東北龍膽組織培養(yǎng)繁殖技術研究

李　黎

（1.黑龍江省科學院自然與生態(tài)研究所濕地與生態(tài)保育國家地方聯(lián)合工程實驗室，哈爾濱150040）

東北龍膽組織培養(yǎng)繁殖技術研究

李黎

（1.黑龍江省科學院自然與生態(tài)研究所濕地與生態(tài)保育國家地方聯(lián)合工程實驗室，哈爾濱150040）

以東北龍膽的莖尖、莖段作為外植體，對其組織培養(yǎng)繁殖技術進行研究，結果表明：誘導不定芽分化的最佳培養(yǎng)基是MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L，分化率可達96.7%，最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.3 mg/L，生根率可達97.5%，組培苗最適合的移栽基質(zhì)為珍珠巖，移栽成活率可達90.0%。

東北龍膽；組織培養(yǎng)；激素；培養(yǎng)基

1　材料與方法

1.1試驗材料

東北龍膽（Gentiana manshurica Kitag），為龍膽科多年生草本植物，以根及根莖入藥［1，2］，植株高25-60cm，花藍紫色，花期8-9月份［3］。

1.2試驗方法

1.2.1外植體消毒

將東北龍膽的莖尖、莖段放入清水中，加入少量洗衣粉浸泡攪拌2-3min，然后放入流水沖洗4-6h，在無菌條件下用75%酒精殺菌60s，再轉入0.1%HgCl2中滅菌，滅菌時間分別為8、10、12min，然后用無菌水沖洗6-7次，接種于MS培養(yǎng)基上，一周后統(tǒng)計污染率（污染率=外植體污染數(shù)/外植體接種數(shù)×100%）。

1.2.2不定芽誘導

在MS培養(yǎng)基上調(diào)節(jié)6-BA和NAA的濃度，采用2因素3水平的正交設計，研究6-BA和NAA的9種不同組合，對不定芽分化的影響。每次接種30瓶，每瓶1株，每一處理設3次重復，其中6-BA含量為1.0、2.0、3.0mg/L共3個水平，NAA含量為0.1、0.2、0.3 mg/L共3個水平，共計9個處理。調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值在5.8-6.2之間，30d后統(tǒng)計分化率（分化率=外植體分化數(shù)/外植體成活數(shù)×100%）。

1.2.3根的誘導

將分化產(chǎn)生高約2.0-2.5cm的不定芽，轉入生根培養(yǎng)基進行生根培養(yǎng)。試驗方案如下：以MS和1/2MS為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的IBA（0.1、0.2、0.3 mg/ L）和NAA（0.1、0.2、0.3 mg/L），共計10個處理，生根培養(yǎng)30d后，組培苗生根數(shù)趨于穩(wěn)定后統(tǒng)計生根率（生根率=生根株數(shù)/成活株數(shù)×100%）和平均根長。

1.2.4移栽基質(zhì)篩選

過渡移栽是組織培養(yǎng)過程中比較重要的環(huán)節(jié)，基質(zhì)的選擇尤為關鍵，基質(zhì)的選擇直接影響到組培苗的成活率，將組培苗移栽到珍珠巖，河沙，草炭以及混合基質(zhì)上，對過渡移栽基質(zhì)進行篩選試驗。

1.2.5培養(yǎng)條件：白天溫度（23±2）℃，夜間不低于15℃，光照時間為12-14h/d，光照強度為2000Lx。

表1　消毒時間滅菌效果的影響

2　結果與分析

2.1滅菌劑對東北龍膽外植體滅菌效果的影響

材料的滅菌是植物組織培養(yǎng)的首要環(huán)節(jié)，既要將外植體表面微生物徹底殺死，又要盡可能減少對外植體組織和細胞的傷害。從表l可以看出，隨著滅菌時間的延長，外植體的污染率呈現(xiàn)出由高到低的趨勢。在0.1%的HgCl2中滅菌10min時污染率為10%，雖然隨著滅菌時間的延長，污染率會逐漸降低，但死亡率也會隨之上升，因此根據(jù)污染率和死亡率兩個因素考慮，東北龍膽最佳的滅菌方法：75%酒精殺菌60s后再用0.1%HgCl2滅菌10min。

