白細(xì)胞介素12基因 rs3212227多態(tài)性與甲狀腺乳頭狀癌的關(guān)系

黃　蓉，程曉剛，金　虹，馬　晶

?

白細(xì)胞介素12基因 rs3212227多態(tài)性與甲狀腺乳頭狀癌的關(guān)系

黃蓉1，程曉剛2，金虹2，馬晶3

目的明確中國漢族人群白細(xì)胞介素12(IL-12)基因rs3212227多態(tài)性與甲狀腺乳頭狀癌(PTC)的相互關(guān)系。方法采用聚合酶鏈反應(yīng)—限制性片段長度多態(tài)性對211例PTC患者和216個健康對照的IL-12基因rs3212227多態(tài)性進(jìn)行分析。結(jié)果PTC組和健康對照組IL-12基因rs3212227多態(tài)性差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但PTC中攜帶有A/C和C/C基因型較攜帶AA基因型在甲狀腺被膜浸潤上的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.047，P=0.035)。結(jié)論 IL-12基因rs3212227多態(tài)性與PTC的發(fā)生沒有顯著關(guān)系，但可能影響PTC對甲狀腺被膜的浸潤。

IL-12；單核苷酸多態(tài)性；甲狀腺乳頭狀癌；

甲狀腺癌是女性第五大腫瘤，也是最常見的內(nèi)分泌惡性腫瘤。其中甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid cancer,PTC)是甲狀腺惡性腫瘤中最常見的形式，占80%左右，其發(fā)病率在過去的幾十年里迅速增加[1-3]。目前，PTC發(fā)病機制尚不明確，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為是由遺傳和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果，并發(fā)現(xiàn)基因單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism,SNP)與不同國家與種族的PTC發(fā)生相關(guān)[4-7]。

IL-12是二硫鍵連接的由IL-12p35 (由IL12A編碼) 和 IL-12p40 (由 IL12B編碼)組成的異源二聚體，可增強細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞生成并提高其殺傷活性，抑制NK細(xì)胞和Th2型輔助性T細(xì)胞分化，具有較強的抗腫瘤作用[8-10]。目前，研究發(fā)現(xiàn)IL-12基因多態(tài)性與癌癥發(fā)病風(fēng)險之間的關(guān)系，包括胃癌、膠質(zhì)瘤、結(jié)直腸癌、宮頸癌、肝癌等[11-15]。本研究擬探討IL-12基因rs3212227多態(tài)性與PTC的發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)聯(lián)，現(xiàn)報道如下。

1　材料與方法

1.1研究人群的臨床特征收集2014年4月至2015年9月共211例華西醫(yī)科大學(xué)就醫(yī)的PTC患者，所有PTC診斷均經(jīng)病理切片證實，年齡(43.63±12.95)歲。臨床資料主要包括年齡、性別等資料，排除前期曾發(fā)生有癌癥、化療或放療史者，同期隨機選擇年齡和性別匹配的健康個體216例，年齡(44.53±7.15)歲，無任何家族性癌癥病史或其他嚴(yán)重的疾病，患者和對照組的性別和年齡分布差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。研究中所有病例和對照均為漢族，生活在西南地區(qū)，并獲得了所有受試者的知情同意，研究人群的臨床特征見表1。

表1　研究人群的臨床特征

1.2基因分型采用聚合酶鏈反應(yīng)—限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)檢測IL-27基因rs3212227多態(tài)性。采用外周血基因組DNA提取試劑盒(北京bioteke公司)，根據(jù)試劑說明書提取基因組DNA，-80 ℃凍存。根據(jù)參考文獻(xiàn)[14]設(shè)計PCR引物，具體為：上游引物F:5′-TTTGGAGGAAAAGTGGAAGA-3′，下游引物R:5′-AACATTCCATACATCCTGGC-3′。PCR反應(yīng)條件為：總體積25 μL含100 ng基因組DNA，0.2 μM dNTPs，各0.5 μM上下游引物，2.0 mM MgCl2，10 mM Tris HCl(pH值8.8)，和2.5 U DNA聚合酶(Tiangen,China)，反應(yīng)溫度：94 ℃ 4 min預(yù)變性，94 ℃變性 45 s，60 ℃ 退火1 min，72 ℃延伸1 min共循環(huán)35次，最后延伸72 ℃ 8 min。PCR產(chǎn)物用Taq I酶(New England Bio-Labs,USA)進(jìn)行酶切后，經(jīng)6%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離和1%硝酸銀染色鑒定。分型結(jié)果采用測序以驗證其正確性。

