘要:選取18頭患不同程度隱性乳房炎奶牛和6頭健康奶牛為試驗(yàn)動(dòng)物,采集乳汁,分離乳清,利用比色法檢測(cè)乳清中LDH、NAG活性,研究奶牛隱性乳房炎發(fā)病與乳清中LDH、NAG活性的關(guān)系。結(jié)果表明,隨著隱性乳房炎病情加重,乳清中LDH、NAG活性呈升高的趨勢(shì)。乳清中LDH、NAG活性與奶牛隱性乳房炎發(fā)病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)性,隨著體細(xì)胞數(shù)增加和乳腺炎癥的加劇,乳清中LDH、NAG活性隨之升高。

    關(guān)鍵詞:奶牛;隱性乳房炎;乳清;乳酸脫氫酶

    中圖分類號(hào): S858.23 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A 文章編號(hào):1002-1302(2016)07-0276-02

    奶牛乳房炎是危害奶牛養(yǎng)殖業(yè)最嚴(yán)重的疾病之一,其中隱性乳房炎發(fā)生率最高。隱性乳房炎可引起泌乳奶牛產(chǎn)奶量下降、牛奶品質(zhì)降低、養(yǎng)殖成本增加、產(chǎn)后發(fā)情延長(zhǎng)、妊娠時(shí)間推遲,給奶牛養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失[1]。乳酸脫氫酶(LDH)和N-乙?;?β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)廣泛存在于動(dòng)物組織及體液中,白細(xì)胞和乳腺上皮細(xì)胞損傷會(huì)引起乳中LDH活性改變[2],炎癥時(shí)白細(xì)胞釋放NAG,病原菌破壞乳腺組織也可使NAG釋放[3]。研究表明,奶牛乳房炎發(fā)病時(shí)引起乳汁體細(xì)胞數(shù)(SCC)增加,SCC作為監(jiān)測(cè)奶牛乳房炎發(fā)病情況的可靠指標(biāo)[4],奶牛隱性乳房炎發(fā)病與乳中LDH、NAG酶活性相關(guān),乳中SCC變化與乳酶活性呈正相關(guān)[5-6]。本研究探討不同發(fā)病階段的奶牛隱性乳房炎與乳汁中LDH、NAG酶活性的關(guān)系,旨在為該病的臨床診斷提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

    乳汁體細(xì)胞計(jì)數(shù)監(jiān)測(cè)后選擇年齡、胎次、產(chǎn)奶量、泌乳期等指標(biāo)相近的6頭健康奶牛和18頭患不同程度奶牛隱性乳房炎奶牛,由吉林市某奶牛場(chǎng)提供。

    1.2 主要試劑與儀器

    LDH檢測(cè)試劑盒、NAG檢測(cè)試劑盒(南京建成生物工程研究所);Fossmatic 5000體細(xì)胞計(jì)數(shù)儀(丹麥FOSS 公司);Varioskan 酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo 公司);離心機(jī)(美國(guó)Sigma公司)。

    1.3 試驗(yàn)動(dòng)物分組

    乳汁體細(xì)胞計(jì)數(shù)監(jiān)測(cè)后將試驗(yàn)?zāi)膛7殖山】祵?duì)照組(6頭,SCC≤10×104個(gè)/mL)、輕度隱性乳房炎組(6頭,50×104個(gè)/mL500×104個(gè)/mL)。

    1.4 乳樣采集

    采集試驗(yàn)?zāi)膛5娜橹?,采樣前?duì)乳區(qū)進(jìn)行清洗,用75%乙醇消毒乳區(qū),棄掉頭3 把乳汁,分別采乳10 mL裝入無菌試管中,將乳樣放入冰盒中,帶回實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

    1.5 乳清制備

    將采集的乳樣3 000 r/min離心5 min,除去上層乳脂,于16 000 r/min高速離心機(jī)中離心10 min,去除沉淀,保留上清,4 ℃保存,待測(cè)。

    1.6 檢測(cè)方法

    采用體細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定乳汁體細(xì)胞數(shù),采用LDH試劑盒測(cè)定LDH活性,采用NAG試劑盒測(cè)定NAG活性,在酶標(biāo)儀上440 nm處比色測(cè)定D值,根據(jù)試劑盒說明書計(jì)算酶活性。

