奶牛不同濃度酒精滴定陽(yáng)性乳中體細(xì)胞數(shù)及乳酸水平分析

李　靜，賀紹君，周　巖，劉德義，陳會(huì)良，商常發(fā)

(安徽科技學(xué)院　動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，安徽　鳳陽(yáng)　233100)

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奶牛不同濃度酒精滴定陽(yáng)性乳中體細(xì)胞數(shù)及乳酸水平分析

李靜，賀紹君，周巖，劉德義，陳會(huì)良，商常發(fā)

(安徽科技學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，安徽鳳陽(yáng)233100)

目的:探討不同濃度酒精滴定陽(yáng)性乳中的體細(xì)胞數(shù)量和乳酸度水平;方法:首先篩選出68%、72%、75%的酒精陽(yáng)性乳奶牛，然后各組選擇產(chǎn)奶量、胎次、年齡、泌乳期相近的奶牛6頭，同時(shí)設(shè)立酒精陰性對(duì)照組。在第7、14和21 d采集全乳，測(cè)定體細(xì)胞數(shù)及乳酸的含量;結(jié)果:各組奶牛乳中的體細(xì)胞數(shù)平均值隨時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)，差異均不顯著(P﹥0.05)；各組乳酸含量在12.58-15.25 °T之間，均屬于正常范圍，組內(nèi)及組間差異均不顯著(P﹥0.05)；結(jié)論:酒精陽(yáng)性乳既不會(huì)引起乳中體細(xì)胞數(shù)的改變，也不會(huì)影響其酸度，因此可以進(jìn)行合理地利用。

酒精陽(yáng)性乳；體細(xì)胞數(shù)；酸度；奶牛

牛奶的穩(wěn)定性與其所含的酪蛋白膠體的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性有密切關(guān)系[1]。在20 ℃下，如果新擠出的牛奶與等量的質(zhì)量濃度70%的中性酒精均勻混合后，產(chǎn)生細(xì)微顆粒和絮狀凝塊，便可斷定為乳酒精陽(yáng)性乳[2]。酒精試驗(yàn)中，牛乳產(chǎn)生凝固主要原因是離子平衡紊亂和酪蛋白膠體微粒的變性產(chǎn)生沉淀[3]。酒精陽(yáng)性檢測(cè)是乳品收購(gòu)中檢驗(yàn)的常規(guī)項(xiàng)目，如果檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，往往拒收，造成一定的資源浪費(fèi)和經(jīng)濟(jì)損失。奶牛酒精陽(yáng)性乳的首次報(bào)道是1936年，發(fā)生在荷蘭，此后各國(guó)均有關(guān)于酒精陽(yáng)性乳發(fā)生的報(bào)道。在我國(guó)酒精陽(yáng)性乳的發(fā)病率為30～50%，目前將其歸為營(yíng)養(yǎng)代謝性疾病[4]。資料報(bào)道，低酸度酒精陽(yáng)性乳的酸度在11～18 °T之間，酸度并不高，是由于乳腺細(xì)胞生理功能紊亂所致，加熱后并不凝固[5]；有人認(rèn)為，低酸度酒精陽(yáng)性乳除酸度低于國(guó)標(biāo)(16～19 °T)外，口感和營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)均正常[6]。乳汁中的體細(xì)胞數(shù)檢測(cè)是評(píng)定乳品衛(wèi)生的指標(biāo)之一，乳中體細(xì)胞主要包括脫落的乳腺上皮細(xì)胞和白細(xì)胞，所以其含量的變化反映乳腺的狀況和功能[7]。因此，本試驗(yàn)連續(xù)三周測(cè)定酒精陽(yáng)性乳患牛乳汁的酸度和體細(xì)胞數(shù)，研究奶牛酒精陽(yáng)性乳與其酸度和體細(xì)胞數(shù)之間的關(guān)系，為研究酒精陽(yáng)性乳的可利用性提供技術(shù)資料。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物及管理

試驗(yàn)在安徽蚌埠市某奶牛場(chǎng)進(jìn)行，中國(guó)荷斯坦奶牛，年齡5～7歲，體重500～600 kg， 3～4胎；處于泌乳盛期或中期，每天于6～8時(shí)、13～15時(shí)和19～21時(shí)分別飼喂和擠乳1次。

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)