1.3統(tǒng)計分析采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，分類變量采用卡方檢驗，連續(xù)變量采用t檢驗。IL-12 rs3212227基因型和等位基因頻率的比較采用卡方檢驗，比值比(OR)和95%可信區(qū)間(CI)用于評估相對風(fēng)險，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

PTC組和對照組之間的IL-12基因rs3212227多態(tài)性的基因型分布均符合哈迪—溫伯格均衡。與對照組相比，PTC組IL-12基因rs3212227的多態(tài)性差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

表2　兩組IL-12 rs3212227基因多態(tài)性　例(%)

注：OR：比值比；CI：置信區(qū)間。

在IL-12基因rs3212227多態(tài)性與PTC的臨床特征之間的關(guān)系中，PTC組IL-12基因rs3212227多態(tài)性與腫瘤大小、數(shù)目、頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，但I(xiàn)L-12基因rs3212227攜帶有A/C和C/C基因型與攜帶AA基因型相比，在甲狀腺被膜浸潤上差異有統(tǒng)計學(xué)意義(分別為P=0.05和P=0.04)，見表3。

表3IL-12 rs3212227多態(tài)性與PTC臨床特征例(%)

(續(xù)表)

基因型基因型頻率腫瘤≥1cm腫瘤<1cmOR(95%CI)P值頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(+)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(-)A/A37(32.17)28(29.17)1.00(Ref)A/C60(52.17)41(42.71)0.89(0.47-1.71)0.72C/C18(15.65)27(28.13)1.80(0.82-3.98)0.17被膜浸潤(+)被膜浸潤(-)A/A44(36.97)21(22.83)1.00(Ref)A/C53(44.54)48(52.17)1.94(1.01-3.74)0.05C/C22(18.49)23(25.00)2.31(1.05-5.11)0.04

注：OR：比值比；CI：置信區(qū)間。

3　討論

IL-12是一種異源二聚體結(jié)構(gòu)的前炎癥因子，亞單位p35和p40分別由白細(xì)胞介素12A(interleukin-12A,IL-12A)和白細(xì)胞介素12B(interleukin-12B,IL-12B)基因編碼。IL-12能誘導(dǎo)Th1細(xì)胞分化，促進(jìn)IFN-γ的產(chǎn)生，并在固有免疫和獲得免疫之間建立起重要聯(lián)系，在Th1類免疫過程中處于核心地位。IL-12具有較強的抗病毒與抗腫瘤活性，它通過激活Th1獲得性免疫和CTL在抗血管生成和消退腫瘤的過程中發(fā)揮作用[8-10]?；贗L-12的相關(guān)功能，有關(guān)IL-12基因多態(tài)性與腫瘤關(guān)系的研究報道，包括宮頸癌、胃癌、肺癌、非霍奇金淋巴瘤和其他腫瘤[11-15]。

本研究IL-12基因rs3212227單核苷酸多態(tài)性在PTC組與對照組的差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明IL-12基因rs3212227多態(tài)性對PTC的發(fā)生沒有顯著性影響。但PTC患者攜帶有A/C和C/C基因型與攜帶AA基因型相比，在甲狀腺被膜浸潤上差異有統(tǒng)計學(xué)意義上增加的差異，提示IL-12 rs3212227基因的遺傳變異有可能影響PTC對甲狀腺被膜的浸潤，其具體原因尚待進(jìn)一步研究。

本研究也有一定的局限性。首先，病例數(shù)和對照組樣本較少，需要在更大范圍人群中進(jìn)行進(jìn)一步驗證；其次，因為沒有檢測IL-12的表達(dá)水平，因此無法得出此多態(tài)性對IL-12水平是否有影響，但多數(shù)研究認(rèn)為IL-12 rs3212227基因的遺傳變異對其表達(dá)沒有顯著性影響[5]；第三，環(huán)境和生活方式等因素未考慮在內(nèi)，這可能影響探究IL-12基因rs3212227多態(tài)性與PTC風(fēng)險關(guān)系的準(zhǔn)確性。未來需要進(jìn)一步在大樣本人群中研究，探討不同環(huán)境因素與PTC發(fā)生及IL-12基因多態(tài)性之間的復(fù)雜的相互作用。

[1]Brown RL,de Souza JA,Cohen EE.Thyroid cancer: burden of illness and management of disease[J].J Cancer,2011,2:193-199.

[2]Vigneri R,Malandrino P,Vigneri P,et al.The changing epidemiology of thyroid cancer: why is incidence increasing[J].Curr Opin Oncol,2015,27(1):1-7.

