miR-135b在宮頸癌中的表達及臨床意義

劉　平

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miR-135b在宮頸癌中的表達及臨床意義

劉平

目的探討miR-135b在宮頸癌及相應(yīng)癌旁組織中的表達情況及其與宮頸癌臨床病理特征的相關(guān)性。方法收集26例宮頸癌和相應(yīng)癌旁組織，運用RT-PCR的方法檢測26例宮頸癌及相應(yīng)癌旁組織中miR-135b的表達，分析miR-135b與宮頸癌臨床病理特征的相關(guān)性，并評價其臨床意義。結(jié)果熒光定量PCR顯示宮頸癌中miR-135b的表達(8.36±3.67)比癌旁組織(6.19±2.81)明顯上調(diào)(P<0.05)。miR-135b的表達與宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期(Ⅲb)之間存在相關(guān)性(均P<0.05)。結(jié)論miR-135b可能在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要的作用。

宮頸癌；miR-135b；臨床分期；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

宮頸癌是全世界排名第二的女性惡性腫瘤，也是癌癥死亡的主要原因之一。雖然早期宮頸癌可以通過根治手術(shù)輔以化療或放療得以治愈，但很多因素影響宮頸癌的預(yù)后，包括腫瘤大小、基質(zhì)浸潤深度、血管浸潤、子宮旁組織的入侵、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等，其中盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移被認(rèn)為是影響宮頸癌預(yù)后最重要的危險因素[1]。近年的研究表明miRNA與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有密切的關(guān)系，其參與調(diào)控宮頸癌的進程和雌孕激素的表達[2]。研究發(fā)現(xiàn)miR-135b在骨肉瘤[3]、結(jié)腸癌[4]、前列腺癌[8]等多種腫瘤中表達上升。本研究用RT-PCR的方法檢測miR-135b在宮頸癌及其相應(yīng)癌旁組織中的表達，并探討其與宮頸癌臨床病理特征的相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1　材料和方法

1.1材料

1.1.1樣本和臨床資料的收集樣本來自2013年7月至2015年12月在南陽市第二人民醫(yī)院婦科26例宮頸鱗狀細(xì)胞癌行根治性子宮切除術(shù)和盆腔淋巴結(jié)清掃的樣本和臨床資料，年齡28～66歲。根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)合會(Federation International of Gynecology and Obstetrics,FIGO)診斷標(biāo)準(zhǔn)，26例中有15例<Ⅲb，11例≥Ⅲb；8例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，18例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；7例低-中分化，19例中-高分化。所有患者術(shù)前均未接受化療或放療，并均有組織病理學(xué)確診。所有宮頸癌及癌旁組織標(biāo)本收集后立即儲存至-80 ℃冰箱。

1.1.2試劑與儀器RNA提取試劑盒(天根生物公司)，miRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(諾維贊生物公司)，熒光定量PCR試劑盒康(世紀(jì)生物公司)，Biotek Epoch微量核酸定量儀購自美國Biotek公司，7500熒光定量PCR儀購自ABI 公司。

1.1.3RT-PCR引物設(shè)計miRNA-135b的引物序列通過PCR引物設(shè)計軟件Primer Premier 5.0設(shè)計has-mir-135b和U6的引物序列，具體序列如下：has-mir-135b-5p：5′-CCTGGCTTTTCATTCCTATGTGA-3′，U6：5′-GCTTCGGC AGCACATATACTAAA-3′，并由In-vitrogen 公司合成。引物干粉離心后用DEPC水配制成20 μmol·L-1，置于-20 ℃冰箱備用。

1.2方法

1.2.1總RNA的提取和反轉(zhuǎn)錄從宮頸癌組織和癌旁組織中抽提總RNA，按RNA提取試劑盒說明書進行，采用定量分光光度法在A260/280處對提取RNA進行定量。按miRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書對樣本總RNA進行反轉(zhuǎn)錄，反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)由1 μg的總RNA，與10 μL 2×RT mix，2 μL mix，1 μL oligo dNTPs,1 μL Random hexamers，總體系20 μL。 25 ℃ 5 min，50 ℃ 15 min，85 ℃ 5 min，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA。

1.2.2RT-PCR檢測miR-135b根據(jù)RT-PCR試劑盒說明書進行熒光定量PCR，以2-ΔΔCt表示基因的相對表達水平。實時PCR體系為 20 μL。10 μL 2×mix，2 μL primer，2 μL reverse primer，2 μL cDNA，4 μL H2O。 95 ℃的30 s，95 ℃ 5 s和60 ℃ 30 s，總共40個循環(huán)。PCR是一式三份。

2　結(jié)果

2.1宮頸癌及癌旁組織miR-135b表達應(yīng)用RT-PCR檢測26對配對的宮頸癌癌組織及癌旁組織中miR-135b的表達，通過配對樣本t檢驗，宮頸癌癌組織中miR-135b的平均表達量(8.36±3.67)大于癌旁組織中miR-135b的平均表達量(6.19±2.81)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=2.247，P=0.003)，見圖1。

圖1　miR-135b實時熒光定量PCR (t=2.247，P=0.003)

2.2miR-135b表達與臨床病理特征腫瘤組織中miR-135b的表達水平與臨床分期(P=0.029)和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.022)有相關(guān)性，即臨床分期越差，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時miR-135b表達水平越高，見表1。