首先用質(zhì)量濃度68%的酒精進(jìn)行全群檢測(cè)篩選出陽(yáng)性，然后在68%的酒精陰性乳中用72%的酒精進(jìn)行篩選，最后在68%的酒精陰性乳中用75%的酒精篩選，建立68%酒精陰性牛組(對(duì)照組)、75%陽(yáng)性牛組，72%酒精陽(yáng)性牛組和68%酒精陽(yáng)性牛組，篩選產(chǎn)奶量、胎次、年齡、泌乳期等因素相近的奶牛為試驗(yàn)動(dòng)物，每組6頭。連續(xù)三周對(duì)各組奶牛進(jìn)行采乳，測(cè)定乳中體細(xì)胞及乳酸的含量。

1.3藥品及儀器

藥品：酚酞指示劑；70%酒精；0.1 mol/L氫氧化鈉。

儀器：光學(xué)顯微鏡；堿式滴定管；細(xì)胞計(jì)算板。

1.4方 法

1.4.1奶樣采集方法每次于13～15時(shí)采集乳樣。溫水清洗乳房后，0.1 %新潔爾滅擦洗消毒，70% 酒精棉球消毒乳頭和操作人員的手指，每個(gè)乳頭的前兩把乳汁棄去。將各乳區(qū)的乳汁混合后，用消毒滅菌后的三角瓶取20 mL 左右，立刻做酸度及體細(xì)胞的測(cè)定。

1.4.2酒精陽(yáng)性乳的檢測(cè)對(duì)試驗(yàn)所采集的乳樣在30 min內(nèi)進(jìn)行酒精陽(yáng)性檢測(cè)，取3～4 mL乳汁與等量的68%(或72%，75%)酒精混合，產(chǎn)生細(xì)微顆?；蛐鯛钅龎K的乳樣，記為陽(yáng)性，根據(jù)測(cè)定結(jié)果，篩選出不同濃度酒精滴定陽(yáng)性乳。

1.4.3體細(xì)胞的含量檢測(cè)參照參考文獻(xiàn)8中介紹的改進(jìn)的顯微鏡計(jì)數(shù)法檢測(cè)牛奶中體細(xì)胞[8]，采樣后在4 ℃下保存，并且在2 h之內(nèi)完成測(cè)定。

1.4.4乳酸的檢測(cè)采用食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)：乳和乳制品酸度的測(cè)定(GB 5413.34-2010)中的方法測(cè)牛奶中滴定酸度[9]。

1.5數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)用均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差(M±SE)”表示，用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行描述性統(tǒng)計(jì)，對(duì)相應(yīng)結(jié)果作t檢驗(yàn)分析。

2　結(jié)果與分析

2.1酒精陽(yáng)性乳中體細(xì)胞數(shù)的檢驗(yàn)結(jié)果

表1　各組乳中的體細(xì)胞數(shù)(×104/mL)

由表1可見(jiàn)，在1～3周時(shí)間內(nèi)，各組奶牛乳中的體細(xì)胞數(shù)平均值隨時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)，其中對(duì)照組為9.17～25.00 ×104/mL，68%酒精陽(yáng)性組為10.00～18.33 ×104/mL，72%酒精陽(yáng)性組為10.83～15.83×104/ml，75%酒精陽(yáng)性組為10.83～16.67 ×104/ml，差異均不顯著(P﹥0.05)。

2.2酒精陽(yáng)性乳酸度的檢驗(yàn)結(jié)果

表2　各組乳的酸度( °T)

從表2可見(jiàn)，在1～3周時(shí)間內(nèi)，各組奶牛乳中的乳酸含量平均值沒(méi)有規(guī)律性可尋，但均在正常范圍12.58～15.25 °T之間，其中對(duì)照組為14.00～15.25 °T，68%酒精陽(yáng)性組為14.33～15.00 °T，72%酒精陽(yáng)性組為12.58～14.92 °T，75%酒精陽(yáng)性組為13.58～14.67 °T，組內(nèi)及組間差異均不顯著(P﹥0.05)。

