蒼耳合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

孫曉迪 謝予朋 李秀敏 王瑞 王蘇會(huì) 李艷輝

[摘要] 目的 完善蒼耳合劑現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，使之更加規(guī)范。 方法 采用薄層色譜法，以三氯甲烷-乙醚（5∶1）為展開劑，木蘭脂素對(duì)照品為對(duì)照，鑒別蒼耳合劑的主要成分辛夷花；采用高效液相色譜法測(cè)定木蘭脂素的含量。色譜柱：CAPCELL PAK MG C18 MG S-5（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（45∶55）；流速1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)278 nm；柱溫30℃。 結(jié)果 薄層色譜中供試品和對(duì)照品斑點(diǎn)清晰/分離度好，且陰性無干擾；含量測(cè)定中，木蘭脂素在41.25～660.00 μg/mL濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系（r = 0.9999），平均回收率為100.80%，RSD為1.55%（n=6）。3批樣品中木蘭脂素平均含量分別為6.96、6.90、6.93 mg/瓶。 結(jié)論 新增加的定性、定量檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，可用于蒼耳合劑的質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞] 蒼耳合劑；薄層色譜法；高效液相色譜法；木蘭脂素

[中圖分類號(hào)] R284. 1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2016）03（c）-0023-03

[Abstract] Objective To complete the quality standard for Xanthium Mixture， and make it more standardized. Methods Magnolia flower in Xanthium Mixture was identified by TLC method， using chloroform-ether （5∶1） as eluent and magnolin as control. The content of magnolin was determined by HPLC method. CAPCELL PAK MG C18 MG S-5 （4.6 mm×150 mm， 5 μm） column was used with acetonitrile-water （45∶55） as the mobile phase at flow rate of 1.0 mL/min. Detection was performed with spectrophotometric detection （278 nm） at 30℃. Results TLC spots were clear and well-separated without negative interference. The linear range of Magnolin was from 41.25 to 660 μg/mL （r = 0.9999）. The average recovery was 100.8%， the RSD was 1.55% （n=6）. In the 3 grups， the average content of Magnolin was 6.96， 6.90， 6.93 mg/bottle. Conclusion The new methods are simple， accurate， sensitive and reproducible and may be potential criterion for the quality control of Xanthium Mixture.

[Key words] Xanthium Mixture； TLC method； HPLC method； Magnolin

蒼耳合劑是應(yīng)用多年的醫(yī)院制劑，由蒼耳子、辛夷花、金銀花等中藥組成，有效治療鼻炎、鼻竇炎。方中蒼耳子為君藥，辛夷花為臣藥，二者配伍，辛散風(fēng)邪，發(fā)揮散風(fēng)寒、通鼻竅的功能[1-3]，再佐以清熱解毒、消膿止痛的金銀花達(dá)到治療目的[4]。本試驗(yàn)在蒼耳合劑現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，增加辛夷花的薄層鑒別及木蘭脂素的含量測(cè)定，完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，確保其有效性與安全性。

1 儀器與材料

1.1 儀器

LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津），SPD-20A紫外檢測(cè)器（日本島津），SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器（日本島津），LC-solution色譜工作站（日本島津）；BS2202S 電子分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司）。

1.2 試劑

乙腈為色譜純；水為純化水（自制）；其余試劑均為分析純。

1.3 藥品

木蘭脂素對(duì)照品（批號(hào)110882-201206）購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。蒼耳合劑（批號(hào)20150108、20150114、20140921）由北京軍區(qū)天津療養(yǎng)院提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 TLC鑒別

取蒼耳合劑50 mL，置分液漏斗中，用三氯甲烷萃取2次，每次50 mL，合并三氯甲烷層，蒸干，殘?jiān)尤燃淄? mL溶解，作為供試品溶液。取木蘭脂素對(duì)照品2 mg，加甲醇定容至2 mL，作為對(duì)照品溶液。稱取不含辛夷花的蒼耳子、金銀花煎煮制得陰性對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙醚（5∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇液，置105℃烤箱中烘烤至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)，且陰性無干擾。見圖1。

2.2 木蘭脂素含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件

CAPCELL PAK MG C18 MG S-5（4.6 mm×250 mm，5 μm）（資生堂公司）；流動(dòng)相為乙腈-水（45∶55）；檢測(cè)波長(zhǎng)278 nm；柱溫30℃；進(jìn)樣量10 μL，理論塔板數(shù)按木蘭脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于9000。

2.2.2 溶液制備

2.2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱定木蘭脂素對(duì)照品1.65 mg，加甲醇定容至5 mL，即得。

2.2.2.2 供試品溶液的制備 取蒼耳合劑20 mL，置分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取4次，每次20 mL，合并乙酸乙酯層，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，定容?0 mL量瓶中，搖勻，即得。

2.2.2.3 陰性對(duì)照品溶液的制備 稱取不含辛夷花的蒼耳子、金銀花煎煮制得陰性對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.2.3專屬性試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液各10 μL，進(jìn)行測(cè)定，供試品溶液與對(duì)照品溶液中木蘭脂素特征峰具有相同保留時(shí)間，且陰性無干擾。見圖2。