表1　miR-135b表達與宮頸癌

3　討論

宮頸癌在低收入和中等收入國家是女性最常見的癌癥之一。在過去的一個世紀(jì)這些國家都在致力建立成功的篩查項目來顯著降低宮頸癌的發(fā)病率和死亡率。這些篩查依賴細(xì)胞學(xué)巴氏涂片發(fā)現(xiàn)宮頸癌的前期病變。這些檢查可以預(yù)防多達91%的浸潤性宮頸癌[5]。然而，這些項目需要大量資金投入。因此，尋找更為客觀精準(zhǔn)的腫瘤標(biāo)志物來標(biāo)記宮頸癌發(fā)病和預(yù)后是重要的研究方向。miRNA可以結(jié)合到目標(biāo)mRNA的3′UTR，調(diào)節(jié)mRNA的穩(wěn)定和翻譯，最終導(dǎo)致翻譯抑制或目標(biāo)mRNA被降解[6]。miRNA可分為致癌基因或抑癌基因，并參與細(xì)胞的多個生物過程，包括細(xì)胞增殖、凋亡、代謝、細(xì)胞分化[7]。miRNA的發(fā)現(xiàn)為腫瘤的研究提供了一個新的方向，也為探索宮頸癌新的生物標(biāo)志物和其轉(zhuǎn)移和發(fā)展機制提供了方向。miRNA參與多種癌癥的轉(zhuǎn)移和發(fā)展。到目前為止，除了mir-127[8]，很少有miRNAs被報道與宮頸癌的轉(zhuǎn)移和進展有關(guān)。

miR-135b基因位于第l號染色體長臂第3區(qū)2號帶的第1號亞帶(1q32.1)，其在骨肉瘤[3]、結(jié)腸癌[4]、前列腺癌[8]等多種腫瘤中表達上升。在非小細(xì)胞肺癌中，miR-135b通過激活Hippo信號通路調(diào)控靶基因LZTS1，進而促進肺癌轉(zhuǎn)移[9]。Arigoni等[10]發(fā)現(xiàn)在乳腺癌和前列腺癌細(xì)胞中miR-135b表達上調(diào)，并靶向雌激素受體、雄激素受體和缺氧誘導(dǎo)因子1α( hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α) ，進而促進腫瘤細(xì)胞的增殖。在小鼠頭頸鱗癌細(xì)胞中，miR-135b促進腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移、克隆，并下調(diào)FIH的表達和HIF通路的活性，成為致癌miRNA[11]。

Valeri等[12]發(fā)現(xiàn)，miR-135b的過度表達觸發(fā)了老鼠和人體抑癌基因APC的缺失，導(dǎo)致PTEN/PI3K通路的異常，癌基因SRC的表達上調(diào)并促進腫瘤的轉(zhuǎn)化和進展。miR-135b的過度表達在與結(jié)直腸癌相關(guān)的炎癥中是普遍事件，且與腫瘤分期及預(yù)后不良有密切關(guān)系。有研究認(rèn)為糞便中的miR-135b，可作為結(jié)直腸癌及進展期腺瘤的非侵襲性的生物學(xué)標(biāo)記物[13]。本研究采用熒光定量PCR實驗對26例子宮內(nèi)膜癌癌組織及癌旁組織進行定量分析，發(fā)現(xiàn)miR-135b在宮頸癌癌組織中的表達(8.36±3.67)高于癌旁組織(6.19±2.81)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，表明miR-135b可能在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中起一定作用。而且，miR-135b的表達與宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期之間存在顯著的相關(guān)性(均P<0.05)。

總之，本研究表明miR-135b在宮頸癌癌組織中高表達，可能發(fā)揮著癌基因的作用，促進宮頸癌的增殖作用。并且miR-135b的表達與宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期存在相關(guān)性。當(dāng)然，由于樣本量和樣本來源的局限性，本研究結(jié)果有待于大樣本研究進一步證實。

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Expression and Its Clinical Significance of miR-135b in Cervical Cancer

LIU Ping

(Second People′s Hospital of Nanyang,Nanyang 473000,China)

ObjectiveTo explore the expression of miR-135b in cervical cancer and adjacent tissues and its correlation with clinicopathologic characteristics of cervical cancer.Methods26 fresh cervical cancer tissues and its paired adjacent tissues were collected and detected by RT-PCR for expressions of miR-135b and its correlation with cervical cancer.ResultsThe expression of miR-135b was significantly up-regulated in cervical cancer tissues compared with the adjacent tissues ((8.36±3.67) VS (6.19±2.81),P<0.05).The significant correlation were found between miR-135b expression and clinicopathologic parameters,including lymph node metastasis and clinical stage (Ⅲb) of cervical cancer (all P<0.05).ConclusionThe miR-135b might play an important role in the carcinogenesis and development of cervical cancer.

cervical cancer；miR-135b；clinical stage；lymphnode metastasis

1672-688X(2016)03-0177-03DOI：10.15926/j.cnki.issn1672-688x.2016.03.005

2016-06-15

南陽市第二人民醫(yī)院，河南南陽 473000

劉平(1984-)，女，河南南陽人，醫(yī)師，從事婦產(chǎn)科臨床、科研工作。

R737.33,Q786

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