3　結(jié)論與討論

牛奶中的體細(xì)胞中大部分是白細(xì)胞，包括巨噬細(xì)胞、噬中性白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，還有少量脫落的乳腺上皮細(xì)胞，正常乳中都含有一定數(shù)量的體細(xì)胞，一般為2 ×105～3 ×105/mL[10]。牛奶中的體細(xì)胞數(shù)量在不同泌乳階段也不同，一般在泌乳初期體細(xì)胞數(shù)量較多，然后逐漸下降，在產(chǎn)后40～80 d降到最低，然后再增加，直到泌乳末期[11-12]，由于牛奶中的體細(xì)胞存在生理性的變化，再加之年齡、胎次、品種的差異，所以奶牛正常乳的體細(xì)胞數(shù)量存在著一定的范圍波動(dòng)。我國(guó)規(guī)定生鮮乳中不得超過(guò)5.0 ×105/mL以上的體細(xì)胞數(shù)[13]。本試驗(yàn)研究結(jié)果中，酒精陽(yáng)性乳中的體細(xì)胞均在正常范圍內(nèi)。隨采樣時(shí)間推移，體細(xì)胞數(shù)減少，可能與泌乳階段的發(fā)展有關(guān)。也有研究報(bào)道，酒精陽(yáng)性乳樣的細(xì)胞數(shù)超過(guò)陰性乳[14]。

乳中蛋白質(zhì)、檸檬酸鹽、磷酸鹽及二氧化碳等酸性物質(zhì)共同構(gòu)成牛乳的酸度，正常牛乳酸度一般在16～18 °T[15]。正常牛乳的酸度隨乳牛的品種、飼料、泌乳期的不同而略有差異，但一般均在14～18 °T之間。有學(xué)者認(rèn)為瘤胃酸中毒是奶牛酒精陽(yáng)性乳的主要誘發(fā)因素原因。王允孝等報(bào)導(dǎo)酒精陽(yáng)性乳的發(fā)生與血液的酸堿度無(wú)關(guān)[16]。研究發(fā)現(xiàn)牛奶的滴定酸度對(duì)穩(wěn)定性無(wú)明顯影響。有報(bào)道表明，牛乳酸度(°T)值越高其酒精陽(yáng)性率越高[17]。本試驗(yàn)研究結(jié)果中，酒精陽(yáng)性乳中的酸度各組差異不顯著，均在正常范圍，屬于低酸度酒精陽(yáng)性乳。

本試驗(yàn)表明，奶牛發(fā)生酒精陽(yáng)性乳后，其牛乳中的體細(xì)胞及乳酸的含量無(wú)明顯變化。酒精陽(yáng)性乳不能像奶牛隱性乳房炎一樣通過(guò)檢測(cè)體細(xì)胞或乳酸的含量來(lái)判斷奶?；疾∨c否。酒精陽(yáng)性乳與隱性乳房炎之間是否有關(guān)還存在一定的爭(zhēng)議。馬樹東報(bào)道隱性乳腺炎做為酒精陽(yáng)性乳的病因約占60%[18]。但是肖定漢研究發(fā)現(xiàn)酒精陽(yáng)性乳與隱性乳腺炎無(wú)關(guān)，是不同類型的臨床表現(xiàn)[19]。楊宏軍研究認(rèn)為酒精陽(yáng)性乳與隱性乳腺炎是兩個(gè)相對(duì)獨(dú)立的疾病，但嚴(yán)重的乳腺炎導(dǎo)致乳腺功能紊亂，也可引起酒精陽(yáng)性乳的發(fā)生[20]，研究的共同點(diǎn)是奶牛酒精陽(yáng)性乳病與牛乳中的體細(xì)胞與乳酸含量不存在相關(guān)性，即牛乳中的體細(xì)胞和乳酸的變化并不能體現(xiàn)奶牛酒精陽(yáng)性乳的發(fā)病情況。這和本試驗(yàn)研究也是相吻合的。