2.2激素配比對不定芽分化的影響

試驗結果表明，不定芽的分化與6-BA和NAA兩種激素的配比密切相關。從表2的方差分析結果顯示，東北龍膽在處理4和處理5的培養(yǎng)基中長勢良好，東北龍膽在處理4上即：MS+6-BA2.0mg/L+ NAA0.1mg/L分化率可達96.7%，與其它處理間差異極顯著（P＜0.01）。因此培養(yǎng)基MS附加激素由濃度為2.0mg/L的6-BA和濃度為0.1mg/L的NAA組合是誘導不定芽分化的最佳激素組合。

2.3不同培養(yǎng)基對生根的影響

從表3可以看出，在NAA和IBA濃度相同情況下，在MS培養(yǎng)基中生根效果不理想，生根率低，在1/2MS培養(yǎng)基中生根率高，說明作為東北龍膽的生根培養(yǎng)基1/2 MS培養(yǎng)基的培養(yǎng)效果優(yōu)于MS培養(yǎng)基。NAA與IBA兩種激素對組培苗的生根均有促進作用，兩種激素附加到1/2MS培養(yǎng)基中，組培苗在1/2MS+IBA0.3mg/L培養(yǎng)基中生根率最高，可達97.5%，且根的粗細長短比較適中，成活率高，所以東北龍膽的最佳生根培養(yǎng)基為：1/2MS+IBA0.3mg/L。

表2　激素配比對不定芽分化的影響及方差分析

表3　不同培養(yǎng)基對生根的影響

表4　不同栽培基質(zhì)對組培苗成活率的影響

2.4移栽基質(zhì)的選擇

將生根苗分別栽入珍珠巖，草炭，河沙以及不同比例的混合基質(zhì)，30d后對成活率、植株生長情況進行統(tǒng)計，統(tǒng)計結果見表4。從表4可以看出，在7種移栽基質(zhì)中，1號基質(zhì)扎根效果最好，成活率可達90%，植株長勢好，主要是珍珠巖的透氣性好，河沙和草炭的透氣性較差，易造成植株腐爛，導致成活率降低。

3　小結

3.1東北龍膽的組織培養(yǎng)繁殖技術以莖尖、莖段作為外植體，滅菌方法為75%酒精殺60s+0.1%HgCl2滅菌10min。

3.2東北龍膽不定芽分化的最佳培養(yǎng)基及激素配比為：MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L，分化率可達96.7%。

3.3東北龍膽組培苗的最佳生根培養(yǎng)基為：1/2MS+ IBA0.3mg/L，生根率可達97.5%，組培苗移栽馴化的適宜基質(zhì)為珍珠巖，移栽成活率可達90%。

［1］孫天國，沙偉.東北龍膽莖段組織培養(yǎng)的研究［J］.北方園藝，2010（5）：148-150.

［2］孫閻，王臣，劉鳴遠.東北龍膽花芽分化研究［J］.哈爾濱師范大學自然科學學報，2007，23（3）：100-103.

［3］翟瑞龍，朱勇.龍膽屬植物園藝學研究進展［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學，2009（37）26：12506-12508.

（2016-06-13收稿M編輯）

The study of propagation techniques by tissue culture of Gentiana manshuica Kitagawa

LI Li
（Institute of Natural Resources and Ecology，HAS.National and Provincial Joint Engineering Laboratory ofWetlands and Ecological Conservation，Harbin 150040，China）

The study of propagation techniques by tissue culture of stem tips and stem segements of Gentiana manshuica Kitagawa were used as explants.The results showed that the best medium of induction on adventitious bud was MS+6-BA2.0mg/L+ NAA0.1mg/L，and the ratio of differentiation was 96.7%，the best medium of rooting was 1/2MS+IBA0.3 mg/L，and the ratio of rooting was 97.5%.The best matrix of transp lanting of the tissue culture seedling was the perlite，and the ratio of transplanted survival was 90.0%.

Gentianamanshuica Kitagawa；Tissue culture；Hormone；Medium

S603.8

A

1003-7853（2016）04-0088-02

李黎（1976-），女，高級工程師，碩士，研究方向：主要從事園林植物育種及組織培養(yǎng)方面的研究。