    1.7 數(shù)據(jù)處理

    采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析,結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 奶牛乳清中LDH活性變化

    如表1所示,患輕度奶牛隱性乳房炎奶牛乳清中LDH活性為(184.15±13.27)U/L,與對(duì)照組差異極顯著;患中度奶牛隱性乳房炎奶牛乳清中LDH活性為(359.79±19.49)U/L,與對(duì)照組差異極顯著;患重度奶牛隱性乳房炎奶牛乳清中LDH活性為(829.63±21.48)U/L,與對(duì)照組差異極顯著。隨著奶牛隱性乳房炎病情加重,乳清中LDH活性呈升高的趨勢(shì)。

    2.2 奶牛乳清中NAG活性變化

    如表2所示,患輕度奶牛隱性乳房炎奶牛乳清中NAG活性為(42.44±8.55)U/L,與對(duì)照組差異顯著;患中度奶牛隱性乳房炎奶牛乳清中NAG活性為(62.93±13.45)U/L,與對(duì)照組差異極顯著;患重度奶牛隱性乳房炎奶牛乳清中NAG活性為(91.61±15.96)U/L,與對(duì)照組差異極顯著。隨著奶牛隱性乳房炎病情加重,乳清中NAG活性呈升高的趨勢(shì)。

    3 結(jié)論與討論

    3.1 奶牛隱性乳房炎與乳清中LDH相關(guān)性

    LDH是由H和M亞基聚合成5種不同形式的四聚體,廣泛存在于動(dòng)物組織和體液中。研究表明,LDH活性與奶牛隱性乳房炎發(fā)病存在一定的聯(lián)系[7]。Babaei等報(bào)道,患隱性乳房炎奶牛乳區(qū)乳汁中LDH活性顯著高于正常乳區(qū)[5]。Hortet等報(bào)道,疾病導(dǎo)致乳腺功能的改變引起乳汁中LDH活性發(fā)生相應(yīng)變化[8]。牛乳中LDH活性可作為監(jiān)測(cè)隱性乳房炎的指標(biāo)之一[9]。在隱性乳房炎發(fā)病過程中,LDH起著非常重要作用,可作為診斷隱性乳房炎和乳腺損害的重要指標(biāo)之一。研究表明,乳房炎發(fā)病引起乳汁中LDH變化的主要原因是由于乳腺上皮細(xì)胞的破壞、炎癥過程引起白細(xì)胞大量聚集,使損害的上皮細(xì)胞和大量的乳汁細(xì)胞釋放LDH增多[10]。乳汁中LDH活性的增加量可以反映乳腺組織的損害程度[11]。本研究結(jié)果表明,奶牛隱性乳房炎發(fā)病引起乳汁中LDH活性升高,隨著乳房炎病情的加重,乳汁中LDH活性呈逐漸升高趨勢(shì),LDH活性與乳腺損傷程度呈正相關(guān)。

    3.2 奶牛隱性乳房炎與乳清中NAG相關(guān)性

    NAG是一種溶菌酶,可作為乳腺上皮細(xì)胞破壞的標(biāo)志[12]。乳房炎發(fā)病與NAG關(guān)系密切,乳房炎發(fā)生時(shí)血清中NAG活性明顯升高,該酶可用作奶牛隱性乳房炎的診斷指標(biāo)之一,對(duì)于隱性乳房炎的早期診斷具有重要意義[6]。研究發(fā)現(xiàn),NAG在隱性乳房炎奶牛乳中NAG活性會(huì)增加,且與白細(xì)胞的增加有關(guān)[13-14]。NAG活性變化不僅與體細(xì)胞數(shù)量相關(guān),且與不同細(xì)菌感染也有相關(guān)性[15]。葡萄球菌、鏈球菌、大腸桿菌感染時(shí),NAG活性與體細(xì)胞數(shù)相關(guān)系數(shù)較高[16-17]。本研究結(jié)果表明,奶牛隱性乳房炎發(fā)病引起乳汁中NAG活性升高,隨著乳房炎病情的加重,乳汁中NAG活性呈逐漸升高的趨勢(shì)?;茧[性乳房炎奶牛乳清中LDH、NAG活性與奶牛隱性乳房炎發(fā)病程度呈正相關(guān)性,隨著體細(xì)胞數(shù)增加和乳腺炎癥的加劇,乳清中LDH、NAG活性隨之升高。

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