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密稱取木蘭脂素對(duì)照品10.49 mg（純度：98.3%），甲醇定容至5 mL，作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。精密吸取0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mL置5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得濃度為41.25、82.5、165、330、660 μg/mL對(duì)照品溶液。精密吸取各濃度對(duì)照品溶液10 μL，進(jìn)行測(cè)定。以濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。其線性方程為Y=5721.4297X+12 935.75（r2 = 0.9999）。結(jié)果表明木蘭脂素在41.25 ～660.00 μg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.2.5 精密度試驗(yàn)

連續(xù)6次精密吸取“2.2.4”項(xiàng)下濃度為330 μg/mL的對(duì)照品溶液10 μL進(jìn)行測(cè)定。計(jì)算得出木蘭脂素峰面積RSD為0.38%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取批號(hào)為20140921的蒼耳合劑6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行測(cè)定。計(jì)算得出木蘭脂素平均含量為139.23 μg/ml，RSD為1.03%。結(jié)果表明此色譜條件測(cè)定供試品中木蘭脂素含量重復(fù)性良好。

2.2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別于0、1、2、4、8、12、24 h進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算得出木蘭脂素峰面積RSD為0.38%，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8加樣回收率

精密稱取批號(hào)為20140921已知含量的樣品6份，加入木蘭脂素對(duì)照品溶液，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算得出木蘭脂素平均回收率為100.80%，RSD為1.55%。結(jié)果表明選用的色譜條件適合測(cè)定木蘭脂素含量。見表1。

2.2.9 樣品含量測(cè)定

按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法處理3批樣品（批號(hào)：20150108、20150114、20140921），按“2.2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行測(cè)定。3批樣品的含量分別為6.96、6.90、6.93 mg/瓶。

3 討論

隨著人們對(duì)中藥研究的深入，通過單一的化學(xué)指標(biāo)成分對(duì)中藥制劑進(jìn)行質(zhì)量控制的模式已經(jīng)不適用于中藥現(xiàn)代化的發(fā)展，多指標(biāo)成分的質(zhì)量控制將是發(fā)展的必然趨勢(shì)[5]。醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥制劑有著自身優(yōu)勢(shì)，不僅可以滿足醫(yī)院臨床需求、還可以彌補(bǔ)已上市中成藥品種的不足[6]。因此，醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥制劑的發(fā)展不容忽視。蒼耳合劑作為醫(yī)院自制中藥制劑，現(xiàn)有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)指標(biāo)單一。為使其更好地為患者服務(wù)，在醫(yī)院更好地應(yīng)用推廣，本試驗(yàn)對(duì)現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行修訂。新增的定性、定量檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單、專屬性強(qiáng)，可對(duì)蒼耳合劑進(jìn)行有效的質(zhì)量控制。

辛夷為木蘭科植物望春花（Magnolia biondii Pamp.）、玉蘭（Magnolia denudata Desr.）或武當(dāng)玉蘭（Magnolia sprengeri Pamp.）的干燥花蕾[7]。臨床上常與蒼耳子、細(xì)辛、白芷、防風(fēng)等配伍，用于治療各種鼻炎[8]。王熒熒等[9]報(bào)道，蒼耳子和辛夷合煎液中有效成分的峰面積大于單煎液峰面積，說明二者有相互增溶的作用。辛夷主要含有揮發(fā)油、黃酮類、木脂素、脂肪酸、香豆素等多種藥效成分[10]。研究表明，辛夷具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗過敏活性[11]，有局部收斂、中樞抑制、降血壓等作用，對(duì)子宮及腸道平滑肌的影響有多種藥理學(xué)作用[12]，其中木脂素和新木脂素已經(jīng)成功應(yīng)用于調(diào)控過敏性疾病[13]。在生物活性方面，辛夷中的木蘭脂素、松脂素二甲醚、里立脂素B二甲醚等木脂素成分可通過拮抗血小板活性因子（PAF）活性而發(fā)揮抗炎作用[14]；其水提物可抑制鼻咽癌細(xì)胞（CNE）的增殖，抑制率為24.40%[15]。在臨床應(yīng)用中，辛夷被開發(fā)成多種劑型治療各種鼻炎。如口服的鼻淵丸、鼻炎糖漿等[16]；外用的鼻通寧滴劑、復(fù)方鼻炎寧滴鼻劑等。由此可見，辛夷在鼻炎、鼻竇炎治療中發(fā)揮重要作用[17]。

在流動(dòng)相選取時(shí)，分別考察藥典方法和文獻(xiàn)方法乙腈-四氫呋喃-水（39∶1∶60）[18]、乙腈-水（45∶55）、乙腈-水（49∶51）[19]、乙腈-水（40∶60）[20]為流動(dòng)相時(shí)木蘭脂素含量的測(cè)定情況。結(jié)果表明，含四氫呋喃的流動(dòng)相使木蘭脂素分離度<1.5；其余三種流動(dòng)相測(cè)得結(jié)果差異不大。綜合考慮，選擇乙腈-水（45∶55）為流動(dòng)相。同時(shí)考察柱溫為30、35℃時(shí)，主峰與雜質(zhì)峰分離情況。結(jié)果表明溫度僅影響出峰時(shí)間，故選擇30℃。

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（收稿日期：2015-12-24 本文編輯：趙魯楓）