由于酒精陽(yáng)性乳的體細(xì)胞和乳酸都沒(méi)有出現(xiàn)病理性的變化，故對(duì)患有酒精陽(yáng)性乳的牛奶可以加工利用。陳有亮等的研究表明，與正常乳比較低酸度酒精陽(yáng)性乳的粗蛋白質(zhì)、乳脂肪、乳糖和18種氨基酸的含量無(wú)顯著差異，細(xì)菌衛(wèi)生指標(biāo)符合食用要求[21]，說(shuō)明低酸度酒精陽(yáng)性乳的主要營(yíng)養(yǎng)成分未發(fā)生顯著變化，所以并沒(méi)失去使用和開發(fā)價(jià)值。但也有學(xué)者認(rèn)為從保健功能方面看，酒精陽(yáng)性乳的功能不如正常乳，因?yàn)榫凭?yáng)性乳鋅含量極低，抗氧化活性物質(zhì)SOD、GSH 的活性也降低[22]。但是酒精陽(yáng)性乳拒收的主要原因是熱穩(wěn)定性較差，80 ℃時(shí)易發(fā)生凝固，超過(guò)120 ℃時(shí)易形成褐色的乳石，容易阻塞乳品加工設(shè)備的管道，并且難于清洗。陳有亮等對(duì)低酸度酒精陽(yáng)性乳的加工利用進(jìn)行研究，結(jié)果表明，用低酸度酒精陽(yáng)性乳加工的消毒牛奶、奶粉和酸奶，主要存在的問(wèn)題是成品的組織狀態(tài)和風(fēng)味口感欠佳，奶粉的溶解度不佳，理化指標(biāo)和微生物指標(biāo)均與正常乳制品無(wú)明顯差異。利用酒精陽(yáng)性乳為原料，添加500-750 ppm 磷酸鹽或檸檬酸鹽加工的酸奶，各項(xiàng)指標(biāo)均與正常乳加工成的酸奶相同，口感和組織狀態(tài)均有提高，所以酒精陽(yáng)性乳做為原料在加工時(shí)可發(fā)酵或提高糖分或添加為水果風(fēng)味酸奶[23]。唐艷[24]等研究表明，低酸度酒精陽(yáng)性水牛乳的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值以及物理特性與正常乳無(wú)顯著差異，加工成酸奶后，除彈性外，其它指標(biāo)與正常乳沒(méi)有顯著性差異，農(nóng)皓如[25]等用低酸度酒精陽(yáng)性水牛乳制作的干酪，其理化性質(zhì)與正常水牛乳加工的干酪無(wú)顯著差異。由此可見(jiàn)，酒精陽(yáng)性乳的主要缺陷是熱穩(wěn)定性較低，從營(yíng)養(yǎng)價(jià)值角度看仍有利用價(jià)值，在乳品深加工方面應(yīng)積極開發(fā)新的加工方法和工藝，以改善酒精陽(yáng)性乳的風(fēng)味差的問(wèn)題。

酒精陽(yáng)性乳的發(fā)生可以反映出機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài)，處于代謝紊亂和乳腺功能障礙情況下，從飼養(yǎng)管理角度預(yù)防和治療酒精陽(yáng)性乳效果顯著。酒精陽(yáng)性乳既不會(huì)引起乳中體細(xì)胞數(shù)的改變，也不會(huì)影響其酸度，因此從理化角度和微生物角度來(lái)分析，酒精陽(yáng)性乳可以在一定加工工藝下，使其不凝固管道，可以加工成水果酸奶以彌補(bǔ)其風(fēng)味不佳的缺點(diǎn)，進(jìn)行合理地利用。

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(責(zé)任編輯：馬世堂)

Analysis of Somatic Cell Counts and Acidity from Different Alcohol Positive Milk

LI Jing, HE Shao-jun, ZHOU Yan, LIU De-yi, CHEN Hui-liang, SHANG Chang-fa

(College of Animal Science, Anhui Science and Technology University, Fengyang 233100, China)

Objective: To investigate the somatic cell counts and lactic acid level in different concentration titration alcohol positive milk availability. Method: First screen out 68%、72%、75% alcohol positive milk, then each group consisted of cow 6 similar in milk production, parity, age, lactation period, at the same time to establish alcohol the negative control group. At 7, 14 and 21 days to collect the milk, measure the somatic cell counts and lactic acid acidity content. Results: The somatic cell counts of each group with the extension of time presents downward trend, but differences were not significant (P> 0.05), each groups of lactic acid content is between 12.58-15.25 ° T, all belong to the normal range, and no significant difference between groups(P﹥0.05). Conclusion: The alcohol positive milk did not cause the change of the somatic cell count in milk, also would not affect lactic acid level, and thus could be used reasonably.

Alcohol-positive milk; Somatic cell counts; Acidity; Cow

2016-04-10

安徽省優(yōu)秀青年人才基金項(xiàng)目(2010SQRL098)；安徽省農(nóng)業(yè)委員會(huì)科技基金(皖農(nóng)科函[2009]221號(hào))；安徽省科技廳青年基金項(xiàng)目(1508085QC61)；安徽省教育廳自然科學(xué)重點(diǎn)項(xiàng)目(KJ2015A237)，安徽科技學(xué)院重點(diǎn)學(xué)科基金項(xiàng)目(AKXK20101-2)，(AKZDXK2015A04)。

李靜(1979-)，女，黑龍江省齊齊哈爾市人，博士，副教授，主要從事中草藥防治動(dòng)物疾病研究。

S852

A

1673-8772(2016)04-0011-04