[3]Schneider DF,Chen H.New developments in the diagnosis and treatment of thyroid cancer[J].CA Cancer J Clin,2013,63(6):374-394.

[4]Kula D,Kalemba M,Jurecka-Lubieniecka B,et al.Genetic predisposition to papillary thyroid cancer[J].Endokrynol Pol,2010,61(5):486-489.

[5]Eun YG,Lee YC,Kim SK,et al.Single nucleotide polymorphisms of the Fas gene are associated with papillary thyroid cancer[J].Auris Nasus Larynx,2015,42(4):326-331.

[6]Huang CJ,Jap TS.A systematic review of genetic studies of thyroid disorders in Taiwan[J].J Chin Med Assoc,2015,78(3):145-153.

[7]Brenner AV,Neta G,Sturgis EM,et al.Common single nucleotide polymorphisms in genes related to immune function and risk of papillary thyroid cancer[J].PLoS One,2013,8(3):e57243.

[8]Floros T,Tarhini AA.Anticancer cytokines:biology and clinical effects of interferon-a2,interleukin (IL)-2,IL-15,IL-21,and IL-12[J].Semin Oncol,2015,42(4):539-548.

[9]Tugues S,Burkhard SH,Ohs I,et al.New insights into IL-12-mediated tumor suppression[J].Cell Death Differ,2015,22(2):237-246.

[11]Zhao B,Meng LQ,Huang HN,et al.A novel functional polymorphism,16974 A/C,in the interleukin-12-3′ untranslated region is associated with risk of glioma[J].DNA Cell Biol,2009,28(7):335-341.

[12]Tao YP,Wang WL,Li SY,et al.Associations between polymorphisms in IL-12A,IL-12B,IL-12Rbeta1,IL-27 gene and serum levels of IL-12p40,IL-27p28 with esophageal cancer[J].J Cancer Res Clin Oncol,2012,138(11):1891-1900.

[13]Wei YS,Lan Y,Luo B,et al.Association of variants in the interleukin-27 and interleukin-12 gene with nasopharyngeal carcinoma[J].Mol Carcinog,2009,48(8):751-757.

[14]Huang ZQ,Wang JL,Pan GG,et al.Association of single nucleotide polymorphisms in IL-12 and IL-27 genes with colorectal cancer risk[J].Clin Biochem,2012,45(1-2):54-59.

[15]Jafarzadeh A,Minaee K,Farsinejad AR,et al.Evaluation of the circulating levels of IL-12 and IL-33 in patients with breast cancer: influences of the tumor stages and cytokine gene polymorphisms[J].Iran J Basic Med Sci,2015,18(12):1189-1198.

Association of IL-12 rs3212227 Polymorphism with Papillary Thyroid Cancer in a Chinese Population

HUANG Rong1,CHENG Xiao-gang2,JIN Hong2,Ma Jing3

(1.School of pharmacy,Chengdu Medical College,Chengdu 610083,China;2.Department of Immunology,Chengdu Medical College,Chengdu 610083,China;3.Department of rehabilitation therapy,Chengdu Medical College,Chengdu 610083,China)

ObjectiveThe aim of the present study was to clarify the role of interleukin-12 (IL-12) gene rs3212227 polymorphism with the risk of papillary thyroid cancer (PTC) in a Chinese population.MethodsIL-12 gene rs3212227 polymorphism were genotyped in a case-control study of 211 PTC patients and 216 health controls using polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP).ResultsNo significant difference was noticed in IL-12 rs3212227 polymorphism between PTC patients and healthy controls in the overall analysis.However,we found that PTC patients carrying the A/C and C/C genotypes in rs3212227 had significantly increased risks for developing extra-thyroidal invasion compared with those carrying the AA genotype (P=0.047,P=0.035,respectively).ConclusionThere is no obvious association between IL-12 gene rs3212227 polymorphism and PTC occurance.However,the data elucidate that the rs3212227 polymorphism of IL-12 gene might affect the PTC invasion to thyroid capsule.

IL-12；single nucleotide polymorphism；papillary thyroid cancer

1672-688X(2016)03-0180-03DOI：10.15926/j.cnki.issn1672-688x.2016.03.006

2013年省級大學(xué)生創(chuàng)新實驗計劃項目(編號：201313705019)

2016-05-13

1.成都醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，四川成都 610083

2.成都醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室，四川成都 610083

3.成都醫(yī)學(xué)院康復(fù)治療系，四川成都 610083

黃蓉(1993-)，女，四川成都人，從事基因多態(tài)性分析研究。

金虹(1978-)，女，博士，講師，E-mail：Jingh04280@yahoo.com.cn

R736.1,Q754

A